專利名稱：新的三唑并(4,5－d)嘧啶化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供新的三唑并(4，5-d)嘧啶化合物，它們作為藥物的用途、含有它們的組合物和它們的制備方法。
血小板粘附和聚集為動(dòng)脈血栓形成的起始事件。盡管所述血小板粘附于內(nèi)皮下表面的過程在修復(fù)損壞的血管壁方面可起重要的作用，這樣啟動(dòng)的所述血小板聚集能夠促成重要的血管床的急性血栓閉塞，導(dǎo)致高發(fā)病率的事件例如心肌梗死和不穩(wěn)定的心絞痛。血小板介導(dǎo)的閉塞或再閉塞也危及用于防止或緩解這些疾病的手術(shù)例如血栓溶解和血管成形術(shù)的成功。
多種會聚途徑導(dǎo)致血小板聚集。無論初始刺激物是什么，最后的常見的情況為通過使纖維蛋白原結(jié)合至膜結(jié)合位點(diǎn)，糖蛋白Ⅱb／Ⅲa(GPⅡb／Ⅲa)造成血小板交聯(lián)。GPⅡb／Ⅲa的抗體或拮抗劑的高抗血小板效力通過它們干擾這個(gè)最后常見的情況來解釋。然而，這種效力也可解釋用這類藥物時(shí)觀察到的出血問題。凝血酶能夠產(chǎn)生血小板聚集作用大大獨(dú)立于其它的途徑，但是，沒有通過其它機(jī)理的先前的血小板活化，基本上定量的凝血酶不可能存在。凝血酶抑制劑例如肝素為高度有效的抗血栓藥物，但是可再次產(chǎn)生過量的出血，因?yàn)樗鼈冏鳛榭寡“搴涂鼓幬锲鹱饔?The TIMI 9aInvestigators(1994)，Circulation 90，第1624-1630頁；The Global Use ofStrategies to Open Occluded Coronary Arteries(GUSTO)IIa Investigators(1994)Circulation 90，第1631-1637頁；Neuhaus K．L．等(1994)Circulation 90，第1638-1642頁)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ADP作為血栓形成的關(guān)鍵介質(zhì)起作用。ADP的關(guān)鍵性作用通過其它藥物例如腎上腺素和5-羥色胺(5HT，血清素)將僅在ADP存在下產(chǎn)生聚集的事實(shí)得到支持。阿司匹林有限的抗血栓效力可反映這樣的事實(shí)，即它僅阻斷ADP的一個(gè)來源，其以血小板粘附隨后血栓烷依賴的方式釋放(參見例如Antiplatelet Trialists’Collaboration(1994)，Br．Med．J．308，第81-106頁；AntiplateletTrialists’Collaboration(1994)，Br．Med．J．308，第159-168頁)。阿司匹林對由其它來源的ADP例如損傷的細(xì)胞或在血湍流的情況下釋放的ADP產(chǎn)生的聚集無作用。ADP誘導(dǎo)的血小板聚集由單獨(dú)位于血小板膜上的P27-受體亞型介導(dǎo)。最近，已經(jīng)顯示對該受體的拮抗劑比其它的抗血栓藥物提供更明顯的改善。因此，需要尋找作為抗血栓藥物的P27-拮抗劑。
現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)一系列三唑并(4，5-d)嘧啶衍生物為P27-受體拮抗劑。因此本發(fā)明第一方面提供式(Ⅰ)化合物或者它們藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物 其中R1為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8-環(huán)烷基、芳基或噻吩基，每一基團(tuán)由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身任選由一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代)的基團(tuán)任選取代；R2為C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C3-8環(huán)烷基，其中每一基團(tuán)可由一個(gè)或多個(gè)選自的下列取代基任選取代鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、吡啶基或芳基(其中的后兩個(gè)基團(tuán)可由一或多個(gè)選自的下列取代基任選取代鹵素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亞甲二氧基或由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的C1-6烷基)；R3和R4兩者為羥基；R5為氫或C1-6烷基；R6為由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OR21、C3-6環(huán)烷基的基團(tuán)任選取代的C1-6烷基?；蛘逺6為C3-6環(huán)烷基，或者R6為-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一個(gè)可由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OC1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或亞甲二氧基的基團(tuán)任選取代；或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成由C1-6烷基任選取代的5至7-元飽和環(huán)；A為鍵或C1-6烷基；R8為氫、C1-6烷基(其可由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)或芳基(其可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、硝基、C(O)R11、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任選取代)；R9為氫、C1-6烷基(其可由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)或芳基(其可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、硝基、C(O)R20、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任選取代)；R10為氫、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基；R12和R13獨(dú)立為氫、C1-6烷基或者與它們連接的氮原子一起形成4-至8-元環(huán)；R15為C1-6烷基或苯基；R11、R14和R16獨(dú)立為氫或C1-6烷基；R17為C1-6烷基或苯基；R18和R19獨(dú)立為氫、C1-6烷基或苯基；R20為氫、苯基或C1-6烷基(其可由鹵素任選取代)；R21為氫或C1-6烷基，條件是當(dāng)R21為H時(shí)，R5必須為C1-6烷基。
無論單獨(dú)或作為另一個(gè)基團(tuán)的一部分，烷基基團(tuán)可以為直鏈的或分枝的。芳基包括苯基和萘基。酰基包括C(O)C1-6烷基例如乙?；?-氧代丙基。
R1適宜為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、芳基或噻吩基，每一基團(tuán)可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其可由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)的取代基任選取代。R1優(yōu)選為C1-6烷基、噻吩基或三氟甲基苯基。R1更優(yōu)選為甲基、丙基、丙烯基或噻吩基。
R2適宜為C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C3-8環(huán)烷基，其中每一基團(tuán)可由一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基任選取代鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、吡啶基或芳基(其后兩個(gè)基團(tuán)可由一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基任選取代鹵素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亞甲二氧基或由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的C1-6烷基。其中R8、R9、R10、R11、R14、R15、R16、R17、R18和R19如上定義。R2優(yōu)選為由苯基任選取代的C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基，所述苯基本身能夠由鹵素、OR8或C1-6烷基取代。R2更優(yōu)選為由苯基、4-甲氧基苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基或4-氟苯基任選取代的環(huán)丙基。
R5適宜為氫或C1-6烷基；R6為由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OR21、C3-6環(huán)烷基的基團(tuán)任選取代的C1-6烷基，或者R6為C3-6環(huán)烷基，或者R6為-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一個(gè)可由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OC1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或亞甲二氧基的基團(tuán)任選取代；或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成由C1-6烷基任選取代的5至7-元飽和環(huán)。R5優(yōu)選為氫和R6優(yōu)選為環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基、C1-6烷基、由鹵素(優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)氟原子)取代的C1-6烷基。R5更優(yōu)選為乙基、異丙基或異丁基，或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成吡咯烷環(huán)。最優(yōu)選R5為氫和R6為甲基或2-氟乙基。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物包括那些在此舉例說明的化合物，它們以游離堿和作為它們的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物兩類形式存在。本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括使式(Ⅱ)化合物 其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定義或者為其被保護(hù)的衍生物，P1和P2為氫或保護(hù)基團(tuán)和Y為CO2H與式(Ⅲ)化合物反應(yīng)R5R6NH(Ⅲ)其中R5和R6如在式(Ⅰ)中定義并且以后任選以任何順序·將一個(gè)或多個(gè)功能團(tuán)轉(zhuǎn)化為另一個(gè)功能團(tuán)·除去任何保護(hù)基團(tuán)·形成藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
每個(gè)P1和P2能夠獨(dú)立代表的適宜的基團(tuán)的實(shí)例為C1-6烷基(優(yōu)選為甲基)、芐基、(C1-6烷基)3Si(優(yōu)選為三甲基甲硅烷基)和C(O)(C1-6烷基)(優(yōu)選為乙酰基)。所述兩個(gè)基團(tuán)P1和P2優(yōu)選與它們所連接的原子一起完成一個(gè)環(huán)，例如，兩個(gè)基團(tuán)P1和P2一起表示亞烷基例如亞甲基，或者更優(yōu)選為亞異丙基或者烷氧基亞甲基例如乙氧基亞甲基。
使用來自肽合成的已知方法(參見M．Bodanszky和A．Bondanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，1984)，優(yōu)選在偶合試劑存在下進(jìn)行式(Ⅱ)與(Ⅲ)化合物的反應(yīng)。適宜的偶合試劑包括1，1’-羰基二咪唑和二環(huán)己基碳二亞胺；所述優(yōu)選的偶合試劑為在N，N-二異丙基乙胺存在下使用的溴-三-吡咯烷-六氟磷酸鏻或苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻。該反應(yīng)優(yōu)選在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中進(jìn)行，且優(yōu)選在-15°至120°之間的溫度，更優(yōu)選在0℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
使用已知的反應(yīng)條件，能夠加入并且除去保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)的用途在‘有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)’，由JWF McOmie編輯，Plenum出版社(1973)和‘有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)’，第2版，TW Greene和PGM Wutz，Wiley-Interscience(1991)中有充分描述。
使其中Y為CO2H的式(Ⅱ)化合物活化的其它方法包括形成酰鹵或乙酸酐。通過在堿例如吡啶存在下用酰鹵例如乙酰氯處理可形成酸酐，或在惰性溶劑中通過用脫水劑例如乙酸酐或五氧化二磷處理可形成酸酐。通過以鹵化劑例如P(Ⅲ)、P(V)或S(Ⅳ)鹵代物例如三氯化磷處理酸可形成酰鹵。通過酸與酰鹵例如草酰溴的交換反應(yīng)也可制備酰鹵。在0至150℃的溫度下，在鹵化劑或酰鹵作為溶劑或者在其它惰性溶劑例如二氯甲烷中可進(jìn)行所述反應(yīng)。優(yōu)選在室溫下，于二氯甲烷中用草酰氯處理進(jìn)行活化。
使用本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行脫保護(hù)作用。例如優(yōu)選如下進(jìn)行對于基團(tuán)P1／P2的脫保護(hù)作用(ⅰ)當(dāng)P1和P2中一個(gè)或兩個(gè)表示COC1-6烷基時(shí)，這些基團(tuán)能夠通過堿性下水解除去，例如在10至100℃的溫度下，優(yōu)選所述溫度為大約室溫，在溶劑例如乙醇水溶液或四氫呋喃水溶液中，通過使用金屬氫氧化物，優(yōu)選為堿金屬氫氧化物例如氫氧化鈉或氫氧化鋰或者季銨氫氧化物進(jìn)行堿性水解，或者在溶劑例如1，4-二氧六環(huán)中，通過使用無機(jī)酸例如HCl或者強(qiáng)有機(jī)酸例如三氯乙酸能夠進(jìn)行酸性水解；(ⅱ)當(dāng)P1和P2中一個(gè)或兩個(gè)表示(C1-6烷基)3Si時(shí)，這些基團(tuán)能夠通過使用例如氟離子來源如四正丁基氟化銨或氟化氫除去；(ⅲ)當(dāng)P1和P2中一個(gè)或兩個(gè)表示C1-6烷基時(shí)，這些基團(tuán)能夠通過使用例如三溴化硼除去；(ⅳ)當(dāng)P1和P2中一個(gè)或兩個(gè)表示芐基時(shí)，這些基團(tuán)能夠通過在溶劑如乙酸中，在1至5個(gè)巴的壓力的氫氣氛下使用過渡金屬催化劑例如披鈀木炭氫解除去；和／或
(ⅴ)當(dāng)P1和P2中一個(gè)或兩個(gè)表示亞烷基或烷氧基亞烷基時(shí)，這些基團(tuán)能夠通過使用例如無機(jī)或有機(jī)酸除去，優(yōu)選在室溫下于甲醇／1，4-二氧六環(huán)中通過使用2M的鹽酸水溶液除去。
式(Ⅲ)化合物為市售的化合物或者能夠通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的文獻(xiàn)方法進(jìn)行制備其中Y為CO2H、CONR5R6或CO2R’的式(Ⅱ)化合物能夠在堿存在下通過使式(Ⅳ)化合物 其中R1、P1、P2R5和R6如上定義，L1為離去基團(tuán)例如鹵原子和R’為C1-6烷基或芐基，與其中R2如上定義的胺NH2R2或NH2R2的鹽反應(yīng)進(jìn)行制備。NH2R2適宜的鹽包括鹽酸鹽。適宜的堿包括有機(jī)堿如三乙胺或者無機(jī)堿如碳酸鉀。使用在H Nishiyama等，Bull．Chem．Soc．，Jpn．，1995，68，1247，P．Newman．用于化學(xué)化合物的光學(xué)拆分方法，第1卷，胺和相關(guān)化合物；光學(xué)拆分和信息中心Manhattan學(xué)院，Riverdale，NY，1978，第120頁，J．Vallgarda等，J．Chem．Soc．Perkin 1，1994，461中描述的方法，能夠制備所述胺NH2R2。某些胺NH2R2為新化合物并且形成本發(fā)明的另一個(gè)方面。
式(Ⅳ)化合物能夠通過在稀酸水溶液例如2M的HCl中使其中R1、Y、L1、P1和P2如上定義的式(Ⅴ)化合物 與金屬亞硝酸鹽例如堿金屬亞硝酸鹽特別是亞硝酸鈉重氮化來制備，或者在-20至100℃下于惰性溶劑中用C1-6烷基亞硝酸鹽重氮化來制備。優(yōu)選的條件為在80℃下于乙腈中的亞硝酸異戊酯。
其中Y為CO2H的式(Ⅴ)化合物能夠通過還原并水解其中R1、L1、P1和P2如上定義的式(Ⅵ)化合物來制備 例如在大約為室溫的溫度下，通過使用過渡金屬催化劑例如在氫氣氛下的披鈀木炭氫化，優(yōu)選在溶劑如乙醇中，在1至5個(gè)大氣壓的氫氣氛下進(jìn)行還原，或者通過在大約100℃的溫度下，使用酸性溶劑例如乙酸中的鐵進(jìn)行還原。
為制備其中Y為CO2H的式(Ⅴ)化合物，在進(jìn)行上述反應(yīng)后，通過在20至150℃的溫度下，在溶劑例如1，4-二氧六環(huán)中使用礦物酸例如HCl或強(qiáng)有機(jī)酸例如三氟乙酸，可進(jìn)行衍生于所述式(Ⅵ)化合物的化合物的水解。優(yōu)選在大約80℃的溫度下，使用在含有堿土金屬鹵化物例如氯化鈣的酸性溶劑例如乙酸中的鐵進(jìn)行所述還原和水解。
為制備其中R9為C1-6烷基或芐基的式(Ⅴ)化合物，在50至80℃的溫度下，用在乙酸中的鐵處理所述式(Ⅵ)化合物以使所述硝基被還原。然后在大約室溫下，于水和C1-6烷基醇或者芐基醇的混合物中用硼氫化鈉處理所生成的中間體。
在-10至100℃的溫度下，在惰性溶劑例如四氫呋喃(THF)中，在堿例如其中M為金屬的C1-6烷基-M或MH如丁基鋰存在下，通過使其中L1和R1如上定義和L2為離去基團(tuán)例如鹵素原子，其中L1和L2優(yōu)選為相同的式(Ⅶ)化合物 與其中P1如上定義的式(Ⅷ)化合物反應(yīng)能夠制備式(Ⅵ)化合物。 優(yōu)選在室溫下于THF中使用氫化鈉。
通過用其中R1如上定義并且L3為適宜的離去基團(tuán)例如鹵原子的R1L3烷基化，隨后通過硝化，其后所述兩個(gè)醇轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)L1和L2，可由4，6-二羥基-2-巰基嘧啶制備式(Ⅶ)化合物。在堿例如N，N-二異丙基乙胺存在下，在適宜的溶劑例如1，4-二氧六環(huán)中通過使式(Ⅸ)化合物 與其中P1、P2、R1、R5、L1和L2如上定義的式(Ⅶ)化合物反應(yīng)隨后通過還原硝基，制備其中Y為CONR5R6的式(Ⅴ)化合物?？墒褂迷赪O 9528160中描述的方法制備式(Ⅸ)化合物。
所述基團(tuán)SR1能夠通過氧化所述硫互變，如使用oxone或mCPBA隨后通過用其中R1為不同的R基團(tuán)并且M為金屬例如鈉的化合物R1SM處理。
所有新的中間體形成本發(fā)明的另一個(gè)方面。
式(Ⅰ)化合物的鹽可通過使游離的酸或其鹽、或者游離的堿或它的鹽或衍生物與一或者更多當(dāng)量的所述適宜的堿(例如通過C1-6烷基或堿金屬或堿土金屬氫氧化物任選取代的氫氧化銨)或酸(例如氫鹵酸(特別是HCl)、硫酸、草酸或磷酸)反應(yīng)來形成。所述反應(yīng)可在其中所述鹽是不溶解的溶劑或介質(zhì)中或者在其中所述鹽是溶解的溶劑例如水、乙醇、THF或乙醚中進(jìn)行，所述溶劑或介質(zhì)可真空除去或通過冷凍干燥。所述反應(yīng)也可是置換方法或者可在離子交換樹脂上進(jìn)行。所述非毒性的生理上可接受的鹽是優(yōu)選的，盡管其它的鹽例如在使所述產(chǎn)物分離或純化中是有用的。
本發(fā)明化合物作為P27-受體拮抗劑起作用。因此，所述化合物用于治療，尤其是輔助治療，特別是它們適于用作血小板活化、聚集和脫粒的抑制劑、抗血栓藥物或者用于治療或預(yù)防不穩(wěn)定心絞痛、冠狀血管成形術(shù)(PTCA)、心肌梗塞、周圍血栓溶解、動(dòng)脈粥樣硬化的初期動(dòng)脈血栓形成并發(fā)癥例如血栓形成或栓塞中風(fēng)、外周血管疾病、伴有或不伴有血栓形成的心肌梗塞、由于在動(dòng)脈粥樣硬化疾病進(jìn)行手術(shù)例如血管成形術(shù)、動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)、斯坦特固定膜放置、冠狀和其它血管移植術(shù)、手術(shù)或機(jī)械損傷血栓形成并發(fā)癥例如事故或手術(shù)損傷后的組織搶救、重建手術(shù)包括皮膚和肌肉瓣所引起的動(dòng)脈并發(fā)癥、具有彌漫性血栓形成／血小板消耗成分的疾病例如播散性血管內(nèi)凝血、血栓形成的血小板減少性紫癜、溶血性尿毒綜合征、敗血癥的血栓形成并發(fā)癥、成人呼吸窘迫綜合征、抗磷脂綜合征、肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥和子癇前期和子癇、或者靜脈血栓形成例如深度靜脈血栓形成、靜脈閉塞疾病、血液學(xué)情況例如骨髓及骨髓增殖的疾病、包括血小板增多、鐮形細(xì)胞疾?。换蛘哂糜陬A(yù)防機(jī)械誘導(dǎo)的血小板體內(nèi)活化，例如心-肺旁路和體外膜氧化作用(預(yù)防小血栓栓塞)、機(jī)械誘導(dǎo)的血小板體外活化，例如用于保存血液產(chǎn)品，例如血小板集聚，或者旁路閉塞例如在腎透析和血漿除去法中、繼發(fā)于血管損傷／炎癥例如脈管炎、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎、炎性腸道疾病和器官移植排斥反應(yīng)的血栓形成，例如偏頭痛、雷諾現(xiàn)象、動(dòng)脈粥樣化蝕斑形成／進(jìn)展的疾病、其中血小板衍化因子與所述疾病過程有關(guān)的血管狹窄／再狹窄和哮喘。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了本發(fā)明化合物在制備治療上述疾病的藥物中的用途。本發(fā)明也提供了制備治療上述疾病的方法，該方法包括給予患有這類疾病的患者治療有效量的本發(fā)明化合物。
所述化合物可以溶液劑、混懸劑、HFA氣溶膠和干燥粉末制劑的形式局部給予例如肺部和／或氣道給予；或者全身給藥，例如以片劑、丸劑、膠囊劑、糖漿劑、散劑或顆粒劑形式口服給予，或者以無菌非腸道溶液劑或混懸劑的形式經(jīng)非腸道給予，經(jīng)皮下給予，或者以栓劑經(jīng)直腸或者經(jīng)皮的形式給予。
本發(fā)明化合物可以其本身或者作為與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔助劑或載體混合的包含本發(fā)明化合物的藥用組合物給藥。特別優(yōu)選地是組合物不含有能夠引起副作用例如過敏反應(yīng)的材料。
本發(fā)明化合物的干燥粉末制劑和加壓的HFA氣溶膠可通過口腔或鼻腔吸入給藥。為了吸入所述化合物需要求細(xì)粉化。
本發(fā)明化合物也可借助干燥粉末吸入器給藥。所述吸入器可為單或多劑量吸入器，并且可為呼吸干燥粉末吸入器。
一種可能性是使所述細(xì)分散的化合物與載體物質(zhì)例如單-、雙或多糖醇、糖醇或另一種多醇混合。適宜的載體包括糖和淀粉?；蛘咚黾?xì)分散的化合物可通過另一種物質(zhì)包衣。也可將該粉末混合物分散在硬明膠膠囊中，每一個(gè)膠囊含有所要求劑量的所述活性化合物。
另一種可能性是將細(xì)分散的粉末加工成在吸入過程中破裂的球形。可將所述團(tuán)成球形的粉末填充到例如稱作Turbuhaler的多單位劑量吸入器的藥物貯庫中，以劑單位計(jì)量所要求的劑量，然后由患者吸入。用這個(gè)系統(tǒng)，所述活性化合物可具有或不具有傳遞給患者的載體物質(zhì)。
包含本發(fā)明化合物的所述藥用組合物可方便地為用于口服給藥的片劑、丸劑、膠囊劑、糖漿劑、散劑或顆粒劑；用于非腸道給藥的滅菌的非腸道或皮下溶液劑、懸浮劑或用于直腸給藥的栓劑。
對口服給藥而言，所述活性化合物可與輔劑或載體例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉例如馬鈴薯淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉、纖維素衍生物、粘合劑例如明膠或聚乙烯吡咯烷酮和潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、聚乙二醇、蠟、石蠟等混合，并且然后壓制成片劑。如果需要包衣片劑，則可將如上描述的那樣制備的芯用濃的糖溶液包衣，該溶液可含有例如阿拉伯膠、明膠、滑石粉、二氧化鈦等?；蛘?，所述片劑可以用溶解在易于揮發(fā)的有機(jī)溶劑或水性溶劑中的適宜的聚合物包衣。
對軟明膠膠囊制劑而言，所述化合物可與例如植物油或聚乙二醇混合。使用以上提到的用于片劑的賦形劑例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、纖維素衍生物或明膠，硬明膠膠囊劑可含有所述化合物顆粒。所述藥物的液體或半固體制劑也可填充到硬明膠膠囊中。
用于口服應(yīng)用的液體制劑可以糖漿劑或混懸劑的形式存在，例如含有所述化合物的溶液劑，所述平衡為糖與乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。這樣的液體制劑可任選含有本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的著色劑、矯味劑、糖精和作為增稠劑的羧甲基纖維素或者其它的本領(lǐng)域已知的賦形劑。
本發(fā)明通過以下實(shí)施例舉例說明。在所述實(shí)施例中，所述NMR波譜在Varian Unity Inova 300或400光譜儀中測定并且如下測量MS波譜在VG 70-250S或者Finnigan Mat Incos-XL光譜儀中得到EI波譜，在Finnigan Mat SSQ7000或Micromass Platform光譜儀中得到APCI波譜。制備型HPLC分離通常使用填充BDSC-18反相硅膠的Novapak、Bondapak或Hypersil柱。快速層析法(在實(shí)施例中指明為(SiO2))使用30-70μm的Fisher Matrix硅膠進(jìn)行。
在質(zhì)子NMR波譜中顯示存在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的實(shí)施例僅指明主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的化學(xué)位移。
按照實(shí)施例4步驟b)的方法，使用4-(1，1-二甲基乙基)苯硫酚，制備所述標(biāo)題化合物。MS(APCI)588(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．40(1H，d)，7．92(1H，t)，7．50(2H，d)，7．35(2H，d)，7．29(2H，t)，7．20(1H，m)，7．09(2H，d)，5．11(1H，d)，4．91(1H，d)，4．87(1H，dd)，4．37(1H，dd)，4．03(1H，dd)，3．10(3H，m)，2．71(1H，m)，2．40-2．10(3H，m)，1．33(1H，m)，1．26(9H，s)，1．07(1H，m)，1．03(3H，t)。
按照實(shí)施例50步驟a)的方法，使用實(shí)施例1步驟d)的產(chǎn)物和3-(4-三氟甲基苯基)丙基胺(如K Fujimura等在Bioorganic MedicinalChemistry，1997，5，1675中描述的那樣制備)，制備標(biāo)題化合物。MS(APCI)608(M+H+，100％)。b)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-N-((3-(4-三氟甲基苯基)丙基)氨基)-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺按照實(shí)施例39步驟b)的方法，使用步驟a)的產(chǎn)物，制備所述標(biāo)題化合物。Mpt215-217℃MS(APCI)568(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．06-9．03(1H，t)，7．93-7．90(1H，t)，7．64-7．45(4H，m)，5．10-4．90(3H，m)，4．41(1H，m)，4．11-4．09(1H，dd)，3．55-3．49(1H，dd)，3．14-3．01(4H，m)，2．78-2．69(3H，m)，2．36-2．20(2H，m)，1．99-1．94(2H，m)，1．69-1．62(2H，m)，1．04-0．94(6H，m)。
按照實(shí)施例39步驟a)的方法，使用實(shí)施例1步驟c)的產(chǎn)物和4-(氨基甲基)吡啶，制備所述次標(biāo)題化合物。MS(APCI)601(M+H+，100％)。b)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-N-(4-吡啶基甲基)-環(huán)戊烷甲酰胺按照實(shí)施例39步驟b)的方法，使用步驟a)的產(chǎn)物，制備所述標(biāo)題化合物。Mpt140-145℃MS(APCI)561(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．35(1H，d)，8．58-8．56(1H，t)，8．48(3H，m)，7．36-7．16(7H，m)，5．16-4．94(3H，m)，4．41-4．14(4H，m)，3．21-3．19(1H，m)，2．97-2．80(3H，m)，2．45-2．10(3H，m)，1．54-1．29(4H，m)，0．81-0．78(3H，t)。
按照實(shí)施例18步驟b)的方法，使用步驟a)的產(chǎn)物，制備所述標(biāo)題化合物。Mpt175℃MS(APCI)515(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．02(1H，t)，8．43(1H，d)，8．39(1H，d)，7．92(1H，t)，7．63(1H，d)，7．29(1H，dd)，5．11(1H，d)，4．98-4．93(2H，m)，4．45-4．40(1H，m)，4．12-4．00(1H，m)，3．56-3．50(2H，d)，3．12-3．05(4H，m)，2．80-2．63(3H，m)，2．32-2．25(2H，m)，1．72-1．64(6H，m)，1．05-0．93(6H，m)。
人靜脈血(100ml)等量分成3個(gè)試管，每個(gè)試管含有3．2％作為抗凝劑的枸櫞酸三鈉鹽(4ml)。在240G下將這些試管離心15分鐘，以得到富集血小板的血漿(PRP)，向其加入300ng／ml前列環(huán)素，以在洗滌過程中穩(wěn)定所述血小板。在125G下離心10分鐘隨后在640G下進(jìn)一步離心15分鐘，得到無紅細(xì)胞的PRP。棄去上清液并把這些血小板再懸浮于改良的無鈣蒂羅德液(10ml)(CFT)中，該溶液組成NaCl137mM、NaHCO311．9mM、NaH2PO40．4mM、KCl2．7mM、MgCl21．1mM、葡萄糖5．6mM，通入95％O2／5％CO2并在37℃下維持。隨后加入另外300ng／mlPGI2，在640G下再一次將合并的懸浮液離心15分鐘。棄去上清液并把這些血小板初步再懸浮于10ml的CFT中，并加入另外的CFT以調(diào)節(jié)最終的血小板數(shù)目達(dá)到2×105／ml。在3℃下，將最終懸浮液貯存在已經(jīng)排除空氣的60ml注射器中。為使得從正常功能的PGI2抑制作用恢復(fù)，在最后再懸浮液產(chǎn)生2小時(shí)后即將血小板用于聚集試驗(yàn)。
在所有研究中，將3ml等分的血小板懸浮液加入到含有CaCl2溶液(具有最終濃度1mM的50mM溶液的60μl)中。將人纖維蛋白原(Sigma，F(xiàn)4883)和8-硫代苯基茶堿(8-SPT，其用于阻斷化合物的任何P1-激動(dòng)劑活性)加入，以分別得到最終濃度0．2 mg／ml(在鹽水中可凝固蛋白的10mg／ml溶液60μl)和300nM(在6％葡萄糖中15mM溶液10μl)。適宜的話以150μl體積將血小板或者緩沖液加入到96孔板上的單個(gè)孔中。在來自每個(gè)供體的血小板中將所有測定進(jìn)行三次。
如下評價(jià)所述激動(dòng)劑／拮抗劑活性效力。
在660nm下，使用通過所述板讀數(shù)計(jì)上給出的吸收度的變化在96孔板上測量聚集應(yīng)答。將Bio-Tec Ceres 900C或者Dynatech MRX用作所述板的讀數(shù)計(jì)。
在660nm下讀出所述板上每孔的吸收度，以建立基線圖。將以10μl體積的鹽水或者受試化合物的適當(dāng)溶液加入到每一個(gè)孔中，得到0、0．01、0．1、1、10或100mM的最終濃度。然后于設(shè)置10下在定軌搖床上將所述板振搖5分鐘并在660nm下讀出所述吸收度。在這一點(diǎn)上的聚集指明為所述受試化合物的激動(dòng)劑活性。然后將鹽水或者ADP(30mM；450mM的10μl)加入到每一個(gè)孔中，并將所述板振搖另外5分鐘后，在660nm下讀出所述吸收度。
以對照ADP應(yīng)答的％抑制作用評估拮抗劑效力，以得到IC50。所舉例說明的化合物具有大于5．0的pIC50值。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)化合物或者它們藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物 其中R1為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8-環(huán)烷基、芳基或噻吩基，每一基團(tuán)由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身任選由一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代)的取代基任選取代；R2為C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C3-8環(huán)烷基，其每一基團(tuán)可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、吡啶基或芳基(其后兩個(gè)基團(tuán)可由一或多個(gè)選自鹵素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亞甲二氧基或其由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的C1-6烷基的取代基任選取代)的取代基任選取代；R3和R4兩者為羥基；R5為氫或C1-6烷基；R6為由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OR21、C3-6環(huán)烷基的基團(tuán)任選取代的C1-6烷基。或者R6為C3-6環(huán)烷基，或者R6為-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一個(gè)可由一個(gè)或多個(gè)選自C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素、OC1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或亞甲二氧基的取代基任選取代；或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成由C1-6烷基任選取代的5至7-元飽和環(huán)；A為鍵或C1-6烷基；R8為氫、C1-6烷基(其可由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)或芳基(其可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、硝基、C(O)R11、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任選取代)；R9為氫、C1-6烷基(其可由一個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)或芳基(其可由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、硝基、C(O)R20、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任選取代)；R10為氫、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基；R12和R13獨(dú)立為氫、C1-6烷基或者與它們連接的氮原子一起形成4-至8-元環(huán)；R15為C1-6烷基或苯基；R11、R14和R16獨(dú)立為氫或C1-6烷基；R17為C1-6烷基或苯基；R18和R19獨(dú)立為氫、C1-6烷基或苯基；R20為氫、苯基或C1-6烷基(其可由鹵素任選取代)；R21為氫或C1-6烷基，條件是當(dāng)R21為H時(shí)，R5必須為C1-6烷基。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為C1-6烷基、噻吩基或三氟甲基苯基。
3．權(quán)利要求1或2的化合物，其中R2為其本身能夠由鹵素、OR8或C1-6烷基任選取代的苯基任選取代的C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基。
4．權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)的化合物，其中R5為氫和R6為由一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基或C1-6烷基或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成吡咯烷環(huán)。
5．在此作為舉例說明的化合物以游離堿形式和作為它們藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物兩種形式存在。
6．包含與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔助劑或載體混合的權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的化合物的藥用組合物。
7．權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的化合物用于治療。
8．權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的化合物用于治療心肌梗塞或不穩(wěn)定心絞痛。
9．制備式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括；(a)使式(Ⅱ)化合物 其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定義或者為其保護(hù)的衍生物，P1和P2為氫或保護(hù)基團(tuán)和L為離去基團(tuán)，與其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定義的式(Ⅲ)化合物反應(yīng)，R5R6NH(Ⅲ)或者(b)使式(Ⅳ)化合物 其中Y為CO2H、CO2R’或CONR5R6和R1、R5、R6、P1和P2如上定義并且L1為離去基團(tuán)和R’為C1-6烷基或芐基，與其中R2如上定義的NH2R2或NH2R2的鹽反應(yīng)并且此后任選(a)或(b)并以任何方式進(jìn)行·將一個(gè)或多個(gè)功能團(tuán)轉(zhuǎn)化為另一個(gè)功能團(tuán)·除去任何保護(hù)基團(tuán)形成藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的式(Ⅰ)三唑并(4,5－d)嘧啶化合物,它們作為藥物的用途、含有它們的組合物和它們的制備方法。
文檔編號A61K31/519GK1291193SQ9980295
公開日2001年4月11日 申請日期1999年2月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月17日
發(fā)明者R·布朗, G·派勞德奧, B·斯普林托爾佩, S·托姆, P·維利斯 申請人:阿斯特拉曾尼卡英國有限公司