專利名稱：作為骨吸收抑制劑和玻連蛋白受體拮抗劑的新?；已苌锏闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式Ⅰ酰基胍衍生物、其生理上可耐受的鹽及其前藥 其中R1、R2、R4、R5、R6、A、m和n具有以下所表明的意義。式(Ⅰ)化合物是重要的藥用活性化合物。它們是玻連蛋白受體拮抗劑和破骨細(xì)胞骨吸收的抑制劑，并且適用于如治療或預(yù)防至少部分由骨吸收不需要擴(kuò)大而引起的疾病，如骨質(zhì)疏松癥。本發(fā)明還涉及式(Ⅰ)化合物的制備方法、用途(尤其是作為藥用活性成分的用途)，以及含有它們的藥物制劑。
人骨經(jīng)歷恒定的動(dòng)態(tài)更新過程，其包括骨吸收和骨形成。這些過程由專屬這些目的的細(xì)胞類型所控制。骨吸收的基礎(chǔ)在于由破骨細(xì)胞所引起的骨基質(zhì)的破壞。大多數(shù)骨疾病是由于骨形成和骨吸收之間的不平衡。骨質(zhì)疏松癥是特征在于低骨質(zhì)和增強(qiáng)的骨脆性所導(dǎo)致的骨折危險(xiǎn)增加的疾病。其原因是在該進(jìn)行的重塑過程中，新骨形成相對于骨吸收的不足。常規(guī)骨質(zhì)疏松癥的治療法包括，如給予雙膦酸酯、雌激素、雌激素/黃體酮(激素替代療法或HRT)、雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑(選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑或SERMs)、降血鈣素、維生素D類似物、甲狀旁腺激素、生長激素促分泌素或氟化鈉(Jardine等，Annual Reports in Medicinal Chemistry 1996，31，211)。
活化的破骨細(xì)胞是直徑多至400μm并能除去骨基質(zhì)的多核細(xì)胞?；罨钠乒羌?xì)胞粘著于該骨基質(zhì)的表面并分泌蛋白水解酶和酸進(jìn)入稱為“密封區(qū)”處，該區(qū)在其細(xì)胞膜和骨基質(zhì)之間。該酸性環(huán)境和蛋白水解酶引起骨的破壞。式Ⅰ化合物可以抑制破骨細(xì)胞的骨吸收。
研究顯示破骨細(xì)胞對骨的粘著由破骨細(xì)胞細(xì)胞表面上的整聯(lián)蛋白受體所控制。整聯(lián)蛋白是特別是包括血小板上的血纖蛋白原受體αⅡbβ3和所述玻連蛋白受體αvβ3的受體超家族。玻連蛋白受體αvβ3是表達(dá)在許多細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、破骨細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞)表面上的膜糖蛋白。表達(dá)在破骨細(xì)胞膜上的所述玻連蛋白受體αvβ3控制與骨的粘著過程和骨的吸收，因此成為骨質(zhì)疏松癥的原因之一。這種情況下αvβ3與包含三肽基序Arg-Gly-Asp(或RGD)的骨基質(zhì)蛋白質(zhì)如骨橋蛋白、涎蛋白和血小板反應(yīng)蛋白結(jié)合。
Horton與合作者介紹了RGD肽和抗玻連蛋白受體抗體(23C6)，它們能抑制破骨細(xì)胞導(dǎo)致的牙齒破壞和抑制破骨細(xì)胞遷移(Horton等，Exp.Cell.Res.1991，195，368)。在J.Cell Biol.1990，111，1713中，Sato等介紹了鋸鱗血抑肽(echistatin)，一種得自蛇毒的RGD肽，是一種組織培養(yǎng)中有效的骨吸收抑制劑，是破骨細(xì)胞向骨的附著的抑制劑。Fischer等(Endocrinology 1993，132，1411)能夠表明鋸鱗血抑肽在大鼠體內(nèi)也抑制骨吸收。
還進(jìn)一步表明人體主動(dòng)脈血管平滑肌肉系統(tǒng)細(xì)胞上的玻連蛋白受體αvβ3可以刺激這些細(xì)胞向新內(nèi)膜的遷移，其最后導(dǎo)致動(dòng)脈硬化和血管成形術(shù)后的再狹窄(Brown等，Cardiovascular Res.，1994，28，1815)。Yue等(Pharmacology Reivews and Communications 1998，10，9-18)表明用αvβ3拮抗劑抑制新內(nèi)膜的形成。
Brooks等(Cell，1994，79，1157)已表明通過在血管發(fā)生中誘發(fā)血管細(xì)胞的編程性死亡，αvβ3抗體或αvβ3拮抗劑能引起腫瘤減小。所述玻連蛋白受體αvβ3還與各種其它類型癌癥的發(fā)展有關(guān)，并在惡性黑素瘤細(xì)胞中超表達(dá)(Engleman等，Annual Reports in MedicinalChemistry 1996，31，191)。該黑素瘤侵襲力與此超表達(dá)有關(guān)(Stracke等，Encylopedia of Cancer，第Ⅲ卷，1855，Academic Press，1997；Hills等，Clinical Science 1996，91，639)。Carron等(Cancer Res.1998，58，1930)描述可用αvβ3拮抗劑抑制腫瘤的生長并抑制惡性高血鈣。
Cheresh等(Science 1995，270，1500)說明了能抑制大鼠眼中bFGF所誘發(fā)的血管發(fā)生過程的抗-αvβ3抗體或αvβ3拮抗劑，它是可用于治療視網(wǎng)膜病的特性。
因此，玻連蛋白受體的影響或其所涉及的相互作用的影響為要求仍然需要適當(dāng)?shù)乃幱没钚猿煞种委熀皖A(yù)防影響不同疾病的可能性。
專利申請WO-A-94/12181介紹取代的芳環(huán)系統(tǒng)以及WO-A-94/08577介紹取代的雜環(huán)用作血纖蛋白原受體拮抗劑和血小板聚集抑制劑。EP-A-528 586和EP-A-528587公開氨基烷基取代的或雜環(huán)基取代的苯基丙氨酸衍生物。WO-A-95/32710公開作為破骨細(xì)胞引起的骨吸收的抑制劑的芳基衍生物。WO-A-96/00574介紹作為玻連蛋白受體拮抗劑的苯并二氮雜類化合物，WO-A-96/00730介紹血纖蛋白原受體拮抗劑模板，尤其是與含氮的5-元環(huán)相連的苯并二氮雜為玻連蛋白受體拮抗體。WO-A-97/21726描述了促進(jìn)骨形成的藥物，它屬于不同類型的化合物，其中包括含有未取代胍基的酪氨酸衍生物。另外的研究者已表明式Ⅰ的?；沂翘貏e強(qiáng)的玻連蛋白受體抑制劑和破骨細(xì)胞引起的骨吸收的抑制劑。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥 其中R1和R2彼此獨(dú)立是氫或是未取代的或被R3取代的(C1-C6)-烷基，條件是R1和R2不同時(shí)都是氫，或者其中R1-和R2-基團(tuán)一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C9)-亞烷基，例如-(CH2)p-，其中p是2、3、4、5、6、7、8或9，其為未取代的或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它可未取代或被R3取代，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C9)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C8)-烷基、(C1-C8)-烷氧基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)-烷基-、鹵素、三氟甲基、羥基、硝基或氨基；R4是氫、(C1-C6)-烷基-CO-O-(C1-C4)-烷基或(C1-C6)-烷基，其可是未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代羥基、(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-、NR7R7’和N+R7R7’R7”Q-；其中R7、R7’和R7”彼此獨(dú)立是氫、(C1-C6)-烷基、(C5-C14)-芳基或(C5-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-，Q-是生理上可耐受的陰離子，或者其中R4是下列其中之一的基團(tuán) 其中通過其所結(jié)合基團(tuán)的鍵用虛線表示；R5是(C1-C8)-烷基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-或(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-，其中所述芳基或雜芳基未被取代或被一、二或三個(gè)R3基團(tuán)取代；R6是氫、(C1-C6)-烷基-O-CO-、羥基、(C1-C6)-烷基-O-CO-O-或硝基；A是CH2、O、S或NH；m是1、2或3；n是0或1式Ⅰ化合物中出現(xiàn)一次以上的所有基團(tuán)，如R3基團(tuán)，可在各自情況下彼此獨(dú)立具有所表明的意義，并且它們在各自情況下可以相同或不同。類似地，被稱為彼此獨(dú)立可具有所表明的意義的所有基團(tuán)在各自情況下可以相同或不同。
出現(xiàn)在取代基中的烷基可以是直鏈或支鏈的，并且可以是飽和或單不飽和或多不飽和的。如果它們帶有取代基或以其它基團(tuán)的取代基出現(xiàn)，如在烷氧基、烷氧基羰基或芳基烷基中出現(xiàn)，該原則還可應(yīng)用。還同樣適用于亞烷基(烷二基)。適當(dāng)?shù)?C1-C9)-烷基的實(shí)例為甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、這些基團(tuán)的n-異構(gòu)體、異丙基、異丁基、異戊基、新戊基、異己基、3-甲基戊基、2，3，4-三甲基己基、仲丁基、叔丁基、叔戊基。優(yōu)選的烷基是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。亞烷基的實(shí)例是對應(yīng)于以上所提的單價(jià)基團(tuán)的二價(jià)基團(tuán)，例如亞甲基、亞乙基、1，3-亞丙基、1，2-亞丙基(=1-甲基亞乙基)、2，3-亞丁基(=1，2-二甲基亞乙基)、1，4-亞丁基、1，6-亞己基。
不飽和的烷基是，例如鏈烯基像乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、丁烯基、3-甲基-2-丁烯基或炔基如乙炔基、1-丙炔基或炔丙基。不飽和的亞烷基(即亞鏈烯基(=鏈烯二基))和亞炔基(=炔二基)同樣可以是直鏈或支鏈的。亞鏈烯基的實(shí)例為亞乙烯基或亞丙烯基，亞炔基的實(shí)例為亞乙炔基或亞丙炔基。
環(huán)烷基可以是，例如，單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)。單環(huán)環(huán)烷基尤其是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一烷基或環(huán)十二烷基，但是它們還可被，如(C1-C4)-烷基取代?？赡芴岬降谋蝗〈沫h(huán)烷基的實(shí)例是4-甲基環(huán)己基和2，3-二甲基環(huán)戊基。
鹵素是例如氟、氯、溴和碘。
(C5-C14)-芳基包括雜環(huán)(C5-C14)-芳基(=(C5-C14)-雜芳基)和碳環(huán)(C6-C14)-芳基，在所述雜環(huán)芳基中雜原子如氮、氧或硫，可取代一或多個(gè)5-14環(huán)的碳原子。碳環(huán)(C6-C14)-芳基的實(shí)例是苯基、萘基、聯(lián)苯基、蒽基或芴基，其中優(yōu)選1-萘基、2-萘基及特別優(yōu)選苯基。除非特別說明，芳基，尤其是苯基，可以是未取代的或被一或多個(gè)優(yōu)選一、二或三個(gè)取代基取代。尤其是芳基可被相同或不同的選自下列的基團(tuán)取代(C1-C8)-烷基、尤其是(C1-C4)-烷基，(C1-C8)-烷氧基、尤其是(C1-C4)-烷氧基，鹵素如氟、氯和溴，硝基、氨基、三氟甲基、羥基、亞甲二氧基、氰基、羥基羰基、氨基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、苯基、苯氧基、芐基和芐氧基。一般而言，最多只許兩個(gè)硝基作為取代基出現(xiàn)在本發(fā)明的式Ⅰ化合物中。
在單取代的苯基中，該取代基可以位于2-位、3-位或4-位，優(yōu)選3-和4-位。如果苯基被二取代，那么這些取代基可以在2，3-位、2，4-位、2，5-位、2，6-位、3，4-位或3，5-位。在二取代的苯基中，這兩個(gè)取代基優(yōu)選相對于連接位在3，4-位。在三取代的苯基中，所述取代基可以在2，3，4-位、2，3，5-位、2，3，6-位、2，4，5-位、2，4，6-位或3，4，5-位。
除碳環(huán)系統(tǒng)外，(C5-C14)-芳基也可以是單環(huán)或多環(huán)芳族環(huán)系，其中5-14環(huán)碳原子中的1、2、3、4或5個(gè)可被雜原子取代，尤其是被相同或不同的選自氮、氧和硫的雜原子取代。雜環(huán)(C5-C14)-芳基和(C5-C14)-雜芳基的實(shí)例是2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、2，3-二氮雜萘基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、肉啉基、β-2-咔啉基或這些基團(tuán)的苯并稠和的、環(huán)戊-、環(huán)已-或環(huán)庚-稠和的衍生物。所述雜環(huán)系統(tǒng)可被與以上所述的碳環(huán)芳族系統(tǒng)的相同的取代基取代。
在這些雜芳基的系列中，優(yōu)選具有1、2或3個(gè)尤其是具有1或2個(gè)選自N、O、S的雜原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族環(huán)系，它們可以未被取代或被1、2或3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、氟、氯、硝基、氨基、三氟甲基、羥基、(C1-C4)-烷氧基羰基、苯基、苯氧基、芐氧基和芐基取代。特別優(yōu)選的是具有1-3個(gè)尤其是具有1或2個(gè)選自N、O、S的雜原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族5-10元環(huán)系，它們可以被1至2個(gè)選自(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基、苯基、苯氧基、芐基和芐氧基的取代基取代。
如果兩個(gè)R1-和R2-基團(tuán)一起代表二價(jià)的飽和或不飽和的(C2-C9)-亞烷基，那么這兩個(gè)基團(tuán)與它們結(jié)合的兩個(gè)氮原子以及這兩個(gè)氮原子結(jié)合的胍基的中心碳原子一起形成單環(huán)1，3-二氮雜環(huán)，該環(huán)通過其2-位與基團(tuán)-(CH2)m-CO-NH中的氮原子結(jié)合?？砂?C2-C9)-亞烷基中可被取代以及在胍基氮原子上被取代的該1，3-二氮雜環(huán)的實(shí)例是1H-咪唑-2-基、4，5-二氫-1H-咪唑-2-基、1，4，5，6-四氫咪唑嘧啶-2-基或4，5，6，7-四氫-1H-1，3-二氮雜-2-基。如果5-7元環(huán)與所述(C2-C9)-亞烷基中的碳-碳鍵稠合，那么這兩個(gè)基團(tuán)R1和R2與它們結(jié)合的兩個(gè)氮原子以及這兩個(gè)氮原子結(jié)合的胍基的中心碳原子一起形成雙環(huán)雜環(huán)，該雙環(huán)與可被如上述方式取代的基團(tuán)-(CH2)m-CO-NH中的氮原子結(jié)合。該稠和的(或縮合的)5-7元環(huán)可以是飽和的、單不飽和的或雙不飽和的環(huán)或芳環(huán)。因此，可以縮合例如環(huán)戊烷環(huán)、環(huán)己烷環(huán)、環(huán)己烯環(huán)、環(huán)己二烯環(huán)、環(huán)庚烷環(huán)或苯環(huán)。可與基團(tuán)-(CH2)m-CO-NH中的氮原子結(jié)合的這些雙環(huán)雜環(huán)基的實(shí)例是1，3a，4，5，6，6a-六氫-1，3-二氮雜戊烯-2-基、1H-苯并咪唑-2-基、3a，4，5，6，7，7a-六氫-1H-苯并咪唑-2-基、4，5，6，7-四氫-1H-苯并咪唑-2-基、4，7-二氫-1H-苯并咪唑-2-基或1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基。如果稠和的環(huán)是取代的和/或如果該(C2-C9)-亞烷基是取代的，那么它們優(yōu)選彼此獨(dú)立被相同或不同的R3單取代或雙取代。如果代表烷基的R1和/或R2基團(tuán)是取代的，它們優(yōu)選是彼此獨(dú)立被相同或不同的R3基團(tuán)單取代或雙取代的，尤其是單取代的。
式Ⅰ化合物中所含的旋光活性的碳原子可以彼此獨(dú)立具有R構(gòu)型或S構(gòu)型。不同中心上的構(gòu)型可以相同或不同。式Ⅰ化合物可以以純對映體或純非對映體的形式或者以對映體混合物形式存在，例如以消旋體或非對映體混合物的形式存在。本發(fā)明既涉及純對映體和對映體混合物，例如消旋體，又涉及非對映體和非對映體混合物。本發(fā)明包括兩個(gè)或兩個(gè)以上的式Ⅰ的立體異構(gòu)體以及所有比率的所述立體異構(gòu)體的混合物。式Ⅰ化合物可任選以E異構(gòu)體或Z異構(gòu)體存在。本發(fā)明既涉及純的E異構(gòu)體和純的Z異構(gòu)體又涉及所有比率的E/Z混合物。本發(fā)明還包括式Ⅰ化合物的所有互變異構(gòu)形式。例如，除式Ⅰ中所示的形式以外，還包括其中?；覇挝皇且曰鶊F(tuán)-CO-N=C(NHR1)-NR2R6的形式存在以及通過流動(dòng)氫原子的不同位置而改變的所有其它形式。例如，通過層析，可將非對映體(包括E/Z異構(gòu)體)分離成為單獨(dú)的異構(gòu)體。通過一般的方法，如通過手性層析或拆分，可將外消旋體分離成為兩個(gè)對映體。也可利用立體化學(xué)上相等的起始化合物或利用立體選擇性反應(yīng)獲得立體化學(xué)上相等的化合物。
式Ⅰ化合物的生理上可耐受的鹽是無毒的、生理上可接受的，尤其是藥學(xué)上可利用的鹽。這些含有酸性基團(tuán)(如羧酸基團(tuán))的式Ⅰ化合物的鹽是，如堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽，以及與生理上可耐受的季銨離子形成的鹽和與氨及生理上可耐受的有機(jī)胺，如三乙胺、乙醇胺或三-(2-羥基乙基)胺形成的酸加成鹽。含有堿性基團(tuán)的式Ⅰ化合物形成酸加成鹽，例如與無機(jī)酸如鹽酸、硫酸或磷酸，或與有機(jī)羧酸和磺酸如乙酸、檸檬酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、甲磺酸或?qū)?甲苯磺酸形成酸加成鹽。含有堿性和酸性基團(tuán)(例如胍基和羧基)的式Ⅰ化合物可以以兩性離子(內(nèi)銨鹽)存在，其同樣包括在本發(fā)明之內(nèi)。
當(dāng)R4是可被荷正電的銨基團(tuán)取代的烷基時(shí)，式Ⅰ化合物所包含的生理上可耐受的陰離子Q-特別是無毒的、生理上可接受的、尤其也是藥學(xué)上可利用的無機(jī)或有機(jī)酸的單價(jià)陰離子或相當(dāng)?shù)亩鄡r(jià)陰離子，例如，一種以上所提的適于形成酸加成鹽的陰離子或相當(dāng)?shù)年庪x子。因此，Q-可以是例如氯離子、硫酸根、磷酸根、乙酸根、檸檬酸根、苯甲酸根、馬來酸根、富馬酸根、酒石酸根、甲磺酸根或?qū)?甲苯磺酸根中之一的陰離子(或相當(dāng)?shù)年庪x子)。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員所知的常用方法，例如在溶劑或分散劑中，將式Ⅰ化合物與無機(jī)或有機(jī)酸或堿混合，或者通過陽離子或陰離子交換形成其它的鹽獲得式Ⅰ化合物的鹽。本發(fā)明還包括式Ⅰ化合物的所有的鹽，由于低生理上可耐受性，有些鹽不能直接適用于藥物，但是例如其適于作為中間體進(jìn)行式Ⅰ化合物的其它化學(xué)改變或者作為起始原料用于制備生理上可耐受的鹽。
本發(fā)明還包括式Ⅰ化合物的所有的溶劑化物，例如水合物或醇加合物，以及式Ⅰ化合物的衍生物，例如式Ⅰ化合物的酯或其它前藥和其它生理上可耐受的衍生物以及活性代謝物。本發(fā)明尤其涉及式Ⅰ化合物的前藥，在生理?xiàng)l件下，前藥可被轉(zhuǎn)化為式Ⅰ化合物。式Ⅰ化合物的適當(dāng)?shù)那八?，即在所要求的條件下具有改進(jìn)的性質(zhì)的式Ⅰ化合物的化學(xué)改性衍生物，對本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員來講是熟悉的。涉及到前藥的更詳細(xì)的信息見Fleisher等，Advanced Drug Delivery Reviews19(1996)115-130；前藥的設(shè)計(jì)，H.Bundgaard編輯，Elsevier，1985；H.Bundgaard，未來藥物16(1991)443；Saulnier等，Bioorg.Med.Chem.Lett.4(1994)1985；Safadi等，藥物研究.10(1993)1350。式Ⅰ化合物的適當(dāng)?shù)那八幪貏e是酯前藥，例如羧酸的(C1-C4)-烷基酯，尤其是其中COOR4中R4是氫時(shí)存在的COOH的酯，以及?；八幒秃锌甚；牡?如氨基，尤其是胍基)的氨基甲酸酯的前藥。在?；八幓虬被姿狨サ那八幹?，位于這些基團(tuán)的氮原子上的氫原子可被?；虬被姿狨セ淮位蚨啻稳〈?。該酰基前藥和氨基甲酸酯前藥中的適當(dāng)?shù)孽；虬被姿狨セ?，如基團(tuán)R10-CO-和R11O-CO-，其中R10是氫、(C1-C18)-烷基、(C3-C14)-環(huán)烷基、(C3-C14)-環(huán)烷基-(C1-C8)-烷基、(C5-C14)-芳基，其中1-5個(gè)碳原子可被雜原子如N、O、S取代，或者(C5-C14)-芳基-(C1-C8)-烷基其中所述芳基部分的1-5個(gè)碳原子可被雜原子如N、O、S取代，并且R11具有除氫以外R10所表明的意義。
在式Ⅰ化合物中，R1和R2基團(tuán)優(yōu)選一起是飽和或不飽和，尤其是飽和的二價(jià)(C2-C5)-亞烷基，尤其是(C2-C4)-亞烷基，特別是(C2-C3)-亞烷基，其為未取代的或被一或兩個(gè)相同或不同的選自下列的基團(tuán)取代的鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代或被R3取代的，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述亞烷基的碳-碳鍵上。在式Ⅰ化合物中，R1和R2基團(tuán)特別優(yōu)選是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2、3、4或5，優(yōu)選2、3或4，特別優(yōu)選2或3，并且其為未取代的或被一或兩個(gè)相同或不同的選自下列的基團(tuán)取代的鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它可以是未取代的或被R3取代的，尤其是被一或二個(gè)基團(tuán)R3取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于基團(tuán)-(CH2)p-中的碳-碳鍵上。
R3優(yōu)選是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基。
R4優(yōu)選是氫，或未被取代的或取代的(C1-C6)-烷基，尤其優(yōu)選氫或(C1-C6)-烷基，其可以是未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代的(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-和NR7R7’，其中R7和R7’彼此獨(dú)立是氫或(C1-C4)-烷基。R4特別優(yōu)選是氫或未被取代或取代的(C1-C4)-烷基，尤其優(yōu)選氫或(C1-C4)-烷基，其可以是未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代的(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-和NR7R7’，其中R7和R7’彼此獨(dú)立是氫或(C1-C4)-烷基。
R5優(yōu)選是(C1-C8)-烷基或式Ⅱ基團(tuán) 其中R3基團(tuán)可以相同或不同，并且可以位于該苯基的任何所要求的位置，其中q是0、1或2，優(yōu)選0或1，更優(yōu)選是0。R5特別優(yōu)選是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ基團(tuán)，其中q是0或1，R5非常特別優(yōu)選是式Ⅱ基團(tuán)，其中q是0或1，即未取代的芐基或在鄰位、間位或?qū)ξ槐籖3單取代的芐基。
R6優(yōu)選是氫或(C1-C6)-烷基-O-CO-，特別優(yōu)選是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-，尤其是H。
A優(yōu)選是CH2或O。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些其中一或多個(gè)基團(tuán)具有優(yōu)選的意義或者優(yōu)選意義的一個(gè)特例的化合物，這些所優(yōu)選的意義的所有組合是本發(fā)明的主題。特別優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C5)-亞烷基，尤其一起是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2、3、4或5，其中所述(C2-C5)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代的鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，其可以是未被取代的或被R3取代的，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C5)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C6)-烷基，它是未被取代的或被選自下列的基團(tuán)取代的(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-和NR7R7’，其中R7和R7’彼此獨(dú)立是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C8)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3可位于所述苯基的任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C6)-烷基-O-CO-；A是CH2或O；m是1、2或3；n是0或1。
非常特別優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C4)-亞烷基，尤其一起是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2、3或4，其中所述(C2-C4)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-未被取代的或被選自下列的基團(tuán)取代的鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，其可以是未被取代的或被R3取代的，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代的，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C4)-亞烷基和-基團(tuán)(CH2)p-中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C6)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，所述R3基團(tuán)可位于該苯基的任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是CH2或O；m是1、2或3；n是0或1。
特殊優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，尤其一起是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2或3，其中所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，其可以未被取代或被R3基團(tuán)取代，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基的任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是CH2；m是1；n是1。
特殊優(yōu)選的式Ⅰ化合物也是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，尤其一起是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2或3，其中所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，其可以未被取代或被R3取代，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基的任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是氧；m是1；n是1。
特殊優(yōu)選的式Ⅰ化合物還是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，尤其一起是基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是數(shù)字2或3，其中所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，其可以未被取代或被R3取代，尤其是被一或二個(gè)R3基團(tuán)取代，并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基和基團(tuán)-(CH2)p-中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基的任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是氧；m是3；n是0。
特別特殊優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和的、未被取代的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，尤其一起是未被取代的基團(tuán)-(CH2)2-或未被取代的基團(tuán)-(CH2)3-；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是未被取代的芐基；R6是氫；A是氧；m是3；n是0。
另外優(yōu)選的式Ⅰ化合物是那些其中與所述兩個(gè)基團(tuán)R4O-CO-和R5OCO-NH-相結(jié)合的碳原子具有S構(gòu)型的化合物。
本發(fā)明還涉及制備式Ⅰ化合物的方法。這些化合物一般可通過，如在會(huì)聚合成(covergent synthesis)過程中，通過連接從式Ⅰ逆合成衍生的兩個(gè)或多個(gè)片段來制備。在制備式Ⅰ化合物時(shí)，在合成過程中，可以在其后可被轉(zhuǎn)化為所需官能團(tuán)的前體形式引入在分別的合成步驟中能導(dǎo)致不合需要的反應(yīng)或副反應(yīng)的官能團(tuán)或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適于合成問題的保護(hù)基方法暫時(shí)封閉官能團(tuán)一般是有利或有必要的(Greene和Wuts，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，Wiley，1991)。
因此，例如可通過實(shí)質(zhì)上所知的方法將式Ⅲ的羧酸或羧酸衍生物 其中R4、R5、A、n和m定義同式Ⅰ所述，或者是可在其后轉(zhuǎn)化成式Ⅰ化合物的中存在的基團(tuán)的前體形式存在的其它的官能團(tuán)，或者是以被保護(hù)形式存在的官能團(tuán)，并且其中Ⅹ是親核性可取代的離去基團(tuán)，與式Ⅳ的胍或胍衍生物連接來制備式Ⅰ化合物，式Ⅳ如下 其中R1、R2和R6定義同式Ⅰ所述，或者是可在其后轉(zhuǎn)化成式Ⅰ化合物的中存在的基團(tuán)的前體形式存在的其它的官能團(tuán)，或者是以被保護(hù)形式存在的官能團(tuán)。
式Ⅲ中的COX基團(tuán)優(yōu)選是羧酸基COOH或活化的羧酸衍生物，Ⅹ是例如羥基或鹵素，特別是氯或溴、烷氧基優(yōu)選甲氧基或乙氧基，芳氧基例如苯氧基、五氟苯氧基、苯硫基、甲硫基、2-吡啶硫基或通過氮原子結(jié)合的氮雜環(huán)基團(tuán)，特別是吡咯基團(tuán)，如1-咪唑基。Ⅹ還可以是例如((C1-C4)-烷基)-O-CO-O-或甲苯磺酰氧基，并且所述活化的酸衍生物可以是混合酐。
如果Ⅹ是羥基，即如果使式Ⅳ的胍與羧酸反應(yīng)，那么首先將該羧酸有利地活化?？捎萌缍h(huán)己基碳二亞胺(DCCI)或用O-((氰基-(乙氧基羰基)-亞甲基)氨基)-1，l，3，3-四甲基尿鎓四氟硼酸鹽(TOTU；Knig等，Proc.21stEurop.Peptide Symp.1990(Eds.Giralt，Andreu)，Escom，Leiden 1991，第143頁)或其它的肽化學(xué)中常用的活化劑來進(jìn)行該活化。
除游離的式Ⅳ胍外，也可將胍鎓(guanidinium)鹽用于與式Ⅲ化合物的反應(yīng)中，然后從該反應(yīng)中在位制備游離胍或者通過堿方法以另外步驟制備游離胍。式Ⅲ的活化的羧酸衍生物與式Ⅳ的胍(衍生物)的反應(yīng)優(yōu)選按實(shí)質(zhì)上所知的方法，在質(zhì)子或非質(zhì)子極性且惰性的有機(jī)溶劑中進(jìn)行。在這種情況下，在0℃至這些溶劑的沸點(diǎn)溫度下的甲醇、異丙醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺或四氫呋喃已證實(shí)適用于如甲酯(Ⅹ=甲氧基)或乙酯(Ⅹ=乙氧基)與胍的反應(yīng)中。COX型化合物與不含鹽的胍的反應(yīng)利于在對質(zhì)子有惰性的溶劑，如二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二甲氧基乙烷或二氧六環(huán)中進(jìn)行，如果適合，可加入堿如叔丁醇鉀或甲醇鈉。但是，在式Ⅲ化合物與胍反應(yīng)中，還可用水作為溶劑，例如當(dāng)用堿如氫氧化鈉時(shí)。如果Ⅹ是氯，加入酸清除劑，例如已加入的堿，或在用以結(jié)合所產(chǎn)生的氫鹵酸的過量的胍(衍生物)存在下進(jìn)行該反應(yīng)較有利。將該反應(yīng)混合物處理后，如果要求，可按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的一般方法，將該反應(yīng)產(chǎn)物純化。
然后可通過標(biāo)準(zhǔn)方法除去在式Ⅲ和Ⅳ化合物中所得到的產(chǎn)物中任選存在的保護(hù)基，例如通過用三氟乙酸處理，將叔丁酯轉(zhuǎn)化成羧酸基團(tuán)，通過氫化除去芐基或者通過仲胺除去芴基甲氧基羰基，另外還可通過標(biāo)準(zhǔn)方法，如酰基化反應(yīng)進(jìn)行其它反應(yīng)。如果適合，然后通過已知的方法轉(zhuǎn)化成生理上可耐受的鹽或前藥。
能相連得到式Ⅰ的?；已苌锏氖舰蠛廷舻钠鹗冀M分可從市售獲得或者通過文獻(xiàn)中所述的方法或類似方法制備。式Ⅲ的起始組分的制備通過下列流程中的實(shí)例說明，本發(fā)明不受這些合成或起始組分的限制。對所示合成進(jìn)行的任何修改不會(huì)對本領(lǐng)域技術(shù)人員產(chǎn)生任何問題，這些修改對于制備本發(fā)明的其它化合物是必需的。
因此，如可在吡啶和哌啶存在下，使式Ⅴ的羧基苯甲醛與式Ⅵ的丙二酸酯鹽反應(yīng)得到式Ⅶ的肉桂酸衍生物，然后如在披鈀炭存在下氫化后得到式Ⅷ化合物，使活化的羧酸基團(tuán)與式Ⅸ的2，3-二氨基丙酸衍生物縮合得到式Ⅹ的化合物(流程1)。該縮合反應(yīng)可在如TOTU或其它常用的羧酸活化劑的存在下進(jìn)行。在式Ⅹ中，Z是芐氧基羰基，但是除Z外，其它基團(tuán)也可以存在于所述氮原子上，其或者在2-位上只暫時(shí)性保護(hù)氨基或者還存在于本發(fā)明的式Ⅰ化合物中并且保留在該分子中。同樣地，除叔丁基酯外，其它酯也可以存在，其或者暫時(shí)性保護(hù)酸基或者還存在于本發(fā)明的式Ⅰ化合物中并且保留在該分子中。通過將羰基轉(zhuǎn)化成烯烴的其它方法，例如通過Wittig反應(yīng)，也可獲得與式Ⅶ化合物類似的化合物。
流程1 可使式Ⅺ的對-羥基苯甲酸與式Ⅸ的2，3-二氨基丙酸衍生物縮合得到式Ⅻ化合物，以上說明適用于式Ⅸ化合物和該縮合反應(yīng)。可在標(biāo)準(zhǔn)條件下，用鹵代羧酸衍生物使式Ⅻ化合物烷基化，例如用式ⅩⅢ溴乙酸酯進(jìn)行烷基化得到式ⅩⅣ化合物(流程2)。相應(yīng)地可使對-氨基苯甲酸和對-巰基苯甲酸反應(yīng)。
流程2 在標(biāo)準(zhǔn)條件下，可用鹵代羧酸衍生物使式ⅩⅤ的酪氨酸衍生物烷基化，例如用式ⅩⅥ溴丁酸酯進(jìn)行烷基化得到式ⅩⅦ化合物(流程3)。在式ⅩⅤ中，Z是芐氧基羰基，但是除Z外，其它基團(tuán)也可以存在于該氮原子上，其或者只暫時(shí)保護(hù)該氨基或者還存在于本發(fā)明的式Ⅰ化合物中并且保留在該分子中。同樣地，除叔丁基酯外，其它基團(tuán)也可以只暫時(shí)保護(hù)所述酸基或者還存在于本發(fā)明的式Ⅰ化合物中并且保留在該分子中?？筛鶕?jù)與以上制備方法相應(yīng)的或類似的方法制備式ⅩⅦ化合物的類似物。
流程3 式Ⅹ、ⅩⅣ和ⅩⅦ化合物是式Ⅲ化合物的實(shí)例，其中Ⅹ是甲氧基或乙氧基?？梢允箯囊陨纤龅暮铣芍械玫降?、含有活化的羧酸衍生物基團(tuán)的這些化合物及類似的化合物直接與式Ⅳ化合物反應(yīng)。但是，在標(biāo)準(zhǔn)條件下，通過將在式Ⅹ、ⅩⅣ和ⅩⅦ化合物的有關(guān)位置中存在的所述甲酯基或乙酯基或其它酯基裂解，也可將以上合成中得到的化合物首先轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的羧酸，接著使其與在位活化(例如用TOTU或DCCI)的式Ⅳ胍反應(yīng)，或者再轉(zhuǎn)化成活化的羧酸衍生物之后與式Ⅳ的胍反應(yīng)。如果要制備作為活化的酸的衍生物，如酰氯(式Ⅲ，Ⅹ=Cl)，那么例如可用亞硫酰氯進(jìn)行該反應(yīng)。如果要從羧酸制備如甲酯(Ⅹ=甲氧基)，那么可通過用氯化氫氣體在甲醇中處理進(jìn)行。也可按照本身熟悉的方法，用酰氯或者直接用羧酸(Ⅹ=OH)制備其它的活化的酸衍生物，通過用羰基二咪唑處理所述酸制備如咪唑酰胺(imidazolide)(Ⅹ=1-咪唑基)(cf.Staab，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1，351-367(1962))或者用混合酐制備，例如，在惰性溶劑中，在胺(如三乙胺)的存在下，通過與氯甲酸酯(如氯甲酸乙酯)或甲苯磺酰氯反應(yīng)制備。許多適當(dāng)?shù)闹苽浠钚贼人嵫苌锏姆椒ㄒ娫嘉墨I(xiàn)的詳細(xì)內(nèi)容，J.March，Advanced Organic Chemistry，第三版，John Wilev&Sons，1985，第350頁。
式Ⅰ化合物是有價(jià)值的藥用活性成分，它適用于治療和預(yù)防骨疾病、腫瘤疾病或心血管疾病?？蓪⑹舰窕衔锛捌渖砩峡赡褪艿柠}和其前藥作為藥物給予動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，特別是人以用于治療或預(yù)防?？蓪⑺鼈儐为?dú)給藥、或者與其它藥物的混合物形式或藥用制劑的形式給藥，可使用腸道或非腸道給藥，除含有常用的藥學(xué)上無害的載體和/或添加劑外，制劑還含有至少一種有效量的作為活性組分的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
因此，本發(fā)明化合物還涉及用作藥物的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥，涉及式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥用于生產(chǎn)治療或預(yù)防以上或以下所提的疾病的藥物的用途，如用于治療和預(yù)防骨疾病或腫瘤疾病，并且還涉及式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥用于治療或預(yù)防這些疾病的用途。本發(fā)明還涉及藥用制劑，它包含至少一種有效量的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥以及常用的藥學(xué)上無害的載體。
可將該藥物口服給藥，例如以丸劑、片劑、漆涂片、包衣片、顆粒劑、硬和軟明膠膠囊、溶液劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑或氣霧混合劑的形式給藥。但是，也可以以如栓劑的形式直腸給藥，或者以注射液或輸注液、微囊、植入劑或棒條形式非腸道給藥，或者如以軟膏劑、溶液劑或酊劑形式經(jīng)皮或局部給藥，或者以其它形式給藥，如以氣霧劑或噴鼻劑形式。
可按本身已知的方法，用一種或多種藥用惰性的無機(jī)和/或有機(jī)載體加上式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥來制備本發(fā)明的藥物制劑。生產(chǎn)丸劑、片劑、包衣片和硬明膠膠囊時(shí)，可能使用如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其鹽等。用于軟明膠膠囊和栓劑的載體是如脂肪、蜂蠟、半固體或液體多元醇、天然或硬化的油類等。生產(chǎn)溶液劑(如注射液)或乳劑或糖漿劑的適當(dāng)?shù)妮d體是如水、醇、甘油、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖、植物油等。微囊、植入劑或棒條劑的適當(dāng)載體是乙醇酸和乳酸的共聚物。藥物制劑一般含有約0.5-90％(重量)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。藥物制劑中式Ⅰ活性組分和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥的量一般為0.2-500mg，優(yōu)選1-200mg。
除活性成分和載體外，該藥物制劑還可以含有一或多種添加劑，如填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、潤濕劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、矯味劑或香料、增稠劑、稀釋劑、緩沖物質(zhì)、溶劑或加溶劑還有為達(dá)到儲(chǔ)存效果的試劑、以及為改變滲透壓的鹽、涂層劑或抗氧劑。它們還可以含有兩個(gè)或多個(gè)式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。另外，除含有至少一種式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥以外，該藥物制劑還可含有一種或多種其它治療或預(yù)防活性的成分。
式Ⅰ化合物是玻連蛋白受體拮抗劑，并且具有如抑制破骨細(xì)胞與骨表面結(jié)合的能力，因此抑制破骨細(xì)胞引起的骨吸收。式Ⅰ化合物的作用可在試驗(yàn)中證實(shí)，例如在確證對玻連蛋白與含有該玻連蛋白受體結(jié)合的抑制作用的試驗(yàn)中。以下給出該試驗(yàn)的詳細(xì)內(nèi)容。作為玻連蛋白受體拮抗劑，式Ⅰ化合物和其生理上可耐受的鹽和其前藥一般適于治療或預(yù)防基于在細(xì)胞—細(xì)胞相互作用過程中或細(xì)胞—基質(zhì)之間作用過程中，玻連蛋白受體與其配體之間的相互作用的疾病，或者受該類型相互作用影響的疾病，或者要求其預(yù)防、緩解或治愈該類型相互作用的抑制的疾病。如開始所解釋的那樣，這些相互作用在骨吸收中、在血管發(fā)生中或在血管平滑肌肉系統(tǒng)的細(xì)胞增生中起作用。因此，式Ⅰ化合物和其生理上可耐受的鹽和其前藥適于緩解或治愈至少部分是由骨吸收的不需要擴(kuò)大、血管發(fā)生或血管平滑肌肉系統(tǒng)的細(xì)胞增生所引起的疾病。
用本發(fā)明的式Ⅰ化合物治療和預(yù)防的骨疾病特別是骨質(zhì)疏松癥、高血鈣、骨質(zhì)減少，如由轉(zhuǎn)移引起的，牙病、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎周圍侵蝕和Paget氏病。另外，式Ⅰ化合物可用于緩解、避免或治療由糖皮質(zhì)激素、類固醇或皮質(zhì)類固醇治療或由性激素缺乏引起的骨病。所有這些疾病的特征在于骨丟失，其基于骨形成和骨破壞之間的不平衡，并且它很易于受破骨細(xì)胞引起的骨吸收抑制的影響。式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥還適于用作骨吸收抑制劑，例如用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥，與常用的骨質(zhì)疏松癥治療法結(jié)合使用，例如與雙膦酸酯、雌激素、雌激素/黃體酮、雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑、降血鈣素、維生素D類似物、甲狀旁腺激素、生長激素促分泌素或氟化鈉合用。可以將式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥和其它的如以上所提的有效用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的活性成分同時(shí)或順次給藥、以任何順序給藥以及結(jié)合或單獨(dú)給藥。為這種結(jié)合治療或預(yù)防的用途，可將式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥和一種或多種如以上所提的其它活性成分一起制成單一藥物制劑，如片劑或顆粒劑，或者制成可含在單一包裝內(nèi)或在兩個(gè)或多個(gè)獨(dú)立包裝內(nèi)的兩個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的藥物制劑。本發(fā)明還包括結(jié)合治療或預(yù)防中式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥的應(yīng)用，以及用于這種結(jié)合治療或預(yù)防的藥物產(chǎn)品的用途。本發(fā)明還涉及藥物制劑，它包括至少一個(gè)有效量的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥和至少一個(gè)如以上所提的有效用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或抑制骨吸收的其它活性成分，以及常用的藥學(xué)上無毒的載體。以上有關(guān)藥物制劑的說明相應(yīng)地適用于此類藥物的聯(lián)合制劑。
除用作破骨細(xì)胞引起的骨吸收的抑制劑外，式Ⅰ化合物及其生理上可耐受的鹽和其前藥還可用作腫瘤生長和腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制劑、用作抗炎劑，用于治療或預(yù)防心血管疾病如動(dòng)脈硬化或再狹窄，或用于治療或預(yù)防腎病或視網(wǎng)膜病，如糖尿病性視網(wǎng)膜病。作為腫瘤生長或腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制劑，式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥還適于與常規(guī)的癌癥療法聯(lián)合應(yīng)用。在Bertino(Editor)，Encyclopedia of Cancer，Academic Press，1997中介紹常規(guī)癌癥療法的實(shí)例。所有以上有關(guān)式Ⅰ化合物與常規(guī)骨質(zhì)疏松療法聯(lián)合應(yīng)用的論點(diǎn)，如可能給藥的方式和藥用組合制劑，都相應(yīng)地適用于式Ⅰ化合物與常規(guī)癌癥療法的聯(lián)合應(yīng)用。
當(dāng)使用式Ⅰ化合物時(shí)，其劑量可在很大的范圍內(nèi)變化，并按慣例，該劑量一定要適于每種個(gè)別病例個(gè)別癥狀。它依據(jù)例如所用的本身是生理活性的化合物或者是首先經(jīng)代謝活化的前藥的化合物、或者依據(jù)所治療疾病的性質(zhì)及嚴(yán)重性、或者所治療的疾病是急性或慢性或者是否進(jìn)行了預(yù)防等條件而定。在口服給藥情況下，對體重為75kg的成人來講，為達(dá)到有效的結(jié)果，日劑量一般為0.01-100mg/kg，優(yōu)選0.1-50mg/kg，特別是0.1-5mg/kg，例如0.3-0.5mg/kg(在所有情況下，以每kg體重mg表示)。在靜脈給藥的情況下，日劑量一般約為0.01-100mg/kg，優(yōu)選0.05-10mg/kg(每種情況下均為每kg體重)。尤其在相對較大的給藥劑量情況下，可將日劑量分為數(shù)個(gè)如2、3或4次個(gè)部分給藥。如果適當(dāng)，依據(jù)個(gè)別情況，向上或向下偏離所指定的日劑量是必要的。
除用作藥用活性組分外，式Ⅰ化合物還可用作活性組分的介質(zhì)或載體以便將該活性組分特異性轉(zhuǎn)運(yùn)到作用的部位(=藥物靶；見例如靶向藥物傳遞，R.C.Juliano，Handbook of ExperimentalPharmacology，第l00卷，由Bom，G.V.R.等編輯，Springer Verlag)。被轉(zhuǎn)運(yùn)的活性組分尤其是那些可用于治療以上所提疾病的組分。
式Ⅰ化合物及其鹽還可用于診斷目的，例如在細(xì)胞或組織樣本的體外診斷中，并且可用作其中要求封閉玻連蛋白受體或影響細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)之間作用的生化探究中的輔助劑。它們還可用作制備其它化合物，特別是其它藥用活性成分的中間體，它們能從式Ⅰ化合物中得到，例如通過修飾或引入取代基或官能團(tuán)得到。
實(shí)施例產(chǎn)物通過質(zhì)譜(MS)和/或NMR光譜確定?；衔锸墙?jīng)用含有如乙酸或三氟乙酸的洗脫劑層析純化，然后冰凍干燥，或者在最后的合成步驟中，如用三氟乙酸除去叔丁基保護(hù)基，依據(jù)冷凍干燥如何進(jìn)行而定，在某些情況下，還保留洗脫劑中或最后合成步驟中的酸，而獲得部分或全部所用酸的鹽的形式，如乙酸鹽或三氟乙酸鹽的形式。
實(shí)施例1(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸 a)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-乙氧基羰基丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯將7.42g(0.02mol)的N-芐氧基羰基-L-酪氨酸叔丁基酯與9.77g(0.03mol)的碳酸銫和3.9g(0.02mol)的4-溴丁酸乙酯在約60ml丙酮中一起回流6小時(shí)。冷卻該反應(yīng)混合液后，真空除去溶劑。將殘留物在乙酸乙酯和水(1∶1)之間分配。相分離后，將有機(jī)相用水和飽和氯化鈉溶液各自洗滌二次，經(jīng)硫酸鈉干燥，再真空濃縮。油狀粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速層析(二氯甲烷/乙腈25/1)純化。得到9.4g(97％)粘性油狀物。Rf=0.36(硅膠，二氯甲烷/甲醇99/1)。
b)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯將6.72g(0.06mol)的叔丁醇鉀加入到8.13g(0.06mol)的1-氨基-1，4，5，6-四氫吡啶鹽酸鹽的100ml無水二甲基甲酰胺溶液中。室溫?cái)嚢?0分鐘后，向該溶液中加入7.2g(0.015mol)的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-乙氧基羰基丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯，再在室溫下攪拌12小時(shí)。真空除去溶劑后，將殘留物用300ml乙酸乙酯和100ml水處理，再分出有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌二次，經(jīng)硫酸鈉干燥，再濃縮。將得到的粗產(chǎn)物立即經(jīng)硅膠層析(二氯甲烷/甲醇/冰醋酸100/5/1)。得到5.4g(60.6％)非晶型產(chǎn)物。
c)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸將5.4g(0.009mol)的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯乙酸鹽溶于20ml三氟乙酸/水(95/5)中，然后在室溫下將該溶液攪拌30分鐘。再真空濃縮該反應(yīng)溶液。將殘留物溶于水中，然后冷凍干燥該溶液。收率5.2g(98％)。MS(ES+)m/e=483.3(M+H+，100％)。
實(shí)施例2(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸
a)4-(2-甲氧基羰基乙烯基)苯甲酸將18.74g(0.12mol)的丙二酸單甲酯鉀鹽懸浮于18ml吡啶中。室溫?cái)嚢柘拢尤?5.01g(0.1mol)的4-羧基苯甲醛和0.85g(0.01mol)的哌啶。將該混合液回流至停止放出CO2(約2小時(shí))，然后再加入60ml吡啶，回流下，再將該混合液攪拌1小時(shí)。攪拌下，將該反應(yīng)混合液用500ml冰和110ml濃鹽酸處理。加入完畢后，將該混合液再攪拌20分鐘，然后抽濾產(chǎn)物，用水洗滌，再經(jīng)異丙醇重結(jié)晶。收率12.85g(62％)。1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)δ=3.75(s，3H，OCH3)；6.76(d，J=15Hz，1H，CHCOOCH3)；7.73(d，J=15Hz，1H，Ar-CH)；7.84(d，J=9Hz，2H，Ar-H)；7.98(d，J=9Hz，2H，Ar-H)；13.31(s，寬峰，1H，COOH)。MS(Cl+)m/e=207.2(M+H+，100％)HPLCRP 18，Nucleosil 300-5-Cl8，250×4mm；緩沖液AH2O，0.1％三氟乙酸(TFA)；緩沖液B乙腈(80％v/v)H2O(20％v/v)，0.1％TFA；梯度洗脫最初5分鐘90％緩沖液A/10％緩沖液B，然后在20分鐘內(nèi)達(dá)到90％緩沖液B，之后5分鐘90％緩沖液B；流速1ml/min；Rt=18.05min。
b)4-(2-甲氧基羰基乙基)苯甲酸將8g(38.8mmol)的4-(2-甲氧基羰基乙烯基)苯甲酸懸浮于250ml二氧六環(huán)中，然后在室溫、1巴氫氣下，經(jīng)Pd/C(10％強(qiáng)度)氫化7小時(shí)。將該混合液過濾，然后真空除去溶劑。收率8.05g(100％)。1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)δ=2.67(t，J=8Hz，2H，CH2-COOCH3)；2.93(t，J=8Hz，2H，Ar-CH2)；3.59(s，3H，OCH3)；7.35(d，2H，Ar-H)；7.86(d，J=9Hz，2H，Ar-H)；12.80(s，寬峰，1H，COOH)。MS(Cl+)m/e=209.2(M+H+，100％)。HPLCRP18，Nucleosil 300-5-C18，250×4mm；緩沖液AH2O，0.1％TFA；緩沖液B乙腈(80％v/v)/H2O(20％v/v)，0.1％TFA；梯度洗脫最初5分鐘90％緩沖液A，10％緩沖液B，然后在20分鐘內(nèi)達(dá)到90％緩沖液B，之后5分鐘90％緩沖液B；流速1ml/min；Rt=17.03min。
c)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-甲氧基羰基乙基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯將354mg(1.7mmol)的4-(2-甲氧基羰基乙基)苯甲酸和500mg(1.7mmol)的(2S)-3-氨基-2-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁基酯溶于3ml二甲基甲酰胺中，再用557mg(1.7mmol)的O-((氰基-(乙氧基羰基)亞甲基(methylidene))氨基)-1，1，3，3-四甲基尿鎓四氟硼酸鹽(TOTU)和204mg(1.7mmol)的二異丙基乙胺處理，然后在室溫、pH7-8下，將該混合液攪拌7小時(shí)。真空除去溶劑，將殘留物溶于乙酸乙酯中，再將該溶液用KHSO4溶液和NaHCO3溶液各洗滌3次直至中性。分離有機(jī)相，干燥并真空蒸餾除去溶劑。收率770mg(93％)。MS(ES+)m/e=485.2(M+H+，100％)。
d)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯將1.25g(9.2mmol)的2-氨基-1，4，5，6-四氫吡啶鹽酸鹽和1.03g(9.2mmol)的叔丁醇鉀溶于3ml無水二甲基甲酰胺中，再在室溫下攪拌30分鐘。然后加入740mg(1.53mmol)的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-甲氧基羰基乙基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯的1ml二甲基甲酰胺溶液，再在室溫下將該混合液攪拌4小時(shí)。用冰醋酸將pH調(diào)至4，真空除去溶劑后，然后殘留物經(jīng)硅膠層析，用二氯甲烷/甲醇/冰醋酸/水(9/1/0.1/0.1)洗脫。收率190mg(38％)。MS(ES+)m/e=552.3(M+H+，100％)。
e)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸將190mg(0.34mmol)的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯溶于5ml95％強(qiáng)度的三氟乙酸中，再在室溫下攪拌1小時(shí)。真空蒸餾除去三氟乙酸，并與甲苯共沸，再將殘留物溶于冰醋酸中，用水稀釋，冷凍干燥。收率170mg(100％)。MS(SE+)m/e=496.3(M+H+，100％)。
實(shí)施例3(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-((1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸 a)4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酸芐酯將4.5g(0.02mol)的對羥基苯甲酸芐酯與9.7g(0.03mol)的碳酸銫一起懸浮于約60ml的丙酮中，再用2.3ml(0.025mol)的溴乙酸乙酯處理。然后將該混合液回流至反應(yīng)完成。處理時(shí)，將該反應(yīng)溶液通過澄清層過濾，再將濾液濃縮至干。將殘留物溶解于乙酸乙酯中，再將該混合液用10％強(qiáng)度的檸檬酸溶液和飽和的NaCl溶液各洗滌三次。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾和濃縮。殘留物經(jīng)二異丙基醚/庚烷重結(jié)晶。收率5.5g。
b)4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酸將5g的4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酸芐酯溶于甲醇/乙酸乙酯中，并在600mg催化劑(Pd/C，10％強(qiáng)度)存在下氫化。在用惰性氣體吹洗后，濾掉催化劑，再將濾液真空濃縮。將殘留物用二異丙基醚/庚烷(9/1)研磨，然后抽濾。收率3.3g。
c)(2S)-2-(芐氧基羰基氨基)-3-(4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯將420mg(0.002mol)的4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酸、270mg(0.002mol)的1-羥基苯并三唑和588mg(0.002mol)的(2S)-3-氨基-2-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁基酯溶于5ml的二甲基甲酰胺中。將該溶液冷卻至0℃，再用453mg(0.0022mol)的N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺處理，然后在0℃攪拌10分鐘，再在室溫下攪拌2小時(shí)。處理，濾掉該脲，將濾液濃縮至干。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析(二氯甲烷/乙腈20/1)得到純化合物。收率820mg。
d)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-((1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯將438mg的(2S)-2-(芐氧基羰基氨基)-3-(4-(甲氧基羰基甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸叔丁基酯、606mg的叔丁醇鉀和732mg的2-氨基-1，4，5，6-四氫嘧啶鹽酸鹽溶于10ml無水二甲基甲酰胺中，再在室溫下，將該溶液攪拌14小時(shí)，然后真空濃縮至干。將殘留物溶于乙酸乙酯中，再將該溶液用水提取。將有機(jī)相干燥，真空濃縮，然后粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析(二氯甲烷/甲醇100/7.5)純化。收率370mg。
e)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-((1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸室溫下，在2ml95％強(qiáng)度的三氟乙酸中，將步驟d)中得到的87mg的叔丁基酯攪拌15分鐘。真空濃縮后，將該混合液用乙醚研磨，濾出殘留物，干燥。收率79mg。MS(ES+)m/e=498.2(M+H+)。
實(shí)施例4(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)丙氧基)苯基)丙酸異丙酯鹽酸鹽 將23.88g(0.04mol)的實(shí)施例1化合物(為三氟乙酸鹽)懸浮于400ml異丙醇中。在-15℃、惰性氣體環(huán)境下，向該懸浮液中加入預(yù)先制備的亞硫酰氯的異丙醇溶液(在-10至-15℃、惰性氣體環(huán)境下，用5分鐘將10.4ml的亞硫酰氯滴加到160ml異丙醇中，再在-10℃下，將該混合液攪拌20分鐘即制得該溶液)。加入完畢后，在30分鐘內(nèi)溫度升至室溫。然后在攪拌下，在60℃將其時(shí)澄清的溶液加熱7小時(shí)。不加熱下，繼續(xù)攪拌過夜。通過TLC控制，顯示該反應(yīng)完成。真空旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑。將殘留物懸浮于100ml異丙醇中，再真空除去異丙醇。將該固體殘留物用乙醚研磨，然后抽濾分離。將該粗產(chǎn)物懸浮于120ml異丙醇中，與2.4g活性炭加熱至回流，過濾。冷卻后，過濾得到無色產(chǎn)物。收率16.2g灰白色固體。MS(ES+)m/e=525(M+H+，100％)。元素分析
計(jì)算值C 59.9％H6.6％N10.0％Cl6.3％實(shí)測值C 59.3％H6.7％N10.0％Cl6.6％1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)δ=1.1(dd，6H，J=7Hz)，1.8、1.95和2.5(m，各2H)，2.85(m，2H)，3.35(t，4H，J=3-4Hz)，3.95(t，2H，J=3-4Hz)，4.15(m，1H)，4.9(sep，1H，J=7Hz)，5.0(s，2H)，6.9和7.1(d，各2H，J=7Hz)，7.3(m，5H)，7.7(d，1H，J=7Hz)。
實(shí)施例5(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)丙氧基)苯基)丙酸乙酯鹽酸鹽 在-10℃下，將0.14ml(1.15當(dāng)量)亞硫酰氯加入到5ml乙醇中，在該溫度下攪拌10分鐘。然后加入1g(1.66mmol)實(shí)施例1化合物的10ml乙醇懸浮液。攪拌下，將該混合液溫?zé)嶂潦覝?，再攪?小時(shí)。真空蒸發(fā)其時(shí)已變?yōu)槌吻宓脑撊芤?，將殘留物溶于水中，過濾后，再經(jīng)冷凍干燥。收率0.85g無色、無晶型固體。MS(ES+)m/e=511(M+H+，100％)。
實(shí)施例6(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基甲酰基)丙氧基)苯基)丙酸 a)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯將340mg的4，5-二氫-1H-咪唑-2-基胺、13.6mg的咪唑和26.8mg的碘化鋰加入到970mg的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-乙氧基羰基丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯(實(shí)施例1a)的5ml無水二甲基甲酰胺溶液中。在40℃下，將該溶液攪拌4小時(shí)，再加入170mg的4，5-二氫-1H-咪唑-2-基胺，然后在55℃下，將該溶液再攪拌3小時(shí)。真空除去溶劑后將該殘留物用乙酸乙酯處理，過濾，用10％強(qiáng)度的KHCO3水溶液提取，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，真空濃縮，然后用二異丙基醚沉淀。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析(二氯甲烷/甲醇/冰醋酸90/10/1)純化。得到250mg無晶型產(chǎn)物。MS(ES+)m/e=525.2(M+H+，100％)。
b)(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸將200mg的(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基甲?；?-丙氧基)苯基)丙酸叔丁基酯溶于5ml的三氟乙酸/水(95/5)中，再在室溫下將該溶液攪拌15分鐘。然后真空濃縮該反應(yīng)溶液。將殘留物溶于水中，再將該溶液冷凍干燥。收率100％。MS(ES+)m/e=469.2(M+H+，100％)。
藥理試驗(yàn)借助于破骨細(xì)胞吸收試驗(yàn)(“PITASSAY”)，如類似于WO-A-95/32710，可測定本發(fā)明化合物對骨吸收的抑制作用。
例如，可用以下所述的方法測定本發(fā)明化合物對玻連蛋白受體αvβ3的抑制作用。
測定293細(xì)胞與人玻連蛋白粘合的抑制作用的試驗(yàn)(Vn/293細(xì)胞試驗(yàn))1．人玻連蛋白的純化將人玻連蛋白從人血漿中分離出來，然后根據(jù)Yatohyo等在CellStructure and Function，1988，23，281-292中的方法，通過親和層析純化。
2．細(xì)胞試驗(yàn)根據(jù)FACS方法，選擇高表達(dá)率(＞500，000αvβ3受體/細(xì)胞)的293細(xì)胞，一種人胚腎細(xì)胞系，其可用該玻連蛋白受體αvβ3的αv和β3亞單位的DNA序列共轉(zhuǎn)染。將所選細(xì)胞培養(yǎng)，并通過FACS再分選以獲得每個(gè)細(xì)胞表達(dá)率＞1，000，000個(gè)αvβ3的拷貝的穩(wěn)定細(xì)胞系(15D)。
在4℃下，將平底Linbro96-孔組織培養(yǎng)板用在磷酸鹽緩沖液(PBS)中的人玻連蛋白包被(0.01mg/ml，0.05ml/孔)過夜，然后用強(qiáng)度0.5％的BAS(牛血清清蛋白)封閉。制備10-10mol/l至2×10-3mol/l的該受試化合物的含葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基的溶液，并在每種情況下向該平板每孔中以0.05ml/孔加入該溶液。將表達(dá)高αvβ3水平(如15D)的細(xì)胞懸浮于含葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基中，然后將該懸浮液調(diào)節(jié)至每0.05ml培養(yǎng)基中含25，000個(gè)細(xì)胞。將0.05ml的該細(xì)胞懸浮液加入到每孔中，再在37℃下，將該平板孵育90分鐘。將該平板用溫?zé)岬腜BS洗滌三次以除去未結(jié)合的細(xì)胞。將已結(jié)合的細(xì)胞在含0.25％Triton X-100的檸檬酸鹽緩沖液(25mM，pH5.0)中裂解。然后加入己糖酰胺酶底物對-硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷，再在37℃下將該平板孵育90分鐘。用甘氨酸(50mM)/EDTA(5mM)緩沖液(pH10.4)終止該反應(yīng)，然后在405-650nm處測定每孔的吸收。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法分析該數(shù)據(jù)。
得到以下測試結(jié)果化合物Vn/293細(xì)胞試驗(yàn)IC50(μM)實(shí)施例1 0.028實(shí)施例2 0.017實(shí)施例3 1.35實(shí)施例6 0.03權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥 其中R1和R2彼此獨(dú)立是氫或是未取代的或被R3取代的(C1-C6)-烷基，條件是R1和R2不同時(shí)都是氫，或者其中R1-和R2-基團(tuán)一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C9)-亞烷基，其為未取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或被R3取代的，并且它可為碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可以與所述(C2-C9)-亞烷基中的碳-碳鍵稠合；R3是(C1-C8)-烷基、(C1-C8)-烷氧基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)-烷基、鹵素、三氟甲基、羥基、硝基或氨基；R4是氫、(C1-C6)-烷基-CO-O-(C1-C4)-烷基-或(C1-C6)-烷基，其可是未被取代或被選自下列的基團(tuán)取代羥基、(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-、NR7R7’和N+R7R7’R7”Q-，其中R7、R7’和R7”彼此獨(dú)立是氫、(C1-C6)-烷基、(C5-C14)-芳基或(C5-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-，Q-是生理上可耐受的陰離子，或者其中R4是下列其中之一的基團(tuán) 其中通過其所結(jié)合基團(tuán)的鍵用虛線表示；R5是(C1-C8)-烷基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-或(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-，其中所述芳基或雜芳基未被取代或被一、二或三個(gè)R3基團(tuán)取代；R6是氫、(C1-C6)-烷基-O-CO-、羥基、(C1-C6)-烷基-O-CO-O-或硝基；A是CH2、O、S或NH；m是1、2或3；n是0或1。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C5)-亞烷基，其中所述(C2-C5)-亞烷基為未被取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或被R3取代的并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C5)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C6)-烷基，其是未被取代的或被選自下列的基團(tuán)取代(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)2-和NR7R7’，其中R7和R7’彼此獨(dú)立是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C8)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C6)-烷基-O-CO-；A是CH2或O；m是1、2或3；n是0或1。
3．根據(jù)權(quán)利要求1和/或2的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C4)-亞烷基，其中該(C2-C4)-亞烷基為未被取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或可被R3取代的并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C4)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C6)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是CH2或O；m是1、2或3；n是0或1。
4．根據(jù)權(quán)利要求1-3的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，其中該(C2-C6)-亞烷基為未被取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或被R3取代的并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是CH2；m是1；n是1。
5．根據(jù)權(quán)利要求1-3的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，其中該(C2-C3)-亞烷基為未被取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或被R3取代的并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是氧；m是1；n是1。
6．根據(jù)權(quán)利要求1-3的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是飽和或不飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基，其中該(C2-C3)-亞烷基為未被取代或被一或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代鹵素、(C1-C6)-烷基-、(C1-C6)-烷氧基、(C6-C14)-芳基、(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基-、(C5-C14)-雜芳基、(C5-C14)-雜芳基-(C1-C6)-烷基-、(C3-C12)-環(huán)烷基、(C3-C12)-環(huán)烷基-(C1-C6)-烷基-和氧代，其中5-7元飽和或不飽和的環(huán)，它是未取代的或被R3取代的并且它是碳環(huán)或含有一或二個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán)，可稠合于所述(C2-C3)-亞烷基中的碳-碳鍵上；R3是(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是(C1-C4)-烷基或式Ⅱ的基團(tuán) 其中q是0或1，R3基團(tuán)可位于該苯基任何所要求的位置；R6是氫或(C1-C4)-烷基-O-CO-；A是氧；m是3；n是0。
7．根據(jù)權(quán)利要求1-6的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物，包括它的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R5是未被取代的芐基。
8．根據(jù)權(quán)利要求1-7的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物，包括它們的所有立體異構(gòu)體和所有比率的混合物以及它們的生理上可耐受的鹽和前藥，其中R1和R2一起是未被取代的、飽和的二價(jià)(C2-C3)-亞烷基；R4是氫或(C1-C4)-烷基；R5是未被取代的芐基；R6是氫；A是氧；m是3；n是0。
9．(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸和其生理上可耐受的鹽及其前藥。
10．(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酰氨基)丙酸和其生理上可耐受的鹽及其前藥。
11．(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-((1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?甲氧基)苯甲酰氨基)丙酸和其生理上可耐受的鹽及其前藥。
12．(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-(4-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基甲?；?丙氧基)苯基)丙酸和其生理上可耐受的鹽及其前藥。
13．制備權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物的方法，包括連接從式Ⅰ逆合成衍生的兩個(gè)或多個(gè)片段。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中使式Ⅲ的羧酸或羧酸衍生物 其中R4、R5、A、n和m按權(quán)利要求1-12中所示的定義，或者是可以以前體形式或被保護(hù)形式存在的其它官能團(tuán)，Ⅹ是可親核性取代的離去基團(tuán)，與式Ⅳ胍或胍衍生物反應(yīng)來制備， 其中R1、R2和R6按權(quán)利要求1-12中所示的定義，或者是可以以前體形式或被保護(hù)形式存在的其它官能團(tuán)。
15．用作藥物的根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
16．藥物制劑，它包含至少一個(gè)根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥以及藥學(xué)上無毒的載體。
17．用作玻連蛋白受體拮抗劑的根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
18．用作骨吸收抑制劑或用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
19．用作腫瘤生長或腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑的根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
20．用于抗炎或治療或預(yù)防心血管疾病、再狹窄、動(dòng)脈硬化、腎病或視網(wǎng)膜病的根據(jù)權(quán)利要求1-12的一項(xiàng)或多項(xiàng)的式Ⅰ化合物和/或其生理上可耐受的鹽和/或其前藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的?；已苌锛捌渖砩峡稍试S的鹽和前藥,其中R
文檔編號(hào)A61P43/00GK1284950SQ98813611
公開日2001年2月21日 申請日期1998年12月10日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月19日
發(fā)明者A·佩曼, J·克諾勒, G·布雷波爾, K－H·舍伊尼曼, D·卡尼爾托, J－F·古爾弗斯特, T·加德克, R·麥多維爾, S·C·波達(dá)賴, R·A·庫斯波特森, N·菲爾拉拉 申請人:艾文蒂斯藥品德國股份有限公司, 吉寧特有限公司