專利名稱：抗白血病及逆轉(zhuǎn)耐藥的中藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療白血病過(guò)程中逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)的純中藥藥物，具體是該藥物針對(duì)白血病腫瘤細(xì)胞表面的耐藥基因產(chǎn)物P-糖蛋白，并與其結(jié)合逆轉(zhuǎn)白血病化療耐藥，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的中藥制劑。
白血病人們稱“血癌”，是危害人民健康，特別是青少年和兒童發(fā)病率較高的一種血液系統(tǒng)惡性腫瘤常見(jiàn)病?；熓侵委煱籽〉闹饕侄沃?。但容易導(dǎo)致化療失敗的重要原因就是耐藥性的產(chǎn)生。已證實(shí)造成白血病耐藥的原因是腫瘤細(xì)胞表面有一種耐藥的基因產(chǎn)物P-糖蛋白，它能主動(dòng)地將化療藥物(如長(zhǎng)春新鹼)泵出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，而使化療產(chǎn)生耐藥。選用鈣通道類阻滯劑能與細(xì)胞膜上的P-糖蛋白相結(jié)合，阻滯細(xì)胞外液中鈣離子，通過(guò)鈣通道向細(xì)胞內(nèi)流動(dòng)，抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物外流，提高細(xì)胞內(nèi)化療藥物濃度。目前國(guó)內(nèi)外選用鈣通道阻滯劑來(lái)結(jié)合P-糖蛋白的藥物都為毒性和副作用較大的4-雙氫吡啶類(如異搏定、心痛定、尼卡地平)，硫氮卓酮類(如鹽酸硫氮卓酮)等西藥制劑，對(duì)白血病化療所產(chǎn)生的副作用和抗腫瘤效應(yīng)十分不益。因此，篩選低毒，副作用少，既能逆轉(zhuǎn)化療耐藥又能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能進(jìn)行抗腫瘤的中藥方劑是白血病化療中十分重要的課題。經(jīng)湖南省醫(yī)藥信息所檢索，目前，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)到本發(fā)明藥方能逆轉(zhuǎn)耐藥，又能增強(qiáng)抗白血病效果的藥物。
本發(fā)明的目的是從中藥中篩選出具有提高機(jī)體免疫功能，又富含鈣拮抗活性成份的復(fù)合劑，達(dá)到低毒、副作用少，能結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面耐藥基因產(chǎn)物P-糖蛋白，逆轉(zhuǎn)化療耐藥，增強(qiáng)抗腫瘤的作用。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的方法是選用蓮子心加黃芪二味中藥，經(jīng)提取有效成份制備成膠囊口服、療效好的一種藥物。
以下是對(duì)本發(fā)明藥物的組分、藥效及制備方法作進(jìn)一步說(shuō)明。
一種抗白血病逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)抗腫瘤病效應(yīng)的藥物是由中藥蓮子心加黃芪組方而成，蓮子心與黃芪的比例配制是1∶2.5。以取蓮子心500克，黃芪1250克為例，分別提取兩味藥物中有效成份，制成1000粒膠囊劑型，每粒內(nèi)含蓮心生物鹼0.5克。中醫(yī)認(rèn)為蓮子心苦寒，歸心肺、腎經(jīng)，清心安神，交通心腎，可去熱，澀精止血，用于熱入心包，神昏譫語(yǔ)，心腎不交，失眠遺精，血熱吐血?，F(xiàn)代藥學(xué)認(rèn)為蓮子心內(nèi)含鈣拮抗活性生物鹼，是具有營(yíng)養(yǎng)、低毒、副作用少的睡蓮科植物，并具有鈣通道阻滯劑類藥物的特性，其鈣拮抗活性成份進(jìn)入體內(nèi)后，能迅速經(jīng)鈣通道途徑與腫瘤細(xì)胞表面的耐藥性基因產(chǎn)物P-糖蛋白結(jié)合，抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物外流，提高化療藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度。同時(shí)，蓮子心本身藥性苦寒可去熱，澀精止血，很適應(yīng)中醫(yī)所述白血病中的“溫邪”、“熱勞”、“血癥”范疇。
中醫(yī)認(rèn)為黃芪藥性甘溫，歸肺脾經(jīng)，補(bǔ)氣固表，利尿托毒，用于氣虛乏力，表虛自汗，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴等證?，F(xiàn)代藥學(xué)認(rèn)為黃芪為滋補(bǔ)強(qiáng)身植物，能作用于造血系統(tǒng)生血、排毒，對(duì)人體機(jī)能起免疫調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)免疫功能，很適應(yīng)中醫(yī)所述白血病中的“虛勞”、“熱毒”、“瘰疬”等證。
蓮子心與黃芪組合所形成具有抗白血病及逆轉(zhuǎn)耐藥和免疫功能的特性，是體現(xiàn)本發(fā)明藥物特有藥效釋放的最佳組方，蓮子心與黃芪配制的比例范圍是0.5-1.5∶2-3其中組方最佳配比是1∶2.5。
蓮子心與黃芪組合所釋放的藥性，形成具有抗白血病及提高免疫機(jī)能作用，它的藥效學(xué)研究結(jié)論如下1、使用本發(fā)明的藥物對(duì)體外三種白血病細(xì)胞株(CEM、K562、HL60)實(shí)驗(yàn)，均顯示有抑制腫瘤細(xì)胞作用。將本發(fā)明的藥物與抗癌藥物長(zhǎng)春新鹼(化療藥)聯(lián)合使用，顯示有明顯增強(qiáng)長(zhǎng)春新鹼藥物的作用。單用長(zhǎng)春新鹼對(duì)CEM、K562細(xì)胞株分別抑制率為21.00±4.90％，30.00±6.16％，加用本發(fā)明的藥物，分別抑制率為67.30±2.49、64.67±2.49％，兩組比較均有明顯差異(P＜0.01)。
2、對(duì)30例白血病患者白血病細(xì)胞逆轉(zhuǎn)耐藥與增強(qiáng)長(zhǎng)春新鹼的抗腫瘤試用中顯示長(zhǎng)春新鹼加本發(fā)明的藥物聯(lián)合作用組的細(xì)胞毒性63.36±27.97％，較長(zhǎng)春新鹼單藥組18.46±14.45％明顯增強(qiáng)(P＜0.01)，其中10例為臨床難治與復(fù)發(fā)患者采用單抗已證實(shí)P-糖蛋白高表達(dá)，長(zhǎng)春新鹼組細(xì)胞毒性為11.45±6.01％，而長(zhǎng)春新鹼加本發(fā)明藥物組為47.70±12.46％，兩組比較有明顯差異(P＜0.01)。
3、對(duì)34例白血病患者的白血病細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)，結(jié)果顯示長(zhǎng)春新鹼加本發(fā)明的藥物聯(lián)合作用的細(xì)胞毒性50.03±14.63％，較長(zhǎng)春新鹼單藥組14.45±7.71％明顯增強(qiáng)(P＜0.01)，其中20例為臨床難治與復(fù)發(fā)患者，采用單抗已證實(shí)P-糖蛋白高表達(dá)，長(zhǎng)春新鹼組細(xì)胞毒性為9.17±4.60％，而長(zhǎng)春新鹼加用本發(fā)明藥物組為46.70±12.20％，兩組比較有明顯差異(P＜0.01)。
4、應(yīng)用本發(fā)明藥物對(duì)小鼠移植性白血病模型作實(shí)驗(yàn)，結(jié)果經(jīng)小鼠脾重量及脾病理切片證實(shí)，用本發(fā)明的藥物對(duì)小鼠移植性白血病有抗腫瘤作用，劑量愈增加，作用更明顯，與未用本發(fā)明藥物組比較有明顯差異(P＜0.05)。
5、將小鼠用環(huán)磷酰胺抑制其免疫功能作實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，再?yīng)用本發(fā)明藥物觀察，免疫損傷的動(dòng)物模型及正常動(dòng)物其IFNr與NK活性水平明顯增高，與對(duì)照組相比均有明顯差異(P＜0.01)，顯示應(yīng)用本發(fā)明的藥物具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫機(jī)能的作用。
6、本發(fā)明藥物的動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示小鼠口服本發(fā)明藥物的最大耐受量為40g/kg，按70kg成人臨床用量折算為466.7倍，口服給藥是安全的。
7、將本發(fā)明藥方制備成膠囊劑，按1.3/kg、2.6/kg、5.1/kg/日給大鼠灌胃60天觀察長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，結(jié)果顯示小鼠毛發(fā)光澤，體重增高，血象、肝、腎功能均未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，小鼠心肝、脾、肺、腎、腎上腺6種臟器病理切片均未見(jiàn)異常。
本發(fā)明的藥物制備的最佳實(shí)施方案是將蓮子心與黃芪按1∶2.5比例配制，在蓮子心藥量基礎(chǔ)上加用醋酸乙醇(1-5％，45-70％)6-10倍量進(jìn)行動(dòng)態(tài)冷浸12-24小一種抗白血病逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)抗腫瘤病效應(yīng)的藥物是由中藥蓮子心加黃芪組時(shí)三次，收集冷浸液，將冷浸液在60-100℃的溫控下進(jìn)行醇化提取含蓮子心生物鹼的濃縮液(d＝1.05-1.15g/cm3)備用。
在黃芪藥量基礎(chǔ)上加8-10倍量的清水煎煮三次，每次1小時(shí)，收集煎煮液，在80-100℃的溫控下減壓濃編得到濃縮液(d＝1.20-1.30g/cm3)備用。
將蓮子心生物鹼濃縮液與黃芪濃縮液在配有糊精的溶液中混合，得到本發(fā)明藥物的混合液(d＝1.15-1.25g/cm3)，將混合液置入干燥箱內(nèi)，控制進(jìn)口溫度為270-320℃，出口溫度為85-130℃進(jìn)行干燥，得到淡黃色或棕色松散干粉，在乙醇稀潤(rùn)劑下將干粉制粒，形成干顆粒，在整粒操作下，裝入膠囊包裝，制成本發(fā)明的藥物。
本發(fā)明的藥物具有以下功效和優(yōu)點(diǎn)1、具有類似于鈣通道阻滯劑的作用，有選擇性的與腫瘤細(xì)胞表面的耐藥基因產(chǎn)物P-糖蛋白結(jié)合，減少和逆轉(zhuǎn)抗腫瘤藥物的耐藥性。
2、具有增強(qiáng)機(jī)體，免疫功能作用，配合抗腫瘤藥物化療時(shí)，有增加抗腫瘤的協(xié)同作用。
3、藥物毒性低，副作用少，易口服吸收，配制使用簡(jiǎn)便，藥效好，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
權(quán)利要求
1.一種抗白血病逆轉(zhuǎn)耐藥的中藥制劑，其特征是由蓮子心與黃芪組方而成的純中藥制劑，蓮子心經(jīng)提取后，含一種具有鈣拮抗活性成份的生物鹼，它與白血病腫瘤細(xì)胞表面的耐藥基因產(chǎn)物P-糖蛋白結(jié)合，阻滯化療藥物從腫瘤細(xì)胞內(nèi)泵出，提高細(xì)胞內(nèi)藥物濃度逆轉(zhuǎn)化療耐藥，黃芪具有補(bǔ)氣生肌，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述蓮子心與黃芪的組方，其特征在于蓮子心與黃芪的最佳配比藥量是1∶2.5，其藥量配比的控制范圍是0.5-1.5∶2-3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述蓮子心與黃芪的組方，其特征在于提取蓮子心生物鹼時(shí)所收集的冷浸液是在60-100℃溫控下醇化提取濃縮液，收集黃芪煎煮液時(shí)是在80-100℃的溫控下減壓濃縮得到黃芪濃縮液。
全文摘要
一種抗白血病及逆轉(zhuǎn)耐藥的中藥制劑由蓮子心與黃芪組方而成,其中蓮心生物鹼含鈣拮抗活性成分,結(jié)合作用于腫瘤細(xì)胞表面耐藥基因產(chǎn)物P－糖蛋白,阻滯細(xì)胞內(nèi)化療藥物泵出,黃芪經(jīng)溫控減壓提取濃縮液,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能,作用于補(bǔ)氣生肌排毒,兩藥組方形成具有抗白血病及逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)免疫提高抗腫瘤效應(yīng)的低毒中藥制劑。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1241441SQ9911540
公開日2000年1月19日 申請(qǐng)日期1999年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月2日
發(fā)明者謝兆霞 申請(qǐng)人:湖南醫(yī)科大學(xué)附屬湘雅醫(yī)院