專利名稱：：作為mcp－1抑制劑的雙環(huán)吡咯類衍生物的制作方法
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：本發(fā)明涉及含有通過拮抗CCR2受體(也稱作MCP-1受體)特別抑制單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的抗炎和免疫調節(jié)化合物的藥物組合物。這些化合物含有雙環(huán)芳香部分。本發(fā)明還涉及所述組合物中采用的新化合物、它們的制備方法、在制備中適用的中間體及其作為治療劑的用途。MCP-1是介導白細胞趨化和激活的促炎蛋白類趨化因子中的一員。MCP-1為C-C趨化因子，已知這種趨化因子是一種最有效和選擇性的T-細胞和單核細胞的趨化物和激活劑。MCP-1涉及許多炎性疾病，包括類風濕性關節(jié)炎、腎小球性腎炎、肺纖維變性、再狹窄(國際專利申請WO94／09128)、牙槽炎(Jones等人，1992，《免疫學雜志》(J．Immunol．)149，2147)和哮喘的病理生理學。認為MCP-1在其病理學中起一定作用的其它疾病領域是動脈粥樣硬化(例如Koch等人，1992，《臨床診療雜志》(J．Clin．Invest．)90，772-779)、牛皮癬(Deleuran等人，1996，《皮膚病學雜志》(J．DermatologicalScience)13，228-236)、遲發(fā)型皮膚過敏性反應、炎性腸病(Grimm等人，1996，《白細胞生物學雜志》(J．LeukocyteBiol．)59，804-812)、多發(fā)性硬化和腦部創(chuàng)傷(Berman等人，1996，《免疫學雜志》(J．Immunol)156，3017-3023)。MCP-1抑制劑也可用來治療休克、再灌注損傷、局部缺血、心肌梗塞和移植排斥。MCP-1是通過CCR2受體起作用。MCP-2和MCP-3也可以通過，至少部分通過這種受體發(fā)揮作用。所以在本說明書中，當涉及“MCP-1的抑制或拮抗”或“MCP-1介導的作用”時，包括當MCP-2和／或MCP-3經CCR2受體起作用時MCP-2的抑制或拮抗和／或MCP-3所介導的影響。WO-9631492描述了一系列包括雙環(huán)類化合物在內的化合物為內皮素受體的抑制劑。JP-63284177公開了某些適合多種用途的甲?；〈倪量┎⑦量╊惢衔锏闹苽?。此外，US專利號4751231描述了作為青光眼治療劑的取代噻吩并磺酰胺的制備。本申請人發(fā)現(xiàn)了一類含有雙環(huán)基部分的對MCP-1具有有效抑制活性的化合物。本發(fā)明提供一種含有與藥學上可接受的載體或稀釋劑聯(lián)合使用的式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽或酰胺的酯的藥物組合物，所述化合物是單核細胞趨化蛋白-1的抑制劑并且其中A和B與它們所連接的碳原子共同構成其中含有至少一個雜原子的任選取代的5元芳香環(huán)；X是CH2或SO2；R1是任選取代芳基或雜芳基環(huán)；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR4、-SO2NHR5、四唑-5-基、SO3H或式(Ⅵ)的基團其中R4選自氫、烷基、芳基、氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基，或R4是基團-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各個R10分別選自氫或烷基；R5是烷基、任選取代芳基，例如任選取代苯基或任選取代雜芳基如5或6元雜芳基，或基團COR6，其中R6是氫、烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基；R7和R8分別選自氫或烷基，特別是C1-4烷基；和R3是氫、官能團、任選取代烷基、任選取代鏈烯基、任選取代炔基、任選取代芳基、任選取代雜環(huán)基、任選取代烷氧基、任選取代芳烷基、任選取代芳烷基氧基、任選取代環(huán)烷基。所述組合物適當?shù)睾惺?Ⅰ)的化合物或其鹽或其體內可水解酯。式(Ⅰ)的化合物是單核細胞趨化蛋白-1的抑制劑。此外，它們可以抑制RANTES誘導的趨化。RANTES(活化后可調節(jié)的、正常T細胞表達并可能分泌的(因子))是屬于和MCP-1同類的另一種細胞因子，它們具有相似的生物學分布型，但RANTES是通過CCR1受體起作用。因此，所述化合物可以有效治療上述物質介導的疾病，特別是炎性疾病。所述化合物的實例是其中A、B、X、R1和R3定義如上的化合物，并且其中R2定義如上但R4選自氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基，或R4是基團-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各R10分別選自氫或烷基；R5是任選取代苯基或任選取代雜芳基，或基團COR6，其中R6是烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基；R7和R8分別選自氫或烷基，特別是C1-4烷基。在本文中，術語“雜原子”是指非碳原子，如氧、氮或硫原子。單獨使用或作為后綴使用的術語“烷基”包括直鏈和支鏈結構。這些基團含有至多10個碳原子，優(yōu)選至多6個碳原子和更優(yōu)選至多4個碳原子。同樣地，術語“鏈烯基”和“炔基”是指含有例如2-10個碳原子，優(yōu)選2-6個碳原子的不飽和直鏈或支鏈結構。環(huán)狀部分如環(huán)烷基、環(huán)烯基和環(huán)炔基性質上相似但至少有3個碳原子。術語例如“烷氧基”和“烷酰基”包括定義如上的連接在適當官能度上的烷基部分。術語“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。所述芳基包括芳香碳環(huán)基團，如苯基和萘基。術語“雜環(huán)基”包括芳香或非芳香環(huán)，例如含有4至20，適宜含有5至10個環(huán)原子的芳香或非芳香環(huán)，環(huán)原子中至少一個是雜原子如氧、硫或氮。該基團的實例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑基、三唑基、噻唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基?！半s芳基”是指那些定義如上的具有芳香特征的基團。術語“芳烷基”是指芳基取代的烷基，例如芐基。在說明書中使用的其它表達式包括“烴基”，它是指任何含有碳和氫原子的結構。例如，它們可以是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜環(huán)基、烷氧基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或環(huán)炔基。術語“官能團”是指反應性取代基。它們可以含有供電子體或吸電子體。此類基團的實例包括鹵素、氰基、硝基、C(O)nR11、OR11、S(O)mR11、NR12R12，、OC(O)nR12R12，、-CH=NOR11、-NR12C(O)nR11、-NR11CONR12R12，、-N=CR12R12，、S(O)mNR12R12，或NR12S(O)mR11，其中R11、R12和R12，分別選自氫或任選取代烴基，或R12和R12，一起形成任選取代環(huán)，該環(huán)任選地含有其它雜原子如S(O)m、氧和氮，n是整數(shù)1或2，m是0或1-3的整數(shù)。其中官能團包括S(O)mNR12R12，或NR12S(O)mR11，m通常是1-3的整數(shù)。為了免除懷疑，其中R12和R12，一起形成任選取代環(huán)，該環(huán)應含有定義如上的非芳香雜環(huán)基。適合于烴基R11、R12和R12，的任選取代基包括鹵素、全鹵代烷基如三氟甲基、巰基、羥基、烷氧基、氧代、雜芳氧基、鏈烯基氧基、炔氧基、烷氧基烷氧基、芳氧基(其中芳基可以被鹵素、硝基或羥基取代)、氰基、硝基、氨基、一-或二-烷基氨基、烷基酰氨基、肟基(例如羥亞氨基或烷氧基亞氨基)或S(O)mRy，其中m定義如上和Ry是烷基。適于基團A-B的任選取代基的實例包括定義如上的官能團或任選取代的烴基或任選取代的雜環(huán)基。A-B基團的具體取代基是次級式(Ⅳ)的基團A和B適當?shù)嘏c其所連接的碳原子形成任一次級式所示的5元雜芳基環(huán)其中R13、R14和R15分別選自氫或取代基。適用的取代基R13、R14和R15包括定義如上的官能團或任選取代烴基。適于R13、R14和R15的烴基包括烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、炔基、環(huán)炔基。A-B環(huán)的具體取代基包括三氟甲基；任選取代C1-4烷基，如芳烷基、羧烷基或其酰胺衍生物；鹵素；羥基；C1-4烷氧基；C1-4烷?；?；C1-4烷酰氧基；氨基；氰基；C1-4烷基氨基；二(C1-4烷基)氨基；C1-4烷?；被幌趸?；氨基甲?；?；C1-4烷氧基羰基；巰基；C1-4烷基硫基；C1-4烷基亞磺?；?；C1-4烷基磺?；换酋０被?，或烷基或芳基磺酰氨基；氨基甲?；鵆1-4烷基；N-(C1-4烷基)氨基甲?；鵆1-4烷基；N-(C1-4烷基)氨基甲酰基-C1-4烷基；羥基C1-4烷基；C1-4烷氧基C1-4烷基；一-或二-烷基或芳基取代脲；嗎啉代；硫嗎啉代；氧硫嗎啉代；吡咯烷基；羧基C1-4烷基氨基；R16，-NHR17和OR17(其中R16和R17分別選自任選取代的苯基和任選取代的5或6元雜芳基環(huán))。適用于R16和R17的任選取代基包括上述那些為R11、R12和R13所列的取代基。適用于R16和R17的任選取代基還包括那些為R1所列的取代基。烷基或芳基磺酰氨基取代基自身也可以被任選取代，例如被R11、R12或R12，或R1所列的取代基取代。式(Ⅰ)化合物的實例是那些其中環(huán)A-B帶有至少一個取代基的化合物。適宜地，當A-B形成上述次級式(ⅲ)的基團時，R15是氫，R14不是甲?；?，和／或R13不是氫、烷基或芳烷基。適宜地，當A-B形成上述次級式(ⅴ)的基團時，R13不是脒基。取代基適宜排列或接近于稱作環(huán)“A”的一側而優(yōu)于“B”位置。因此，在上述次級式(ⅰ)至(ⅹⅷ)的化合物中，其中存在的R13和／或R14適宜不是氫，首選R13不是氫。最接近“B”的位置優(yōu)選是氫。所以，在上述次級式(ⅰ)至(ⅹⅷ)中，R15首選是氫。優(yōu)選的A-B環(huán)的取代基以及，R13、R14和R15的優(yōu)選實例包括C1-4烷基，特別是甲基，該烷基可被羥基、氨基或一-或二-C1-4烷基氨基(如甲基氨基或二甲基氨基)；氰基；鹵素，特別是溴；噻吩基；四唑基；由氨基任選取代的苯基；C1-4烷氧基，特別是甲氧基；羧基或羧酰氨基任選取代。其中存在的A-B環(huán)的優(yōu)選取代基以及，R13、R14和R15的優(yōu)選實例是C1-4烷基，特別是甲基。式(Ⅰ)中適于R1的任選取代基包括上述為R11、R12和R12，以及為烷基、鏈烯基或炔基所列的那些取代基。適合于烷基、鏈烯基、炔基、基團R3的任選取代基包括上述為R11、R12和R12，和對于芳基、芳烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)基R3所列的那些；取代基也可以是在此為R1所列的取代基。適用的X為CH2。適用的R1是任選取代的苯基、萘基、呋喃基、吡啶基或噻吩基環(huán)，并且優(yōu)選取代苯基或吡啶基環(huán)。優(yōu)選R1被至少一個取代基取代，特別是當R1是苯基時。R1的具體取代基包括三氟甲基、C1-4烷基、鹵素、三氟甲氧基、C1-4烷氧基、C1-4烷酰基、C1-4烷酰基氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷?；被?、硝基、羧基、氨基甲?；?、C1-4烷氧基羰基、巰基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基亞磺?；1-4烷基磺?；⒒酋０被?、氨基甲酰基C1-4烷基、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基C1-4烷基、N-(C1-4烷基)2氨基甲?；?C1-4烷基、羥基C1-4烷基或C1-4烷氧基C1-4烷基。其它或另外地，兩個上述取代基可以一起構成連接在R1環(huán)相鄰碳原子上的式-O(CH2)1-4O-所示的二價基團。優(yōu)選的R1的取代基是一個或多個非極性取代基如鹵素。特別是，R1被一個或多個鹵素基團，尤其是氯取代。R1的具體例子是3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基或2，3-二氯吡啶-5-基。優(yōu)選R1是3，4-二氯苯基?；鶊FR2的實例包括羧基、四唑-5-基、氰基、SO3H、-SO2NHR5、-CONHR4，或式(Ⅵ)的基團其中R5定義如上，R7和R8分別選自氫或烷基，特別是C1-4烷基，R4是氰基、OH、-SO2-C1-4烷基(其中該烷基是由鹵素如氟任選取代，尤其是在α位)、-SO2CF3、-SO2-苯基、-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3和各R10分別選自氫或烷基，例如C1-4烷基。優(yōu)選的R2是羧基或其藥學上可接受的鹽或酯，例如C1-4烷基酯，和特別是羧基或其藥學上可接受的鹽，具體是羧基。適用的基團R3包括氫、氟、氯、溴、碘、甲基、氰基、三氟甲基、羥甲基、烷氧基烷基如C1-4烷氧基甲基、甲氧基、芐氧基、羧基烷氧基如羧基甲氧基、甲基硫基、甲基亞磺?；⒓谆酋；螋然鵆3-6環(huán)烷基、-(CHR21)r-NR23(其中r是0-2，各R21分別是氫或烷基，特別是C1-4烷基，和R23分別選自H和C1-4烷基，或和R23與它們所連接的氮一起形成任選含有另外一個雜原子的5或6元環(huán)，所述雜原子選自O、N、S、S(O)或SO2。和R23適宜一起形成雜環(huán)，例如嗎啉代或哌啶基。其它的R3基團包括任選取代芳基，例如任選取代的苯基或萘基。適于苯基R3的取代基包括一個或多個選自氯、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、甲?；?、苯基、甲氧基、苯氧基或苯基的基團。R3可以帶有多個上述取代基，特別是氫或小取代基如C1-4烷基(具體如甲基)、或三氟甲基，并且優(yōu)選是氫。特別適用的A-B基團是如上所示的式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅴ)和(ⅸ)的那些基團。另外特別適用的A-B基團是上述式(ⅹⅰ)的基團。特別優(yōu)選的式(Ⅰ)化合物是式(ⅠA)或(ⅠB)的化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺的酯，其中R1定義如上，和優(yōu)選是鹵素取代的苯基，例如3，4-二氯苯基，R26是氫或G1-4烷基，具體為甲基，并且在式(ⅠA)中(ⅰ)R24是硫和R25是CH；或(ⅱ)R24是硫和R25是氮；或(ⅲ)R24是氧和R25是CH；或(ⅳ)R24是NCH3和R25是CH；和在式(ⅠB)中(ⅰ)R24’是CH和R25’是硫；或(ⅱ)R24’是CH和R25’是氧；或(ⅲ)R24’是氮和R25’是硫。特別優(yōu)選的實例是式(ⅠA)的化合物，其中R1是鹵素取代的苯基，例如3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基，R26是氫或甲基，R24是硫和R25是CH或氮。其它具體實例是式(ⅠA)的化合物，其中R1是鹵素取代的苯基，例如3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基，R24是氧，R25是CH，和R26是氫或甲基。其它優(yōu)選的實例是式(ⅠB)的化合物，其中R1是鹵素取代的苯基，例如3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基，R25’是硫，R26是氫和R24’是CH或氮。優(yōu)選式(ⅠA)或(ⅠB)的化合物為酸。適用的式(Ⅰ)化合物的藥學上可接受鹽包括堿鹽，例如堿金屬鹽如鈉鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽或鎂鹽；有機胺鹽如三乙胺、嗎啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普魯卡因、二芐胺、N，N-二芐基乙基胺，或氨基酸如賴氨酸。另一方面，當所述化合物堿性足夠時，適當?shù)柠}包括酸加成鹽，例如甲磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽和與磷酸和硫酸形成的鹽。根據(jù)荷電官能團的數(shù)量和陽離子或陰離子的效價，可以存在不止一個陽離子或陰離子。優(yōu)選的藥學上可接受的鹽是鈉鹽。在體內可水解的含有羧基或羥基的式(1)化合物的酯是例如能在人體或動物體內被水解產生母體酸或醇的藥學上可接受的酯。藥學上可接受的適于羧基的酯包括C1-6烷基酯如甲酯或乙酯；C1-6烷氧基甲酯如甲氧基甲酯，C1-6烷酰氧基甲酯如新戊酰氧基甲酯，2-苯并[c]呋喃酮基酯，C3-8環(huán)烷氧基-羰氧基C1-6烷基酯如1-環(huán)己基羰氧基乙酯；1，3-二氧雜環(huán)戊烯(dioxolen)-2-酮基甲酯，例如5-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮基甲酯；和C1-6烷氧基羰氧基乙酯，例如1-甲氧基羰氧基乙酯，并且可以在本發(fā)明化合物的任何羧基上形成。在體內可水解的含羥基式(Ⅰ)化合物的酯包括無機酯，例如磷酸酯和α-酰氧基烷基醚以及作為酯在體內水解生成母體羥基的產物的有關化合物。α-酰氧基烷基醚的實例包括乙酰氧基甲氧基醚和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基醚。選擇的體內可水解酯對羥基所形成的基團包括烷?；?、苯甲?；?、苯基乙酰基和取代苯甲?；c取代苯基乙?；⑼檠趸驶?生成烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲?；蚇-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲?；?生成氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙?；汪然阴；?。適用的酰胺包括，例如N-C1-6烷基和N，N-二(C1-6烷基)酰胺，如N-甲基、N-乙基、N-丙基、N，N-二甲基、N-乙基-N-甲基或N，N-二乙基酰胺。具體的式(Ⅰ)化合物如表Ⅰ所列。在式中，虛線表示存在的雙鍵，它位于R40和R41或在R41和R42之間，所屬領域技術人員應理解這取決于基團R40、R41和R42的性質和化合價。表Ⅰ其中，表Ⅰ中的化合物4、25、34、50和56特別受關注并且這些化合物或其藥學上可接受的鹽將被作為本發(fā)明進一步的特征。本發(fā)明進一步提供定義如上的式(Ⅰ)化合物在炎性疾病治療中的應用。此外，本發(fā)明提供了定義如上的式(Ⅰ)化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。某些式Ⅰ化合物是已知化合物，例如在《分子學》(1997)，2(4)，69-79；《Chem．Pap．》(1996)，50(2)，72-76；《Chem．Pap．》(1994)，48(4)，268-73；《雜環(huán)》(1994)，37(3)，1695-700和(1989)，29(10)，1943-9；《Coll．Czech．Chem．Commun．》(1994)，59(2)，473-481和499-502；《Coll．Czech．Chem．Commun．》(1993)，58(9)，2139-49；《Coll．Czech．Chem．Commun．》(1992)，57(7)，1487-94；《Monatsh．Chem》(1992)，123(8-9)，807-15和《Magn．Reson．Chem．》(1990)，28(9)，830-1中公開了的具體化合物。然而，在本發(fā)明之前，并不知道任何這些化合物具有抗MCP-1的抑制活性。某些式(Ⅰ)化合物是新化合物，這些新化合物構成本發(fā)明的另外范圍。所以，本發(fā)明還提供了定義如上的式(Ⅰ)化合物，或其藥學上可接受的鹽或其體內可水解酯。它是單核細胞趨化蛋白-1的抑制劑；需滿足下列條件a)其中A-B形成上述次級式(ⅰ)或(ⅳ)的基團，R1不是苯基、氨基苯基或硝基苯基；和b)其中A-B形成上述次級式(ⅲ)的基團，R13是甲基和R15是氫，R14不是CHO；c)其中A-B形成上述次級式(ⅴ)的基團和X是SO2，R1不是未取代苯基。具體和優(yōu)選的新式(Ⅰ)化合物是在上述有關藥物組合物中描述的那些化合物。特別優(yōu)選的一組化合物是定義如上的式(ⅠA)和(ⅠB)的化合物。一些式(Ⅰ)化合物可以具有手性中心。應理解，本發(fā)明包括式(I)化合物的所有這些光學異構體和非對映異構體以及含有它們的藥物組合物。本發(fā)明進一步涉及式(Ⅰ)化合物的所有互變異構體和含有它們的藥物組合物。還應理解，某些式(Ⅰ)化合物可以以溶劑化和非溶劑化形式存在，例如以水合形式存在。應懂得，本發(fā)明包括所有這些溶劑化形式和含有它們的藥物組合物。式(Ⅰ)的化合物適合通過將式(Ⅶ)的化合物與式(Ⅷ)的化合物反應來制備。(Ⅶ)中A、B和R3是式(Ⅰ)中的有關定義和R27是氫或權利要求1中定義的R2基團。R1-X-ZⅧ(Ⅷ)中R1和X是式(Ⅰ)中的有關定義和Z是離去基團；并且此后如果希望或需要，將R27轉化為基團R2和／或不同于該基團的基團。適用于Z的離去基團包括鹵化物如氯化物、溴化物或碘化物，和甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。該反應適合在有機溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)或DCM中，在堿如氫化鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀的存在下完成。該反應任意地在適當相轉移催化劑的存在下進行。正如所屬領域技術人員所理解的，對堿和溶劑的選擇在某種程度上相互依賴，其中某些溶劑與一些堿相容。例如，氫化鈉優(yōu)選與二甲基甲酰胺或四氫呋喃一起使用，氫氧化鈉優(yōu)選與二氯甲烷和相轉移催化劑一起使用。該反應是在適度的溫度下進行，例如0-50℃，并且一般是在約室溫下進行。優(yōu)選式Ⅶ化合物中的R27是酯基，這樣隨后可以通過常規(guī)方法轉化成為酸或酰胺或另一種酯或鹽。例如，當Ⅹ是SO2和R2是羧基的甲酯時，它可以通過在干燥吡啶或DMF中與碘化鋰反應轉化成為相應羧酸。此外，當R27是氫時，它通過例如與二異丙基氨化鋰(LDA)反應，隨后通過氯甲酸烷基酯反應，可以轉化為羧酸酯基。該反應適合在有機溶劑如四氫呋喃(THF)中在低溫如-78℃至0℃，優(yōu)選約-20℃至-40℃下完成。在這種情況下，氮原子上的基團是一個適合在2一位被直接金屬取代的基團，例如苯基磺?；?。式(Ⅶ)的化合物或是已知化合物，或是可以由已知化合物通過常規(guī)方法制備的化合物。例如，式(Ⅶ)的化合物可以通過將式(Ⅸ)化合物環(huán)化來制備其中A和B如式(Ⅰ)中的有關定義和R28和R29表示可以環(huán)化成適當取代吡咯環(huán)的結合的部分。例如，R28和R29中的一個可以是式-CH=C(R30)N3的基團，其中R30是定義如上的基團R2或其保護形式，和R28和R29中的另一個可以是氫。生成式(Ⅶ)化合物的環(huán)化反應隨后可以通過加熱如回流下在有機溶劑中，特別是在高沸點非質子溶劑如二甲苯或甲苯中進行。而且，R28和R29中的一個可以是硝基并且另一個是式-CH2C(O)R27的基團，其中R27如式(Ⅶ)中的有關定義。這些化合物在催化劑如炭載鈀的存在下、在氫的存在下環(huán)化。該反應可以在適當溫度如0-80℃下，一般是在約室溫下完成。所以，式(Ⅸ)的化合物的實例包括式(Ⅹ)和(Ⅺ)的化合物式(Ⅹ)的化合物可以通過例如式(Ⅻ)的化合物與式(ⅫⅠ)的化合物反應來制備。其中A、B、R3和R27如上述定義。該反應可以在有機溶劑如乙醇中在-20℃至0℃，適宜約為0℃的低溫下進行。該反應適合在堿如醇鹽，特別是乙醇鹽(例如乙醇鉀)的存在下完成。式(ⅫⅠ)的化合物適合通過式(ⅪⅤ)的化合物其中R3和R27定義如上和R30是離去基團，例如鹵化物和特別是溴化物；與疊氮化物鹽，例如疊氮化堿金屬鹽(具體如疊氮化鈉)反應來制備。式(Ⅺ)的化合物通過式(ⅩⅤ)的化合物其中A、B和R3定義如上，與式(ⅩⅥ)的化合物反應來制備。其中R27定義如上和R31是離去基團。式(ⅩⅥ)化合物的實例是草酸酯，如草酸二乙酯。該反應適合在堿如氫化鈉的存在下、在有機溶劑如THF中進行。反應采用0-40℃的適當溫度，并且一般采用室溫。式(Ⅻ)、(ⅪⅤ)、(ⅩⅤ)和(ⅩⅥ)的化合物是已知化合物，或它們是可以由已知化合物通過常規(guī)方法制備的化合物。位于通過A-B生成的環(huán)上的取代基可以在上述合成過程中引入，或利用所屬領域普通技術人員熟知的多種方法引入，這取決于具體被引入的取代基的性質。而且，應用常規(guī)化學方法可以將一種取代基更換為不同的取代基。其它可能的情況對于所屬領域普通技術人員來說是顯而易見的。某些在此定義的中間體是新的，例如某些式(Ⅶ)化合物是新化合物，并且作為本發(fā)明進一步的特征提供。本發(fā)明的組合物可以是適合口服使用(例如片劑、錠劑、硬或軟膠囊、水或油性混懸液、乳液、可分散粉末或顆粒、糖漿劑或酏劑)、局部使用(例如霜劑、軟膏、凝膠，或水或油性溶液或混懸液)、吸入給藥(例如微粉或液態(tài)氣溶膠)、吹入給藥(例如微粉)或非腸道給藥(例如用于靜脈內、皮下、肌肉內給藥的滅菌水或油溶液或用于直腸給藥的栓劑)的形式。本發(fā)明的組合物可以通過所屬領域熟知的常規(guī)方法采用常用藥物賦形劑來獲得。因此，例如，口服使用的組合物含有一種或多種著色劑、甜味劑、矯味劑和／或防腐劑。適用于片劑的藥學上可接受的賦形劑包括，例如惰性稀釋劑，如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；制粒和崩解劑，如玉米淀粉或藻酸(algenicacid)；粘合劑，例如淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑，例如對-羥基苯甲酸乙酯或丙酯；和抗氧劑，例如抗壞血酸。片劑制劑可以是未包衣或包衣的，以改進其崩解作用和隨后在胃腸道內活性組分的吸收作用，或改進穩(wěn)定性和／或外觀，在任一情況中，可以采用所屬領域普通技術人員熟知的常規(guī)包衣劑和方法。口服使用的組合物可以是硬明膠膠囊的形式，其中活性組分與惰性固體稀釋劑，例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或是軟明膠膠囊的形式，其中活性組分與水或油，例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。水混懸液一般含有微粉形式的活性組分和一種或多種助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠、和阿拉伯膠；分散或濕潤劑，例如卵磷脂或氧化烯和脂肪酸的縮合產物(例如聚氧化乙烯硬脂酸酯)，或環(huán)氧乙烷和長鏈脂肪醇如十七碳乙烯氧基十六烷醇的縮合產物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產物，例如聚氧化乙烯山梨糖醇一油酸酯，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產物如聚氧化乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。水混懸液還可以含有一種或多種防腐劑(例如對-羥基苯甲酸乙酯或丙酯)，抗氧劑(如抗壞血酸)，著色劑，矯味劑，和／或甜味劑(例如蔗糖、糖精或天冬甜素)。油性混懸液可以通過將活性組分懸浮在植物油(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰油)或礦物油(例如液體石蠟)中來制備。油性混懸液還可以含有增稠劑如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？梢约尤肷鲜鎏鹞秳┖统C味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過加入抗氧劑如抗壞血酸來保藏。適于通過加入水來制備水懸浮液的可分散粉末和顆粒一般含有活性組分和分散劑或濕潤劑、助懸劑和一種或多種防腐劑。適用的分散劑或濕潤劑和助懸劑例如是上述提及的那些。附加賦形劑，例如甜味劑、矯味劑和著色劑也可以存在其中。本發(fā)明的藥物組合物還可以是水包油乳液。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油；或礦物油，例如液體石蠟；或它們的混合物。適用的乳化劑可以是，例如天然樹膠，如阿拉伯膠或黃耆膠；天然磷脂，如大豆、卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如脫水山梨糖醇一油酸酯)，和所述偏酯和環(huán)氧乙烷的縮合產物，例如聚氧化乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。該乳液還可以含有甜味劑、矯味劑和／或防腐劑。糖漿劑和酏劑可以用甜味劑，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖配制，并且還可以含有濕潤劑、防腐劑、矯味劑和／或著色劑。所述藥物組合物也可以是滅菌可注射水或油懸浮液的形式，該形式可以按照已知方法采用一種或多種適當?shù)娜缟纤龅姆稚┗驖駶檮┖椭鷳覄﹣碇苽?。滅菌可注射制劑還可以是在無毒非腸道給藥可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌可注射溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。栓劑可以通過將活性組分與在常溫下為固體在直腸溫度下為液體且在直腸內熔融釋放出藥物的適當無刺激賦形劑混合來制備。適用的賦形劑包括，例如，可可脂和聚乙烯乙二醇。局部用制劑，例如霜劑、軟膏、凝膠和水或油溶液或混懸液，一般可以通過所屬領域熟知的常規(guī)方法由活性組分和常規(guī)局部可接受的賦形劑或稀釋劑配制得到。用于吹入給藥的組合物可以是含有平均粒徑等于或小于30μ的微粉的形式，微粉本身只含有活性組分或用一種或多種生理可接受載體如乳糖稀釋的活性組分。此后，用于吹入的粉末通常被保存在膠囊中，膠囊內含有例如1-50mg的活性組分，膠囊適用于汽輪式吸入裝置，例如已知藥物色甘酸鈉吹入用裝置。用于吸入給藥的組合物可以是常規(guī)加壓式氣溶膠，它可以將活性組分分配成為具有細小固體或液滴的氣溶膠?？梢圆捎闷胀馊苣z拋射劑，例如揮發(fā)性氟化烴類化合物或烴類化合物，氣溶膠裝置一般能夠分配出計量量的活性組分。有關制劑的更進一步的信息，讀者可以參考《綜合藥物化學》(ComprehensiveMedicinalChemistry)的第5卷第25．2章(CorwinHansch；ChairmanofEditorialBoard)，PergamonPress1990。與一種或多種賦形劑一起制成單劑量的活性組分的用量必須取決于被治療宿主和具體的給藥途徑。例如，用于人體口服給藥的制劑一般含有，例如，0．5mg-2g的與適當和常規(guī)量的賦形劑相結合的活性劑，所述賦形劑的量在組合物總重量的約5-98％(重量)內變化。單位劑型一般含有約1mg至約500mg的活性組分。有關給藥途徑和給藥方案的進一步的信息，讀者可以參考《ComprehensiveMedicinalChemistry》的第5卷第25．3章(CorwinHansch；ChairmanofEditorialBoard)，PergamonPress1990。式Ⅰ化合物的用于治療或預防目的的劑量的大小當然應根據(jù)疾病的性質和嚴重性、動物或患者的年齡和性別以及給藥途徑按照公知的醫(yī)學原理來改變。如上所述，式Ⅰ化合物可以有效治療單獨或部分由于大鼠法尼基化作用引起的，疾病或臨床癥狀。在將式Ⅰ的化合物用于治療或預防目的時，通常給藥是使日劑量范圍在，例如，0．5mg至75mg／kg體重內，如果需要可以分次給藥。一般地，采用非腸道途徑給藥時應以低劑量給藥。因此，例如對于靜脈內給藥，給藥劑量可以采用例如0．5mg至30mg／kg體重的范圍。同樣地，對于吸入給藥，劑量范圍可以采用例如0．5mg至25mg/kg體重的范圍。但優(yōu)選口服給藥。另一方面，本發(fā)明提供一種通過施用上述式(Ⅰ)化合物或其上述藥物組合物用于治療炎性疾病的方法。本發(fā)明將進一步通過下列實施例舉例說明，但不受下列實施例的限定，其中采用以下通用方法，除非另外說明。N，N-二甲基甲酰胺(DMF)用4_分子篩干燥。無水四氫呋喃(THF)得自于AldrichSURESEALTM試劑瓶。其它市售試劑和溶劑無需進一步純化即可使用，除非另外說明。有機溶劑提取液用無水MgSO4干燥。1H、13C和19FNMR采用Me2SO-d6記錄在BrukerWM200、WM250、WM300或WM400儀器上，如果適當?shù)脑?，用Me4Si或CCl3F作為內標，除非另有說明?；瘜W位移表示為d(ppm)，峰的多重態(tài)表示如下s，單重峰；d，雙重峰；dd，一對雙重峰；t，三重峰；dt，一對三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬帶。質譜記錄在VG12-12四極，VG70-250SE、VGZAB2-SE或VG改進AEI／KratosMS9分光計上。對于TLC分析，采用Merck預涂層TLC板(硅膠60F254，d=0．25mm)。閃式層析是在硅膠(MerckKieselgelArt．9385)上進行。在Kofler密閉塊上或用Bchi熔點儀進行熔點測定并且未經校正。所有溫度均為攝氏度。制備例1疊氮乙酸乙酯室溫下，將溴乙酸乙酯(3．43ml)加入疊氮化鈉(3g)在DMF(50ml)中的混懸液內且在90℃下將該反應攪拌5小時。將反應物傾入冰水(300g)中，用乙醚提取。合并的提取液用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)和濃縮，得到無色油狀產物(3．37g，84％)，該產物無需進一步純化即可使用。NMRd(CDCl3)1．30(3H，t)，3．82(2H，s)，4．23(2H，q)；M／z(+)130(MH+)。制備例2疊氮乙酸甲酯重復實施例1所述方法但采用適當?shù)匿逡宜狨?。得到標題化合物，收率為82％；NMRd(CDCl3)3．80(3H，s)，3．90(2H，s)。制備例32-疊氮-3-(2-噻吩基)丙酸乙酯0℃下，將疊氮乙酸乙酯(1．38g)和噻吩-2-羧醛(1g)在乙醇(20ml)中的溶液滴加至乙醇鉀(0．9g)的乙醇(20ml)溶液內。在0℃下將反應攪拌2小時且在室溫下攪拌2小時，隨后傾入飽和氯化銨水溶液(150ml)中，用乙醚提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，真空濃縮，殘余物通過柱層析利用異己烷作為洗脫劑純化，得到淺黃色結晶固體的產物(0．49g，25％)，NMRd(CDCl3)1．40(3H，t)，4．37(2H，q)，7．08(2H，m)，7．18(1H，s)，7．38(1H，m)，7．52(1H，d)。制備例44H-噻吩并[3，2-b]吡咯-5-羧酸甲酯將2-疊氮-3-(2-噻吩基)丙烯酸乙酯(0．45g)在二甲苯(10ml)中的溶液加熱回流30分鐘，真空濃縮，殘余物通過柱層析用異己烷-15％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到淺黃色固體產物(0．26g，66％)，NMRd(CDCl3)1．40(3H，t)，4．39(2H，q)，6．98(1H，d)，7．18(1H，s)，7．35(1H，d)，9．30(1H，bs)；M／z(-)194(M-H+)，166。制備例54-羥甲基-2-甲基噻唑將氫化鋰鋁(1M的四氫呋喃溶液，140ml)滴加到0℃的2-甲基噻唑-4-甲酸乙酯(22g)在四氫呋喃中的溶液內。令反應升至室溫，傾入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，濃縮，殘余物通過柱層析用乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到黃色膠狀的產物(10g，55％)，NMRd(CDCl3)2．7(3H，s)，4．72(2H，s)，7．02(1H，s)。制備例62-甲基噻唑-4-羧醛在-60℃下，將草酰氯(2M的二氯甲烷溶液，2．4ml)滴加至4-羥甲基-2-甲基噻唑(0．5g)和二甲基亞砜(0．34ml)的二氯甲烷(15ml)溶液中。令反應升至室溫，冷卻至-60℃并加入N，N-二異丙基胺(2．02ml)。隨后令反應升至室溫，傾入水中，用二氯甲烷提取。將合并的有機提取液干燥，真空濃縮和通過柱層析用異己烷至異己烷40％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到淺黃色固體的產物(0．27g，55％)，NMRd(CDCl3)2．8(3H，s)，8．05(1H，s)，9．98(1H，s)；M／z(+)128(MH+)。制備例7采用適當?shù)碾s芳基醛和疊氮乙酸酯重復制備例3和4所述的方法。由此得到下列化合物。制備例7a4H-噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率15％(2步)，M／z(-)194(M-H+)，166，122。制備例7b4H-呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率18％(2步)，M／z(+)180(M-H+)，152，134，108，102。制備例7c4H-呋喃并[2，3-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率9％(2步)，M／z(-)179(M-H+)，178，150，106。制備例7d4H-1-甲基吡咯并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率7％(2步)，M／z(+)193(MH+)，147。制備例7e4H-呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯收率25％(2步)，NMRd(DMSO)3．78(3H，s)，6．58(1H，s)，6．72(1H，s)，7．78(1H，s)，11．64(1H，bs)；M／z(-)165(M+)，164。制備例7f4H-3-溴噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率3％(2步)，NMRd(DMSO)1．28(3H，t)，4．24(2H，q)，7．02(1H，s)，7．18(2H，s)，12．15(1H，bs)；M／z(-)274(M+)，272。制備例7g4H-噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸甲酯收率7％(2步)，NMRd(DMSO)3．80(3H，s)，7．00(2H，m)，7．10(1H，d)，12．25(1H，bs)；M／z(-)180(M-H+)。制備例7h1-甲基-1，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸乙酯收率24％(2步)，NMRd(DMSO)1．25(3H，t)，3．7(3H，s)，4．2(2H，q)，6．7(1H，s)，7．7(1H，s)，11．6(1H，bs)；M／z(+)194(MH+)。制備例7i3-甲基-3，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸乙酯收率7％(2步)，NMRd(DMSO)1．3(3H，t)，3．7(3H，s)，4．2(2H，q)，6．7(1H，s)，7．6(1H，s)，11．7(1H，bs)；M／z(+)194(MH+)。制備例7j4H-吡咯并[2，3-d][1，3]噻唑-5-甲酸乙酯收率10％(2步)，NMRd(DMSO)1．3(3H，t)，4．3(2H，q)，7．3(1H，s)，8．3(1H，s)，9．2(1H，bs)。制備例7k4H-2-甲基噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯收率67％(2步)，NMRd(DMSO)1．24(3H，t)，2．43(3H，s)，4．23(2H，q)，6．70(1H，s)，6．95(1H，s)；M／z(-)208(M-H+)。制備例7l4H-吡咯并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸甲酯收率4％(2步)，NMRd(DMSO)3．82(3H，s)，7．19(1H，s)，8．84(1H，s)；M／z(+)183(MH+)。制備例7m2-甲基-4H-吡咯并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸甲酯收率38％(2步)，NMRd(DMSO)2．68(3H，s)，3．8(3H，s)，7．05(1H，s)；M／z(+)197(MH+)。制備例7n4H-2-甲氧基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯收率19％(2步)，NMRd(DMSO)3．7(1H，s)，3．9(1H，s)，5．6(1H，s)，6．65(1H，s)，11．55(1H，s)；M／z(+)196(MH+)。實施例14-(3，4-二氯芐基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物7)將氫化鈉(32mg，60％)加入到4H-噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(0．13g)(得自制備例4)的溶液中并且將反應攪拌30分鐘。加入3，4-二氯芐基溴(0．22g)且繼續(xù)攪拌2小時。加入水終止該反應，用乙醚提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，濃縮，殘余物通過柱層析用異己烷-5％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到黃色固體的產物(0．15g，64％)，NMRd(DMSO)1．24(3H，t)，4．22(2H，q)，5．73(2H，s)，6．63(1H，d)，6．98(1H，dd)，7．25(2H，m)，7．37(1H，s)，7．55(1H，d)；M／z(+)，354(M+)，214，158，129。實施例2采用適當?shù)倪量┖推S鹵化物或芳基磺酰氯重復實施例1所述的方法。由此得到下列化合物。實施例2a4-(3，4-二氯芐基)噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物1)收率73％，NMRd(CDCl3)1．36(3H，t)，4．30(2H，q)，5．62(2H，s)，6．91(1H，d)，7．02(1H，d)，7．07(1H，dd)，7．24(1H，s)，7．35(2H，m)；M／z(+)354(M+)，319。實施例2b4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物3)收率52％，NMRd(CDCl3)1．35(3H，t)，4．26(2H，q)，5．60(2H，s)，6．28(1H，d)，6．89(1H，s)，6．96(1H，dd)，7．23(1H，s)，7．36(1H，d)，7．50(1H，d)；M／z(+)338(M+)。實施例2c4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[2，3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物5)收率88％，NMRd(CDCl3)1．34(3H，t)，4．28(2H，q)，5．60(2H，s)，6．53(1H，d)，6．96(1H，s)，7．09(1H，dd)，7．30(1H，d)，7．37(2H，m)；M／z(+)338(M+)。實施例2d4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物17)收率81％，NMRd(CDCl3)1．33(3H，t)，3．67(3H，s)，4．24(2H，q)，5．58(2H，s)，5．80(1H，d)，6．79(1H，d)，6．84(1H，s)，6．97(1H，dd)，7．24(1H，m)，7．32(1H，d)；M／z(+)351(M+)。實施例2e4-(3，4-二氯苯磺?；?呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物19)收率70％，NMRd(DMSO)3．72(3H，s)，7．03(1H，s)，7．38(1H，s)，7．96(2H，m)，8．06(1H，s)，8．23(1H，s)；M／z(+)374(M+)，344，165，121。實施例2f4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物21)收率65％，NMRd(DMSO)3．72(3H，s)，5．63(2H，s)，6．80(1H，d)，6．90(1H，s)，7．02(1H，dd)，7．39(1H，s)，7．55(1H，d)，7．80(1H，d)；M／z(+)324(M+)，259，243，158，121。實施例2g4-(3，4-二氯苯磺?；?噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物15)收率70％，NMRd(DMSO)3．70(3H，s)，7．17(2H，d)，7．46(1H，d)，7．47(1H，s)，7．84(1H，dd)，7．93(1H，d)，8．20(1H，s)；M／z(+)392(M+)，390，360，339，159，150，115。實施例2h4-(3，4-二氯芐基)-2-溴噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物9)收率62％，NMRd(DMSO)1．22(3H，t)，4．20(2H，q)，5．66(2H，s)，6．96(1H，dd)，7．21(1H，s)，7．38(1H，m)，7．57(1H，d)，7．59(1H，s)；M／z(+)434(M+)，119。實施例2j4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物24)標題化合物是由2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯制備，收率74％，NMRd(DMSO)1．20(3H，t)，2．35(3H，s)，4．20(2H，q)，5．60(2H，s)，6．4(1H，s)，6．80(1H，s)，7．00(1H，m)，7．40(1H，s)，7．60(1H，d)。實施例2j4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-1，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物26)收率70％，NMRd(DMSO)1．2(3H，t)，3．7(3H，s)，4．2(2H，q)，5．6(2H，s)，6．9(1H，s)，7．05(1H，m)，7．35(1H，m)，7．5(1H，d)，7．8(1H，s)；M／z(+)352(MH+)。實施例2k4-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-3，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物28)收率79％，NMRd(DMSO)1．25(3H，t)，3．6(3H，s)，4．2(2H，q)，5．8(2H，s)，6．85(1H，m)，7．0(1H，s)，7．3(1H，s)，7．6(2H，m)；M／z(+)352(MH+)。實施例2l4-(3，4-二氯芐基)-4-H-吡咯并[2，3-d][1，3]噻唑-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物30)收率100％，NMRd(DMSO)1．2(3H，t)，4．25(2H，q)，5．8(2H，s)，7．0(1H，m)，7．3(1H，s)，7．4(1H，m)，7．55(1H，d)，9．15(1H，s)；M／z(+)355(MH+)。實施例2m4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物32)收率94％，NMRd(CDCl3)1．35(3H，t)，2．55(3H，s)，4．26(2H，q)，5．60(2H，s)，6．56(1H，s)，6．90(1H，dd)，7．20(2H，m)，7．35(1H，d)；M／z(+)370，368(M+)。實施例2n4-(3，4-二氟芐基)-2-甲基噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物33)收率64％，NMRd(CDCl3)1．35(3H，t)，2．55(3H，s)，4．30(2H，q)，5．60(2H，s)，6．55(1H，s)，6．80-7．20(4H，m)；M／z(+)336(MH+)。實施例2o4-(3，4-二氯芐基)-4H-吡咯并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物48)收率58％，NMRd(CDCl3)3．88(3H，s)，5．68(2H，s)，7．05(1H，dd)，7．31(1H，d)，7．39(1H，d)，7．45(1H，s)，8．51(1H，s)；M／z(+)341(MH+)。實施例2p4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基-4H-吡咯并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物49)收率80％，NMRd(CDCl3)2．72(3H，s)，3．85(3H，s)，5．62(2H，s)，7．05(1H，dd)，7．28(1H，s)，7．3(1H，d)，7．39(1H，d)；M／z(+)355(MH+)。實施例2q4-(3，4-二氟芐基)吡咯并[2，3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物52)收率88％，NMRd(DMSO)1．25(3H，t)，4．25(2H，q)，5．8(2H，s)，6．9(2H，m)，7．2(1H，m)，7．3(1H，m)，9．2(1H，s)；M／z(+)323(MH+)。實施例2r4-(4-氯-3-氟芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物54)收率95％，NMRd(DMSO)2．35(3H，s)，3．7(3H，s)，5．6(2H，s)，6．4(1H，s)，6．85(1H，s)，6．9(1H，d)，7．15(1H，d)，7．5(1H，t)；M／z(+)322(MH+)。實施例2s4-(3-氯-4-氟芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物55)收率78％，NMRd(DMSO)2．35(3H，s)，3．7(3H，s)，5．55(2H，s)，6．4(1H，s)，6．8(1H，s)，7．1(1H，m)，7．35(2H，m)；M／z(+)322(MH+)。實施例2t4-(3，4-二氯芐基)-2-甲氧基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表Ⅰ中的化合物58)收率47％，NMRd(DMSO)3．65(3H，s)，3．90(3H，s)，5．6(2H，s)，5．85(1H，s)，6．85(1H，s)，7．05(1H，d)，7．4(1H，m)，7．6(1H，d)；M／z(+)354(MH+)。實施例34-(3，4-二氯芐基)-2-(噻吩-2-基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表Ⅰ中的化合物10)將四(三苯基膦)鈀(O)(20mg)加入4-(3，4-二氯芐基)-2-溴噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(0．1g)和噻吩-2-硼酸(34mg)在乙醇(1ml)、甲苯(1ml)和碳酸鉀水溶液(2N，1ml)中的脫氣溶液內，在80℃和氬氣氛下將反應攪拌6小時。將反應冷卻，傾入2NHCl中，用乙醚提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，真空濃縮，殘余物通過柱層析用異己烷至異己烷-25％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到淺黃色結晶固體的產物(77mg，77％)，M／z(+)435(MH+)，276，204，159，127。實施例42-(3-氨基苯基)-4-(3，4-二氯芐基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(表1中的化合物11)采用適當硼酸重復實施例3中所述的方法。得到標題化合物，收率為82％，M／z(+)444(MH+)，285，241，213，186，179，159，123。實施例54-(3，4-二氯芐基)-2-甲?；秽3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物36)將磷酰氯(1．41ml)加入到冷卻的DMF(4．7ml)中并且將反應攪拌20分鐘。保持溫度低于10℃，滴加4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(4．89g)。在此溫度下將該混合物攪拌30分鐘，隨后在60℃下加熱1小時。傾入冰／水中終止該反應，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和并用乙酸乙酯提取。將有機提取液干燥，(MgSO4)，真空濃縮，殘余物通過柱層析、用異己烷30％乙酸乙酯增高至異己烷70％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到淺褐色固體的產物(3．85g，72％)。NMRd(CDCl3)3．9(3H，s)，5．65(2H，s)，6．9(1H，s)，7．0(2H，m)，7．25(1H，s)，9．65(1H，s)；M／z(+)354(MH+)，352。實施例64-(3，4-二氯芐基)-2-羥甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物37)將4-(3，4-二氯芐基)-2-甲?；秽3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．2g)溶解在甲醇(10ml)和THF(10ml)中并冷卻至0℃。加入硼氫化鈉(26mg)，將反應攪拌2小時。該混合物用2MHCl酸化，部分蒸發(fā)，用乙酸乙酯提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到白色固體(0．23g)，NMRd(CDCl3)3．8(3H，s)，4．65(2H，d)，5．6(2H，s)，6．2(1H，s)，6．85(1H，s)，7．0(1H，dd)，7．2(1H，d)，7．35(1H，d)；M／z(+)340(MH+)，332，278。實施例72-羧基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物39)將4-(3，4-二氯芐基)-2-甲?；秽3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．2g)溶解在叔丁醇(20ml)和2-甲基丁-2-烯(10ml)中。向其中滴加亞氯酸鈉(0．46g)和正磷酸二氫鈉(0．62g)的水(10ml)溶液并且在室溫下將該反應攪拌18小時。將混合物部分蒸發(fā)且在乙酸乙酯／水之間分配。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到白色固體(0．19g，91％)NMRd(DMSO)3．75(3H，s)，5．65(2H，s)，7．0(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．5(1H，d)，7．55(2H，m)；M／z(+)370(MH+)，368。實施例82-氰基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物41)將4-(3，4-二氯芐基)-2-甲?；秽3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．7g)溶解在吡啶(7ml)中。向其中加入氯化羥銨(0．23g)并在90℃下將該反應加熱30分鐘。滴加乙酸酐(2．5ml)，將反應繼續(xù)在90℃下加熱2小時。通過傾入冰／水中終止該反應，過濾出所得沉淀且真空干燥，得到淺褐色固體(0．69g，100％)，NMRd(CDCl3)3．85(3H，s)，5．6(2H，s)，6．85(2H，d)，6．95(1H，dd)，7．2(1H，d)，7．4(1H，d)；M／z(-)349(M-H+)，347，189。實施例92-甲酰胺基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物43)將2-氰基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．35g)溶解在THF(5ml)和甲醇(2．5ml)中。向其中加入2MNaOH溶液(5ml)，將反應攪拌18小時。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解在水中，用乙酸酸化。過濾所得沉淀并真空干燥，得到白色固體(333mg，99％)，NMRd(DMSO)5．75(2H，s)，6．65(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．25(1H，d)，7．5(2H，d)；M／z(+)355(MH+)，353。實施例104-(3，4-二氯芐基)-2-(5’-四唑基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物44)將2-氰基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．35g)溶解在DMF(7．5ml)中。向其中加入氯化銨(64mg)和疊氮化鈉(78mg)，將反應在100℃下加熱4小時。加入水并用2MHCl溶液酸化該混合物。過濾所得沉淀，真空干燥，得到淺褐色固體(0．35g，89％)，NMRd(DMSO)3．8(3H，s)，5．7(2H，s)，7．05(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．5(1H，d)，7．6(2H，m)，7．9(1H，s)；M／z(-)392(M-H+)，390，334。實施例114-(3，4-二氯芐基)-二甲基氨基甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(表1中的化合物46)將4-(3，4-二氯芐基)-2-甲?；秽3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(0．25g)溶解在甲醇(5ml)和THF(10ml)中，向其中加入乙酸鈉(116mg)和一份MgSO4，隨后加入二甲基胺溶液(2M的甲醇溶液，0．53ml)。1小時后，再加入2．5ml二甲基胺溶液，30分鐘后加入氰基硼氫化鈉(0．45g)。將反應攪拌18小時，隨后加入1M碳酸鉀溶液終止該反應，用乙酸乙酯提取。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，真空濃縮。殘余物通過柱層析、用乙酸乙酯增高至10％甲醇乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到黃色油狀物(0．15g，55％)，NMRd(CDCl3)2．3(6H，s)，3．5(2H，s)，3．8(3H，s)，5．55(2H，s)，6．15(1H，s)，6．85(1H，s)，6．95(2H，dd)，7．2(1H，d)，7．35(1H，d)。M／z(+)383(MH+)，381，338，336。實施例124-(3，4-二氯芐基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物8)將氫氧化鈉(3N，1．3ml)加入到4-(3，4-二氯芐基)-噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸乙酯(0．137g)在THF(2．5ml)和甲醇(2．5ml)中的攪拌溶液內。室溫下繼續(xù)攪拌16小時，真空濃縮，將殘余物溶解在水中。滴加乙酸，使產物沉淀，該產物為白色固體，過濾并干燥(0．107g，85％)，NMRd(DMSO)5．79(2H，s)，7．05(1H，m)，7．28(2H，m)，7．42(1H，s)，7．60(2H，m)；M／z(-)326(M+)，324，282，280。實施例13用適當?shù)腘-芐基吡咯羧酸酯重復實施例12所述的方法。由此得到下列化合物。實施例13a4-(3，4-二氯芐基)噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸(表1中的化合物2)收率84％，M／z(-)326(M+)，324，280。實施例13b4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物4)收率78％，M／z(-)310(M+)，308。實施例13c4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[2，3-b]吡咯-5-甲酸(表1中的化合物6)收率55％，M／z(-)310(M+)，308。實施例13d4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表1中的化合物18)收率19％，M／z(-)323(M+)，321。實施例13e4-(3，4-二氯芐基)-2-溴噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表1中的化合物14)收率70％，NMRd(DMSO)5．72(2H，s)，7．00(1H，m)，7．20(1H，s)，7．42(1H，s)，7．60(2H，m)，12．71(1H，bs)；M／z(-)404(M-H+)，360，137。元素分析forC14H8BrCl2NO2S實測值C，41．6％；H，2．1％；N，3．2％；理論值C，41．5％；H，2．0％；N，3．46％。實施例13f4-(3，4-二氯芐基)-2-(噻吩-2-基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表1中的化合物12)收率91％，M／z(-)406(M-H+)，362。實施例13g2-(3-氨基苯基)-4-(3，4-二氯芐基)噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物13)收率76％，M／z(-)415(M-H+)，371。實施例13h4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物25)收率88％，M／z(-)322(M-H+)，280。實施例13i4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-1，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物27)收率89％，NMRd(DMSO)3．7(3H，s)，5．6(2H，s)，6．75(1H，s)，7．1(1H，d)，7．35(1H，m)，7．5(1H，d)，7．7(1H，s)；M／z(-)322(M-H+)。實施例13j4-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-3，4-二氫吡咯并[2，3-d]咪唑-5-甲酸(表1中的化合物29)收率28％，M／z(-)322(M-H+)。實施例13k4-(3，4-二氯芐基)-4H-吡咯并[2，3-d][1，3]噻唑-5-甲酸(表1中的化合物31)收率70％，NMRd(DMSO)5．6(2H，s)，7．05(1H，m)，7．2(1H，s)，7．4(1H，m)，7．5(1H，d)，9．1(1H，s)；M／z(-)325(M-H+)。實施例13l4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物34)收率38％，NMRd(DMSO)2．45(3H，s)，5．65(2H，s)，6．95(1H，s)，7．00(2H，m)，7．38(1H，d)，7．50(1H，d)；M／z(-)340(M+)，338。實施例13m4-(3，4-二氟芐基)-2-甲基噻吩并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物35)收率64％，NMRd(DMSO)2．45(3H，s)，5．65(2H，s)，6．90(1H，m)，6．95(1H，s)，7．16(1H，s)，7．19(1H，m)，7．32(1H，dt)；M／z(-)306(M-H+)。實施例13n4-(3，4-二氯芐基)-2-羥甲基呋喃并[3，2-b]咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物38)收率32％，NMRd(DMSO)4．4(2H，s)，5．65(2H，s)，6．55(1H，s)，6．8(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．4(1H，d)，7．55(1H，d)。M／z(+)342(MH+)，340，322。實施例13o4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-2，5-二甲酸(表Ⅰ中的化合物40)收率72％，NMRd(DMSO)5．65(2H，s)，6．9(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．5(3H，m)；M／z(+)354(MH+)，159，141。實施例13p4-(3，4-二氯芐基)-2-(5’-四唑基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物45)收率83％，NMRd(DMSO)5．7(2H，s)，6．95(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．5(2H，m)，7．55(1H，d)；M／z(+)380(MH+)，378。實施例13q4-(3，4-二氯芐基)-2-二甲基氨基甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物47)收率52％，NMRd(DMSO)2．15(6H，s)，3．5(2H，s)，5．6(2H，s)，6．6(1H，s)，6．8(1H，s)，7．1(1H，dd)，7．4(1H，d)，7．6(1H，d)；M／z(-)367(M-H+)，365，321。實施例13r4-(3，4-二氯芐基)-4H-吡咯并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物50)收率68％，NMRd(DMSO)5．75(2H，s)，7．1(1H，dd)，7．3(1H，s)，7．48(1H，d)，7．6(1H，d)，8．8(1H，s)；M／z(-)325(M-H+)。實施例13s4-(3，4-二氯芐基)-2-甲基-4H-噻吩并[3，2-d][1，3]噻唑-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物51)收率79％，NMRd(DMSO)2．64(3H，s)，5．7(2H，s)，7．08(1H，dd)，7．15(1H，s)，7．45(1H，d)，7．6(1H，d)；M／z(-)339(M-H+)。實施例13t4-(3，4-二氟芐基)吡咯并[2，3-b][1，3]噻唑-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物53)收率70％，NMRd(DMSO)5．8(2H，s)，6．95(1H，m)，7．3(3H，m)，9．1(1H，s)；M／z(-)293(M-H+)。實施例13u4-(4-氯-3-氟芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物56)收率77％，NMRd(DMSO)2．35(3H，s)，5．6(2H，s)，6．4(1H，s)，6．75(1H，s)，6．9(1H，d)，7．15(1H，d)，7．5(1H，t)；M／z(-)306(M-H+)。實施例13v4-(3-氯-4-氟芐基)-2-甲基呋喃并[3，2-d]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物57)收率71％，NMRd(DMSO)2．35(3H，s)，5．6(2H，s)，6．4(1H，s)，6．75(1H，s)，7．1(1H，m)，7．3(2H，m)；M／z(-)306(M-H+)。實施例13w4-(3，4-二氯芐基)-2-甲氧基呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物22)收率68％，NMRd(DMSO)3．9(3H，s)，5．6(3H，s)，5．8(1H，s)，6．75(1H，s)，7．05(1H，d)，7．4(1H，s)，7．6(1H，d)；M／z(-)338(M-H+)。實施例144-(3，4-二氯苯磺?；?呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物20)將4-(3，4-二氯苯磺?；?呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸甲酯(1．15g)和碘化鋰(4．Og)溶解在吡啶(50ml)中且加熱回流5小時，冷卻，隨后真空干燥。殘余物在2NHCl和乙醚之間分配。將合并的有機提取液干燥(MgSO4)，濃縮，殘余物用乙醚研制，生成白色結晶固體的產物，過濾和干燥(0．58g，52％)，NMRd(DMSO)7．02(1H，d)，7．27(1H，s)，7．88(2H，s)，8．03(1H，d)，8．22(1H，s)；M／z(-)360(M+)，314，252，250，227，225，209，170。AnalysisforC13H7Cl2NO5SfoundC，43．2％；H，2．1％；N，3．8％；theoryC，41．4％；H，2．0％；N，3．9％。實施例15采用適當?shù)聂人峒柞ブ貜蛯嵤├?4所述的方法。由此得到下列化合物。實施例15a4-(3，4-二氯苯磺酰基)噻吩并[2，3-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物16)收率11％，NMRd(DMSO)7．12(1H，d)，7．38(1H，s)，7．42(1H，d)，7．80(1H，dd)，7．90(1H，d)，8．20(1H，s)；M／z(+)378(M+)，376，196，166，131，119，113。實施例15b2-氰基-4-(3，4-二氯芐基)呋喃并[3，2-b]吡咯-5-甲酸(表Ⅰ中的化合物42)收率81％，NMRd(DMSO)5．65(2H，s)，6．9(1H，s)，7．05(1H，dd)，7．45(1H，d)，7．6(1H，d)，7．9(1H，s)。M／z(-)335(M-H+)，333，291，289，262。實施例16對hMCP-1拮抗劑的生物試驗a)hMCP-1受體結合試驗ⅰ)hMCP-1受體的克隆和表達通過PCR、由THP-1細胞RNA、采用基于公開的MCP-1受體序列(Charo等人，1994，《美國科學院院報》91，2752)的適當寡核苷酸引物克隆得到MCP-1受體B(CCR2B)cDNA。所得PCR產物被克隆在載體PCR-IITM中(InVitrogen，SanDiego，CA．)。將無差錯CCR2BcDNA進一步作為HindⅢ-NotⅠ片段克隆在真核表達載體pCDNA3(InVitrogen)中以分別生成pCDNA3／CC-CKR2A和pCDNA3／CCR2B。用磷酸鈣沉淀法將線性化pCDNA3／CCR2BDNA轉染至CHO-K1細胞中(Wigler等人，1979，《細胞學》16，777)。細胞被轉染后24小時，通過加入1mg／ml的硫酸遺傳霉素(G418，GibcoBRL)選擇出被轉染細胞。按照早已公開的方法(Needham等人，1995，Prot．Express．Purific_6，134)制備RNA和Northernblotting．CHO-K1克隆7(CHO_CCR2B)已被鑒別為最高MCP-1受體B表達子。ⅱ)膜片段的制備令CHO-CCR2B細胞在DMEM中生長，DMEM中補加有10％胎牛血清、2mM谷酰胺、1x非必需氨基酸、1x次黃嘌呤和胸腺嘧啶核甙添加物和青霉素-鏈霉素(50μg鏈霉素／ml，GibcoBRL)。利用業(yè)已公開的細胞溶解／差速離心法來制備膜片段(Siciliano等人，1990，《生物化學雜志》265，19658)。通過BCA蛋白試驗(Pierce，Rockford，llinois)按照制造商的說明來確定蛋白濃度。ⅲ)分析試驗用Bolton&amp;Hunter接合法(Bolton等人，1973，《生物化學雜志》133，529；AmershamInternationalplc)來制備125IMCP-1。利用Ernst等人，1994，《免疫學雜志》152，3541的方法進行平衡結合實驗。簡單地說，將不同量的125I標記MCP-1加入10mg存在于100ml結合緩沖液中的純化CHO-CCR2B細胞膜中。室溫下溫育1小時后，過濾結合反應的混合物并用平板洗滌器(PackardHarvesterFiltermateTM196)洗滌5次。向各孔內加入閃爍計數(shù)液(25μl，MicroscintTM-20，對含水樣本來說是高效的液態(tài)閃爍計數(shù)合劑)并且用平板密封器覆蓋平板和計數(shù)(PackardTopCountTM)。采用100pM125I-標記MCP-1在不同濃度的未標記MCP-1的存在下進行上述冷式競爭試驗。通過反應中過量200倍摩爾的未標記MCP-1的內含物來測定非特異性結合作用。利用得自于CHO-CCR2B細胞的膜片段進行的配體結合試驗顯示，CCR2B是以0．2pmoles／mg膜蛋白的濃度存在，同時選擇性和高親和性地與MCP-1結合(IC50=110pM，Kd=120pM)。與這些膜的結合完全是可逆的，在室溫下45分鐘后達到平衡，當MCP-1的使用濃度為100pM至500pM時，MCP-1結合作用和CHO-CCR2B細胞膜濃度之間存在線性關系。用8個點劑量-反應曲線一式二份測試溶解在DMSO(5μl)中的試驗化合物在一定濃度范圍(0．1-200μM)與100pM標記MCP-1的競爭作用，計算出IC50濃度。本發(fā)明的試驗化合物在此處所述的hMCP-1受體結合試驗中具有等于或小于50μM的IC50。例如實施例13g的化合物的IC50為8．3μM。b)THP-1細胞中MCP-1介導的鈣流出令人體單核細胞系THP-1在合成細胞培養(yǎng)基RPMI1640中生長，該培養(yǎng)基中補加有10％胎牛血清、2mM谷酰胺和青霉素-鏈霉素(50μg鏈霉素／ml，GibcoBRL)。將THP-1細胞在HBSS(無Ca2+和Mg2+)+1mg／mlBSA中洗滌且重新懸浮在相同的緩沖液中，密度為3×106細胞／ml。隨后在37℃下將細胞用1mMFURA-2／AM荷載30分鐘，在HBSS中洗滌2次，重新懸浮達到1x106細胞／ml。THP-1細胞懸浮液(0．9ml)加入到5ml一次性比色杯中，該比色杯內含有磁攪拌棒和2．1ml預熱(37℃)的含有1mg／mlBSA，1mMMgCl2和2mMCaCl2的HBSS。將比色杯置于熒光分光光度計(PerkinElmer，Norwalk，CT)中并在攪拌和37℃下預熱4分鐘。記錄70秒內的熒光，10秒后通過向比色杯中加入hMCP-1刺激細胞。測定[Ca2+]i分別在340nm和380nm的激發(fā)光譜，隨后測定在510nm下的熒光發(fā)射強度。計算出在340nm和380nm下激發(fā)的熒光激發(fā)強度的比例(R)，按照下列公式給出和確定胞質[Ca2+][Ca2+]i=Kd(R-Rmin)(Sf2／Sb2)(Rmax-R)其中FURA-Ca2+在37℃下復合的Kd是在224nm測定。Rmax是在加入10mM伊屋諾霉素后測定的最大熒光比例，Rmin是通過隨后加入含有5mMEGTA的無Ca2+溶液測定的最小比例，和Sf2／Sb2是在380nm激發(fā)時分別測定的Rmin和Rmax的熒光值比例。用hMCP-1刺激THP-1細胞可以誘發(fā)[Ca2+]i以特異和劑量依賴的方式迅速、瞬時增高。劑量反應曲線表明EC50約為2nm。測試溶解在DMSO(10μl)中的試驗化合物對鈣釋放的抑制作用，這是通過將它們加入到細胞懸浮液中，10秒后加入配體并且測定[Ca2+]i瞬時提高中的降低。另外還檢測出試驗化合物通過替代加入的hMCP-1缺乏激動作用。c)hMCP-1介導的趨化性和RANTES試驗體外趨化試驗采用人體單核細胞系THP-1或得自于新鮮人血的外周血混合的單核細胞，外周血混合單核細胞是通過紅細胞沉降法隨后在9．6％(w／v)甲泛影酸鈉和5．6％(w／v)多糖，密度1．077g／ml(LymphoprepTMNycomed)中通過密度梯度離心法來純化。通過直接用計數(shù)器對透過的細胞計數(shù)，或通過顯色殘存試驗(colourimetricviabilityassay)測定線粒體呼吸鏈裂解的四唑鎓鹽間接計數(shù)，來測定透過聚碳酸酯膜的細胞遷移作用(ScudieroD．A．等人，1988，《癌癥研究》48，4827-4833)。將化學引誘物加入96孔微量滴定平板中，該平板形成下部孔的趨化室，按照制造商的說明用無PVP的5μm孔徑聚碳酸酯粘著構架濾膜(NeuroProbeMB系列，CabinJohn，MD20818，USA)固定。將化學引誘物適當?shù)叵♂屧诤铣杉毎囵B(yǎng)基RPMI1640(Gibco)中或補加2mM谷酰胺和0．5％BSA的該培養(yǎng)基中，或采用另外含有Ca2+和Mg2+、無酚紅(Gibco)加0．1％BSA的HBSS的該培養(yǎng)基中。將各稀釋液在真空下脫氣30分鐘和置于(400μl)趨化室的下部孔中，令THP-1細胞(5×105在100μlRPMI1640+0．5％BSA)在趨化室上部的各孔內溫育。為了抑制趨化，化學引誘物應恒定保持在預先對各個趨化因子測出的次最大濃度(對于MCP-1為1nM，對于RANTES是2nM)，并且與不同濃度的溶于DMSO(最終的DMSO濃度＜0．05％v／v)中的試驗化合物一起加入到下部孔中。將趨化室在37℃和5％CO2下溫育2小時。從上部孔除去培養(yǎng)基，隨后用200μl生理鹽水沖洗，此后打開趨化室，吹干膜表面，在600g下將96孔平板離心5分鐘，收集細胞。抽吸上清液(150μl)并且向孔內加入10μl細胞增殖試劑，WST-1，{4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑并]-1，3-苯基二磺酸鹽}加電子耦合劑(BoehringerMannheim，Cat．no．1644807)。將平板在37℃下溫育3小時，在450nm下在微量滴定平板讀取器上讀取可溶性甲替產物的吸光度。將數(shù)據(jù)輸入電子制表軟件，修正化學引誘物不存在時的任何隨機遷移，計算出平均吸光度值、平均標準誤差和顯著性試驗。hMCP-1誘導的濃度依賴性細胞遷移具有特征雙相性反應，最大值為0．5-1．0nm。在上述試驗的其他形式中，可以采用熒光標記細胞，以便有助于終點檢測。在這種情況中，所用THP-1細胞通過在5mMCalceinAM(甘氨酸，N，N’-[[3’，6’-雙(乙酰氧基)-3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]氧雜蒽]-2’，7’-二基]雙(亞甲基)雙[N-[2-[(乙酰氧基)甲氧基]2-氧代乙基]]-雙[(乙酰氧基)甲基]酯；分子探針)存在下、在無光條件下溫育45分鐘來熒光標記。通過離心收集細胞和再懸浮在含有Ca2+、Mg2+和0．1％BSA的HBSS(無酚紅)中。將50ml(2×105細胞)的細胞懸浮液置于位于各孔上方的濾膜上，將上述單元在37℃和5％CO2下溫育2小時。溫育結束時，用磷酸鹽緩沖的鹽水洗去位于濾膜上表面的細胞，取下平板上的濾膜，在波長485nm激發(fā)光，在538nm的發(fā)射光(fmax，MolecularDevices)下通過讀取熒光來確定吸附在濾膜下側或細胞孔內的細胞的數(shù)量。將數(shù)據(jù)輸入電子制表軟件，修正化學引誘物不存在時的任何隨機遷移，計算出平均吸光度值、平均標準誤差、百分抑制率、試驗化合物的IC50和顯著性試驗。例如，利用這種方法，表Ⅰ中的化合物20在hMCP-1趨化試驗中的IC50是1．66μM，和表1中的化合物8在RANTES試驗中表現(xiàn)出2．66μM的IC50。在本發(fā)明的試驗化合物的有效劑量下沒有觀察到生理不可接受的毒性。實施例17藥物組合物本實施例舉例說明但不限制用于人體治療或預防用途的本發(fā)明有代表性的藥物劑型(活性組分稱作“化合物Ⅹ”)實施例A(a)<tablesid="table1"num="001"><table>片劑Ⅰmg／片化合物Ⅹ100乳糖歐洲藥典182．75交聯(lián)羧甲基纖維素(Croscarmellose)鈉12．0玉米淀粉糊(5％w／v糊)2．25硬脂酸鎂3．0</table></tables>(b)<tablesid="table2"num="002"><table>片劑Ⅱmg／片化合物Ⅹ50乳糖歐洲藥典223．75交聯(lián)羧甲基纖維素鈉6．0玉米淀粉糊15．0聚乙烯吡咯烷酮(5％w／v糊)2．25硬脂酸鎂3．0</table></tables>(c)<tablesid="table3"num="003"><table>片劑Ⅲmg／片化合物Ⅹ1．0乳糖歐洲藥典93．25交聯(lián)羧甲基纖維素鈉4．0玉米淀粉糊(5％w／v糊)0．75硬脂酸鎂1．0</table></tables>(d)<tablesid="table4"num="004"><table>膠囊mg／囊化合物Ⅹ10乳糖歐洲藥典488．5鎂1．5</table></tables>(e)<tablesid="table5"num="005"><table>注射劑Ⅰ(50mg／ml)化合物Ⅹ5．0％w／v1M氫氧化鈉溶液15．O％v／vO．1M鹽酸調至pH7．6聚乙二醇4004．5％w／v注射用水至100％</table></tables>(f)<tablesid="table6"num="006"><table>注射劑Ⅱ(10mg／ml)化合物Ⅹ1．0％w／v磷酸鈉BP3．6％W／v0．1M氫氧化鈉溶液15．0％v／v注射用水至100％</table></tables>(g)<tablesid="table7"num="007"><table>注射劑Ⅲ(1mg／ml，緩沖至pH6)化合物ⅩO．1％w／v磷酸鈉BP2．26％W／v檸檬酸Q．38％w／v聚乙二醇4003．5％w／v注射用水至100％</table></tables>(h)<tablesid="table8"num="008"><table>氣溶膠Ⅰmg／ml化合物Ⅹ10．0脫水山梨糖醇三油酸酯13．5三氯氟甲烷910．0二氯二氟甲烷490．0</table></tables>(i)<tablesid="table9"num="009"><table>氣溶膠Ⅱmg／ml化合物Ⅹ0．2脫水山梨糖醇三油酸酯0．27三氯氟甲烷70．0二氯二氟甲烷280．0二氯四氟乙烷1094．0</table></tables>(j)<tablesid="table10"num="010"><table>氣溶膠Ⅲmg／ml化合物ⅹ2．5脫水山梨糖醇三油酸酯3．38三氯氟甲烷67．5二氯二氟甲烷1086．0二氯四氟乙烷191．6</table></tables>(k)<tablesid="table11"num="011"><table>氣溶膠Ⅳmg／ml化合物Ⅹ2．5大豆卵磷脂2．7三氯氟甲烷67．5二氯二氟甲烷1086．0二氯四氟甲烷191．6</table></tables>(l)<tablesid="table12"num="012"><table>軟膏Ⅰml化合物Ⅹ40mg乙醇300μl水300μl1-十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮50μl聚乙二醇至1ml</table></tables>注釋上述制劑中的化合物Ⅹ可以含有上述1-15舉例說明的化合物，例如實施例12-15的化合物。上述制劑可以通過藥學領域熟知的常規(guī)方法得到。片劑(a)-(c)可以通過常規(guī)方式腸溶包衣，例如用鄰苯二甲酸乙酸纖維素的包衣。氣溶膠制劑(h)-(k)可以與標準、劑量給藥的氣溶膠分配器結合使用，并且助懸劑脫水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂可以用其它助懸劑如脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇倍半油酸酯、吐溫80、聚甘油油酸酯或油酸來代替。權利要求1．含有式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受鹽或其酰胺的酯以及藥學上可接受載體的藥物組合物所述化合物是單核細胞趨化蛋白-1的抑制劑和其中A和B一起構成含有至少一個雜原子的任選取代的5元芳香環(huán)；X是CH2或SO2；R1是任選取代芳基或雜芳基環(huán)；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR4、-SO2NHR5、四唑-5-基、SO3H或式(Ⅵ)的基團其中R4選自氫、烷基、芳基、氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基，或R4是基團-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各個R10分別選自氫或烷基；R5是烷基、任選取代芳基，例如任選取代苯基或任選取代雜芳基如5或6元雜芳基，或基團COR6，其中R6是氫、烷基、芳基、雜芳基或鹵烷基；R7和R8分別選自氫或烷基，特別是C1-4烷基；和R3是氫、官能團、任選取代烷基、任選取代鏈烯基、任選取代炔基、任選取代芳基、任選取代雜環(huán)基、任選取代烷氧基、任選取代芳烷基、任選取代芳烷基氧基、任選取代環(huán)烷基。2．根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中A和B與它們所連接的碳原子一起形成任一次級式的5元雜芳基環(huán)其中R13、R14和R15分別選自氫或取代基團。3．根據(jù)權利要求1或2所述的組合物，其中R1是鹵素取代的苯基或吡啶基。4．根據(jù)上述權利要求任一項所述的組合物，其中在式(Ⅰ)的化合物中，R2是羧基或其藥學上可接受的鹽或酯。5．根據(jù)上述權利要求任一項所述的組合物，其中R3是氫、C1-4烷基或三氟甲基。6．根據(jù)上述權利要求任一項所述的組合物，其中式(Ⅰ)的化合物是式(ⅠA)或(ⅠB)的化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺的酯，其中R1如權利要求1的定義，R26是氫或C1-4烷基，和在式(ⅠA)中(ⅰ)R24是硫和R25是CH；或(ⅱ)R24是硫和R25是氮；或(ⅲ)R24是氧和R25是CH；或(ⅳ)R24是NCH3和R25是CH；和在式(IB)中(ⅰ)R24’是CH和R25’是硫；或(ⅱ)R24’是CH和R25’是氧；或(ⅲ)R24’是氮和R25’是硫。7．根據(jù)權利要求6所述的組合物，其中式(ⅠA)的化合物是其中R1是鹵素取代苯基，和R26是氫或甲基，R24是硫和R25是CH或氮的化合物；或R24是氧，R25是CH，和R26是氫或甲基的化合物；或該化合物是其中R1是鹵代取代苯基，R25’是硫，R26是氫和R24’是CH或氮的式(ⅠB)化合物。8．定義如上的式(Ⅰ)化合物或其鹽、酯或酰胺，該化合物是單核細胞趨化蛋白-1的抑制劑；但滿足下列條件a)其中A-B形成上述次級式(ⅰ)或(ⅳ)的基團時，R1不是苯基、氨基苯基或硝基苯基；和b)其中A-B形成上述次級式(ⅲ)的基團時，R13是甲基和R15是氫，R14不是CHO；c)其中A-B形成上述次級式(ⅴ)的基團和X是SO2時，R1不是未取代苯基。9．根據(jù)權利要求8所述的化合物，其中式(Ⅰ)的化合物是如權利要求6定義的式(ⅠA)或(ⅠB)的化合物。10．一種用于制備權利要求8中定義的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括將式(Ⅶ)的化合物其中A、B和R3如式(Ⅰ)的有關定義和R27是氫或權利要求1定義的基團R2；與式(Ⅷ)的化合物反應R1-X-ZⅧ其中R1和X如式(Ⅰ)的有關定義和Z是離去基團；和此后如果希望或需要，將R27轉化為基團R2和／或轉化為不同于該基團的基團；和／或向A-B環(huán)引入或改變取代基。全文摘要本發(fā)明涉及含有式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受鹽或酰胺酯以及藥學上可接受載體的藥物組合物,該化合物是單核細胞趨化蛋白－1的抑制劑和其中A和B一起形成任選取代含有至少一個雜原子的5元芳香環(huán);X是CH文檔編號A61P1/00GK1291094SQ9980300公開日2001年4月11日申請日期1999年2月2日優(yōu)先權日1998年2月17日發(fā)明者A·J·巴克爾,J·G·克特勒,A·W·福爾申請人:阿斯特拉曾尼卡英國有限公司