專利名稱：天然產(chǎn)物的協(xié)同混合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有番茄紅素和大蒜的組合物。更具體來說，本發(fā)明涉及番茄紅素和大蒜的協(xié)同混合物，所述組合物在防止LDL氧化中的應(yīng)用，以及所述組合物在制備用于抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的藥物組合物或食用組合物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在西方國家，有50％以上的人死于動(dòng)脈粥樣硬化(Davies MJ，和Woolf N．動(dòng)脈粥樣硬化它是什么并且是怎樣發(fā)生的 《英國心臟病雜志》(Br Heart J)69S3，1993)。此外，動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致很多心臟病，例如心絞痛綜合征、心肌梗塞、缺血性心肌病、心跳聚停、腦血管意外、和外周血管疾病。從多個(gè)流行病學(xué)研究中已經(jīng)得出了冠心病(CHD)與危險(xiǎn)因素例如高動(dòng)脈壓、吸煙和高脂血癥相關(guān)的無可爭議的證據(jù)。在迄今為止所發(fā)現(xiàn)的所有危險(xiǎn)因素中，脂質(zhì)失調(diào)在動(dòng)脈粥樣硬化性血管病、尤其是CHD的致病機(jī)理中起關(guān)鍵作用。許多流行病和臨床試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，在高血脂和CHO的高發(fā)病率之間有很強(qiáng)的聯(lián)系。從1984年開始一直持續(xù)進(jìn)行的The Framingham Heart Study(Castelli WP，Anderson K．，Wilson PW．，Levy D．脂質(zhì)和冠心病危險(xiǎn)性，The Framingham Study．Ann Epidemiol 2(1-2)23-28，1992)表明，高膽固醇血癥是造成CHO的主要原因。動(dòng)脈粥樣硬化和膽固醇之間的聯(lián)系已被很多臨床試驗(yàn)證實(shí)。
脂肪不溶于血液的含水介質(zhì)。因此，脂類甘油三酯、磷脂和膽固醇的運(yùn)輸僅通過脂質(zhì)-蛋白復(fù)合物-脂蛋白來進(jìn)行。脂蛋白分為4大類乳糜微粒、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、和高密度脂蛋白(HDL)，它們?cè)诮M成、大小、和潛在的動(dòng)脈粥樣硬化形成方面不同。
測定血漿中總膽固醇水平可反映出各個(gè)脂蛋白中運(yùn)輸?shù)哪懝檀伎偭?。然而，在血漿中，LDL和HDL是主要的膽固醇載體，僅有一小部分膽固醇是在VLDL或乳糜微粒中運(yùn)輸?shù)摹?br> 動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)逐漸發(fā)展的病變過程，其特征是脂質(zhì)填充巨噬細(xì)胞(泡沫細(xì)胞)、和平滑肌細(xì)胞積聚，造成動(dòng)脈血管壁變厚和變硬。積聚在泡沫細(xì)胞內(nèi)的膽固醇的主要來源是循環(huán)LDL。很多流行病和臨床試驗(yàn)表明，LDL作為大約70％總血漿膽固醇的載體，是主要的致動(dòng)脈粥樣化脂蛋白。LDL的水平增高會(huì)帶來特別危險(xiǎn)，降低LDL膽固醇可減小動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)。脂質(zhì)研究臨床部冠心病初級(jí)預(yù)防試驗(yàn)(LRC-CPPT)已經(jīng)首次提供了強(qiáng)有力的證據(jù)表明，在男性中，降低LDL膽固醇能減小心肌梗塞發(fā)生率和梗塞死亡率。
包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的幾乎所有細(xì)胞都通過LDL-受體攝取外源性膽固醇。然而，細(xì)胞膽固醇含量的增加會(huì)使LDL受體數(shù)目下調(diào)，由此就防止了膽固醇通過該途徑而在細(xì)胞的過度積聚。據(jù)表明，包括氧化LDL在內(nèi)的化學(xué)或生物修飾可提高修飾的脂蛋白通過其它細(xì)胞表面受體-稱為清除受體的攝取量。這些受體存在于巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上。
據(jù)信，LDL的氧化修飾在動(dòng)脈粥樣硬化中起病因性作用(參見例如Steinberg D．，Parthasarathy S．，Carew T．E．，Khoo J．C．和Witztum J．L．，“過量膽固醇低密度脂蛋白的修飾提高了其致動(dòng)脈粥樣化作用”，《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(N．Engl．J．Med．)1989；320915-924；Haberland M．E．和Fogelman A．M．“改性脂蛋白在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理中的作用”，《美國心臟病雜志》(Am．Heart J)1987；113573-577；和Witztum J．L．，“動(dòng)脈粥樣硬化的氧化假說”《柳葉刀》(Lancet)1994；344，793)。因此，據(jù)信通過抗氧化劑防止LDL氧化可抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展(參見例如Aviram M．過量膽固醇脂蛋白修飾和pitherogenicity增加。在動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥和血栓形成(GG Neri Sermeri，GF Geusini，R，Abbate and D．Prisco eds)中，Scientific Press-Florence，Italy，pp15-36，1993；AviramM．氧化的低密度脂蛋白(OX-LDL)與巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的相互作用和抗氧化劑的ocutioctberogenicity，Europ．J．Clin．Chem．Clin．Biochem．34599-608，1996)。
防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展對(duì)于公眾健康有重要意義。因此使用具有復(fù)合作用(例如降低膽固醇水平和抑制氧化修飾作用)的治療劑，可獲得比使用其它具有單一作用的活性劑更好的效果。
類胡蘿卜素是具有親脂性特征的色素，其廣泛分布在水果和植物中(例如胡蘿卜中含有β-胡蘿卜素，番茄中含有番茄紅素)，并具有一些抗氧化劑特性(參見例如Burton G．W．，“類胡蘿卜素的抗氧化作用”，1989；《營養(yǎng)學(xué)雜志》(J．Nutr．)119109-11l和KrinskyN．I．，“類胡蘿卜素”，F(xiàn)ree Rad．Biol．Med．1989，7617-635(9-13))。類胡蘿卜素是在循環(huán)脂蛋白內(nèi)而被運(yùn)輸?shù)?，?jù)假定其參與防止LDL被氧化修飾。
以前的流行病研究表明，攝食類胡蘿卜素能降低心血管疾病死亡率(參見例如Kohlmeier L．和Hastings S．B．，“類胡蘿卜素在預(yù)防心血管疾病方面的作用的流行病學(xué)證據(jù)”，《美國臨床營養(yǎng)學(xué)雜志》(Am．J．Clin．Nutr．)1995；62137S-146S)，但是近來的數(shù)據(jù)沒有證實(shí)類似的有益效果(參見例如Hennekens C．H．，Buring J．E．，Manson J．E．，Stampfer M，Rosier B．，Cook N．R．，Belanger C．，LaMotte F．，Gaziano J．M．，Ridker P．M．，Willett W．和Peto R．，“長期補(bǔ)充β-胡蘿卜素對(duì)于惡性腫瘤和心血管疾病沒有作用”，《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(N．Engl．J．Med．)1996；3341145-1149)。
近來顯示，降低血脂過氧化與增加番茄攝食有關(guān)。據(jù)顯示，低血漿類胡蘿卜素水平與心肌梗塞危險(xiǎn)性增加有關(guān)，近來證實(shí)，β-胡蘿卜素和急性心肌梗塞的關(guān)系依賴于聚不飽和脂肪酸狀態(tài)，因此，給喂以膽固醇的兔子喂食β-胡蘿卜素的全反式異構(gòu)體能減弱它們的動(dòng)脈粥樣硬化程度，而在體外對(duì)LDL的氧化作用沒有任何影響。關(guān)于體外或體內(nèi)補(bǔ)充β-胡蘿卜素來防止LDL氧化的能力的數(shù)據(jù)是不一致的有些實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充β-胡蘿卜素對(duì)于LDL氧化有抑制作用，而另一些實(shí)驗(yàn)則沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。
番茄紅素-β-胡蘿卜素的開鏈類似物，與β-胡蘿卜素有類似結(jié)構(gòu)，其具有延伸的共軛雙鍵。在人血漿中，番茄紅素和β-胡蘿卜素是同等數(shù)量級(jí)的主要的類胡蘿卜素。據(jù)顯示，在各種類胡蘿卜素當(dāng)中，番茄紅素表現(xiàn)出最強(qiáng)的單線態(tài)氧猝滅能力(DiMascio P．，Kaiser S．& Sies H．，“番茄紅素是最有效的生物類胡蘿卜素單線態(tài)氧猝滅劑”，《生物化學(xué)與生物物理學(xué)文獻(xiàn)》(Arch．Biochem．Biophys．)，1989，274532-538)，并且據(jù)顯示，在保護(hù)血液淋巴細(xì)胞免受NO2游離基損害方面，番茄紅素的抗氧化作用是β-胡蘿卜素的至少2倍(Bohm F．，Tinkler J．H．，和Truscott T．G．，“類胡蘿卜素保護(hù)細(xì)胞膜免受二氧化氮游離基的損害”，Nature Medicine，1995，298-99)。
我們最近已經(jīng)證實(shí)了番茄紅素抗LDL氧化修飾的保護(hù)作用。番茄紅素的這種LDL保護(hù)作用超過了β-胡蘿卜素表現(xiàn)出的保護(hù)作用，當(dāng)胡蘿卜素與維生素E一起存在時(shí)，據(jù)顯示，保護(hù)作用僅選擇性地作用于高維生素E含量的LDL(參見例如Fuhrman B，Ben Yaish L，Attiasy．Hayek T，Aviram M．番茄紅素和β-胡蘿卜素抑制低密度脂蛋白氧化，并且該作用依賴于脂蛋白維生素E含量。Nutr Metab．Cardiovasc．Dis 7433-443，1997)。此外，我們還證實(shí)了，通過飲食補(bǔ)充番茄紅素可以起到繼其抑制細(xì)胞膽固醇合成作用之后的中度降血膽固醇劑的作用(參見例如Fuhrman B．，Elis A．，Aviram M．，番茄紅素和β-胡蘿卜素的降低血膽固醇作用與抑制巨噬細(xì)胞中膽固醇合成和增加LDL受體活性有關(guān)。Bichem，Biophys Res．Commun 233658-662(1997))。
大蒜的治療作用及其組分已有廣泛報(bào)道。參見例如，K．G．Agarwal，Med．Res．Rev．，Vol 16(1996)pp．111-124；L．D．Lawson，大蒜的生物活性有機(jī)硫化合物及其在降血脂中的作用，pp．308-330在A．D．Kinghorn和MiF．Balandrin(編者)，Human MedicinalAgents form Plants，American Chemical Society Books，Washington，1983；S．Eilat等人，Coronary Artery Disease，Vol．6(1995)985-990；Anonymous，除臭(陳化)大蒜產(chǎn)物與含有大蒜產(chǎn)物的常見大蒜素的對(duì)比Summary of Current Knowledge，Wakunanagaof America發(fā)行的Commercial White Paper(數(shù)據(jù)未知)。
大蒜對(duì)膽固醇作用的大多數(shù)重要結(jié)果都是從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中獲得的。在高血脂兔子中，大蒜素對(duì)血清脂相(lipid profile)具有有益作用(Eilat，S．，Oestraicher，Y．，Rabinkov，A．，等人，通過大蒜的活性組分-大蒜素改變高血脂兔子的脂相，Coron．ArteryDis．6985-90，1995．)。在大鼠中的類似結(jié)果也有報(bào)道(Lata，S．，Saxena，K．K．，Bhasin，V．，等人，大蒜、洋蔥、和穆庫爾沒藥(commiphora mukul)對(duì)實(shí)驗(yàn)高血脂的有利作用和動(dòng)脈粥樣硬化比較評(píng)價(jià)，J-Postgrad-Med．37132-5，1991)。大蒜可顯著地降低通過給大鼠喂食膽固醇而誘導(dǎo)的高膽固醇血癥。此外，也發(fā)現(xiàn)，對(duì)于在高膽固醇血癥時(shí)會(huì)受到強(qiáng)烈損傷的谷胱甘肽依賴性過氧化物解毒體系的酶的保護(hù)方面，大蒜具有顯著的作用(Heinle，H．和Betz，E．在動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型中通過飲食補(bǔ)充大蒜的作用，Arzneimittelforschung．44614-7，1994)。大蒜對(duì)人血清脂相的作用已經(jīng)成為爭論的焦點(diǎn)。根據(jù)一些觀點(diǎn)，對(duì)于補(bǔ)充大蒜，科學(xué)證據(jù)不充分(Kleijnen，J．，Knipschild，P．，和ter Riet，G．大蒜、洋蔥和心血管疾病危險(xiǎn)因素。重點(diǎn)在市售制劑的從人體實(shí)驗(yàn)中得到的證據(jù)的回顧(Br．J．Clin．Pharmacol．)2835-44，1989)，但是這一看法隨著更近期實(shí)驗(yàn)的發(fā)表而被改變了。在食用大蒜粉的老年人(70和70歲以上)中，發(fā)現(xiàn)膽固醇有非常輕微的減少(Brosche，T．，Platt，D．，和Dorner，H．大蒜制備物對(duì)老年受試者血漿脂蛋白組成和紅細(xì)胞的作用，Br J Clin Pract Symp Suppl．6912-9，1990)。另一方面，50名年齡在17-22歲之間的醫(yī)學(xué)生在早餐后服用未加工大蒜，連續(xù)2個(gè)月。血清膽固醇顯著下降，同時(shí)血凝時(shí)間和纖維蛋白分解活性提高了(在正常受試者中，Gadkari，J．V．和Joshi，V．D．?dāng)z取未加工大蒜對(duì)血清膽固醇水平、凝血時(shí)間、和纖維蛋白分解活性的影響．J-Postgrad-Med．37128-31，1991)。也測定了食用新鮮大蒜頭對(duì)血小板血栓烷生成的影響。食用大蒜26周后，血清膽固醇水平下降了約20％，血清血栓烷減少了約80％(Ahi，M．和Thomson，M．每天攝取大蒜頭有助于預(yù)防血栓形成。Prostaglandins-Leukot．Essent．Fatty Acids．53211-2，1995)。這些和其它結(jié)果表明，大蒜有益于中度高血壓和高血脂的病例(Auer，W．，Eiber，A．，Hertkorn，E．，等人。大蒜有益于中度高血壓和高血脂的病例。Br JClin Pract Symp Suppl．693-6，1990)。未作很詳細(xì)的說明，用大蒜和銀杏組合物進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)(Kenzelmann，R．和Dade，F(xiàn)．標(biāo)準(zhǔn)大蒜-銀杏組合產(chǎn)物對(duì)脂質(zhì)參數(shù)的限制和降低。多中心無效對(duì)照劑雙盲實(shí)驗(yàn)，Arzneimittelforschung．43978-81，1993)。
用接近900mg／天的標(biāo)準(zhǔn)大蒜食物進(jìn)行的數(shù)項(xiàng)研究表明，該飲食對(duì)血清膽固醇有顯著但是非常溫和的影響。例如在一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，通過食用大蒜，低密度脂蛋白膽固醇減少了11％，而安慰劑使其減少了3％(Jain，A．K．，Vargas，R．，Gotzkowsky，S．，和McMahon，F(xiàn)．G．大蒜能降低血脂水平嗎 對(duì)照臨床實(shí)驗(yàn)，Am-J-Med．94632-5，1993)。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中，據(jù)報(bào)道總膽固醇值平均下降了12％，甘油三酯值平均下降了17％(Mader，F(xiàn)．H．用大蒜粉片劑治療高血脂。從German Association of General’s多中心安慰劑對(duì)照雙盲實(shí)驗(yàn)，Arzneimittelforschung．401111-6，1990)。在第三個(gè)實(shí)驗(yàn)中，據(jù)報(bào)道，與僅用安慰劑相比，用大蒜進(jìn)行治療使膽固醇下降了12％(Silagy，C．和Neil，A．作為脂質(zhì)減少劑的大蒜-元-分析(meta-analysis)，J-R-Coll-Physicians-Lond．2839-45，1994．)。另一實(shí)驗(yàn)表明，在食物中補(bǔ)充陳化大蒜提取物對(duì)中度高膽固醇血癥患者的脂相和血壓有益(Steiner，M．，Khan，A．H．，Holbert，d．，和Lin，R．I．在中度高膽固醇血癥男性中比較給予陳化大蒜提取物和安慰劑對(duì)血脂影響的雙盲交叉實(shí)驗(yàn)，Am-J-Clin-Nutr．64866-70，1996)。在一個(gè)安慰劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，給藥組每天接受相當(dāng)于2700mg新鮮大蒜的900mg大蒜粉。在治療期間，給藥組的總膽固醇、甘油三酯和血壓比安慰劑組顯著下降(Vorberg，G．和Schneider，B．用大蒜治療安慰劑對(duì)照、雙盲實(shí)驗(yàn)結(jié)果．Br J Clin．Pract．Symp．Suppl．697-11，1990)。大蒜降低高血脂的對(duì)照試驗(yàn)的元-分析表明，總膽固醇水平有顯著下降。最好的可利用證據(jù)表明，在實(shí)驗(yàn)患者中，每天以約半頭-一頭大蒜的量攝取大蒜，使得總血清膽固醇水平下降了約9％(Warshafsky，S．，Kamer，R．S．，和sivak，S．L．大蒜對(duì)總血清膽固醇的影響。一項(xiàng)元-分析．Ann-Intern-Med．119599-605m 1993)。
然而這些中等程度的結(jié)果可能會(huì)使人們得出這樣的結(jié)論，即大蒜降低總膽固醇的效果不如以前元-分析所提出的那么好?？赡艿慕忉屖浅霭嫫睢⒃谠囼?yàn)中過高估計(jì)治療效果，同時(shí)隱瞞治療分配。近期評(píng)論的作者認(rèn)為，如果試驗(yàn)組成很小的話，應(yīng)當(dāng)審慎并且特別小心地解釋元-分析(Neil，H．A．，Silagy，C．A．，Lancaster，T．，等人，大蒜粉在中度高血脂治療中的作用一項(xiàng)對(duì)照試驗(yàn)和元-分析，J-R-Coll-physicians-Lond．30329-34，1996)。另一項(xiàng)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，攝取大蒜對(duì)脂質(zhì)和脂蛋白沒有任何可證明的作用(Simons，L．A．，Balasubramaniam，S．，von Konigsmark，M．，等人，在中度高血脂中大蒜對(duì)血漿脂質(zhì)和脂蛋白的作用，《動(dòng)脈粥樣硬化》(Atherosclerosis)．113219-25，1995)。
在24小時(shí)培養(yǎng)期間，培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞持續(xù)地用放射標(biāo)記的乙酸酯合成膽固醇并將其大概以VLDL形式輸出到培養(yǎng)基中。米法斯丁將膽固醇生物合成抑制了90％。培養(yǎng)物與大蒜粉(kwai，Sapec)的水溶性提取物一起培養(yǎng)，膽固醇生物合成下降(20-25％)，同時(shí)也減少了其向培養(yǎng)基中的輸出(30-35％)。IC50值為90微克／ml。在0．25-10mg／ml的濃度之間，平均最大抑制量約為23％。該提取物的細(xì)胞毒性僅在125mg／ml以上的濃度時(shí)才明顯。在用蒜氨酸酶(轉(zhuǎn)化成大蒜素)培養(yǎng)前或之后，相當(dāng)于其在提取物中含量的濃度的純大蒜素沒有表現(xiàn)出任何抑制作用。用14C-甲羥戊酸酯代替14C-乙酸酯，就沒有了抑制作用。50微克／ml的大蒜提取物顯著地降低了HMGCoA(羥甲基戊二酰-CoA)還原酶的活性。在較高濃度下，脂肪酸合成酶、膽固醇7α-羥化酶和膽固醇?；D(zhuǎn)移酶的活性也被輕度抑制。在這些酶當(dāng)中，脂肪酸合成酶是唯一一個(gè)被大蒜素在非常高濃度下抑制的酶。這些結(jié)果證明，水溶性大蒜提取物降低了肝臟膽固醇生物合成，因此使得血液膽固醇減少。主要靶位點(diǎn)看上去是HMGCoA-還原酶。實(shí)際的活性組分仍然是未知的(Gebhardt，R．和Beck，H．在初始大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)物中，得自大蒜的有機(jī)硫化合物對(duì)膽固醇生物合成的不同抑制作用，Lipids．311269-76，1996；Gebhardt，R．大蒜提取物對(duì)肝細(xì)胞中膽固醇生物合成的多重抑制作用，Lipids．28613-9，1993；Gebhardt，R．在初始大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)物中，水溶性大蒜提取物的膽固醇生物合成抑制作用，Arzneimittelforschung．41800-4，1991)。有人證明了從大蒜與野生大蒜中制備的提取物和分離化合物在體外抑制膽固醇合成的作用(Sendl，A．，Schliack，M．，Loser，R．，Stanislaus，F(xiàn)．，和Wagner，H．和從大蒜與野生大蒜中制備的提取物和分離化合物在體外抑制膽固醇合成，《動(dòng)脈粥樣硬化》(Atherosclerosis)．9479-85，1992)。
已經(jīng)在體外證實(shí)的大蒜的抗氧化特性引導(dǎo)人們研究給人體補(bǔ)充大蒜對(duì)脂蛋白易氧化性的作用。在安慰劑對(duì)照、隨機(jī)、雙盲交叉試驗(yàn)中，對(duì)10名健康志愿者每天給予600mg大蒜粉(6片Kwai)，試驗(yàn)進(jìn)行2周。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然血清脂質(zhì)和脂蛋白水平在該短時(shí)間期限內(nèi)沒有下降，但是含有脂蛋白的載脂蛋白B的易氧化性在體外被顯著降低(-34％)(Phelps，S．和Harris，W．S．補(bǔ)充大蒜和脂蛋白易氧化性，Lipids．28475-7，1993)。
在所有上述大量研究之后，沒有人提出使用大蒜和番茄紅素的混合物來預(yù)防和／或治療動(dòng)脈粥樣硬化。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供番茄紅素和大蒜的新混合物。本發(fā)明的目的是提供番茄紅素和大蒜協(xié)同混合物來阻斷LDL氧化和／或動(dòng)脈粥樣硬化并降低血漿膽固醇水平。本發(fā)明的另一目的是上述混合物在制備用于阻止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的藥物組合物或食品組合物中的應(yīng)用。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供了含有番茄紅素和大蒜的協(xié)同藥物組合物或食品組合物。本發(fā)明還提供了阻斷LDL氧化、抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的改進(jìn)方法，高膽固醇血癥治療劑，和使用所述組合物預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法。
發(fā)明詳述番茄紅素來源可以是包含在番茄油性樹脂中的番茄紅素、從番茄中提取的番茄紅素、或合成番茄紅素。
大蒜來源可選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。優(yōu)選來源是含有0．2％-2．0％、優(yōu)選含有0．5％-1．2％大蒜素的大蒜粉。
大蒜和番茄紅素可以以10000∶1-1∶10000、優(yōu)選500∶1-1∶500、最優(yōu)選100∶1-1∶100的相對(duì)重量份存在。
大蒜和番茄紅素可以是僅有的存在組分。然而，有時(shí)優(yōu)選將大蒜和番茄紅素與其它化合物例如食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑或它們的混合物混合。
大蒜番茄紅素混合物可以包含在選自片劑、膠囊小藥丸(caplets)、植物性膠囊(vegecaps)、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，大蒜和番茄紅素的混合物可用于制備用于抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的藥物組合物或食品組合物，可用作高膽固醇血癥治療劑，以及可用在協(xié)同阻斷血清中LDL氧化的方法中。
常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法通過不連續(xù)密度梯度超離心和用鹽水EDTA(1mM)透析，從人血漿中分離LDL。在氧化前，將LDL在PBS中稀釋至100ug蛋白／ml，在4℃用PBS過夜透析。
依據(jù)金屬離子依賴機(jī)制，通過在37℃與新鮮制備的5uM CuSO4培養(yǎng)2-4小時(shí)，并測定硫代巴比土酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)來將LDL氧化。
還在非金屬離子依賴體系中，通過與游離基生成化合物、2-2azobis、2-脒基丙烷鹽酸鹽(AAPH，5mM)在37℃培養(yǎng)來氧化LDL。
將番茄紅素、和含有5％番茄紅素的番茄油性樹脂溶于四氫呋喃(THF)，對(duì)于純番茄紅素，制成0．5mg／ml貯備液，對(duì)于該油性樹脂，制成10mg／ml貯備液。
用水提取大蒜粉、干燥、并以0．25mg大蒜素同等物／ml貯備液的濃度再溶解在水中。
實(shí)施例1測定大蒜和番茄紅素組合物對(duì)銅離子誘導(dǎo)的LDL氧化的協(xié)同作用。詳細(xì)內(nèi)容如表1所示，用于計(jì)算協(xié)同作用的Abbott方程的各參數(shù)如下A+B-(AB／100)=預(yù)期對(duì)照其中A=單獨(dú)大蒜的對(duì)照百分比B=單獨(dú)番茄紅素的對(duì)照百分比協(xié)同作用=IF／IE其中IF=實(shí)際對(duì)照百分比IE=預(yù)期對(duì)照百分比如果IF／IE顯著地大于1，則就證實(shí)了協(xié)同作用。附

圖1 & 2表明了該協(xié)同作用。
實(shí)施例2按照實(shí)驗(yàn)1的方法，測定如實(shí)驗(yàn)1所述的大蒜和番茄紅素組合的協(xié)同作用，但是使用的是番茄油性樹脂。結(jié)果如表1和附圖3與4所示。
實(shí)施例3按照實(shí)施例1的方法，測定大蒜和番茄油性樹脂混合物對(duì)AAPH-誘導(dǎo)的LDL氧化作用的協(xié)同作用。
實(shí)施例4進(jìn)行實(shí)驗(yàn)1混合物的作用的動(dòng)力學(xué)研究，以確定延長的對(duì)數(shù)時(shí)間。詳細(xì)內(nèi)容如附圖5所示，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與單獨(dú)大蒜的90分鐘相比，對(duì)于該混合物，推遲時(shí)間是200分鐘。
實(shí)施例5用實(shí)驗(yàn)2混合物進(jìn)行類似動(dòng)力學(xué)研究，對(duì)于混合物，發(fā)現(xiàn)了相同的對(duì)數(shù)時(shí)間。詳細(xì)內(nèi)容如附圖6所示。表1實(shí)驗(yàn)1-3中與Abbott方程配合的數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn) A B IEIF(TBARS) IF(脂質(zhì)) IF／IE(TBARS) IF／IE(脂質(zhì))1 25a18b38．5 6472 1．66 1．8720c0d0 5460 ∝∝3 26a18c39．3 6850 1．73 1．27a6．25大蒜素等同物／mlb5μg／mlc2．5大蒜素等同物／mld3μg番茄江素／mle4．5μg／ml
權(quán)利要求
1．含有番茄紅素和大蒜的協(xié)同藥物組合物或食品組合物。
2．權(quán)利要求1的組合物，其中番茄紅素包含在番茄油性樹脂中。
3．權(quán)利要求1的組合物，其中含有合成番茄紅素。
4．權(quán)利要求1的組合物，其中大蒜選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。
5．權(quán)利要求4的組合物，其中大蒜是以大蒜素含量為0．2％-2．0％作為標(biāo)準(zhǔn)的大蒜粉。
6．權(quán)利要求5的組合物，其中大蒜粉是以大蒜素含量為0．5％-1．2％作為標(biāo)準(zhǔn)。
7．權(quán)利要求1的組合物，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為10000∶1-1∶10000。
8．權(quán)利要求7的組合物，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為500∶1-1∶500。
9． 權(quán)利要求7的組合物，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為100∶1-1∶100。
10．權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的組合物，其中還含有其它化合物。
11．權(quán)利要求10的組合物，其中所述其它化合物選自食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑、和它們的混合物。
12．權(quán)利要求1的組合物，其中番茄紅素和大蒜混合物包含在選自片劑、膠囊小藥丸、植物性膠囊、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
13．含有番茄紅素和大蒜的協(xié)同組合物在制備用于抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的藥物組合物或食品組合物中的應(yīng)用。
14．權(quán)利要求13的應(yīng)用，其中番茄紅素包含在番茄油性樹脂中。
15．權(quán)利要求13的應(yīng)用，其中含有合成番茄紅素。
16．權(quán)利要求1 3的應(yīng)用，其中大蒜選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。
17．權(quán)利要求16的應(yīng)用，其中大蒜是以大蒜素含量為0．2％-2．0％作為標(biāo)準(zhǔn)的大蒜粉。
18．權(quán)利要求16的應(yīng)用，其中大蒜粉是以大蒜素含量為0．5％-1．2％作為標(biāo)準(zhǔn)。
19．權(quán)利要求13的應(yīng)用，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為10000∶1-1∶10000。
20．權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為500∶1-1∶500。
21．權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為100∶1-1∶100。
22．權(quán)利要求13-21任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中還含有其它化合物。
23．權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中所述其它化合物選自食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑、和它們的混合物。
24．權(quán)利要求13的應(yīng)用，其中番茄紅素和大蒜混合物包含在選自片劑、膠囊小藥丸、植物性膠囊、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
25．含有番茄紅素和大蒜作為有效組分的高膽固醇血癥協(xié)同治療劑。
26．權(quán)利要求25的治療劑，其中番茄紅素包含在番茄油性樹脂中。
27．權(quán)利要求25的治療劑，其中含有合成番茄紅素。
28．權(quán)利要求25的治療劑，其中大蒜選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。
29．權(quán)利要求28的治療劑，其中大蒜是以大蒜素含量為0．2％-2．0％作為標(biāo)準(zhǔn)的大蒜粉。
30．權(quán)利要求25的治療劑，其中大蒜粉是以大蒜素含量為0．5％-1．2％作為標(biāo)準(zhǔn)。
31．權(quán)利要求25的治療劑，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為10000∶1-1∶10000。
32．權(quán)利要求31的治療劑，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為500∶1-1∶500。
33．權(quán)利要求31的治療劑，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為100∶1-1∶100。
34．權(quán)利要求26-31任一項(xiàng)的治療劑，其中還含有其它化合物。
35．權(quán)利要求25的治療劑，其中所述其它化合物選自食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑、和它們的混合物。
36．權(quán)利要求25的治療劑，其中番茄紅素和大蒜混合物包含在選自片劑、膠囊小藥丸、植物性膠囊、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
37．在哺乳動(dòng)物中預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括將有效量的番茄紅素和大蒜混合物對(duì)需要這種預(yù)防或治療的哺乳動(dòng)物給藥。
38．權(quán)利要求37的方法，其中番茄紅素包含在番茄油性樹脂中。
39．權(quán)利要求37的方法，其中含有合成番茄紅素。
40．權(quán)利要求37的方法，其中大蒜選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。
41．權(quán)利要求40的方法，其中大蒜是以大蒜素含量為0．2％-2．0％作為標(biāo)準(zhǔn)的大蒜粉。
42．權(quán)利要求40的方法，其中大蒜粉是以大蒜素含量為0．5％-1．2％作為標(biāo)準(zhǔn)。
43．權(quán)利要求37的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為10000∶1-1∶10000。
44．權(quán)利要求43的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為500∶1-1∶500。
45．權(quán)利要求43的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為100∶1-1∶100。
46．權(quán)利要求37-45任一項(xiàng)的方法，其中還含有其它化合物。
47．權(quán)利要求37的方法，其中所述其它化合物選自食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑、和它們的混合物。
48．權(quán)利要求37的方法，其中番茄紅素和大蒜混合物包含在選自片劑、膠囊小藥丸、植物性膠囊、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
49．阻斷血清中LDL氧化的方法，包括將所述血清與含有番茄紅素和大蒜的協(xié)同組合物接觸。
50．權(quán)利要求49的方法，其中番茄紅素包含在番茄油性樹脂中。
51．權(quán)利要求49的方法，其中所述組合物含有合成番茄紅素。
52．權(quán)利要求49的方法，其中大蒜選自完整大蒜、大蒜素、大蒜粉、新鮮粉碎大蒜的非極性提取物、陳化去味大蒜提取物、和它們的混合物。
53．權(quán)利要求52的方法，其中大蒜是以大蒜素含量為0．2％-2．0％作為標(biāo)準(zhǔn)的大蒜粉。
54．權(quán)利要求52的方法，其中大蒜粉是以大蒜素含量為0．5％-1．2％作為標(biāo)準(zhǔn)。
55．權(quán)利要求49的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為10000∶1-1∶10000。
56．權(quán)利要求55的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為500∶1-1∶500。
57．權(quán)利要求55的方法，其中大蒜與番茄紅素的相對(duì)重量份為100∶1-1∶100。
58．權(quán)利要求49-57任一項(xiàng)的方法，其中還含有其它化合物。
59．權(quán)利要求58的方法，其中所述其它化合物選自食用組分、添加劑、賦形劑、粘合劑、包衣劑、防腐劑、和它們的混合物。
60．權(quán)利要求49的方法，其中番茄紅素和大蒜混合物包含在選自片劑、膠囊小藥丸、植物性膠囊、和硬殼明膠膠囊的劑型中。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有番茄紅素和大蒜的協(xié)同藥物組合物或食品組合物。本發(fā)明還提供了阻斷LDL氧化、抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的改進(jìn)方法,血膽固醇過多治療劑,和使用所述組合物預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法。
文檔編號(hào)A61P3/06GK1289251SQ99802549
公開日2001年3月28日 申請(qǐng)日期1999年1月31日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月1日
發(fā)明者M·阿維拉姆, B·福爾曼, Z·尼爾, J·格魯恩瓦爾德 申請(qǐng)人:利庫德天然產(chǎn)品工業(yè)有限公司