專利名稱：環(huán)加氧酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)加氧酶-2抑制劑。該抑制劑可以抑制前列腺素H和I的合成或其隨后代謝產(chǎn)物血栓烷的合成，并且可以用作治療和預(yù)防局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化以及多種炎性疾病的藥物。
環(huán)加氧酶(前列腺素-內(nèi)過氧化物合成酶)是一種催化花生四烯酸底物在體內(nèi)合成為前列腺素H2的酶。前列腺素H2的生理活性很高。由前列腺素H2可以生成代謝產(chǎn)物前列腺素D2、E2和F2以及代謝產(chǎn)物血栓烷A2和B2，所有這些代謝物也都具有較高的生理活性。
因此，對環(huán)加氧酶活性的抑制將使這些代謝物的合成受到抑制。所以，所述前列腺素H2抑制劑不但抑制前列腺素H2，也將抑制其他高生理活性的化合物，例如前列腺素D2、E2和F2以及血栓烷A2和B2。
普遍認為炎癥中涉及到環(huán)加氧酶。為達到治療此類炎癥的目的，業(yè)已廣泛應(yīng)用了多種環(huán)加氧酶抑制劑，其中包括阿斯匹林和吲哚美辛。然而，在對這些藥物的發(fā)現(xiàn)中，已知僅有一類環(huán)加氧酶普遍存在于生物體內(nèi)。
近期人們又發(fā)現(xiàn)了另一類環(huán)加氧酶，即誘導(dǎo)型環(huán)加氧酶。此類誘導(dǎo)型環(huán)加氧酶可被多種刺激所誘發(fā)并被稱作環(huán)加氧酶2，而所述普遍存在型環(huán)加氧酶現(xiàn)被稱作環(huán)加氧酶1。此外，人們已逐漸了解到，環(huán)加氧酶2與局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和多種炎性疾病極其相關(guān)。根據(jù)這樣的觀察，環(huán)加氧酶-2-抑制劑可能成為十分有效的藥物用于治療上述疾病(G.Cirino.Biochem.Pharmaol.55105-111，1998)。
鑒于上述內(nèi)容，本發(fā)明提供一種含有可抑制環(huán)加氧酶2的化合物作為活性組分的藥物，該藥物可以作為治療上述疾病的優(yōu)異治療藥物，由于該藥物毒性低、引起的副作用極小，使其適合在臨床上使用。
所以，本發(fā)明提供下列1)一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有作為活性組分的下式(1)或(1’)所示化合物
其中R1代表氫原子或具有1至3個碳原子的烷基；R2代表肽或蛋白質(zhì)，它們能夠通過其分子內(nèi)所含的巰基相結(jié)合，或R1和R2可以彼此連接成為一個單鍵；R3代表氫原子、鹵素原子、具有1至3個碳原子的烷基、具有1至3個碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基；而各R4和R5可彼此相同或不同，并且代表氫原子、鹵素原子、具有1至4個碳原子的烷氧基、三氟甲基，或R4和R5可以彼此連接成亞甲二氧基；或其鹽，或其水合物。
2)一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮(此后將稱作化合物A)、其鹽或其水合物作為活性組分。
3)一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有下式(2)所代表的化合物、其鹽或其水合物作為活性組分
其中R2代表肽或蛋白質(zhì)，它們能夠通過其分子內(nèi)所含巰基相結(jié)合，而R1、R3、R4和R5如上述定義。
4)一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氫硒基)-白蛋白(此后將稱作化合物B)、其鹽或其水合物。
本發(fā)明也涉及藥物組合物的制備方法，所述藥物組合物適用于治療和/或預(yù)防由于環(huán)加氧酶-2-抑制作用的失調(diào)和/或影響而引起的上述疾病，其中在制備組合物中以環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分，所述環(huán)加氧酶-2-抑制劑的特征在于它們是上述通式所示的化合物。
而且，本發(fā)明優(yōu)選涉及用于治療和/或預(yù)防局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和/或炎性疾病的藥物組合物的制備方法，其中在制備所述組合物中以上述類型的環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分。
在本發(fā)明的全文中，術(shù)語“活性組分”不但是指制備本發(fā)明組合物所用的一種活性組分，而且也包括這些活性組分的混合物。
此外，本發(fā)明還涉及一種治療和/或預(yù)防上述由于環(huán)加氧酶-2-抑制作用的失調(diào)和/或影響所引起的疾病的方法，其中是將含有上述類型環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分的藥物組合物以0.05至2000mg的日劑量(相對于活性組分而言)對成人進行經(jīng)口給藥。
成人經(jīng)口給藥的組合物優(yōu)選具有使每日給藥劑量達到100至2000mg，更優(yōu)選200至1000mg的所述活性組分濃度。
如果是將本發(fā)明所述方法用于治療和/或預(yù)防上述由于環(huán)加氧酶-2-抑制作用的失調(diào)和/或影響所引起的疾病，則將含有環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分的藥物組合物以0.05至1000mg的日劑量(相對于活性組分而言)對成人進行經(jīng)口給藥。
優(yōu)選將本發(fā)明所述方法用于治療和/或預(yù)防局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和/或炎性疾病。
根據(jù)活性組分的給藥濃度，本發(fā)明所述組合物可以每天服用一次至三次。
下文中將對本發(fā)明進行詳細描述。
如上所述，本發(fā)明提供一種含有式(1)化合物作為活性組分的環(huán)加氧酶-2-抑制劑。式(1)化合物中的取代基如下所述R1為氫原子或具有1至3個碳原子的烷基，并且優(yōu)選氫。
R2為肽或蛋白質(zhì)，它們能夠通過分子內(nèi)所含的巰基相結(jié)合，或R1和R2彼此連接成為一個單鍵。
R3為氫原子、鹵素原子、具有1至3個碳原子的烷基、具有1至3個碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基。其中優(yōu)選氫。
本發(fā)明還提供一種含有式(2)化合物作為活性組分的環(huán)加氧酶-2-抑制劑。式(2)化合物中的取代基如下所述式(2)中的R2代表肽或蛋白質(zhì)，它們能夠通過其分子內(nèi)所含的巰基結(jié)合；對于所述肽或蛋白質(zhì)，任何生理學(xué)可接受的肽或蛋白質(zhì)均可采用；而且，優(yōu)選血清內(nèi)存在的蛋白質(zhì)，例如白蛋白以及球蛋白。并且，在這些血清蛋白質(zhì)中，更優(yōu)選白蛋白；在所述白蛋白中，最優(yōu)選人白蛋白。
本發(fā)明所采用的制備化合物A的方法業(yè)已公開在日本特許公告(kokoku)號2-38591(即日本特許申請公開(Kokai)號57-67568)中。化合物B的合成方法也公開在日本特許申請公開(Kokai)號7-233056中。
根據(jù)現(xiàn)有制劑工藝，本發(fā)明所述化合物A可以與添加劑一起被配制為片劑、膠囊、粉末、顆粒、糖漿的形式或注射用制劑，所述添加劑可例如是賦形劑、粘合劑、崩解劑和增溶劑。
下面將描述具體制劑例。
當是片劑時采用下列配方片劑化合物A 50mg羧甲基纖維素25mg淀粉 5mg結(jié)晶纖維素40mg硬脂酸鎂 2mg總量 122mg當通過常規(guī)經(jīng)口給藥或非腸道給藥(例如注射劑)時，化合物A分別表現(xiàn)出預(yù)期的一級藥理學(xué)作用。當對成人經(jīng)口給藥時，化學(xué)物質(zhì)A的劑量為0.05至2000mg/天，優(yōu)選100至2000mg/天，更優(yōu)選200至1000mg/天。所述劑量可以依據(jù)患者癥狀的嚴重程度而改變。
本發(fā)明所述2-苯基氨基甲酰基-苯基氫硒基衍生物及其生理可接受鹽可以經(jīng)口或非腸道給藥。當成人經(jīng)口給藥時，所述劑量通常為0.05至1000mg/天。毒性對于化合物A和B的毒性，采用小鼠和大鼠來測定它們的LD50值。各化合物的小鼠LD50在經(jīng)口給藥時不低于6810(mg/kg)，當腹膜內(nèi)給藥時為740(mg/kg)。就大鼠而言，需要較大劑量才可達到LD50。上述結(jié)果表明，這些化合物的給藥具有很高的安全水平。我們對上述化合物中的一種，S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氫硒基)白蛋白進行了急性毒性試驗。將該化合物溶解在生理鹽水中并對小鼠靜脈內(nèi)給藥(5g/kg)。其LD50比1g/kg高許多，由此證實該化合物的安全量較高。急性毒性取4只8周齡的Wistar系雄性大鼠進行急性毒性試驗。將溶解在生理鹽水中的S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氫硒基)白蛋白靜脈內(nèi)給藥(1g/kg/3ml)，進而在此后的24小時內(nèi)對這些大鼠進行觀察。在觀測期間未發(fā)現(xiàn)特別的副作用，并且所有大鼠均健康成活。此外，當小鼠和大鼠的給藥劑量較高時，并沒有觀察到可疑的副作用。
在所述化合物中，S-(2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基)白蛋白被認為具有最高的預(yù)期功效。利用環(huán)加氧酶2合成的前列腺素H2及其代謝產(chǎn)物，例如前列腺素D2、E2和F2以及血栓烷A2和B2處于花生四烯酸級聯(lián)，即花生四烯酸的下游中。如上所述，在局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和各種炎性疾病中均涉及上述物質(zhì)。可以應(yīng)用2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基衍生物及其生理學(xué)可接受鹽來治療上述疾病，并且其給藥預(yù)后良好。
在本發(fā)明中，所述2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基衍生物包括化合物A和化合物B。
通過現(xiàn)有制劑技術(shù)，本發(fā)明所述2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基衍生物及其生理可接受鹽可以與添加劑一起被配制為片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、糖漿劑或注射用制劑，所述添加劑例如是賦形劑、粘合劑、崩解劑和增溶劑。
對均屬于本發(fā)明所述化合物的2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮衍生物以及2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基衍生物進行環(huán)加氧酶2活性抑制作用的體外試驗，所述環(huán)加氧酶2活性是指對花生四烯酸合成為前列腺素H2的催化。其結(jié)果表明它們具有很強的抑制作用，并且比吲哚美辛更強有效(參見表1)。
因此，本發(fā)明所述2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮衍生物以及2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基衍生物是最有希望成為上述疾病治療藥物的候選物，所述疾病與環(huán)加氧酶2的前列腺素H2合成有關(guān)。
本發(fā)明將通過下列實驗實施例作詳細描述，但這些實施例不對本發(fā)明的保護范圍起限定作用。實施例1在本實施例中以花生四烯酸為底物。將10μl花生四烯酸溶解在甲醇中(10mg/ml)并與5μCi14C標記的花生四烯酸混合；為得到干燥底物，在室溫下吹入氮氣以蒸發(fā)溶劑。此后，將該底物溶于50μl二甲基亞砜(DMSO)中，在該底物溶液中加入10ml的5mM Tris-HCl緩沖液(pH8.0)，該緩沖液中含有2mM苯酚；隨后進行超聲處理以使樣品溶解達到完全。分別制備出終濃度為0.1至10μM的試驗化合物溶液。在本實驗中，將與人血清白蛋白(HAS)結(jié)合的化合物溶解在上述緩沖液中，其它化合物用DMSO溶解。取5μl上述各化合物溶液并且加入到5μl所述底物溶液內(nèi)，進而混合。將樣品在35℃下預(yù)保溫約10分鐘。另外，用上述緩沖液將從綿羊胎盤(Cayman Chem.)中獲得的環(huán)加氧酶2稀釋10倍，取20μl酶溶液加至上述各個樣品中。酶促反應(yīng)是在35℃下進行30分鐘，進而在各樣品中加入0.5ml冰冷的乙醇以使反應(yīng)停止。隨后，向0.9ml的各個樣品中加入2.0ml2％乙酸溶液。用3.0ml乙酸乙酯提取花生四烯酸及其代謝產(chǎn)物-前列腺素H2。從各提取樣品中，取2.0ml為一份轉(zhuǎn)移到新試管中。在減壓條件下將被轉(zhuǎn)移樣品中的溶劑蒸除，并在真空下干燥樣品。隨后，將各干燥樣品溶解在100μl甲醇中，取5μl進行高分辨薄層層析的分析。用配比為70∶30∶8∶1∶0.5(v/v)的氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶乙酸∶水的展開液層析分離花生四烯酸及其代謝物前列腺素H2。將含有14C標準底物的層析薄板暴露于顯影板(富士膠片)下，用富士膠片生物成象分析儀BAS-2000進行分析，得到放射自顯影圖。在對標準放射性樣品所對應(yīng)的點進行掃描后可以繪制出劑量-反應(yīng)的標準曲線。此后，利用標準曲線，將花生四烯酸展開點和前列腺素H2展開點的掃描值轉(zhuǎn)化為放射量。吲哚美辛購自Sigma，PZ25由Rhone-Poulenc Rorer贈送。
結(jié)果如表1所示。
表1環(huán)加氧酶2抑制劑
ND未做試驗p-值的顯著性*，P＜0.05；**P＜0.01(按照Williams-Wilcoxon試驗計算)；化合物A2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮化合物BS-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氫硒基)白蛋白PZ252-苯基-1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮
權(quán)利要求
1.一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有作為活性組分的下式(1)或(1’)所示化合物
其中R1代表氫原子或具有1至3個碳原子的烷基；R2代表氫原子、羥基、能夠通過分子內(nèi)所含巰基相鍵合的有機基團，或R1和R2可以彼此連接成為一個單鍵；R3代表氫原子、鹵素原子、具有1至3個碳原子的烷基、具有1至3個碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基；各R4和R5可彼此相同或不同，并且代表氫原子、鹵素原子、具有1至4個碳原子的烷氧基、三氟甲基，或R4和R5可以彼此連接成為亞甲二氧基；或其鹽，或其水合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑，其中R2是肽、蛋白質(zhì)或糖蛋白，并且能夠通過其分子內(nèi)所含巰基相鍵合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑，其中R2是白蛋白、谷胱甘肽基或α-氨基酸基團，并且能夠通過其分子內(nèi)所含巰基相鍵合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑，其中所述白蛋白為人白蛋白。
5.一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有作為活性組分的2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮、其鹽或其水合物。
6.一種環(huán)加氧酶-2-抑制劑，該抑制劑含有作為活性組分的S-(2-苯基氨基甲?；?苯基氫硒基)-白蛋白、其鹽或其水合物。
7.一種制備藥物組合物的方法，所述藥物組合物適合于治療和/或預(yù)防由于環(huán)加氧酶-2-抑制作用的失調(diào)和/或影響而引起的疾病，其中在制備所述組合物中，將權(quán)利要求1至6任一項所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑用作活性組分。
8.一種制備藥物組合物的方法，所述藥物組合物適合于治療和/或預(yù)防局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和/或炎性疾病，其中在制備所述組合物中，將權(quán)利要求1至6任一項所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑用作活性組分。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中在制備所述組合物中，將權(quán)利要求1至6任一項所述的環(huán)加氧酶-2-抑制劑的混合物用作活性組分。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9任一項所述的方法，其中在制備所述組合物中，除活性組分或活性組分的混合物外還至少采用一種賦形劑、粘合劑、崩解劑和/或增溶劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10任一項所述的方法，其中所述組合物被配制為片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、糖漿的形式和/或注射用制劑。
12.一種治療和/或預(yù)防由于環(huán)加氧酶-2-抑制作用的失調(diào)和/或影響所引起的疾病的方法，其中將含有權(quán)利要求1至6任一項所述環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分的藥物組合物以0.05至2000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述組合物以100至2000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述組合物以200至1000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述組合物以0.05至1000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
16.一種治療和/或預(yù)防局部缺血性疾病、老年性癡呆、癌癥、哮喘、動脈硬化和/或炎性疾病的方法，其中將含有權(quán)利要求1至6任一項所述環(huán)加氧酶-2-抑制劑作為活性組分的藥物組合物以0.05至2000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述組合物以100至2000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述組合物以200至1000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述組合物以0.05至1000mg的日劑量對成人進行經(jīng)口給藥，所述日劑量是相對于活性組分而言。
20.根據(jù)權(quán)利要求12至19任一項所述的方法，其中所述組合物以片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、糖漿的形式和/或注射用制劑給藥。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述組合物每天給藥1至3次。
全文摘要
一種環(huán)加氧酶－2－抑制劑,其含有具有環(huán)加氧酶－2抑制活性且只引起極小副作用的低毒性的化合物作為活性組分。所述活性化合物如式(1)或(1’)所示,其中R
文檔編號A61P25/28GK1243749SQ9911017
公開日2000年2月9日 申請日期1999年6月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月1日
發(fā)明者田中淳二 申請人:納特曼和希依有限公司