專利名稱：抗cd3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，由所述基因編碼的多肽，含有所述基因的載體及所述的基因和多肽在制備診斷和治療腫瘤的藥物及在器官移植中抑制免疫排斥反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。
CD3為T細(xì)胞表面重要分子，參與T細(xì)胞受體識(shí)別抗原后的信號(hào)傳遞、T細(xì)胞激活增長過程及免疫細(xì)胞間相互作用等一系列重要的免疫應(yīng)答反應(yīng)。近年來，抗CD3單克隆抗體不僅是免疫學(xué)研究的有用工具，而且已成為臨床上主要免疫抑制劑之一。作為免疫調(diào)節(jié)分子的抗CD3單抗，在防治移植排斥上的作用已經(jīng)得到世界公認(rèn)。1986年FDA正式批準(zhǔn)Ortho公司的OKT3(一種抗CD3的鼠源性單抗)用于臨床試驗(yàn)。1989-1993年期間，美國急性腎移植的Ⅱ期臨床結(jié)果顯示，應(yīng)用含OKT3單抗的免疫抑制組方的療效要比其它組方好(移植后鞏固治療的4年存活率為100％)且花費(fèi)要少(移植后的前5年含OKT3的組方花費(fèi)30,474美元/年，用環(huán)胞菌素A組方的為32,687美元/年)。目前，OKT3單抗已準(zhǔn)備上Ⅲ期臨床試驗(yàn)，同時(shí)，OKT3單抗也已應(yīng)用與其它實(shí)體器官移植(如心臟移植、胰腺移植等)的Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗(yàn)。據(jù)1995年我國統(tǒng)計(jì)資料表明，全國僅腎移植就達(dá)2,382例次，這表明抗CD3單抗在國內(nèi)用于防治免疫排斥方面，具有廣泛的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。抗CD3單抗除了可用于防治移植物免疫排斥，還用于體內(nèi)外激活T淋巴細(xì)胞，并在其它細(xì)胞因子(如IL-2)的協(xié)同下，可殺傷腫瘤細(xì)胞，這也是人體內(nèi)免疫系統(tǒng)控制和殺滅腫瘤細(xì)胞的主要機(jī)制之一。但由于鼠源性的抗CD3單抗具有分子量較大，穿透能力差，免疫原性強(qiáng)等缺點(diǎn)，這將直接限制該類抗體用于腫瘤的體內(nèi)免疫顯像和治療的效果，為此，英美德等國積極投資研制和開發(fā)基因工程抗體，以克服鼠源性抗體上述諸多缺點(diǎn)。
本發(fā)明人在這種國際大環(huán)境下，采用國際上90年代較為先進(jìn)的抗體庫技術(shù)，成功地克隆到抗CD3抗體的輕重鏈可變區(qū)基因，并通過免疫篩選技術(shù)得到幾株生物活性較高的重組抗體克隆株，并且基于上述已克隆到的抗CD3抗體的輕重鏈可變區(qū)基因，采用基因操作方法，構(gòu)建和表達(dá)多種小分子工程抗體，如單鏈抗體片段，F(xiàn)ab抗體片段，單特異性雙價(jià)小抗體等，以便用于不同腫瘤的診斷和治療目的。與此同時(shí)，我們還研制了一種雙功能抗體(Diabody)，它是將抗CD3抗體/抗腫瘤抗體結(jié)合在一起的雙特異性工程抗體，可以介導(dǎo)細(xì)胞在體內(nèi)外對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，今后有望能解決“藥物在體內(nèi)的定向輸送”這一醫(yī)學(xué)難題。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，兩者重組后可表達(dá)出特異性識(shí)別和結(jié)合CD3的抗體活性片段，并克服了鼠源性抗體上述諸多缺點(diǎn)。
本發(fā)明的另一目的在于提供由所述抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因編碼的多肽產(chǎn)物。
本發(fā)明的再一目的在于提供含有所述基因的載體。
本發(fā)明的又一目的在于所述的基因和多肽在制備診斷和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用以及在器官移植中抑制免疫排斥反應(yīng)中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，其中所述的重鏈可變區(qū)基因全長為357bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，其編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO3所示。所述的輕鏈可變區(qū)基因全長為321bp，其核苷酸序列如SEQ IDNO2所示，其編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO4所示。兩個(gè)基因重組后可表達(dá)出特異性識(shí)別和結(jié)合CD3的抗體活性片段，并克服了鼠源性抗體的諸多缺點(diǎn)。本發(fā)明的抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因是能分泌活性較高的鼠源性抗CD3抗體的雜交瘤細(xì)胞株HIT3a中克隆的，該細(xì)胞株的建立見中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)第15卷第3期(1993)。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了含有所述抗CD3抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因的載體，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的載體例如為實(shí)施例中所述的表達(dá)載體pCANTABC3scFv。
本發(fā)明還涉及所述的基因和多肽在制備診斷和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用以及在器官移植中抑制免疫排斥反應(yīng)中的應(yīng)用。
以下參照附圖，以實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，其中

圖1為RT-PCR擴(kuò)增的抗CD3抗體可變區(qū)基因的瓊脂糖凝膠電泳圖，圖中泳道1為DNA標(biāo)記物φⅩ174RFDNA/HaeⅢ，泳道2為抗CD3單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因，泳道3為抗CD3單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因。
圖2示出含有本發(fā)明的抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因的表達(dá)載體pCANTABC3scFv的構(gòu)建過程。
圖3示出E-標(biāo)記親和層析純化的抗CD3scFv抗體片段(FPLC)，圖中，泳道4為菌體的外周質(zhì)裂解液；在分子量約為30KD處有一深的蛋白帶(箭頭處)；泳道3為裂解液經(jīng)E-標(biāo)記親和柱后流出液，對(duì)應(yīng)上述深帶處的蛋白帶消失，表明該蛋白帶已與親和柱結(jié)合；泳道2和1分別為洗脫液的第4、5級(jí)分收集液(含抗scFv抗體片段，大小為30KD左右)。
圖4為E-標(biāo)記親和層析純化的抗CD3scFv抗體片段的結(jié)合活性分析(FACS)，其中靶細(xì)胞為CD3+的Jurkat細(xì)胞；陰性對(duì)照為PBS；抗CD3 scFv抗體片段的反應(yīng)濃度為50μg/ml。
實(shí)施例1重鏈及輕鏈可變區(qū)基因的克隆及含有其表達(dá)載體的構(gòu)建1、所用細(xì)胞和鼠源性抗CD3抗體HIT3a是由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所免疫室采用傳統(tǒng)的細(xì)胞融合方法得到的一株能分泌活性較高的鼠源性抗CD3抗體(HIT3a)的雜交瘤細(xì)胞株，其分泌的抗體的分子亞型為IgG2a(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)第15卷第3期(1993))。Jarkat是一種Tac缺陷的人T細(xì)胞株，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所免疫室提供。上述細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)在10％胎牛血清(Gibco)的RPMI1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為37℃，5％CO2。純化的HIT3a抗體可通過將常規(guī)制備的腹水抗體經(jīng)蛋白A(Gibco)親和層析柱純化制備。
2、抗CD3抗體可變區(qū)基因的克隆取狀態(tài)良好的HIT3a雜交瘤細(xì)胞(5×106個(gè))，經(jīng)異硫氰酸胍一步法提取總RNA，隨后以O(shè)ligo(dT)15(Promega)為隨機(jī)引物，逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA。爾后，采用通用的兼并性引物特異性地分別擴(kuò)增抗體輕鏈、重鏈可變區(qū)基因(VL和VH)。擴(kuò)增產(chǎn)物VH基因(360bp左右)和VL基因(325bp左右)，經(jīng)瓊脂糖(1.5％)電泳后，切膠分離靶片段，再將含上述兩基因的膠塊分別經(jīng)Microspin柱(PharmaciaBiotech)離心(2444rpm,2分鐘)分離，得到純化的DNA片段，凝膠電泳定量，見圖1。
以O(shè)ligo(dT)15(Promega)為隨機(jī)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄方案如下40μl反應(yīng)體系中依次加入2μg總RNA，100ng隨機(jī)引物(Oligo(dT)15)，1μl 10mM4×dNTP，8μ15×緩沖液，1μl 0.1M DTT，適量的水，混勻，65℃水浴5分鐘，冰浴3分鐘，加入Rnasin 40U，200U M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，混勻，37℃孵育1小時(shí)，然后置于95℃水浴10分鐘。反應(yīng)產(chǎn)物保存于-20℃?zhèn)溆?。PCR擴(kuò)增體系如下輕鏈PCR擴(kuò)增體系 重鏈PCR擴(kuò)增體系逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 5μl逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5μlLight Primer Mix2μlHeavy Primer Mix 2μl滅菌去離子水42μl 滅菌去離子水 42μlVent DNA聚合酶 1μl(2U)Vent DNA聚合酶 1μl(2U)反應(yīng)程序94℃ 5分鐘，1個(gè)循環(huán)；94℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，72℃ 2分鐘，30個(gè)循環(huán)；72℃5分鐘，1個(gè)循環(huán)。
3、VH和VL基因的拼接和單鏈抗體基因表達(dá)載體的構(gòu)建將VH基因和VL基因用一編碼(GGGGS)3短肽的DNA片段連接成5’VH-接頭-VL3’片段，接著采用PCR擴(kuò)增該片段(約800bp)，并在5’端加上SfiI酶切位點(diǎn)，在3’端加上NotI酶切位點(diǎn)。擴(kuò)增產(chǎn)物走1.5％瓊脂糖凝膠電泳，切取含靶片段凝膠，純化。純化的scFv DNA片段經(jīng)SfiI和NotI酶切后，經(jīng)苯酚氯仿異戊醇(25241)抽提后，上清經(jīng)Microspin柱離心(2444rpm，2分鐘)分離，得到純化的scFv片段，爾后將此片段連接到一噬菌體表達(dá)載體pCANTAB 5E(Pharmacia Biotech)上，組裝成含scFv抗體片段基因的表達(dá)載體pCANTABC3scFv，如圖2所示。
具體地，用于VH和VL基因的拼接的50μl反應(yīng)體系如下輕鏈PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 1μl(50ng)重鏈PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 2μl(50ng)接頭一引物混合物 4μl10×PCR緩沖液(含Mg2+)5μldNTP(10nM) 1μl滅菌去離子水 42μlVent DNA聚合酶1μl(2U)拼接程序每個(gè)循環(huán)包括94℃ 1分鐘，63℃ 4分鐘，共15個(gè)循環(huán)。
PCR擴(kuò)增單鏈抗體(scFv)基因具體過程是向上述拼接反應(yīng)產(chǎn)物中加入等體積的如下擴(kuò)增反應(yīng)溶液(50μl)10×PCR緩沖液(含Mg2+) 5μldNTP(10nM) 1μlRS引物混合物 4μl滅菌去離子水 39μl
Vent DNA聚合酶1μl(2U)擴(kuò)增程序每個(gè)循環(huán)包括94℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，72℃ 2分鐘，共30個(gè)循環(huán)。
實(shí)施例2抗CD3 ScFv抗體庫的建立和淘選法篩選特異性抗CD3噬菌體抗體克隆采用電穿孔方法將實(shí)施例1的pCANTABC3scFv質(zhì)粒轉(zhuǎn)入TG1細(xì)菌中，獲得抗CD3 ScFv抗體庫，庫的大小為1微克DNA轉(zhuǎn)化后獲得106個(gè)克隆。將抗體文庫中細(xì)菌在2YTAG培養(yǎng)基(100μg/ml氨芐青霉素，2％葡萄糖)中常規(guī)培養(yǎng)至OD值為0.8時(shí)加入M13K07輔助噬菌體(4×109pfu/ml培養(yǎng)液)，繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)后，離心(4000rpm，10分鐘)，棄上清，再經(jīng)適當(dāng)體積的2YTAK培養(yǎng)基(含100μg/ml氨芐青霉素，50μg/ml的卡那霉素)溶解沉淀，30℃培養(yǎng)過夜，爾后，常規(guī)提取噬菌體。將提取的噬菌體與已用含10％胎牛血清的PBS(PH7.4)封閉過1小時(shí)的Jukat細(xì)胞(107個(gè))孵育(4℃，振蕩2小時(shí))，然后離心，棄上清，再用PBS(含0.1％TritonX-100)洗10次，最后用0.1N甘氨酸(PH2.2，含0.1％BSA)洗脫噬菌體，離心，棄沉淀，上清中加入適量PEG/NaCl沉淀噬菌體，離心(8000rpm)，棄上清，沉淀用PBS洗2次后，再溶于適量TE(PH8.0)中，該噬菌體再去感染適量的對(duì)數(shù)生長期的TG1菌體后，涂布于2YTAG平板(1％瓊脂，100μg/ml氨芐青霉素，2％葡萄糖)，30℃培養(yǎng)過夜。獲得第一次淘選后的文庫(106)，如上步驟，共進(jìn)行5輪淘選法活性篩選后，獲得一均一和穩(wěn)定的文庫(107)。
采用BstNI酶切噬菌體中ScFv基因，比較電泳后的酶切指紋圖譜的均一性。隨后采用Sanger雙脫氧鏈終止法測序(見分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè))和基因序列分析。應(yīng)用同源氨基酸比較法進(jìn)行抗體可變區(qū)鑒定，結(jié)果表明所克隆的基因是目的基因。
實(shí)施例3抗體的活性鑒定采用免疫組織化學(xué)法(ApAAp法)和ELISA方法對(duì)實(shí)施例2獲得的重組噬菌體抗體進(jìn)行活性鑒定。
重組噬菌體抗體的提取按1/5的比例向重組噬菌體抗體上清中加入PEG/Nacl(2.5M NaCl中含20％PEG6000)，冰上放置30-60分鐘，10000rpm，4℃，離心20分鐘，棄上清，立即用適量的2xYT或PBS溶解沉淀，爾后，過0.45μm濾膜，備用或保存。
ApAAp法見《現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)血液學(xué)研究方法與技術(shù)》，鄭德先等主編，北京，北京醫(yī)科大學(xué)和協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1999，475頁ELISA法(用于顆粒性抗原)具體步驟如下1)靶細(xì)胞抗原的固定在已用多聚L型賴氨酸預(yù)先處理(室溫40分鐘)的96孔板中加入靶細(xì)胞(5-3×105/孔)，室溫放置45分鐘或4℃過夜，去掉上清后加入0.1％戊二醛室溫固定3分鐘，PBS洗2次。2)抗體與靶細(xì)胞的反應(yīng)將待測的標(biāo)本與靶細(xì)胞孵育至少30分鐘，接著用含有0.05％Tween-20的PBS(PBST)洗5次，然后，如上所述過程依次向反應(yīng)體系中加入二抗、三抗進(jìn)行反應(yīng)。3)顯色反應(yīng)當(dāng)接有HR的三抗反應(yīng)完畢后，用PBST洗5次后。流盡殘液后加入新鮮配制的顯色劑(6 mg DAB于10ml 0.01MTris-HCl(PH7.6)中，使用前加入10μl30％雙氧水/10ml)，37℃顯色。顯色至合適強(qiáng)度時(shí)，記錄結(jié)果。
結(jié)果表明次級(jí)文庫與靶抗原的反應(yīng)強(qiáng)度呈遞增現(xiàn)象。第5輪淘選后隨機(jī)挑選8個(gè)克隆均能與靶抗原有反應(yīng)。
實(shí)施例4抗CD3 scFv抗體片段可溶性表達(dá)取已被證明含有陽性重組噬菌體抗體的噬菌體去感染對(duì)數(shù)期的大腸桿菌HB2151，并在含有100μg/mlAmp，2％葡萄糖，100μg/ml萘啶酮酸的2xYT平板(1％瓊脂)篩選轉(zhuǎn)化子。挑單克隆接種到5ml2xYT-AG培養(yǎng)基中，30℃、250rpm，過夜培養(yǎng)，爾后，將上述5ml培養(yǎng)基加入到50ml新鮮配置的2xYT-AG中，30℃、250rpm，培養(yǎng)1小時(shí)，然后離心(4,000rpm,10分鐘，室溫)，收集沉淀，接著換用50ml新鮮的2xYT-AI懸浮沉淀，誘導(dǎo)培養(yǎng)8-24小時(shí)(30℃、250rpm)。離心(7,000rpm,4℃,10分鐘)收集沉淀，置于-20℃速凍1小時(shí)后，取出，加入裂解緩沖液，4℃，輕輕振蕩至少1小時(shí)，再離心(12,000rpm,10分鐘,4℃)，收集上清(含重組抗體)，過0.45μM膜，最后放置-20℃保存。
接著，采用抗E-tag親和層析柱純化抗CD3 scFv抗體片段，具體地，將抗E-tag親和層析柱連接到FPLC上，用15ml洗脫液洗一次柱，爾后用25ml結(jié)合緩沖液洗一次，流速為5ml/min。用上樣器進(jìn)樣，流速為0.5-5ml/min。之后再用25ml結(jié)合緩沖液洗一次柱，以去除大量未結(jié)合的細(xì)菌蛋白。接著用15ml洗脫液洗將結(jié)合到柱上的抗CD3 scFv抗體片段洗脫下來，流速為5ml/min，收集出峰時(shí)的組分2ml/管，并立即向其中加入200μl中和緩沖液，調(diào)PH值至7.0-7.4。最后，用25ml結(jié)合緩沖液沖、平衡親和柱，密封，置于4C保存。
采用Amicon公司的Centricon-10(截流分子量為10KD)離心濃縮器，濃縮條件為4,000rpm、4℃、30分鐘。濃縮后的樣品可用于SDS-PAGE電泳和生物學(xué)活性分析。
隨后用12％的SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物。具體地，所得到的樣品中加入等體積2xSDS上樣緩沖液，加樣緩沖液的量為所誘導(dǎo)表達(dá)后菌體體積的0.1倍。其它樣品則調(diào)整為同一蛋白濃度后，加入等體積加樣緩沖液。煮沸5分鐘后離心，上樣。樣品在濃縮膠中的電壓為8V/cm，進(jìn)入分離膠后電壓調(diào)至15V/cm。電泳完畢用考馬斯亮藍(lán)R-250染色，10％乙酸，30％甲醇溶液中脫色，凝膠保存于含20％甘油的蒸餾水中。
表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳分析，結(jié)果表明，所挑選的克隆株能表達(dá)可溶性的抗CD3 scFv抗體片段。見圖3。實(shí)施例5抗CD3 scFv抗體片段的生物學(xué)活性測定采用間接免疫熒光法(FACS)測定抗CD3 scFv抗體片段的生物學(xué)活性，方法詳見《現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)血液學(xué)研究方法與技術(shù)》，鄭德先等主編，北京，北醫(yī)大和協(xié)和醫(yī)大聯(lián)合出版社，1999。所用靶細(xì)胞為CD3+的Jurkat細(xì)胞；陰性對(duì)照為PBS；抗CD3 scFv抗體片段的反應(yīng)濃度為50μg/ml，結(jié)果見圖4。
序列表SEQ ID NO1的信息序列長度357bp序列類型核酸分子類型cDNA序列描述SEQ ID NO11 CAGGTGCAGC TGCAGGAGTC TGGGGCTGAA CTGGCAAGAC CTGGGGCCTC AGTAAAGATG61 TCCTGCAAGG CTTCTGGCTA CACCTTTACT AGGTACACGA TGCACTGGGT AAAACAGAGG121 CCTGGACAGG GTCTGGAATG GATTGGATAC ATTAATCCTA GCCGTGGTTA TACTAATTAC181 AATCAGAAGT TCAAGGACAA GGCCACATTG ACTACAGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAT241 ATGGAGCTCA CTAGGCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATATTAC301 GATGATCATT ACTGCCTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA CGGTCACCGT CTCCTCASEQ ID NO2的信息序列長度321bp序列類型核酸分子類型cDNA序列描述SEQ ID NO21 GACATCGAGC TCACTCAGTC TCCAGCAATC ATGTCTGCAT CTCCAGGGGA GAAGGTCACC61 ATGACCTGCA GTGCCAGCTC AAGTGTAAGT TACATGAACT GGTACCAGCA GAAGTCAGGC121 ACCTCCCCCA AAAGATGGAT TTATGACACA TCCAAACTGG CTTCTGGAGT CCCTGCTCGC181 TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCAGCGGCAT GGAGGCTGAA241 GATGCTGCCA CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTAACC CATTCACGTT CGGCTCGGGG301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GSEQ ID NO3的信息序列長度119個(gè)氨基酸殘基序列類型氨基酸分子類型肽序列描述SEQ ID NO31 Q V Q L Q E S G A E L A R P G A S V K M S C K A S G Y T F T31 R Y T M H W V K Q R P G Q G L E W I G Y I N P S R G Y T N Y61 N Q K F K D K A T L T T D K S S S T A Y M E L T R L T S E D91 S A V Y Y C A R Y Y D D H Y C L D Y W G Q G T T V T V S SSEQ ID NO4的信息序列長度107個(gè)氨基酸殘基序列類型氨基酸分子類型肽序列描述SEQ ID NO41 D I E L T Q S P A I M S A S P G E K V T M T C S A S S S V S31 Y M N W Y Q Q K S G T S P K R W I Y D T S K L A S G V P A R61 F S G S G S G T S Y S L T I S G M E A E D A A T Y Y C Q Q W91 S S N P F T F G S G T K L E L K R
權(quán)利要求
1.一種抗CD3抗體的重鏈可變區(qū)基因，其具有SEQ ID NO1的序列。
2.由權(quán)利要求1的基因編碼的多肽產(chǎn)物，其具有SEQ ID NO3的序列。
3.一種抗CD3抗體的輕鏈可變區(qū)基因，其具有SEQ ID NO2的序列。
4.由權(quán)利要求3的基因編碼的多肽產(chǎn)物，其具有SEQ ID NO4的序列。
5.一種表達(dá)載體，其含有權(quán)利要求1的抗CD3抗體的重鏈可變區(qū)基因及權(quán)利要求3的抗CD3抗體的輕鏈可變區(qū)基因。
6.如權(quán)利要求5的表達(dá)載體，其為pCANTABC3scFv。
7.如權(quán)利要求5或6的表達(dá)載體所表達(dá)的多肽產(chǎn)物。
8.權(quán)利要求1或3所述的基因在制備診斷和治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1或3所述的基因在制備在器官移植中抑制免疫排斥反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了抗CD3單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因,由所述基因編碼的多肽,含有所述基因的載體及所述的基因和多肽在制備診斷和治療腫瘤的藥物及在器官移植中抑制免疫排斥反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/7088GK1298020SQ99125250
公開日2001年6月6日 申請(qǐng)日期1999年11月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月30日
發(fā)明者楊純正, 朱禎平, 熊冬生, 許元富, 彭暉, 賴增祖, 邵曉楓, 范冬梅, 徐晨 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院