專利名稱：：用于傷口愈合的基質(zhì)蛋白組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白作為治療或預(yù)防制劑的應(yīng)用。這些物質(zhì)具有傷口愈合，抗細(xì)菌和/或抗炎制劑的活性。本發(fā)明的背景釉基質(zhì)蛋白例如存在于釉基質(zhì)中的基質(zhì)蛋白眾所周知是作為釉質(zhì)的前體。釉質(zhì)蛋白和釉基質(zhì)衍生物以前曾在用于硬組織形成的專利(即釉質(zhì)形成，美國(guó)專利4，672，032(Slavkin))，或硬組織間的連接(EP-B-O337967和EP-B-O263，086)的專利中敘述。因此現(xiàn)有技術(shù)主要側(cè)重于硬組織的再生，而本申請(qǐng)卻涉及對(duì)軟組織傷口愈合的有益效應(yīng)和抗細(xì)菌和抗炎作用這些先前未曾預(yù)見(jiàn)到的發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明的描述本發(fā)明是基于如下發(fā)現(xiàn)，即釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白(術(shù)語(yǔ)“活性釉質(zhì)物質(zhì)”在下文中也被用于指代釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白)在提高和改善軟組織(即非礦化組織)的傷口愈合中是有利的制劑，所述組織例如含膠原或表皮的組織，包括皮膚和粘膜，肌肉、血液和淋巴管，神經(jīng)組織，腺體，腱，眼和軟骨。正如在本文中實(shí)驗(yàn)部分所證實(shí)的那樣，這種釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白在軟組織傷口的愈合或預(yù)防上顯示出特殊的功效。因此，本發(fā)明涉及一種活性釉質(zhì)物質(zhì)的制劑在制備一種藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，所述組合物ⅰ)用于傷口的愈合，ⅱ)改善傷口的愈合，和/或ⅲ)用于軟組織再生和/或修復(fù)。另一方面，本發(fā)明涉及一種改善傷口愈合或促進(jìn)軟組織再生和/或修復(fù)的方法，該方法包括給予有此需要的個(gè)體治療或預(yù)防有效量的活性釉質(zhì)物質(zhì)。另外，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有抗細(xì)菌和/或抗炎的性質(zhì)，可以用于治療軟和硬(即礦化)組織病癥。本發(fā)明的另一方面涉及活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑在制備預(yù)防和/或治療感染或炎癥的藥物組合物中的應(yīng)用。傷口愈合傷口和/或潰瘍經(jīng)常突出于皮膚或發(fā)生在粘膜表面或由于器官的梗死所致(“中風(fēng)”)。傷口可以源于軟組織的缺陷或損傷或潛在的病癥。實(shí)驗(yàn)條件下所產(chǎn)生的牙周傷口的再生先前已被本發(fā)明人闡述過(guò)，它們不屬于本發(fā)明的范疇。在本文中，術(shù)語(yǔ)“皮膚”是指包括人在內(nèi)的動(dòng)物身體最外層表面，它包含完整的或幾乎完整的皮膚以及受傷的皮膚。術(shù)語(yǔ)“粘膜”指動(dòng)物例如人的未損害的或損害的粘膜，它可以是口腔，頰，耳腔，鼻腔，肺，眼，胃腸，陰道，或直腸粘膜。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“傷口”指造成組織結(jié)構(gòu)正常完整性破壞的機(jī)體損傷。該術(shù)語(yǔ)也包括術(shù)語(yǔ)“瘡”，“損害”，“壞死”和“潰瘍”。一般來(lái)說(shuō)，術(shù)語(yǔ)“瘡”是涵蓋包括皮膚或粘膜表面幾乎所有損害的廣義術(shù)語(yǔ)，術(shù)語(yǔ)“潰瘍”則指器官或組織表面由于壞死組織脫落而導(dǎo)致的局部缺損或出現(xiàn)孔洞。損害一般與組織的缺損相關(guān)。壞死則是由于感染，受傷，炎癥或梗死而導(dǎo)致的組織死亡。本文中的術(shù)語(yǔ)“傷口”指任何傷口(見(jiàn)下文對(duì)傷口的分類)，并且指愈合過(guò)程中的任何一個(gè)特殊階段，包括愈合開始以前的階段甚或一個(gè)例如手術(shù)切口出現(xiàn)以前的階段(預(yù)防治療)。根據(jù)本發(fā)明可以被預(yù)防和/或治療的傷口的例子是，例如無(wú)菌傷口，挫傷傷口，切割傷口，撕裂傷口，非穿透?jìng)?即對(duì)皮膚沒(méi)有破壞但對(duì)下層結(jié)構(gòu)有傷害的傷口)，開放傷口，穿透?jìng)冢┛讉?，膿毒傷口，皮下傷口等。瘡的例子是褥瘡，潰瘍，鉻潰瘍，感冒瘡，褥瘡等。潰瘍的例子是，例如消化器官潰瘍，十二指腸潰瘍，胃潰瘍，痛風(fēng)潰瘍，糖尿病潰瘍，高血壓性局部缺血性潰瘍，郁積潰瘍，下腿部潰瘍(靜脈潰瘍)，舌下潰瘍，粘膜下潰瘍，癥狀性潰瘍，營(yíng)養(yǎng)性潰瘍，熱帶潰瘍，軟下疳等，例如由淋病所致(包括尿道炎，子宮頸內(nèi)膜炎和直腸炎)?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明成功治療的與傷口或瘡有關(guān)的癥狀是灼傷，炭疽，破傷風(fēng)，氣性壞疽，猩紅熱，丹毒，芒須瘡，毛囊炎，接觸性膿皰病，大皰性膿皰病等。在術(shù)語(yǔ)“傷口”和“潰瘍”以及“傷口”和“瘡”之間的使用上經(jīng)常有一定程度的重疊，而且這些術(shù)語(yǔ)經(jīng)常隨機(jī)使用。因此如上所述，在本文中術(shù)語(yǔ)“傷口”包含術(shù)語(yǔ)“潰瘍”，“損害”，“瘡”和“梗死”，這些術(shù)語(yǔ)的使用是無(wú)區(qū)別的，除非特殊指出。根據(jù)本發(fā)明可以治療的傷口的種類還包括ⅰ)普通傷口，例如，手術(shù)，外傷，感染，缺血、熱、化學(xué)和大皰的傷口；ⅱ)特別針對(duì)口腔的傷口，例如拔牙后的傷口，特別是針對(duì)囊腫和膿腫治療的牙周傷口，細(xì)菌性潰瘍和損害，病毒或自身免疫原性的，機(jī)械的，化學(xué)的，熱，感染性的和青苔狀的傷口；皰疹潰瘍，口腔潰瘍，急性壞死潰瘍性齒齦炎和灼傷性口腔綜合癥則是一些特例；ⅲ)皮膚的傷口例如贅生物，灼傷(例如化學(xué)灼傷，熱灼傷)，損害(細(xì)菌性，病毒性，自身免疫性)，叮咬和手術(shù)切口。對(duì)傷口分類的另一種方法是例如，ⅰ)由于手術(shù)切口而造成的小的組織喪失，輕微磨損和輕微叮咬，或例如ⅱ)嚴(yán)重的組織缺損。后者包括缺血性潰瘍，褥瘡，瘺，撕裂，嚴(yán)重叮咬，熱灼傷，和供體部位損傷(軟和硬組織)和梗死。活性釉質(zhì)物質(zhì)的愈合效應(yīng)是通過(guò)它對(duì)口腔傷口的作用發(fā)現(xiàn)的。這種傷口可以是身體損傷和與口腔手術(shù)有關(guān)的外傷，包括牙周手術(shù)，拔牙，牙髓處理，植牙，牙具的應(yīng)用，諸如此類。在本文的實(shí)驗(yàn)部分，一種活性釉質(zhì)物質(zhì)對(duì)此類傷口的有益效應(yīng)得到了證實(shí)。而且觀察到了軟組織的愈合效應(yīng)。在口腔中口瘡，外傷或皰疹相關(guān)傷口的愈合在使用了這種活性釉質(zhì)物質(zhì)后也得到改善。當(dāng)然外傷和皰疹相關(guān)傷口在口腔以外的身體其它部分也會(huì)出現(xiàn)。在本發(fā)明的其他方面，可以被預(yù)防和/或治療的傷口選自無(wú)菌傷口，梗死，挫傷，切割傷口，撕裂傷口，非穿透性傷口，開放傷口，穿透性傷口，穿孔傷口，刺破傷口，膿毒傷口和皮下傷口。與本發(fā)明有重要聯(lián)系的其它傷口包括缺血性潰瘍，褥瘡，瘺，嚴(yán)重叮咬，熱灼傷和供體部位處的傷口。缺血性潰瘍和褥瘡是通常狀況下愈合非常緩慢的傷口，在這種特殊情況下，一種改善的和更快速的愈合當(dāng)然對(duì)病人至關(guān)重要。而且涉及此類病人傷口愈合治療的成本也會(huì)由于愈合的改善和發(fā)生的快速而大大降低。供體部位處的傷口是指例如，將身體一個(gè)部分的硬組織轉(zhuǎn)移到身體的另一部分，例如與移植有關(guān)。由于此手術(shù)造成的傷口非常疼痛，因此改進(jìn)的愈合也非常有價(jià)值。術(shù)語(yǔ)“皮膚”在一個(gè)很廣泛的意義上使用，包括皮膚的表皮層，在皮膚的表層或多或少被損壞的情形下，也包括皮膚的真皮層。除了角膜層，皮膚的表皮層是指外皮(上皮)層，皮膚深層的結(jié)締組織層稱作真皮。由于皮膚是身體最暴露的部分，它特別易于受到各種損傷，例如破裂，切割，摩擦，灼傷，凍傷或由各種疾病造成的損傷。而且，大部分皮膚也很容易被偶然性損傷。然而，由于皮膚重要的屏障和生理作用，皮膚的完整對(duì)每個(gè)人的正常生存至關(guān)重要，任何裂口和撕裂都需要機(jī)體做出反應(yīng)以保護(hù)其繼續(xù)生存。除了皮膚的損害外，各種組織也會(huì)出現(xiàn)損傷(例如軟組織和硬組織)。包括粘膜和/或皮膚的軟組織的損傷與本發(fā)明極其相關(guān)。皮膚或粘膜傷口的愈合需要經(jīng)過(guò)一系列的階段才能導(dǎo)致皮膚或粘膜的修復(fù)或再生。近年來(lái)，再生和修復(fù)被區(qū)分成兩種形式的愈合。再生被認(rèn)為是一種失去的組織的結(jié)構(gòu)和功能得到完全更新的生物學(xué)過(guò)程。另一方面，修復(fù)則指受損傷的組織的連續(xù)性被新組織恢復(fù)，而不是對(duì)失去組織的結(jié)構(gòu)和功能的復(fù)制的生物學(xué)過(guò)程。傷口愈合的主要部分是通過(guò)修復(fù)，它意味著所形成的新組織在結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)上與原組織不同(疤痕組織)。在組織修復(fù)的最初階段，幾乎都要涉及的一個(gè)過(guò)程是在傷口處形成一個(gè)暫時(shí)的結(jié)締組織。這一過(guò)程是通過(guò)成纖維細(xì)胞形成的一種新的細(xì)胞外膠原基質(zhì)啟動(dòng)的。此后這種新的膠原基質(zhì)在愈合的最后階段作為連接組織的支持。對(duì)很多組織來(lái)說(shuō)愈合的最后階段是指包含連接組織的傷疤的形成。對(duì)于有再生性質(zhì)的組織例如皮膚和骨骼，最終的愈合包括原組織的再生。再生的組織也經(jīng)常有一些疤痕的性質(zhì)，例如，愈合的骨骼的增厚。在正常情況下機(jī)體會(huì)提供一種使受傷的皮膚或粘膜愈合的機(jī)制以恢復(fù)皮膚屏障和粘膜的完整性。這種對(duì)甚至很微小的割裂或傷口的修復(fù)可能要用從幾小時(shí)到幾天至幾周的時(shí)間。然而，對(duì)于潰瘍來(lái)說(shuō)，愈合將非常緩慢，可能持續(xù)一段很長(zhǎng)的時(shí)間，即數(shù)月或數(shù)年。傷口愈合的階段一般包括發(fā)炎(一般1-3天)，遷移(一般1-6天)，增殖(一般3-24天)和成熟(一般1-12個(gè)月)。愈合過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的和精確的物理過(guò)程，它涉及遷移，增殖，各種細(xì)胞類型的分化以及基質(zhì)組分的合成。愈合過(guò)程可以分成以下三個(gè)階段ⅰ)止血和炎癥當(dāng)血小板出現(xiàn)在循環(huán)系統(tǒng)以外并暴露于凝血酶和膠原時(shí)，它們將被激活并聚集。因此血小板通過(guò)聚集并形成確保凝血和防止細(xì)菌侵入組織的暫時(shí)性血栓來(lái)啟動(dòng)修復(fù)的過(guò)程。被激活的血小板啟動(dòng)凝結(jié)系統(tǒng)并釋放生長(zhǎng)因子，例如血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，表皮生長(zhǎng)因子(EGFs)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGFs)等。最先進(jìn)入傷口區(qū)的是中性白細(xì)胞，緊接著是被巨噬細(xì)胞激活的單核細(xì)胞。中性白細(xì)胞的作用體現(xiàn)在清潔傷口或阻止傷口被感染性細(xì)菌感染和通過(guò)除去死細(xì)胞和血小板來(lái)改善傷口的愈合。如果傷口不出現(xiàn)細(xì)菌感染，中性白細(xì)胞的浸潤(rùn)將在大約最初48小時(shí)終止。多余的中性白細(xì)胞被循環(huán)系統(tǒng)中血液攜帶的單核細(xì)胞所募集的組織巨噬細(xì)胞所吞噬。巨噬細(xì)胞被確信對(duì)有效的傷口愈合是必要的，這表現(xiàn)在它們也負(fù)責(zé)對(duì)致病性生物體進(jìn)行吞噬和清除組織碎片。而且它們還釋放涉及愈合過(guò)程的后續(xù)階段的多種因子。巨噬細(xì)胞吸引成纖維細(xì)胞啟動(dòng)膠原的生成。ⅱ)肉芽組織形成和上皮重新合成受傷后48小時(shí)，成纖維細(xì)胞開始增殖并從傷口邊緣的連接組織遷移到傷口處。成纖維細(xì)胞生成膠原和粘多糖，傷口處存在的低氧張力等刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。這些內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一個(gè)新的毛細(xì)網(wǎng)絡(luò)。膠原酶和纖溶酶原激活物是由角質(zhì)化細(xì)胞分泌的。如果傷口沒(méi)有被干擾并有充足的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)，角質(zhì)化細(xì)胞將遷移到傷口上。角質(zhì)化細(xì)胞被認(rèn)為僅僅遷移到活組織上，因此，角質(zhì)化細(xì)胞將遷移到傷口的死組織和之下的區(qū)域。傷口的面積由于收縮的原因進(jìn)一步縮小。ⅲ)真皮的重構(gòu)一旦上皮的重新合成完成緊接著就開始真皮的重構(gòu)。這一階段往往延續(xù)若干年以恢復(fù)傷口組織的強(qiáng)度。所有如上所述的愈合過(guò)程都要經(jīng)過(guò)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。愈合的速度受以下因素影響，傷口不被感染，個(gè)體的大致健康情況，外源物質(zhì)的出現(xiàn)等。一些致病性因素例如感染，浸泡，脫水，不良的健康狀況和營(yíng)養(yǎng)不良可以導(dǎo)致慢性潰瘍，例如缺血性潰瘍。在至少是表面的愈合出現(xiàn)以前，傷口仍有持續(xù)或重新感染的危險(xiǎn)。因此，傷口愈合愈快，這種危險(xiǎn)也會(huì)愈快清除。因此，任何可以影響傷口愈合速度或?qū)谟嫌幸娴牟襟E都具有很高的價(jià)值。而且由于在幾乎所有的組織修復(fù)以前都包含一個(gè)早期連接組織形成的階段，因此對(duì)這一階段和其后過(guò)程的刺激也被認(rèn)為可以改善組織愈合。在本文中術(shù)語(yǔ)“臨床愈合”被用來(lái)指肉眼觀察不到的組織中斷并且僅有離散的炎癥跡象例如輕微紅腫或不連續(xù)的腫脹組織存在的情況。而且當(dāng)器官放松或不被接觸時(shí)無(wú)疼痛感覺(jué)。如上所述，本發(fā)明涉及釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白作為傷口愈合制劑的應(yīng)用，即可以加速，刺激或促進(jìn)皮膚或粘膜傷口愈合的制劑。相應(yīng)的，其作為組織再生和/或修復(fù)制劑的應(yīng)用也非常重要。而且，由于其傷口愈合的效應(yīng)，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白也具有止痛的作用。傳統(tǒng)上，干燥的或濕到干燥的敷料被廣泛應(yīng)用于傷口的保護(hù)。漸漸的它們被在潮濕環(huán)境下使用封閉的繃帶所代替。為了成功的修復(fù)或取代受傷的機(jī)體部分，傷口愈合，纖維化和微生物的侵入之間必須得到平衡。許多防止感染的手段有損傷口愈合。延遲的傷口愈合或炎癥能加速纖維化。而且，盡管以前曾經(jīng)認(rèn)為生長(zhǎng)因子例如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)，血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，包含酸性成纖維生長(zhǎng)因子(α-FGF)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(β-FGF)在內(nèi)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1和IGF-2)是傷口愈合過(guò)程中的傳導(dǎo)因素，經(jīng)常被認(rèn)為是傷口愈合促進(jìn)劑；但是它們實(shí)際上是促進(jìn)纖維化，后者反過(guò)來(lái)則損害成功的愈合。盡管加速的愈合對(duì)減輕感染的危險(xiǎn)提供了最大保證，但加速正常的傷口愈合的過(guò)程的治療性嘗試卻僅獲得了相對(duì)很少的成功。這可能是由于修復(fù)進(jìn)程涉及一系列如上所述的相關(guān)因子的介入。為此，本發(fā)明人觀察到在各種成成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中(牙周膜，魚或鳥衍生的胚胎成纖維細(xì)胞，皮膚成纖維細(xì)胞)，通過(guò)例如ELISA方法對(duì)取自培養(yǎng)物培養(yǎng)基中的樣品進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EMDOGAIN刺激過(guò)的細(xì)胞所產(chǎn)生的TGFβ1的量比未經(jīng)刺激細(xì)胞增加2倍(參閱下面的實(shí)施例1)。這種增加在培養(yǎng)24小時(shí)后出現(xiàn)，而大量的增加出現(xiàn)在隨后幾天(第2和3天)。第2天以后使用EMDOGAIN刺激的細(xì)胞的增殖也明顯增加。在人上皮細(xì)胞中也觀察到同樣的但不是很顯著的TGFβ1量的增加。由于TGFβ1似乎在表皮損傷的上皮形成中起重要作用，這些發(fā)現(xiàn)支持了本發(fā)明的觀點(diǎn)。在口腔中使用敷料是很普通的。這些敷料是傳統(tǒng)的形式，例如在開放傷口中用于止血的外科手術(shù)墊料和Coe-Pack牙周塞制劑(CoeLaboratory，GC集團(tuán)，Chicago，USA)，拔牙時(shí)插入牙槽并在幾天后愈合開始時(shí)需要去除的在抗生素溶液中浸濕的棉球。用例如洗必太的抗菌劑進(jìn)行沖洗是在口腔手術(shù)后經(jīng)常使用的。有時(shí)也使用全身用或局部用抗生素。一般來(lái)說(shuō)在傷口治療的過(guò)程中需要考慮一些特殊的注意事項(xiàng)，例如無(wú)菌條件，污染問(wèn)題，正確使用繃帶/敷料等，這些治療/應(yīng)用過(guò)程一般來(lái)說(shuō)需要受過(guò)專門訓(xùn)練的護(hù)士及相關(guān)人員進(jìn)行。因此在用于傷口愈合的制劑需要在一天里反復(fù)更換時(shí)，傷口的處理經(jīng)常變?yōu)橐环N非常昂貴的操作。因此一種理想的在傷口愈合治療中降低成本的方法應(yīng)該是旨在減少(制劑)的使用頻率或改進(jìn)愈合的程序以縮短傷口愈合所需要的時(shí)間。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白具有傷口愈合的性質(zhì)。而且有顯示應(yīng)用釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白可以改善傷口的愈合。特別是本發(fā)明人觀察到在使用了釉基質(zhì)和/或釉基質(zhì)衍生物后，炎癥的階段得以縮短，熱，紅腫，水腫和疼痛等典型癥狀不大容易觀察到，新的組織形成的非?？?。所觀察到的傷口愈合的時(shí)間與未使用釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白相比(例如手術(shù)后)顯著的縮短。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的治療和/或預(yù)防活性可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人在體內(nèi)得到證實(shí)(參見(jiàn)本文中的實(shí)驗(yàn)部分)。然而，通過(guò)進(jìn)行一些相對(duì)比較簡(jiǎn)單的體外實(shí)驗(yàn)例如涉及細(xì)胞培養(yǎng)物的實(shí)驗(yàn)也可以顯示出釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的治療和/或預(yù)防活性。而且，有很多可以用于評(píng)價(jià)傷口愈合效果的參數(shù)。它們包括計(jì)算機(jī)輔助測(cè)面法(評(píng)價(jià)開放傷口愈合的速度)激光多普勒成象(評(píng)價(jià)傷口的灌注)張力測(cè)量術(shù)(測(cè)定傷口強(qiáng)度)組織學(xué)/細(xì)胞學(xué)方法(傷口組織和液體的微觀評(píng)價(jià))生化方法(HPLC/RIA)(評(píng)價(jià)組織愈合的各種藥物和生化成分)電子診斷(評(píng)價(jià)傷口組織和神經(jīng)支配的關(guān)系)閃爍掃描法(傷口組織的放射性核成象)與傷口/潰瘍治療相關(guān)的清創(chuàng)和傷口的清潔也特別重要。已確信傷口/潰瘍的清創(chuàng)和傷口的清潔是愈合過(guò)程的前提條件，而且當(dāng)使用傷口愈合制劑時(shí)，這些制劑必須作用于新鮮的或活組織而不是死組織或污染的組織。對(duì)壞死組織的清創(chuàng)可以至少采用四種不同的方法ⅰ)切割除創(chuàng)，ⅱ)機(jī)械除創(chuàng)，ⅲ)酶法除創(chuàng)，和ⅳ)自裂解除創(chuàng)。因此本發(fā)明也涉及除創(chuàng)方法與應(yīng)用釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白進(jìn)行傷口愈合和預(yù)防的聯(lián)合應(yīng)用。這種聯(lián)合治療涉及以下2個(gè)步驟，即ⅰ)除創(chuàng)方法，ⅱ)釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的應(yīng)用，這兩個(gè)步驟可以根據(jù)需要按照適當(dāng)?shù)捻樞蚨啻芜M(jìn)行。傷口已經(jīng)除創(chuàng)后，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白即可以直接應(yīng)用在傷口上或傷口內(nèi)，也可以以某種合適的藥物組合物例如一種包含釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的干或濕的清潔敷劑的形式使用。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白當(dāng)然也可以與傷口的清潔聯(lián)系起來(lái)使用。正如后面要討論的，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白可以直接使用或者它們也可以以一種合適的制備物或藥物組合物的形式使用。降低感染作用本發(fā)明另一個(gè)方面是釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白被用作具有抗微生物效應(yīng)的治療和預(yù)防制劑。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白顯示出降低感染的效應(yīng)。在本文中術(shù)語(yǔ)降低感染效應(yīng)是指當(dāng)使用釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白處理某個(gè)組織或個(gè)體時(shí)，它們對(duì)個(gè)體中受感染的組織所產(chǎn)生的治療和預(yù)防效應(yīng)。術(shù)語(yǔ)感染指微生物對(duì)機(jī)體組織的侵入和在其中繁殖或在組織上的聚集，其可以不表現(xiàn)出臨床癥狀，或者由于競(jìng)爭(zhēng)代謝，酶，毒素，胞內(nèi)復(fù)制或抗原-抗體應(yīng)答而導(dǎo)致局部細(xì)胞損傷。根據(jù)本發(fā)明，需預(yù)防和/或治療的感染可由微生物引起。與本發(fā)明有關(guān)的微生物包括細(xì)菌，病毒，酵母，霉菌，原生動(dòng)物和里克次氏體。在本發(fā)明中術(shù)語(yǔ)“抗細(xì)菌效應(yīng)”是指細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制或細(xì)菌被破壞。該術(shù)語(yǔ)不僅限定在某一種細(xì)菌而是包含幾乎任何細(xì)菌。然而，本發(fā)明側(cè)重于ⅰ)對(duì)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物引起疾病的致病細(xì)菌和/或ⅱ)一般情況下在哺乳動(dòng)物體內(nèi)正常存在但在特定條件下可以對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有害作用的細(xì)菌。相應(yīng)的本發(fā)明涉及使用一種有活性的釉基質(zhì)物質(zhì)用以治療和預(yù)防機(jī)體表面例如皮膚，粘膜表面或指甲或牙齒表面上的細(xì)菌生長(zhǎng)。對(duì)將要遇到的細(xì)菌情況的一般和特殊說(shuō)明釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白可以在存在抗菌劑或不存在抗菌劑時(shí)用來(lái)治療細(xì)菌引起的感染?？梢杂没钚杂再|(zhì)物質(zhì)處理的革蘭氏陰性菌可以是球菌例如奈瑟氏球菌屬(例如腦膜炎奈瑟氏球菌，淋病奈瑟氏球菌)，和桿菌，例如擬桿菌屬(例如脆壁擬桿菌)，博德特氏菌屬(例如百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌)，布魯氏菌(例如馬爾他布魯氏菌，流產(chǎn)布魯氏菌，豬布魯氏菌)，彎曲桿菌屬(例如空腸彎曲桿菌，大腸彎曲桿菌，胎兒彎曲桿菌)，檸檬酸桿菌，腸桿菌，埃希氏桿菌屬(例如大腸桿菌)，嗜血桿菌(例如流感嗜血桿菌，副流感嗜血桿菌)，克氏桿菌屬(例如肺炎克氏桿菌)，軍團(tuán)菌屬(例如肺炎軍團(tuán)菌)，巴斯德氏菌(例如耶爾森氏鼠疫桿菌，多殺巴斯德氏菌)，變形桿菌屬(例如奇異變形桿菌，尋常變形桿菌)，假單胞菌屬(例如銅綠假單胞菌，偽鼻疽假單胞菌，鼻疽假單胞菌)，沙門氏菌屬(例如腸沙門氏菌，嬰兒沙門氏菌，都柏林沙門氏菌，傷寒沙門氏菌，副傷寒沙門氏菌，薛氏沙門氏菌，鼠霍亂沙門氏菌，鼠傷寒沙門氏菌，或其它2500個(gè)血清型的任何一個(gè))，沙雷氏菌屬(例如粘質(zhì)沙雷氏菌，液化沙雷氏菌)，志賀氏菌屬(例如索氏志賀氏菌，弗氏志賀氏菌，痢疾志賀氏菌，鮑氏志賀氏菌)，弧菌(例如霍亂弧菌，艾羅特弧菌)，和耶爾森氏菌屬(例如小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌，假結(jié)核耶爾森氏菌，鼠疫耶爾森氏菌)。可以使用活性釉質(zhì)物質(zhì)治療的革蘭氏陽(yáng)性菌可以是球菌例如鏈球菌(例如肺炎鏈球菌，綠色鏈球菌，糞鏈球菌，化膿鏈球菌)，葡萄球菌屬(例如金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌，白葡萄球菌)，和桿菌，例如放線菌(例如以色列放線菌)，芽孢桿菌屬(例如蠟狀芽孢桿菌，枯草桿菌，炭疽芽孢桿菌)，梭菌屬(例如肉毒梭菌，破傷風(fēng)梭菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌，艱難梭菌)，棒狀桿菌(例如白喉棒桿菌)，李斯特氏菌屬和普羅威登斯菌屬。其它一些引起感染的細(xì)菌包括瘡皰丙酸桿菌和Pityosporonovale。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白也可以被用來(lái)治療由螺旋體例如疏螺旋體，鉤端螺旋體，密螺旋體或假單胞菌引起的感染。和釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白聯(lián)合使用的抗菌劑可以是具有抑制細(xì)胞壁合成活性的抗菌劑，例如β-內(nèi)酰胺和萬(wàn)古霉素，最好是青霉素例如巴比妥霉素，氨芐青霉素，羥氨芐青霉素，阿洛西林，氨芐青霉素，芐星青霉素G，羧芐青霉素，鄰氯青霉素，氨環(huán)己青霉素，雙氯青霉素，甲基青霉素，梅茲洛西林，乙氧萘(胺)青霉素，苯甲異唑青霉素，青霉素G，青霉素V，嗶哌青霉素，和羧噻吩青霉素；頭孢菌素，例如第一代的頭孢羥氨芐，氯頭孢菌素，頭孢氨芐，頭孢菌素，頭孢吡硫，和頭孢環(huán)己烯，第二代氯頭孢菌素，羥下四唑頭孢菌素，鹽頭孢菌素，水溶性頭孢菌素，頭孢甲氧霉素和頭孢噻甲羧肟，第三代氧哌羥苯唑頭孢菌素族抗菌素，氨中噻肟頭孢菌素，頭孢雙硫唑甲氧，去甲噻肟頭孢菌素，菌必治，和羥羧氧酰胺菌素；carbapenems例如亞胺培南；或monobactem例如氨曲南；其它通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成的抗菌藥物有，例如氯霉素；其它四環(huán)素特別是地美環(huán)素，強(qiáng)力霉素，甲烯土霉素，二甲胺四環(huán)素，和地霉素；氨基肽酶例如氨基丁卡霉素，慶大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龍霉素，奇放線菌素，鏈霉素，和托普霉素；多粘菌素例如粘菌素，colistimathate，和多粘菌素B，紅霉素和林肯霉素；具有抑制核苷酸合成活性的抗菌劑藥物特別是磺胺類藥物例如sulfacytine，磺胺嘧啶，磺胺異嘧唑，磺胺甲基異惡唑，磺胺甲基硫代二嗪，和磺胺嘧啶，甲氧芐氨嘧啶，喹啉衍生物，新生霉素，乙嘧啶，和利福平。作為本發(fā)明的一個(gè)特殊實(shí)施方案，感染可以出現(xiàn)在口腔并且感染可以由細(xì)菌引起?？梢员煌耆种苹虮坏挚沟目谇患?xì)菌。例子(不是條件)包括引起潰瘍的細(xì)菌，例如突變鏈球菌，乳酸桿菌。引起牙周疾病的細(xì)菌例如伴放線放線桿菌，牙齦卟啉單胞菌，中間普雷沃氏菌，微小消化鏈球菌，彎曲桿菌(梭桿菌，葡萄球菌)，B.forsythus。引起牙槽炎等的細(xì)菌例如葡萄球菌，放線菌和桿菌。引起尖周損害的細(xì)菌，例如螺旋體和所有上述細(xì)菌。抗炎效應(yīng)本發(fā)明涉及釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白作為具有抗炎效應(yīng)的治療和預(yù)防制劑的應(yīng)用。很多藥物被用來(lái)抑制炎癥的出現(xiàn)，包括腎上腺皮質(zhì)類固醇，包含所謂非類固醇抗炎藥物或稱NSAID在內(nèi)的一大組藥物，和例如免疫抑制劑藥物。腎上腺皮質(zhì)類固醇，特別是糖皮質(zhì)激素當(dāng)使用藥物學(xué)劑量時(shí)，具有強(qiáng)抗炎效應(yīng)。它們通過(guò)降低血管的滲透性進(jìn)而降低粒細(xì)胞的遷移以此特異性地抑制早期血管相的炎癥進(jìn)程。糖皮質(zhì)激素也干擾晚期炎癥和修復(fù)進(jìn)程，這一效應(yīng)是通過(guò)抑制間葉細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外包括蛋白多糖和膠原在內(nèi)大分子的生成來(lái)完成的。實(shí)驗(yàn)證明糖皮質(zhì)激素還抑制例如巨噬細(xì)胞的功能，體液抗體的產(chǎn)生，細(xì)胞免疫，或許還有溶菌酶的釋放。組織損害的嚴(yán)重程度依賴于機(jī)體的抗原抗體反應(yīng)和受損傷區(qū)域炎癥產(chǎn)物存在的程度。局部炎癥介體的積聚加速了這個(gè)進(jìn)程。在大多數(shù)情況下，這個(gè)進(jìn)程是緩慢的，它伴隨著組織的免疫滲透和包含炎癥細(xì)胞的粒狀組織的形成。在本文中術(shù)語(yǔ)“抗炎效應(yīng)”指對(duì)抗或抑制炎癥的發(fā)生。所治療的炎癥情況的種類的一般和特殊說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明所能治療的炎癥情況當(dāng)然可以是機(jī)體任何部分內(nèi)/上的或軟(或硬)組織內(nèi)出現(xiàn)的任何炎癥情況。作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，炎癥可以出現(xiàn)在口腔。關(guān)于口腔炎癥情況的例子是牙槽炎，唇炎，牙周壞死(外傷后)，牙破碎。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，炎癥的情況出現(xiàn)在骨髓捐獻(xiàn)者的相應(yīng)位置。在本發(fā)明的第三個(gè)實(shí)施方案中炎癥出現(xiàn)在關(guān)節(jié)腔。該種炎癥情況的例子是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和與其相關(guān)的癥狀。與抗炎相對(duì)應(yīng)的抗細(xì)菌作用與現(xiàn)今正在使用的多種抗菌劑相比，釉基質(zhì)蛋白可以促進(jìn)傷口愈合，因此反過(guò)來(lái)，它也就不會(huì)給慢性或長(zhǎng)期存在的炎癥進(jìn)程的發(fā)生留有余地。而且，正如所敘述的那樣，當(dāng)釉基質(zhì)衍生物作用于牙周感染后，適當(dāng)組織的重新組成由快速的傷口愈合并且沒(méi)有細(xì)菌或炎癥反應(yīng)而受益。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的應(yīng)用可以導(dǎo)致手術(shù)傷口的快速愈合，這可能是通過(guò)它們可以產(chǎn)生一個(gè)與細(xì)菌接觸的表面從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)并同時(shí)增強(qiáng)成纖維細(xì)胞的遷移和膠原的合成。如果炎癥階段縮短，其典型的跡象例如熱，紅腫，水腫和疼痛也不大容易觀察到。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白釉基質(zhì)是釉質(zhì)的前體，它可以從任何相關(guān)的自然原料獲得，例如正處于牙齒發(fā)育階段的哺乳動(dòng)物。一個(gè)合適的來(lái)源是從被屠宰動(dòng)物的正在發(fā)育的牙齒獲得，例如小牛，豬或羊。另一個(gè)來(lái)源可以是例如魚皮。釉基質(zhì)可以通過(guò)先前所述的方法從發(fā)育的牙齒制備(EP-B-0337967和EP-B-0263086)。將釉基質(zhì)刮下以制備釉基質(zhì)衍生物，例如使用水溶液如一種緩沖液、稀酸或堿或水/溶劑混合物抽提，然后進(jìn)行大小分離，除鹽或其它純化步驟，隨后任選地凍干。酶類可以通過(guò)加熱或溶劑處理滅活，這樣可以使制備的衍生物以液體形式存在而無(wú)須凍干。在本文中，釉基質(zhì)衍生物是指通過(guò)可變剪接或加工天然生成的，或通過(guò)對(duì)天然長(zhǎng)度的蛋白用酶或化學(xué)方法切割得到的，或通過(guò)體外或體內(nèi)的多肽合成獲得的(重組DNA方法或二倍體細(xì)胞的培養(yǎng))包含一個(gè)或多個(gè)釉基質(zhì)蛋白或蛋白部分的釉基質(zhì)的衍生物。釉基質(zhì)蛋白衍生物也包括與釉基質(zhì)相關(guān)的多肽或蛋白。這些蛋白或多肽可以被連接在適當(dāng)?shù)目缮飳W(xué)降解的載體分子上，例如聚氨基酸或多糖，或其組合。而且，術(shù)語(yǔ)釉基質(zhì)衍生物也包括合成的類似物。蛋白是通過(guò)肽鍵連接起來(lái)的氨基酸殘基所組成的生物學(xué)大分子。蛋白作為氨基酸的線形多聚體也叫多肽。典型的蛋白有50-800個(gè)氨基酸殘基，因此分子量界于6000至幾十萬(wàn)道爾頓之間。小的蛋白被稱作肽或寡肽。釉基質(zhì)蛋白一般是指存在于釉基質(zhì)中的蛋白，即釉質(zhì)前體(TenCate口腔組織學(xué)，1994；Robinson歐洲口腔科學(xué)雜志，1998年1月，106supp1.1282-91)，或通過(guò)切割此種蛋白而獲得的新蛋白。一般來(lái)說(shuō)，此種蛋白的分子量低于120，000道爾頓，具體包括琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin)和簇質(zhì)蛋白(tuftelin)。根據(jù)本發(fā)明所使用的蛋白的例子包括琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，簇質(zhì)蛋白，簇蛋白(tuftprotein)，血清蛋白，唾液蛋白，成釉質(zhì)蛋白，成釉細(xì)胞蛋白，鞘質(zhì)蛋白，和其相應(yīng)衍生物及混合物。含有用于本發(fā)明的活性釉質(zhì)物質(zhì)的制劑也包含至少兩種上述蛋白物質(zhì)。包含琺瑯蛋白和可能的其它一些釉基質(zhì)蛋白的商品化的產(chǎn)品品為EMDOGAIN(BioraAB)。一般來(lái)說(shuō)釉基質(zhì)的主要蛋白已知為琺瑯蛋白。它們組成大約90％w/w的基質(zhì)蛋白。剩余的10％w/w包含富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，簇質(zhì)蛋白，簇蛋白，血清蛋白和至少一種唾液蛋白；然而也可存在一些其它蛋白，例如已經(jīng)被鑒定的與釉基質(zhì)相關(guān)的成釉質(zhì)蛋白(成釉質(zhì)細(xì)胞蛋白，鞘質(zhì)蛋白)。而且各種蛋白可以被合成和/或加工成不同的大小(例如不同的分子量)。因此釉基質(zhì)中的主要蛋白琺瑯蛋白被發(fā)現(xiàn)以多種不同大小的形式存在，這些蛋白在一起組成超分子聚合物。它們?cè)谏項(xiàng)l件形成明顯疏水性物質(zhì)。它們可以攜帶其他蛋白或肽或是其他蛋白或肽的載體。其它一些蛋白也被認(rèn)為適合本發(fā)明的使用。這些蛋白的例子包括例如富含脯氨酸的蛋白和聚脯氨酸。被認(rèn)為適合本發(fā)明使用的其它物質(zhì)的例子包括釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的聚合物以及釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白的代謝物。代謝物可以是分子量從蛋白質(zhì)到短肽的任何大小。如上所述，根據(jù)本發(fā)明所使用的典型的蛋白，多肽和肽的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE確定多數(shù)為100kDa，90kDa，80kDa，70kDa或60kDa。根據(jù)本發(fā)明所使用的蛋白一般是以制備物的形式存在，制備物中活性釉質(zhì)物質(zhì)的蛋白含量的范圍在0.05％w/w至100％w/w之間，例如大約5-99％w/w，大約10-95％w/w，大約15-90％w/w，大約20-90％w/w，大約30-90％w/w，大約40-85％w/w，50-80％w/w，大約60-70％w/w，大約70-90％w/w，或大約80-90％w/w。根據(jù)本發(fā)明所使用的活性釉質(zhì)物質(zhì)的制備物也可包括不同分子量的活性釉質(zhì)物質(zhì)的混合物。一種釉基質(zhì)的蛋白可以被分成高分子量部分和低分子量部分，且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種已熟知的釉基質(zhì)蛋白的組分在牙周缺損(例如牙周傷口)的治療中具有很高的價(jià)值。這種組分包括醋酸抽提的蛋白即通常所指的琺瑯蛋白并組成釉基質(zhì)的低分子量部分(參考EP-B-0337967和EP-B-0263086)。正如上面所討論的，釉基質(zhì)的低分子量部分具有誘導(dǎo)牙周缺陷中的硬組織連接的適當(dāng)活性。然而在本文中，活性蛋白不只局限在釉基質(zhì)的低分子量部分。本文中優(yōu)選的蛋白包括釉基質(zhì)蛋白例如琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白，簇質(zhì)蛋白等，其分子量(體外SDS-PAGE測(cè)定)小于約60000道爾頓，但是大于60000道爾頓的蛋白在作為傷口愈合，抗細(xì)菌和/或抗炎候選制劑上也顯示出很好的前景。相應(yīng)的，根據(jù)本發(fā)明所使用的活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量大于大約40，000，例如分子量約在5000-25000之間。在本發(fā)明的范圍內(nèi)也包括WO97/02730中敘述的肽，即包括選自四肽DGEA(Asp-Gly-Glu-Ala)，VTKG(Val-Thr-Lys-G1y)，EKGE(Glu-Lys-Gly-Glu)和DKGE(Asp-Lys-Gly-Glu)的至少一個(gè)序列單元的肽，并且進(jìn)一步包含一氨基酸序列，該序列的連續(xù)20個(gè)氨基酸與選自SEQIDNO1的氨基酸序列，SEQIDNO1中1到103位氨基酸及SEQIDNO2中的6到324位氨基酸的相同長(zhǎng)度的氨基酸序列有至少80％相同性。術(shù)語(yǔ)“序列相同性”被認(rèn)為是肽段之間氨基酸的序列和相應(yīng)位置相同。一個(gè)或幾個(gè)氨基酸不相同的間隔是合適的。該種肽可以包含6-300個(gè)氨基酸，例如至少20個(gè)氨基酸，至少30個(gè)氨基酸，至少60個(gè)氨基酸，至少90個(gè)氨基酸，至少120個(gè)氨基酸，至少150個(gè)氨基酸或至少200個(gè)氨基酸。一種分離釉基質(zhì)蛋白的方法涉及對(duì)蛋白進(jìn)行抽提和通過(guò)一種適當(dāng)?shù)姆椒◤娜芙獾牧u磷灰石中除去鈣離子和磷酸根離子，所述方法例如凝膠過(guò)濾，透析或超濾(參見(jiàn)例如Janson，J-C&amp;Ryden，L.(Eds.)，蛋白純化，VCH出版社1989和Harris，ELV&amp;Angal，S.，蛋白純化方法-一種實(shí)用方法，IRS出版社，Oxford，1990)。一種典型的凍干蛋白質(zhì)制備物可高至70-90％主要或僅包含分子量在40000到5000道爾頓之間的琺瑯蛋白，另外10-30％是由短肽，鹽和殘余水分組成。主要的蛋白帶位于20kDa，12-14kDa和大約5kDa。通過(guò)例如沉淀，離子交換層析，制備電泳，凝膠滲透層析，反向?qū)游龌蛴H和層析的方法分離蛋白，可以對(duì)不同分子量大小的琺瑯蛋白進(jìn)行純化。不同分子量的琺瑯蛋白的組合可以多種多樣，從20kDa的化合物占主要成分到40-5kDa的不同分子量的聚集體直至5kDa的化合物占主要組分。在釉基質(zhì)中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的其它一些釉基質(zhì)蛋白例如成釉質(zhì)蛋白，簇質(zhì)蛋白或蛋白水解酶也可以被加入到琺瑯蛋白聚集體并被其攜帶。作為又一個(gè)來(lái)源，也可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的已經(jīng)被應(yīng)用的合成途徑或通過(guò)用重組DNA技術(shù)改造的培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)菌生成釉基質(zhì)衍生物或蛋白。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白的理化特性釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白是疏水性物質(zhì)，也就是水中溶解性很低，特別是在溫度升高時(shí)。一般來(lái)說(shuō)，這些蛋白在非生理?xiàng)l件的pH值和較低溫度例如大約4-20℃時(shí)溶解，然而它們?cè)隗w溫(35-37℃)和中性pH條件下卻積聚和沉淀。根據(jù)本發(fā)明所使用的釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白也包括活性釉質(zhì)物質(zhì)，其中至少部分活性釉質(zhì)物質(zhì)是以聚集體的形式存在或在體內(nèi)使用時(shí)能夠形成聚集體。聚集體中粒子的大小在20nm-1um之間。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的可溶性被認(rèn)為是對(duì)該種物質(zhì)所具有的預(yù)防和治療活性非常重要的。當(dāng)一個(gè)包含釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的組合物(在下文中也使用“活性釉質(zhì)物質(zhì)”作為通用術(shù)語(yǔ))作用于，例如人體時(shí)，其中的蛋白物質(zhì)由于存在于正常的生理?xiàng)l件下的pH值占優(yōu)勢(shì)的條件將會(huì)發(fā)生沉淀。因此，就會(huì)在作用區(qū)域處形成一個(gè)釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白層，這一層(在聚集體形成時(shí)也可是一個(gè)分子層)在生理?xiàng)l件下很難被去除。而且由于該物質(zhì)的生物學(xué)粘附特征(見(jiàn)下文)，該沉積層會(huì)與組織在沉積層和組織的邊緣緊密結(jié)合。這樣，施加了釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白或其組合物的組織就被該蛋白層覆蓋，并且活性釉質(zhì)物質(zhì)在作用區(qū)域保持很長(zhǎng)的時(shí)間，即不需以短間隔給予活性釉質(zhì)物質(zhì)。另外，在作用區(qū)域處形成的層可以被視作一個(gè)封閉的敷料，也就是說(shuō)所形成的層可以阻止被其覆蓋的組織與周圍組織的的接觸。在有受傷組織，感染組織或炎癥組織的情況下，該層可保護(hù)組織避免被周圍環(huán)境中存在的微生物進(jìn)一步感染。而且，所形成的蛋白層可以通過(guò)與組織或存在于組織內(nèi)/上的微生物的直接接觸發(fā)揮作用。為了使用后能夠在作用區(qū)域形成一個(gè)蛋白層，將適當(dāng)?shù)木彌_物質(zhì)摻入釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的藥物或化妝品組合物是有利的，這種緩沖物質(zhì)的目的是避免活性釉質(zhì)物質(zhì)在作用區(qū)域處溶解。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白還(被本發(fā)明人)觀察到具有生物粘附性質(zhì)，即，它們可以粘附于皮膚或粘膜表面。這些性質(zhì)至少是基于以下幾個(gè)原因?qū)τ谒鼈兊闹委熀?或預(yù)防作用是很有價(jià)值的-對(duì)治療和/或預(yù)防起作用的活性物質(zhì)可以在作用區(qū)域處保持很長(zhǎng)的時(shí)間，(即ⅰ)給藥頻率可以降低，ⅱ)可獲得活性物質(zhì)的受控釋放，ⅲ)在作用區(qū)域處的局部治療可以得到改善)；-釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白本身還適于做其它治療或預(yù)防活性物質(zhì)的載體，因?yàn)榘曰|(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的載體可以被設(shè)計(jì)成一種生物粘附載體(也就是說(shuō)，基于釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白的生物粘附性質(zhì)的新型生物粘附藥物輸送系統(tǒng))。與作用機(jī)制相關(guān)的原理釉基質(zhì)是可以粘附于礦物表面及蛋白表面的細(xì)胞外蛋白基質(zhì)的一個(gè)例子。在生理性pH值和溫度條件下，該蛋白形成一種不溶的超分子聚集體(Fincham等，結(jié)構(gòu)生物學(xué)雜志，19943-4月；112(2)103-9和結(jié)構(gòu)生物學(xué)雜志19957-8月；115(1)50-9)，該聚集體在蛋白水解酶的作用下逐漸降解(如果蛋白酶不失活，此種情況可以在體內(nèi)或體外都發(fā)生)。最近觀察到的關(guān)于釉基質(zhì)在牙根和牙根牙骨質(zhì)的形成過(guò)程中形成并短暫存在的情況可以用來(lái)解釋釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白是怎樣促進(jìn)牙周組織的再生的。然而本發(fā)明所觀察到的釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白也具有對(duì)軟組織缺損例如傷口愈合的積極作用是非常令人驚奇的。同樣令人驚奇地觀察到了這些物質(zhì)在抗感染和抗炎上的功效。在很多物種中，當(dāng)牙齒在口腔內(nèi)長(zhǎng)出時(shí)，在新生的礦化牙冠中發(fā)現(xiàn)有釉基質(zhì)的殘留物。這可能是由于新生的牙齒對(duì)通常的口腔細(xì)菌的侵害來(lái)說(shuō)是非常脆弱的，除非在起始階段有一個(gè)天然的保護(hù)存在。具有適當(dāng)?shù)目辜?xì)菌和/或抗炎的性質(zhì)的不溶性的釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白在傷口表面應(yīng)用會(huì)促進(jìn)和改善傷口的愈合。正如在本文的實(shí)驗(yàn)部分所證實(shí)的那樣，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白或蛋白聚集體通過(guò)接觸抑制阻止細(xì)菌的生長(zhǎng)，而暴露的細(xì)胞作為正常的環(huán)境與釉基質(zhì)反應(yīng)以抑制炎癥反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白可以用作治療和預(yù)防。而且釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白還可以與其它有活性的藥物物質(zhì)例如抗細(xì)菌，抗炎，抗病毒，抗真菌物質(zhì)一起使用，或與生長(zhǎng)因子例如TGFβ，PDGF，IGF，F(xiàn)GF，角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子或其相應(yīng)的肽類似物合并使用(據(jù)信EGF通過(guò)促進(jìn)上皮細(xì)胞的遷移和細(xì)胞分化促進(jìn)傷口愈合，另外，EGF通過(guò)增加傷口處的成纖維細(xì)胞的數(shù)目導(dǎo)致大量的膠原合成)。釉基質(zhì)或其制劑中固有的或添加的酶也可以與釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白合并使用，特別是蛋白酶?；钚杂再|(zhì)物質(zhì)的制劑一般被配制成一種藥物或化妝品組合物。這種組合物當(dāng)然可以由蛋白制備物組成，或者它可以進(jìn)一步包含可以接受的藥物或化妝品賦形劑。藥物和化妝品組合物中使用的特別合適的賦形劑是丙二醇海藻酸鹽，或透明質(zhì)酸，或其鹽或衍生物。藥物和/或化妝品組合物以下給出了包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的適當(dāng)組合物的例子。根據(jù)活性釉質(zhì)物質(zhì)的應(yīng)用，組合物可以是藥物組合物或化妝品組合物。在下文中，術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”也包含化妝品組合物以及屬于界于藥物和化妝品之間的所謂灰色區(qū)域的組合物，即藥物化妝品。當(dāng)給予個(gè)體(動(dòng)物或人)時(shí)，釉基質(zhì)，釉基質(zhì)蛋白和/或釉基質(zhì)衍生物(以下稱作“活性釉質(zhì)物質(zhì))，和/或其制劑優(yōu)選設(shè)計(jì)成一個(gè)包含活性釉質(zhì)物質(zhì)以及任選的一種或幾種藥物學(xué)可接受的賦形劑的組合物。組合物可以以例如固體，半固體，或流體的形式存在，比如可生物吸收片，浸濕物，敷料，水凝膠，水狀膠體敷料，薄膜，泡沫，薄片，繃帶，膏藥，輸送裝置，植入物，粉劑，小顆粒，顆粒，膠囊，瓊脂糖或脫乙酰殼多糖珠，片劑，丸劑，小球，微膠囊，微球體，納米顆粒，噴灑劑，氣霧劑，吸入裝置，凝膠，水溶膠，糊劑，軟膏，乳膏，皂，栓劑，vagitorie，牙膏，溶液，分散液，懸浮液，乳狀液，混合物，洗液，漱口液，洗發(fā)精，灌腸劑，試劑盒，其包含例如兩個(gè)分開的容器，第一個(gè)容器含有活性釉質(zhì)物質(zhì)，任選地與其它活性藥物和/或藥物學(xué)可接受的賦形劑混合，第二個(gè)容器含有適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)以備在使用前加入第一個(gè)容器獲得待用的組合物；以及其它一些合適的形式，例如植入物或植入物涂層或一種適合于植入和移植條件下使用的形式。用于皮膚或粘膜的組合物被認(rèn)為是本發(fā)明最重要的。因此，包含待給藥的活性釉質(zhì)物質(zhì)的組合物可適合任何適當(dāng)?shù)氖褂猛緩?，例如，通過(guò)局部(皮膚)，口腔，面頰，鼻腔，耳腔，直腸或陰道使用和體腔使用，例如牙根或牙根槽。而且，組合物可適合與手術(shù)相關(guān)的使用，例如在機(jī)體的切口給藥以推動(dòng)內(nèi)部傷口和軟組織損傷的愈合。如上所述，活性釉質(zhì)物質(zhì)組合物可適合于手術(shù)中的應(yīng)用，例如以一種凝膠，薄膜或干片劑的形式局部使用(例如口腔)，或作為清洗溶液或糊劑或乳膏作用于組織或表面阻止細(xì)菌侵入。牙根槽區(qū)域的手術(shù)或植入時(shí)，可以使用能封閉牙腔的糊劑。組合物可以根據(jù)常規(guī)的藥物實(shí)踐來(lái)配制，參見(jiàn)，例如“Remington′s藥物科學(xué)”和“藥物技術(shù)百科全書”，由Swarbrick,J.&amp;J.C.Boylan編輯，MarcelDekker公司出版，紐約，1988。如上所述包括活性釉質(zhì)物質(zhì)的組合物趨向于使用在皮膚或粘膜上。當(dāng)然其它一些應(yīng)用也可涉及，例如在義齒，假體，植入物上的應(yīng)用，以及應(yīng)用于體腔例如口腔，鼻腔和陰道。粘膜優(yōu)選選自口腔、頰、鼻腔、耳腔、直腸和陰道粘膜。另外，該組合物還可以直接作用于傷口或其它軟組織損傷上。另外，在牙齒/牙科領(lǐng)域的應(yīng)用也十分重要。相關(guān)的例子是應(yīng)用于牙周(牙齒)袋，齒齦或齒齦傷口或位于口腔內(nèi)或與口腔手術(shù)相關(guān)的其它傷口。根據(jù)本文敘述的活性釉質(zhì)物質(zhì)的抗細(xì)菌效應(yīng)，可以進(jìn)一步預(yù)期它們可以有利地應(yīng)用于預(yù)防牙齒或牙根的潰瘍和牙斑。為了支持這一應(yīng)用，現(xiàn)已證實(shí)(Weinmann,J.P.等釉質(zhì)形成和鈣化的遺傳干擾，美國(guó)牙科協(xié)會(huì)雜志，32397-418，1945；SundellS，遺傳性釉質(zhì)發(fā)育不完全，對(duì)瑞典兒童人群的流行病學(xué)，遺傳學(xué)和臨床研究，瑞典牙科雜志提供1986；311-38)，發(fā)育不完全的牙齒(釉質(zhì)發(fā)育不完全)由于包含大量的琺瑯蛋白對(duì)潰瘍有很強(qiáng)的阻止作用。包括活性釉質(zhì)物質(zhì)的藥物組合物可以充當(dāng)藥物輸送系統(tǒng)。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“藥物輸送系統(tǒng)”指當(dāng)藥物組合物(藥物配制品或劑型)被使用時(shí)，可以將活性物質(zhì)呈遞給人或動(dòng)物的機(jī)體。因此術(shù)語(yǔ)“藥物輸送系統(tǒng)”包括普通的藥物組合物例如乳膏，軟膏，液體，粉劑，片劑等以及更復(fù)雜的配方例如噴霧裝置，膏藥，繃帶，敷料和器具等。除了活性釉質(zhì)物質(zhì)以外，根據(jù)本發(fā)明所使用的藥物組合物還包含藥物學(xué)或化妝品可接受的賦形劑。藥物學(xué)或化妝品可接受的賦形劑是指當(dāng)使用該組合物時(shí)對(duì)個(gè)體沒(méi)有明顯危害的物質(zhì)。這種賦形劑一般滿足國(guó)家健康管理部門頒布的要求。官方藥典例如英國(guó)藥典，美國(guó)藥典和歐洲藥典都規(guī)定了可接受的藥物賦形劑的標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)可接受的藥物賦形劑是否可以被一種藥物組合物使用依賴于針對(duì)一個(gè)特殊形式的傷口所選擇的劑型。以下是根據(jù)本發(fā)明用于不同形式的組合物的藥學(xué)可接受的賦形劑的例子。以下是根據(jù)本發(fā)明對(duì)所使用的相關(guān)的藥物組合物的綜述。該綜述是基于特定給藥途徑。然而，應(yīng)理解的是，在那些藥學(xué)可接受的賦形劑可以不同的劑型或組成使用的情形下，特定的藥學(xué)可接受的賦形劑的應(yīng)用將不限于某種特定的劑型或該賦形劑的某種特定功能。用于本發(fā)明的組合物的藥學(xué)可接受賦形劑的選擇及其相應(yīng)的最適濃度一般不能預(yù)測(cè)，而是要基于對(duì)最終組合物的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)才能決定。然而，藥物配制領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以在，例如“Remington′s藥物科學(xué)”第18版，Mack出版公司，Easton，1990中得到指導(dǎo)。局部組合物針對(duì)于粘膜或皮膚的應(yīng)用，根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物可以含有常規(guī)的無(wú)毒性的藥學(xué)可接受的載體和賦形劑，包括微球體和脂質(zhì)體。根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物包括所有形式的固體，半固體，和流體組合物。特殊相關(guān)的組合物是，例如，糊劑，軟膏，親水軟膏，乳膏，凝膠，水凝膠，溶液，乳液，懸浮液，洗液，擦劑，洗發(fā)劑，者哩，皂劑，粘貼物，噴霧劑，粉末，薄膜，泡沫，墊料，海綿(例如膠原海綿)，敷劑，(例如吸收性傷口敷劑)，浸濕劑，繃帶，膏藥，和經(jīng)皮輸送系統(tǒng)。藥學(xué)可接受的賦形劑可以包括，溶劑，緩沖試劑，防腐劑，濕潤(rùn)劑，螯合劑，抗氧化劑，穩(wěn)定劑，乳化劑，懸浮劑，凝膠形成劑，藥膏基質(zhì)，滲透增強(qiáng)劑，香料，和皮膚保護(hù)劑。溶劑的例子是，例如，水，酒精，植物油或魚油，(例如食用油，如杏仁油，蓖麻油，可可油，椰子油，玉米油，棉籽油，亞麻子油，橄欖油，棕櫚油，花生油，罌粟油，菜籽油，芝麻油，大豆油，葵花油，和絨草油)，礦物油，脂肪油，液體石蠟，聚乙二醇，丙二醇，甘油，液體聚烷基硅氧烷，和其混合物。緩沖劑的例子是，例如，檸檬酸，醋酸，酒石酸，乳酸，磷酸，二乙胺等。組合物使用的保護(hù)劑的適當(dāng)?shù)睦邮菍?duì)羥基苯甲酸酯類，例如甲基、乙基、丙基對(duì)羥基苯甲酸酯，對(duì)羥基苯甲酸丁酯，對(duì)羥基苯甲酸異丁酯，對(duì)羥基苯甲酸異丙酯，山梨酸鉀，山梨酸，安息香酸，安息香酸甲酯，苯氧乙醇，bronopol，bronidox，MDM乙內(nèi)酰脲，氨基甲酸碘丙炔丁酯，EDTA，氯化benzalconium，和芐基醇或防腐劑混合物。濕潤(rùn)劑的例子是丙三醇，丙二醇，山梨(糖)醇，乳酸，尿素和相應(yīng)的混合物。螯合劑的例子是EDTA鈉和檸檬酸。抗氧化劑的例子是丁基化羥基苯甲醚(BHA)，抗壞血酸，和其相應(yīng)衍生物，生育酚及其相應(yīng)衍生物，半胱氨酸和其混合物。乳化劑的例子是天然存在的樹膠，例如阿拉伯樹膠或黃芪膠，天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂；山梨聚糖單油酸衍生物，羊毛脂，羊毛醇，山梨聚糖酯；單甘油酯；脂肪醇；脂肪酸酯(例如脂肪酸甘油三酯)；及其混合物。懸浮劑的例子是，例如纖維素及纖維素衍生物，例如羧甲基纖維素，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，角叉菜膠，阿拉伯樹膠，阿拉伯樹膠，膠黃芪，和相應(yīng)的混合物。凝膠基質(zhì)，粘性增強(qiáng)劑或可以從傷口吸收滲出液的組分的例子是液體石蠟，聚乙烯，脂肪油，膠體二氧化硅，或膠體鋁，鋅皂，丙三醇，丙二醇，膠黃芪，羧乙烯基聚合物，硅酸鎂鋁，Carbopol親水聚合物，例如淀粉或纖維素衍生物例如羧甲基纖維素，羥乙基纖維素，和其它纖維素衍生物，水溶脹性hydrocolloid，角叉菜膠，透明質(zhì)酸(例如任選地包含氯化鈉的透明質(zhì)酸凝膠)和包括丙二醇藻酸鹽的藻酸鹽。軟膏基質(zhì)的例子是例如，蜂蠟，石蠟，鯨蠟醇，鯨蠟醇十六酸酯，植物油，失水山梨糖醇脂肪酸酯(Span)，聚乙二醇，以及失水山梨糖醇脂肪酸酯和環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(Tween)。疏水性或水乳化軟膏基質(zhì)的例子是石蠟，植物油，動(dòng)物脂肪，合成甘油酯，蠟，羊毛脂，和液體聚烷基硅氧烷。親水性軟膏基質(zhì)的例子是macrogols(聚乙二醇)。其它軟膏基質(zhì)的例子是三乙醇胺皂，硫化脂肪醇，和多乙氧基醚。粉末組分的例子是海藻酸鹽，膠原，乳糖，當(dāng)作用于傷口時(shí)可以形成凝膠的粉末(吸收液體/傷口滲出液)。一般來(lái)說(shuō)，用于大的開放傷口的粉末必須是無(wú)菌的，其呈現(xiàn)的粒子必須是微小的。其它賦形劑的例子是聚合物，例如carmelose，carmelose鈉，羥丙基甲基纖維素，羥基乙基纖維素，果膠，黃原膠，刺槐豆膠，阿拉伯樹膠，白明膠，carbomer，乳化劑，例如維生素E，硬脂酸甘油酯，十六烷基糖苷，膠原，角叉菜膠，透明質(zhì)酸，和藻酸鹽和kitosans。敷料和/繃帶也是重要的活性釉質(zhì)物質(zhì)的輸送系統(tǒng)，活性釉質(zhì)物質(zhì)可以在敷料生產(chǎn)前或生產(chǎn)中可以與其它物質(zhì)或成分一起混合加入，或者活性釉質(zhì)物質(zhì)可以涂覆在敷料上，例如，使用含有活性釉質(zhì)物質(zhì)的溶液或分散劑的溶液滴加在敷料上或者將含有有活性物質(zhì)的的溶液或分散劑的溶液噴灑在敷料上。另外，活性釉質(zhì)物質(zhì)也可以以粉劑的形式加在敷料上。敷料可以以傷口吸收劑的形式滲入傷口。敷料還可以以水凝膠的形式(例如交聯(lián)的聚合物，例如包含羧甲基纖維素，丙二醇，或多糖，二糖，親水性聚亞氨酯膜，和蛋白，Intrasite公司)的形式或以封閉的敷劑例如藻酸鹽，脫乙酰甲殼質(zhì)，親水性聚尿烷膜，膠原墊，片，粉末，泡沫，或海綿，泡沫(例如聚尿烷或硅酸鹽)，水狀膠體(例如羧甲基纖維素，CMC)，膠原和基于透明質(zhì)酸的敷料以及相應(yīng)的合并物。也可以設(shè)想活性釉質(zhì)物質(zhì)也可以被摻入組織粘合劑，包括例如血纖蛋白原和凝血酶和任選地因子ⅩⅢ或其它可以促進(jìn)止血的血漿凝血因子。這些組織粘合劑也可以制備成活性釉質(zhì)物質(zhì)，血纖蛋白原和任選地因子ⅩⅢ的預(yù)混合物，凝血酶在組織粘合劑使用于傷口前立即加入該預(yù)混合物?；蛘?，血纖蛋白原，活性釉質(zhì)物質(zhì)和任選地因子ⅩⅢ的預(yù)混合物也可以在使用凝血酶前施加于傷口。在作用區(qū)域處，凝血酶將血纖蛋白原轉(zhuǎn)化成血纖蛋白，由此再現(xiàn)了傷口愈合中天然存在的凝血過(guò)程。組織粘合劑中活性釉質(zhì)物質(zhì)的存在可以起到如上所述的促進(jìn)愈合的作用?？梢赃m合包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的商品化物質(zhì)是Tisseel，其是由奧地利維也納的ImmunoAG公司生產(chǎn)的一個(gè)二組分的纖維蛋白封閉劑。對(duì)于應(yīng)用于牙齒或牙根的牙膏或漱口液配方或其它配方，活性釉質(zhì)物質(zhì)可以在略酸性pH條件的溶劑中以溶解狀態(tài)存在，或者分散在中性pH的溶劑中?？梢灶A(yù)測(cè)活性釉質(zhì)物質(zhì)在使用時(shí)可以在牙齒的表面形成一個(gè)保護(hù)層，以此阻止齲齒生成細(xì)菌的附著(參見(jiàn)下文的實(shí)施例4)。在這種牙齒護(hù)理制備物中，活性釉質(zhì)物質(zhì)可以被設(shè)計(jì)成與一種或多種具有抗齲齒效應(yīng)的化合物配制在一起，最常見(jiàn)的是氟或其它微量元素例如釩或鉬。在中性pH下，這些微量元素被認(rèn)為是結(jié)合(如經(jīng)離子鍵)或包埋在活性釉質(zhì)物質(zhì)中，釉質(zhì)物質(zhì)在由于例如齲齒生成細(xì)菌產(chǎn)生的酸性代謝物導(dǎo)致pH大約是5.5或更低時(shí)呈溶解狀態(tài)時(shí)，微量元素從中釋放出來(lái)顯示抗齲齒效應(yīng)。上述用于局部應(yīng)用的組合物非常適合直接作用于傷口或適合引入機(jī)體的相關(guān)出口，例如直腸，尿道，陰道，耳腔，鼻腔或口腔。這些組合物也可以簡(jiǎn)單的直接應(yīng)用于要治療的部位例如粘膜，或通過(guò)其它合適的途徑使用。已經(jīng)證實(shí)的對(duì)局部應(yīng)用非常重要的組合物是那些有觸變性質(zhì)的物質(zhì)，即組合物的粘度受諸如搖動(dòng)或攪拌的影響以至于在作用時(shí)其粘度降低，而在作用后其粘度又可以增加使得組合物保留在作用處。用于口腔或用于粘膜或皮膚的組合物根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物可以以懸浮液，乳液或分散液的形式存在。這種組合物包含的活性釉質(zhì)物質(zhì)與分散劑或濕潤(rùn)劑，懸浮劑和/或一種或多種防腐劑和其它藥學(xué)可接受的賦型劑混合在一起。該種組合物也適合活性釉質(zhì)物質(zhì)釋放到作用區(qū)域例如完整的或受損傷的粘膜比如口腔，面頰，鼻腔，直腸或陰道粘膜，或向完整的或損傷的皮膚，或傷口給藥。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶?rùn)劑是，例如，天然存在的磷脂，例如卵磷脂，大豆卵磷脂；環(huán)氧乙烷與例如脂肪酸的縮合產(chǎn)物，長(zhǎng)鏈脂族醇，或由脂肪酸衍生的部分酯，和一種己糖醇或一種己糖醇酐，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯等。適合的懸浮劑是，例如天然存在的膠例如阿拉伯樹膠，黃原膠，或黃芪膠；纖維素例如羧甲基纖維素鈉，微晶纖維素(例如AvicelRC591，甲基纖維素)；藻酸鹽和脫乙酰甲殼質(zhì)例如藻酸鈉等。根據(jù)本發(fā)明在組合物中所使用的適當(dāng)?shù)姆栏瘎┡c上文所述一致。根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物也可以通過(guò)口腔途徑使用。適當(dāng)?shù)目谇唤M合物可以被設(shè)計(jì)成顆粒配制品或固體，半固體或流體劑型?？谇皇褂玫慕M合物包括固體劑型例如粉劑，小顆粒，顆粒，錠劑，片劑，膠囊，起泡片劑，咀嚼片劑，糖錠，速釋片劑，或修飾的釋放片劑以及流體或液體配方，例如溶液，懸浮液，乳液，分散液和混合物。另外，組合物可以是粉末，分散粉末，或適合于通過(guò)加入液體介質(zhì)例如一種水性介質(zhì)而制備成水性懸浮液的顆粒。對(duì)于口腔(或局部使用)的固體劑型，根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物一般包括活性釉質(zhì)物質(zhì)和任何其它活性物質(zhì)，它們?nèi)芜x地與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合。這些賦形劑包括，例如惰性稀釋劑或填充劑，例如蔗糖，山梨糖醇，糖，甘露醇，微晶纖維素，淀粉包括馬鈴薯淀粉，碳酸鈣，氯化鈉，乳糖，磷酸鈣，硫酸鈣，或磷酸鈉；顆?；虮澜鈩├绲矸垩苌?，包括微晶纖維素，淀粉包括馬鈴薯淀粉，croscarmellose鈉，藻酸鹽，藻酸，和脫乙酰甲殼質(zhì)；粘合劑例如蔗糖，葡萄糖，山梨糖醇，阿拉伯樹膠，藻酸，海藻酸鈉，白明膠，淀粉，預(yù)膠凝化淀粉，微晶淀粉，硅酸鎂鋁，羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，乙基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯基乙酸酯，或聚乙二醇；和脫乙酰甲殼質(zhì)；潤(rùn)滑劑包括助流劑和抗粘附劑，例如硬脂酸鎂，硬脂酸鋅，硬脂酸，二氧化硅，氫化植物油，或滑石。其它藥學(xué)上可接受的賦形劑可以是著色劑，調(diào)味劑，可塑劑，保濕劑，緩沖劑等。在藥物組合物以單位劑型的固體劑型存在的條件下(例如片劑或膠囊)，該單位劑型可以以以下所述的包被物的形式提供。在組合物以片劑，膠囊或多單位組合物的形式存在的條件下，組合物或各個(gè)單位或包含各個(gè)單位的片劑或膠囊可以用下列物質(zhì)包被例如糖衣，薄膜，(例如基于羥丙基甲基纖維素，甲基纖維素，甲基羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，羧甲基纖維素，丙烯酸酯共聚物(Eudragit)，聚乙二醇和/或聚乙烯吡硌烷酮)或腸衣(例如基于甲基丙酸烯共聚物(Eudragit)，鄰苯二甲酸醋酸纖維素，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，羥丙基甲基纖維素醋酸琥珀酸酯，聚乙烯基乙酸鄰苯二甲酸酯，蟲膠，和/或乙基纖維素)。另外，延時(shí)物質(zhì)例如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯也可以使用。直腸和/或陰道組合物為了應(yīng)用于直腸和陰道粘膜，根據(jù)本發(fā)明所使用的組合物包括栓劑(乳液或懸浮液型)，灌腸劑，直腸明膠膠囊(溶液或懸浮液)。適當(dāng)?shù)乃幬飳W(xué)可接受的栓劑基質(zhì)包括可脂，酯化脂肪酸，甘油明膠，和各種水溶性或水分散性基質(zhì)例如聚乙二醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯。各種添加劑例如增強(qiáng)劑或表面活性劑也可以加入。鼻腔組合物針對(duì)鼻腔粘膜的使用(以及口腔粘膜)，適合吸入的噴霧劑或氣霧劑是本發(fā)明適當(dāng)?shù)慕M合物。在一個(gè)典型的鼻腔組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)以顆粒形式存在并任選地分散在適當(dāng)?shù)妮d體中。在組合物中存在的藥物學(xué)上可接受的載體和賦形劑和任選地其它藥物學(xué)上可接受的材料例如稀釋劑，增強(qiáng)劑，調(diào)味劑，防腐劑等均是根據(jù)常規(guī)藥物實(shí)踐以藥物配制領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所理解的方式選擇。釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白的劑量在根據(jù)本發(fā)明針對(duì)皮膚或粘膜使用的藥物組合物中，活性釉質(zhì)物質(zhì)的濃度通常界于大約0.01％w/w至99.9％w/w之間。組合物的使用量通常針對(duì)每平方厘米的傷口/皮膚/組織面積的總蛋白量是從大約0.0lmg/cm2至大約20mg/cm2，例如從大約0.1mg/cm2至大約15mg/cm2。組合物的使用量依賴于組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)的濃度以及活性釉質(zhì)物質(zhì)從組合物中釋放的速度，但是通常多數(shù)大約15-20mg/cm2。當(dāng)活性釉質(zhì)物質(zhì)以流體組合物的形式給藥時(shí)，組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)的濃度在大約0.1到大約50mg/ml之間。在某些情況下希望更高的濃度，也可以獲得例如大約100mg/ml的濃度。當(dāng)組合物應(yīng)用于口腔時(shí)，下列劑量是相關(guān)的典型的口腔內(nèi)的實(shí)驗(yàn)損傷面積(猴子)大約4×2×5-6mm，相應(yīng)于50微升或大約0.025至大約0.15mg總蛋白/mm2或大約2.5-15mg/cm2。一般來(lái)說(shuō)至多0.5，例如0.4，0.3，0.2，0.1ml的組合物，濃度大約是1-40mg/ml，例如5-30mg/ml被給藥。人口腔由于牙周疾病所造成的損害面積典型大小是5-10×2-4×5-10mm，相應(yīng)地需要使用濃度大約1-40mg總蛋白/ml，例如5-30mg/ml的大約200微升，通常多數(shù)大約0.5-1ml，例如0.2-0.3ml/每個(gè)牙齒的組合物。0.2-0.3mg/ml相應(yīng)于每25-100cm2的損害面積6mg蛋白，或者如果僅按牙根面積計(jì)算大約0.1mg/mm2。一般來(lái)說(shuō)常使用過(guò)量體積的組合物以覆蓋整個(gè)表面。甚至一個(gè)多層的形成也僅需要上述劑量的一小部分。一般來(lái)說(shuō)，大約0.1-0.5ml，例如大約0.15-0.3ml或大約0.25-0.35ml的包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的組合物可以施加到拔牙后牙槽的缺陷空間內(nèi)(拔牙后的孔洞)。組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)的濃度通常是1-40mg總蛋白/ml，例如5-30mg/ml。當(dāng)0.3-0.4ml的這種組合物作用于智齒時(shí)，這一體積相應(yīng)于0.1mg/cm2(牙槽的計(jì)算是按照直徑5mm高20mm的圓柱體計(jì)算的)。藥物組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)的濃度依賴于特異的釉質(zhì)物質(zhì)，其活性，需要治療和預(yù)防的疾病的嚴(yán)重程度，及被治病人的年齡和身體情況。對(duì)于藥物組合物中活性釉質(zhì)物質(zhì)相應(yīng)濃度的選擇為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，并可以依據(jù)例如國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO/DIS14155醫(yī)用設(shè)備的臨床研究，1994和ICH(國(guó)際協(xié)調(diào)組織)的良好的臨床應(yīng)用的三方協(xié)定，Brookwood醫(yī)學(xué)出版有限公司，Surrey，1996所敘述的良好臨床應(yīng)用(GCP)或研究新型藥物條例中已建立的條款執(zhí)行。在本領(lǐng)域中的技術(shù)人員可以使用如上所述的標(biāo)準(zhǔn)教科書，條例和規(guī)則以及本領(lǐng)域中的常用知識(shí)敘述的方法選擇針對(duì)一些活性釉質(zhì)物質(zhì)的恰當(dāng)攝入劑量，和/或簡(jiǎn)單地通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟選擇出其它活性物質(zhì)的劑量形式。在其它方面，本發(fā)明涉及下列方法，ⅰ)預(yù)防和/或治療傷口，ⅱ)降低感染，ⅲ)預(yù)防和/或治療炎癥，這些方法包括給予需此治療的哺乳動(dòng)物有效量的活性釉質(zhì)物質(zhì)。正如將被理解的，關(guān)于使用活性釉質(zhì)物質(zhì)預(yù)防和或治療傷口的細(xì)節(jié)與上文討論的該物質(zhì)的其它應(yīng)用(抗細(xì)菌和抗炎效應(yīng))和方法是相同的或類似的，這意味著合適時(shí)，上述關(guān)于活性釉質(zhì)物質(zhì)，包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的制備物，包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的藥物組合物，ⅰ)活性釉質(zhì)物質(zhì)的制備物，ⅱ)包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的制備物，ⅲ)包含活性釉質(zhì)物質(zhì)的藥物組合物，以及其改進(jìn)的性質(zhì)和使用可以應(yīng)用于本發(fā)明所有方面有的變化情形。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明通過(guò)參考附圖可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的揭示，其中圖1顯示出用EMD刺激或未刺激的人PDL細(xì)胞中的DNA合成；圖2顯示出用EMD刺激或未刺激的人PDL細(xì)胞中的TGF-β1生成；圖3顯示出下面的實(shí)施例3和4所述的流動(dòng)實(shí)驗(yàn)中流動(dòng)室和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的示意圖；圖4,5,6顯示出粘放線菌與分別用EMD和乙酸處理過(guò)的玻璃板附著的3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的結(jié)果圖；圖7,8,9顯示出突變鏈球菌與分別用EMD和乙酸處理過(guò)的玻璃板附著的3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的結(jié)果圖；圖10A顯示出智齒摘除后的術(shù)后損傷的X-射線照片；圖10B顯示出下文實(shí)施例12所述的EMD處理后的牙周膜的再生過(guò)程的X-射線照片。實(shí)驗(yàn)部分材料和方法產(chǎn)于瑞典BIORAAB，S-20512Malmo的釉基質(zhì)衍生物EMDOGAIN包含30mg凍干的釉基質(zhì)蛋白(下文中簡(jiǎn)述為EMD)和1ml載體溶液(丙二醇藻酸鹽)，其在使用前混合，除非蛋白和載體分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。主要的蛋白峰20,14,5kDa之間重量比大約是85/5/10。熱處理的EMD指EMD在約80℃處理3小時(shí)用以滅活殘余的蛋白酶。采用HPLC凝膠滲透層析(使用溶于0.9％NaCl的30％乙腈平衡的TSKG-2000SW)從EMD中分離20kDa的琺瑯蛋白和5kDa的富含酪氨酸的琺瑯蛋白肽(TRAP)，進(jìn)一步使用乙腈梯度通過(guò)反向?qū)游?Pro-RPC，HR5/10，Pharmacia-Upjohn，瑞典)進(jìn)行純化。然后將不同量的所分離的蛋白/多肽加入EMDOGAIN載體溶液中，除非是二者分開檢測(cè)。透明質(zhì)酸是來(lái)自日本東京的Seikagaku公司的HMT-0028(MW990000)。細(xì)菌和酵母都是最初從病人分離的，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟根據(jù)代謝和抗原性質(zhì)進(jìn)行分類。所使用的細(xì)菌和酵母的種類在下表中列出。血清白蛋白(牛)和Ⅰ型膠原(牛)均購(gòu)自Sigma，St.Louis，U.S.A.瓊脂板均為腦心浸液瓊脂，購(gòu)自Difco，補(bǔ)加人血紅細(xì)胞(每升瓊脂100ml)。實(shí)施例實(shí)施例1用EMDOGAIN處理的PDL細(xì)胞的細(xì)胞增殖和TGF-β1生成將3ml無(wú)菌過(guò)濾的0.1％的HAc加入小瓶(含30mg的EMD)制備EMD的貯存液。60微升的EMD貯存液加入6000微升的含有10％胎牛血清和1％的青鏈霉素溶液的DMEM培養(yǎng)基。將300微升的混合物加入96孔微量滴定板(NUNCA/S，丹麥，目錄號(hào)#167008)的每個(gè)孔中。1000個(gè)人牙周膜細(xì)胞(PDL)(取自由于畸齒矯正的原因需要進(jìn)行前臼齒摘除的健康人的牙周組織，而后按照Somerman等，牙齒研究雜志67,1988,pp.66-70敘述的方法進(jìn)行培養(yǎng))被加入到每個(gè)孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)5天。用作對(duì)照的PDL細(xì)胞基本如上所述在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，但不加入EMD。孵育后的細(xì)胞按照廠商指導(dǎo)通過(guò)測(cè)定摻入的5-溴-2′-脫氧尿苷(BrdU)量的免疫分析來(lái)觀察細(xì)胞增殖的情況(BoehringerMannheim，目錄號(hào)#1647229)。在該步驟中，BrdU代替胸苷摻入到生長(zhǎng)細(xì)胞的DNA中。通過(guò)ELISA方法對(duì)摻入的BrdU的量進(jìn)行測(cè)定，用該方法測(cè)定的BrdU的摻入量是DNA合成速率的一個(gè)指示，相應(yīng)的顯示出PDL細(xì)胞的增殖速率。圖1的結(jié)果顯示出在EMD存在下培養(yǎng)的PDL細(xì)胞的增殖速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未用EMD培養(yǎng)的細(xì)胞。從微量滴定板上取100微升的細(xì)胞上清加入到20微升1N的HCl中，室溫孵育10分鐘。孵育混合物用20微升的1NNaOH/0.5MHEPES中和。100微升的該混合物加入400微升的稀釋緩沖液。200微升的稀釋液使用英國(guó)R&amp;DSystems的QuantikinesTM試劑盒(目錄號(hào)#DB100)按照說(shuō)明書介紹的方法進(jìn)行ELISA檢測(cè)。圖2的結(jié)果顯示出與EMD保溫的PDL細(xì)胞中TGF-β1生成的量比未用EMD處理的細(xì)胞顯著增加。實(shí)施例2在釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白存在的條件下微生物生長(zhǎng)情況的研究本實(shí)施例的目的是證實(shí)釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白在體外對(duì)微生物的生長(zhǎng)有抑制作用。本實(shí)施例中所使用的蛋白溶解在用乙酸調(diào)節(jié)至pH5.5的磷酸鹽緩沖液(PBS)中。所使用的微生物懸浮在pH6.8的PBS中，終濃度為OD6000.4。將50微升的EMDOGAIN(30mg的EMD溶解在1mlPGA中)和50微升的EMD，熱處理的EMD，EMD組分A，B，C和H(均為每毫升PBS含10mg蛋白)滴在瓊脂板上，使之在平板(9cm直徑，根據(jù)每種微生物的需要加有用來(lái)確定抗性的補(bǔ)充物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)平板)上空氣干燥。隨后微生物的均一懸浮液(1mlOD280=0.5)涂布在瓊脂板上，平板根據(jù)每種細(xì)菌生長(zhǎng)的要求在CO2富集的空氣中或厭氧條件下35℃孵育3天(需氧培養(yǎng))或14天(厭氧培養(yǎng))。所有培養(yǎng)物每天檢查一次。在相同的條件下Ⅰ型膠原和血清白蛋白(均來(lái)源于牛)作為對(duì)照檢測(cè)。未稀釋的丙二醇藻酸鹽(PGA-EMD載體)，PBS緩沖液和透明質(zhì)酸(HA-另一種EMD載體)也作為陰性對(duì)照。表1的結(jié)果顯示出僅有釉基質(zhì)衍生物或釉基質(zhì)蛋白或衍生物抑制一些微生物的生長(zhǎng)。在蛋白周圍沒(méi)有擴(kuò)散區(qū)的跡象表明所使用的EMD蛋白聚集在瓊脂表面，并且只有與蛋白直接接觸的微生物的生長(zhǎng)被抑制。當(dāng)收集被抑制區(qū)域的樣品并在液體培養(yǎng)基(加入補(bǔ)充物質(zhì)的LB肉湯)培養(yǎng)時(shí)，可以復(fù)活原始微生物的單培養(yǎng)物，這表明活性蛋白不是來(lái)自微生物。所有的對(duì)照均為陰性顯示出沒(méi)有非特異性的機(jī)制影響結(jié)果。表1在測(cè)試物質(zhì)上的生長(zhǎng)(+/-)EMD組分A多數(shù)為琺瑯蛋白，約26-20kDaEMD組分B約17-13kDa的蛋白EMD組分C約10-5kDa的肽EMD組分HEMD中分子量大于27kDa的所有蛋白+指微生物的正常生長(zhǎng)-指微生物的生長(zhǎng)完全被抑制+/-指與陰性對(duì)照相比生長(zhǎng)部分被抑制表中所有的結(jié)果是在孵育第二天(需氧培養(yǎng))或第五天(厭氧培養(yǎng))記錄的。這些結(jié)果顯示出EMD包含的蛋白和肽在表面聚集時(shí)可以抑制某些革蘭氏陰性桿菌和某些革蘭氏陽(yáng)性球菌的生長(zhǎng)?；贓MD蛋白的基本行為特性(參考jpc)，并且因?yàn)樵摲N抑制效應(yīng)不是來(lái)源于微生物，對(duì)所觀察到的效應(yīng)的一個(gè)合理的解釋是蛋白聚集物形成一種不溶性屏障將微生物和其生長(zhǎng)所需的底物隔開。實(shí)施例3EMD在體外對(duì)粘放線菌附著速率的作用介紹EMD對(duì)廣泛存在于牙斑但一般不認(rèn)為與嚴(yán)重的牙周炎相關(guān)的一種口腔微生物粘放線菌的最初附著的作用得到了研究。盡管該微生物可以與牙齦卟啉單胞菌形成聚集體并因此對(duì)潛在的牙周病原體在牙根表面的寄居有影響，但放線菌也被發(fā)現(xiàn)大量存在于健康的齒齦下部位(這些發(fā)現(xiàn)與Liljemark等，微生物免疫8，1993，pp.5-15的內(nèi)容一致，Liljemark發(fā)現(xiàn)在牙周治療后，放線菌的比例明顯增加。Haffajee等在“牙周臨床雜志”24，1997，pp.767-776中通過(guò)對(duì)對(duì)最初的牙周治療反應(yīng)較好的個(gè)體的牙齦下牙斑的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)后得出結(jié)論，粘放線菌和T.denticola的數(shù)量相對(duì)豐富。材料粘放線菌HG85由A.J.vanWinkelhoff博士(口腔微生物系，ACTA)提供。Emdogain由BIORA提供(Malmo，瑞典)。RBS去污劑購(gòu)自Fluka(FlukaChemieAG，Buchs，瑞士)。細(xì)菌生長(zhǎng)和收獲粘放線菌從血瓊脂接種到Schaedler′s分批培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。該培養(yǎng)物被用來(lái)接種第二個(gè)培養(yǎng)基Schaedler′s肉湯，繼續(xù)培養(yǎng)16小時(shí)。離心收集細(xì)胞(5分鐘，6500xg)，用無(wú)離子水洗2次。隨后微生物在30W下用超聲波處理20秒(VibraCellmodel375,SonicsandMaterialsInc.,Danbury,CT,USA)打碎菌體鏈和聚集體。超聲處理及將菌體放入冰水混合物間隔進(jìn)行。使用Burker-Turker細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后將粘放線菌懸浮于粘附緩沖液(2mM磷酸鉀，50mM氯化鉀和1mM氯化鈣，pH6.8)中。玻璃板的包被玻璃板先用5％的RBS去污劑通過(guò)超聲波徹底洗凈，進(jìn)一步用自來(lái)水沖洗，然后再用甲醇洗滌，最后用蒸餾水沖洗。這些步驟使得水接觸角為零度。EMD用0.01M的醋酸溶解，濃度為7.5mg/ml。玻璃板用聚四氟乙烯記號(hào)筆(DAKOA/S，Glostrup，丹麥)分割成相等的兩部分。一邊加入醋酸(0.01M)，另一邊是250ug的EMD。玻璃板在一個(gè)流動(dòng)櫥柜中空氣干燥4-6小時(shí)。流動(dòng)試驗(yàn)本試驗(yàn)使用的流動(dòng)室和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)見(jiàn)圖3所示。在試驗(yàn)進(jìn)行以前，所有的試管及流動(dòng)室均加滿粘附緩沖液，應(yīng)該注意的是系統(tǒng)內(nèi)不能含有空氣氣泡。包被好的玻璃板組成流動(dòng)室的底部。流動(dòng)速度設(shè)置為2.5ml/min(與人體內(nèi)唾液的平均流動(dòng)速度相當(dāng))。細(xì)菌懸液在系統(tǒng)內(nèi)大約循環(huán)3-4小時(shí)，計(jì)數(shù)附著于基材上的的細(xì)菌數(shù)。共進(jìn)行3個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)。所有的試驗(yàn)均用每250ml粘附緩沖液含有3×108細(xì)胞進(jìn)行。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)于對(duì)照和EMD包被板上的6個(gè)預(yù)先確定的位置每隔10-15分鐘呈像一次。平行的流動(dòng)室的槽高度為0.6mm。數(shù)據(jù)分析在對(duì)所有圖象中的吸附細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)后，數(shù)據(jù)被轉(zhuǎn)變成每平方厘米細(xì)菌數(shù)。對(duì)于每一個(gè)實(shí)驗(yàn)，每平方厘米細(xì)菌最終數(shù)用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(對(duì)于成對(duì)觀察的Student′st-檢驗(yàn)，以n作為實(shí)驗(yàn)次數(shù))。結(jié)果實(shí)驗(yàn)1(圖4)顯示出特別是在流動(dòng)的最初150分鐘所粘附的微生物數(shù)量的逐漸增加。在這個(gè)時(shí)間段后，與EMD粘附的微生物的數(shù)量達(dá)到一個(gè)2.0×106個(gè)細(xì)菌/平方厘米的平臺(tái)期，這個(gè)數(shù)量比用醋酸處理的玻璃板的數(shù)量高4倍。在實(shí)驗(yàn)2中(圖5)，EMD也顯示出強(qiáng)烈的刺激粘放線菌與基材粘附的能力。然而，在實(shí)驗(yàn)開始的最初階段，這種效應(yīng)不是很明顯。也許這是由于此時(shí)流動(dòng)系統(tǒng)中微生物尚處在低濃度。90分鐘以后，與EMD粘附的細(xì)菌數(shù)量同對(duì)照相比逐漸增加，3小時(shí)后達(dá)到最大值1.6×106/每平方厘米，增加3倍。實(shí)驗(yàn)3(圖6)表明在流動(dòng)后5分鐘就已經(jīng)顯示出對(duì)粘放線菌附著于EMD包被的玻璃板的刺激作用。EMD在最初的45分鐘誘導(dǎo)附著微生物的數(shù)量快速增加。與乙酸處理的一面的附著作用也顯示出相似的情況，但相比之下所吸附的微生物的數(shù)量要少。200分鐘以后，對(duì)EMD包被板的附著比乙酸處理的表面上的附著高2倍。3個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)合在一起看，其差異證明是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p＜0.05)。從這些結(jié)果看出，EMD作為玻璃表面的一個(gè)包被物，在體外對(duì)于粘放線菌的附著有非常顯著的刺激效應(yīng)。盡管現(xiàn)在還沒(méi)有弄清是什么原因?qū)е逻@種增強(qiáng)的初始附著，但現(xiàn)在的假設(shè)是微生物與商購(gòu)的蛋白質(zhì)混合物中的琺瑯蛋白組分中富含的脯氨酸殘基相互作用。細(xì)菌的粘附作用一般是由特異的蛋白質(zhì)-肽和外源凝集素-碳水化合物的識(shí)別決定的。已知粘放線菌中的1型菌毛可以與富含脯氨酸的蛋白結(jié)合，例如唾液中的富含脯氨酸的蛋白(PRP)以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原。EMD和某些口腔微生物之間的特異性相互作用由于使得菌斑處的生態(tài)學(xué)發(fā)生改變因而對(duì)于口腔中生物膜的組成有重要作用。如果該種生態(tài)學(xué)的改變的方向是促使微生物不與牙周疾病相關(guān)，EMD的應(yīng)用就可以通過(guò)發(fā)揮這種效應(yīng)而改善牙周的情況。當(dāng)然，這一點(diǎn)是在EMD的其它有益效應(yīng)之外的。實(shí)施例4EMD在體外對(duì)突變鏈球菌附著速率的作用介紹已經(jīng)有大量的證據(jù)顯示菌斑微生物是引起例如牙周炎和齲齒的口腔疾病的原因。根據(jù)當(dāng)前齦上菌斑形成的模型，鏈球菌被認(rèn)為是牙齒表面的主要寄居者。因此菌斑的產(chǎn)生是由于細(xì)菌的生長(zhǎng)或其它種類的細(xì)菌的進(jìn)一步增加。這種增加可以經(jīng)細(xì)菌和細(xì)菌的結(jié)合而發(fā)生或由唾液分子介導(dǎo)。細(xì)胞外大分子的生成也促進(jìn)了菌斑的發(fā)生。突變鏈球菌現(xiàn)今被認(rèn)為是值得密切注意的生物膜種類細(xì)菌中的一種，因?yàn)樗c齲齒有關(guān)。盡管很多革蘭氏陽(yáng)性菌(即突變鏈球菌)已經(jīng)顯示出對(duì)限菌動(dòng)物引起牙槽骨損傷，但這些微生物似乎不是造成牙周袋的生態(tài)學(xué)的主要因素。然而，潛在的致病微生物一定可以逃避宿主防御和免疫機(jī)制從而對(duì)宿主組織造成損傷。材料突變鏈球菌NS由H.vanderMei博士惠贈(zèng)(材料技術(shù)，Groningen大學(xué))。EMDOGAIN由BIORA提供(Malmo，瑞典)。RBS去污劑購(gòu)自Fluka(FlukaChemieAG，Buchs，瑞典)。細(xì)胞生長(zhǎng)和收獲將突變鏈球菌從血瓊脂板上接種到分批培養(yǎng)基ToddHewitt肉湯中，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。該培養(yǎng)物用于第二次接種ToddHewitt肉湯，生長(zhǎng)16小時(shí)。離心收獲細(xì)胞(5分鐘6000xg)，無(wú)離子水洗兩次。最后微生物在30W下用超聲波處理20sec(VibraCellmode1375,SonicsandMaterialsInc.,Danbury,CT,USA)打碎菌體鏈和聚集體。超聲處理和即將菌體放入冰水混合物中間隔進(jìn)行。使用Burker-Turker細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后將突變鏈球菌懸浮于粘附緩沖液(2mM磷酸鉀，50mM氯化鉀和1mM氯化鈣，pH6.8)中。玻璃板的包被玻璃板先用5％的RBS去污劑通過(guò)超聲波徹底洗凈，進(jìn)一步用自來(lái)水沖洗，然后再用甲醇洗滌，最后用蒸餾水沖洗。這些步驟使得水接觸角為零度。EMD用0.01M的醋酸溶解，濃度為7.5mg/ml。玻璃板用聚四氟乙烯記號(hào)筆(DAKOA/S，Glostrup，丹麥)分割成相等的兩部分。一邊加醋酸(0.01M)，另一邊是250ug的EMD。玻璃板在一個(gè)空氣流動(dòng)的櫥柜中干燥4-6小時(shí)。流動(dòng)試驗(yàn)本試驗(yàn)使用的流動(dòng)室和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)見(jiàn)圖3所示。在試驗(yàn)進(jìn)行以前，所有的試管及流動(dòng)室均加滿粘附緩沖液，應(yīng)該注意的是系統(tǒng)內(nèi)不能含有空氣氣泡。包被好的玻璃板組成流動(dòng)室的底部。流動(dòng)速度設(shè)置為2.5ml/min(與人體內(nèi)唾液的平均流動(dòng)速度相當(dāng))。細(xì)菌懸液在系統(tǒng)內(nèi)大約循環(huán)3-4小時(shí)，計(jì)數(shù)附著于包被的基材的細(xì)菌數(shù)。共進(jìn)行3個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)。所有的試驗(yàn)均用每250ml粘附緩沖液含有3×108細(xì)胞進(jìn)行。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)于對(duì)照和EMD包被板上的6個(gè)預(yù)先確定的位置每隔10-15分鐘呈像一次。平行的流動(dòng)室的槽高度為0.6mm。數(shù)據(jù)分析在對(duì)所有圖象中的附著細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)后，數(shù)據(jù)被轉(zhuǎn)變成每平方厘米細(xì)菌的數(shù)量。對(duì)于每一個(gè)實(shí)驗(yàn)，每平方厘米細(xì)菌最終數(shù)量用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(對(duì)成對(duì)觀察的Student′st-檢驗(yàn)，以n作為實(shí)驗(yàn)次數(shù))。結(jié)果在三個(gè)實(shí)驗(yàn)中的每一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，EMD顯示出對(duì)突變鏈球菌附著速率的抑制作用(圖7,8,9；p＜0.05)。與乙酸處理的對(duì)照相比抑制大約為40-70％。第一個(gè)實(shí)驗(yàn)(圖7)顯示出在流動(dòng)開始10分鐘后就已經(jīng)顯示出附著于EMD包被的玻璃板附著的突變鏈球菌的數(shù)量受到抑制。3小時(shí)后，附著被抑制為對(duì)照的大約60％。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中(圖8)，流動(dòng)開始1.5小時(shí)后，EMD開始抑制突變鏈球菌的附著。附著于EMD的突變鏈球菌數(shù)量在流動(dòng)開始后大約40分鐘達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期，500000個(gè)/cm2。大約3.5小時(shí)后，計(jì)數(shù)大約是對(duì)照的25％。第三個(gè)實(shí)驗(yàn)(圖9)顯示出從流動(dòng)程序一開始，在EMD的影響下對(duì)突變鏈球菌附著的抑制作用就存在。如實(shí)驗(yàn)1所示，流動(dòng)3小時(shí)后，抑制達(dá)到對(duì)照的大約60％。本發(fā)明的研究顯示出EMD對(duì)突變鏈球菌在玻璃表面的附著有明顯的抑制作用。對(duì)這種抑制作用的一種可能的解釋是EMD混合物中疏水性化合物的存在。在混合物中大量存在的蛋白之一是琺瑯蛋白，該蛋白除包含一個(gè)酸性親水性C-端序列外，還包括一個(gè)富含脯氨酸，亮氨酸，蛋氨酸和谷氨酰胺的100-300個(gè)殘基的疏水核心部分。Saito等在“口腔生物學(xué)報(bào)，42，1997，pp.539-545”報(bào)導(dǎo)發(fā)現(xiàn)各種突變鏈球菌菌株對(duì)固定化疏水性蛋白(OAIS)的附著受到抑制。作者將這種效應(yīng)歸因于微生物細(xì)胞表面的負(fù)電荷(突變鏈球菌即是如此)。其它一些表面特征也可以參與受影響的對(duì)基材的附著作用。突變鏈球菌包含一個(gè)表面抗原Ⅰ/Ⅱ，它具有特別富含丙氨酸的N-端部分和并包括串聯(lián)重復(fù)。這種區(qū)域預(yù)測(cè)為α-螺旋，它采取一種卷曲構(gòu)象，這可能是與抗原Ⅰ/Ⅱ表達(dá)有關(guān)的細(xì)胞表面疏水性的原因。實(shí)施例5EMD對(duì)一些牙周病原體生長(zhǎng)的效應(yīng)中間普雷沃氏菌和牙齦卟啉單胞菌在補(bǔ)加0.5mg/ml維生素K和5mg/ml血晶素的硫代乙醇酸鹽肉湯培養(yǎng)基中，在通過(guò)GasPakPlus封袋在適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵罐中產(chǎn)生的厭氧氣氛下預(yù)培養(yǎng)10-16小時(shí)。當(dāng)培養(yǎng)物的OD600值達(dá)到0.1-0.2，即相應(yīng)的細(xì)胞密度至106-107cfu/ml(菌落形成單位)時(shí)，吸出100微升等份，菌體經(jīng)離心沉淀。菌體沉淀用100微升新鮮配制的人血清和無(wú)菌鹽水的混合物重懸，包含105-106個(gè)細(xì)胞的懸浮液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌的1.5ml的Eppendorf管中，與(ⅰ)100微升的EMD制備物(溶解在0.1mlPGA中的3mgEMD)，(ⅱ)100微升的PGA載體或(ⅲ)100微升的血清/NaCl溶液混合物混合作為生長(zhǎng)對(duì)照。0,3,6,24小時(shí)后分別取10微升培養(yǎng)液進(jìn)行生長(zhǎng)測(cè)定。吸取的等份用無(wú)菌0.9％的NaCl溶液系列稀釋，每個(gè)稀釋度取10微升涂在Schaedler瓊脂上。培養(yǎng)條件與預(yù)培養(yǎng)條件相同。瓊脂板培養(yǎng)3-4天，隨后測(cè)定cfu和細(xì)胞密度(cfu/ml)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次。結(jié)果(以相對(duì)于開始時(shí)cfu/ml濃度百分比表示)1)不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照培養(yǎng)物<tablesid="table1"num="001"><table>03小時(shí)6小時(shí)24小時(shí)中間普雷沃氏菌1001602510牙齦卟啉單胞菌100100125150</table></tables>2)在PGA載體存在時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)物<tablesid="table2"num="002"><table>03小時(shí)6小時(shí)24小時(shí)中間普雷沃氏菌1001402510牙齦卟啉單胞菌10075505</table></tables>3)在EMD存在時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)物<tablesid="table3"num="003"><table>03小時(shí)6小時(shí)24小時(shí)中間普雷沃氏菌1004000牙齦卟啉單胞菌1003000</table></tables>與僅使用載體或不添加EMD的對(duì)照相比，EMD的存在顯著抑制培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。實(shí)施例6對(duì)EMODGAIN在牙周手術(shù)后改善軟組織傷口愈合效應(yīng)的研究本實(shí)施例的目的是顯示在牙周手術(shù)后釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白對(duì)改善軟組織傷口愈合的影響。50個(gè)以上獼猴牙齒的牙周邊緣的實(shí)驗(yàn)損傷是通過(guò)除去牙骨質(zhì)，牙周膜和邊緣牙槽骨后造成一個(gè)頸-尖距離大約5mm的牙齒毛刺。將釉基質(zhì)衍生物(購(gòu)自EMODGAIN，未重配的凍干粉末或重配的組合物)加入實(shí)驗(yàn)損傷處，或不加任何物質(zhì)(對(duì)照)。在重配的組合物中蛋白質(zhì)的含量大約是5-30mg/ml，每個(gè)實(shí)驗(yàn)損傷所加的體積介于大約0.1到0.2毫升。傷口愈合在接下來(lái)的8周內(nèi)通過(guò)目測(cè)進(jìn)行評(píng)價(jià)。在給藥EMODGAIN的損傷處，可觀察到很好的愈合效果(無(wú)紅色和腫脹)，給藥2周后拆線時(shí)幾乎看不到斑，5周后可見(jiàn)良好的愈合，幾乎無(wú)牙齦炎，8周即實(shí)驗(yàn)終止時(shí)完全愈合無(wú)任何并發(fā)癥。相比之下，對(duì)照傷口2周后出現(xiàn)炎癥，并伴有收縮和明顯斑，5周和8周后出現(xiàn)明顯的收縮和牙齦炎。實(shí)施例7對(duì)牙周手術(shù)后釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白的傷口愈合效應(yīng)的研究本發(fā)明的目的是顯示牙周手術(shù)后釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)病人的快速傷口愈合的影響。需要進(jìn)行牙周手術(shù)的55個(gè)病人被分成兩組，一種進(jìn)行常規(guī)的手術(shù)并使用改進(jìn)過(guò)的Widman牙周翻瓣術(shù)(20個(gè)病人)，另一組使用相同的步驟但附加使用EMODGAIN(35個(gè)病人)(濃度為30mg蛋白/ml，每個(gè)牙齒大約使用0.3ml)。在手術(shù)時(shí)沒(méi)有病人使用抗生素，但所有人均被指導(dǎo)每天使用無(wú)菌(洗必太)漱口水。在拆線時(shí)(手術(shù)后1-3周)每個(gè)病人被詢問(wèn)問(wèn)題。盡管3個(gè)對(duì)照組病人(15％)出現(xiàn)術(shù)后問(wèn)題需要使用抗生素，但僅有一個(gè)使用EMODGAIN處理的病人需要此種治療。實(shí)施例8拔牙后釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白的傷口愈合效應(yīng)的研究本實(shí)施例的目的是為了證明在第三磨牙摘除后釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)傷口愈合的影響。30歲或大于30歲的需要摘除對(duì)稱阻生或半阻生下頜第三磨牙的病人采用傳統(tǒng)方法進(jìn)行一個(gè)第三磨牙的摘除，該方法涉及垂直向翻瓣術(shù)以進(jìn)行必要的骨切除術(shù)和切開，而另一個(gè)磨牙摘除后牙槽在縫合前添滿EMODGAIN。所有的病人在手術(shù)前1-2小時(shí)使用抗生素(3g羥氨芐青霉素或1g紅霉素)，手術(shù)后使用lbuprofen(600mg×3)。然后他們被指導(dǎo)使用洗必太漱口(0-1％，10ml×2)4周。2周后拆線。用EMODGAIN處理和對(duì)照位置的愈合情況由病人和牙科醫(yī)生共同評(píng)價(jià)。在一個(gè)中心，9個(gè)病人對(duì)側(cè)摘除后使用/不使用EMODGAIN處理。一個(gè)病人在兩個(gè)位置的縫合處均有輕微疼痛，而其它病人僅在對(duì)照位置有嚴(yán)重痛覺(jué)，而在EMODGAIN處理的位置無(wú)任何問(wèn)題。在第二個(gè)中心，6個(gè)病人中的3個(gè)僅在對(duì)照位置有疼痛。最終在第三個(gè)中心，一個(gè)病人被診斷為對(duì)照位置的牙槽有嚴(yán)重問(wèn)題，即牙槽炎，EMODGAIN處理的位置無(wú)問(wèn)題。另一個(gè)病人在兩個(gè)摘除的縫合處均有輕微疼痛，但只有對(duì)照處出現(xiàn)炎癥和明顯疼痛，需要反復(fù)用鹽水沖洗并攝入止痛劑。這些臨床結(jié)果顯示出在智齒被摘除后采用EMODGAIN處理牙槽可以改善愈合并緩解其它情況下經(jīng)常出現(xiàn)的疼痛性腫脹。實(shí)施例9釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)干痛牙槽炎愈合效應(yīng)的研究本實(shí)施例的目的是顯示釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)干痛牙槽炎(干槽癥)愈合的影響。在摘除一個(gè)70歲的男性患者的一個(gè)感染的35牙根殘余物后，病人經(jīng)歷了與摘除牙槽有關(guān)的劇烈疼痛和腫脹。當(dāng)他的牙科醫(yī)生為他檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)他已經(jīng)發(fā)展成干痛牙槽炎，即最初的凝結(jié)物已經(jīng)分離，牙槽骨壁壞死。鄰接的牙槽骨和軟組織出現(xiàn)炎癥。該病人有心臟病史，曾采用抗凝劑Marevan進(jìn)行治療。作為其病況的結(jié)果，他的外周血循環(huán)降低。他還經(jīng)常每天吸多支煙。病人的牙槽炎按照傳統(tǒng)方法除去壞死牙槽骨，導(dǎo)致新出血。而且病人的齒齦松動(dòng)，采用縫合術(shù)封閉牙槽。而后對(duì)病人使用青霉素(apocillin660mg，早晚共2片，使用7天)以防止感染，同時(shí)建議病人使用洗必太每天漱口兩次。5天后停用抗生素時(shí)病人仍顯示出臨床癥狀并抱怨有嚴(yán)重疼痛。對(duì)手術(shù)處進(jìn)行肉眼觀察，觸摸和探測(cè)顯示出牙槽炎持續(xù)存在并出現(xiàn)更多的骨壞死。X-射線顯示骨破壞和壞死均出現(xiàn)在牙槽的頂點(diǎn)部分。手術(shù)處被再一次清理干凈，所產(chǎn)生的骨損害處用EMODGAIN添滿(30mg/m1，最多使用0.5m1)，在齒齦處使用新的縫合以封閉牙槽。未再采用其它的治療方法，但病人被告知繼續(xù)用洗必太漱口。兩天后病人回到診所報(bào)告說(shuō)疼痛和腫脹均消失。臨床檢查和在EMODGAIN處理一周后拆線顯示出良好的愈合效果，沒(méi)有炎癥和壞死的跡象，沒(méi)有紅色和腫脹的完整的齒齦覆蓋傷口區(qū)域。當(dāng)觸摸和探測(cè)時(shí)沒(méi)有流血和疼痛感。觀察不到惡臭或怪味或滲出液。病人沒(méi)有報(bào)告有任何痛覺(jué)和發(fā)現(xiàn)其它癥狀。實(shí)施例10釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)干痛牙槽炎的預(yù)防效應(yīng)的研究本實(shí)施例的目的是顯示釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白抗干痛牙槽炎的預(yù)防效應(yīng)。一個(gè)82歲的女性病人患有44號(hào)牙垂直根斷裂。該牙齒是跨越35號(hào)到46號(hào)牙的橋梁的支柱，病人曾在很多年以前接受牙髓治療。臨床上，牙齒周圍的牙齦出現(xiàn)炎癥，有一個(gè)牙齦袋沿著垂直方向直至牙齒的頂端。X-射線顯示44號(hào)牙的嚴(yán)重局部牙周炎。該病人有很好的口腔衛(wèi)生，但由于使用Marevan(抗凝劑)治療心臟病，牙槽在觸探時(shí)很容易造成流血。6個(gè)月以前，病人由于嚴(yán)重的牙周炎通過(guò)手術(shù)摘除了第35號(hào)牙。那次手術(shù)后她經(jīng)歷了長(zhǎng)時(shí)間的干痛牙槽炎。她非常關(guān)心的是44號(hào)牙的摘除會(huì)不會(huì)導(dǎo)致她曾經(jīng)經(jīng)歷的相同的術(shù)后并發(fā)癥。她被告知由于年齡大，使用過(guò)Marevan進(jìn)行治療和感染的牙根和牙齦袋的合并作用將使得她遭受術(shù)后綜合癥例如牙槽炎的危險(xiǎn)性大大增加，而除了手術(shù)除去牙根碎片外無(wú)其它辦法。該病人同意將44號(hào)牙摘除并且作為實(shí)驗(yàn)使用EMODGAIN進(jìn)行預(yù)防治療以阻止干痛牙槽炎的發(fā)生。病人在麻醉后被實(shí)施切口和摘除面頰骨，以使在不松動(dòng)(牙齒)間橋的情況下摘除牙根碎片。摘除后牙槽經(jīng)機(jī)械清洗后添滿EMODGAIN(30mg/ml，最多使用0.5ml)，通過(guò)縫合使瓣重新復(fù)位。當(dāng)天晚上病人報(bào)告(通過(guò)電話)在手術(shù)區(qū)域有長(zhǎng)時(shí)間流血(手術(shù)前未停止使用Marevan)，但無(wú)其它癥狀。當(dāng)手術(shù)5天后拆線時(shí)，手術(shù)過(guò)的軟組織損傷完全愈合。病人沒(méi)有報(bào)告有任何例如疼痛或腫脹的癥狀，對(duì)此治療大體上非常滿意。實(shí)施例11釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)外傷后并發(fā)癥的愈合效應(yīng)本實(shí)施例的目的是為了顯示釉質(zhì)蛋白/釉基質(zhì)衍生物對(duì)病人外傷后并發(fā)癥愈合的影響。在一次意外事故后，病人在一個(gè)急診所將受傷的上前牙進(jìn)行連接。牙科醫(yī)生發(fā)現(xiàn)11和21號(hào)牙齒死亡，12和22號(hào)牙齒有Ⅰ或Ⅱ類近中切骨折。邊緣齦出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥，與牙齒表面的附著非常差。病人有疼痛和麻木，腫脹和味嗅覺(jué)不好的并發(fā)癥。在11和21號(hào)牙的根尖區(qū)還出現(xiàn)牙周膜損傷。兩個(gè)中切牙被清潔，將新鮮混合的Ca(OH)2添滿牙根。4個(gè)星期后，傷口的愈合仍被判斷為不理想。情況發(fā)展成一種慢性炎癥，牙齒被視作失去。對(duì)于此種情形的標(biāo)準(zhǔn)的治療方法是取出全部4個(gè)切牙并用間橋或植入物代替。然而，病人強(qiáng)烈反對(duì)這種治療方法，作為保存牙齒的最后努力，對(duì)所有四個(gè)受傷的牙齒(11,12,21,22)進(jìn)行齦翻瓣術(shù)。使用了兩瓶EMODGAIN(60mg在3ml溶液中)。在瓣用7針縫合以前，用注射器向每個(gè)牙齒內(nèi)注入至多0.2ml的EMODGAIN(30mg/ml)。手術(shù)5天后拆除4針縫合線。在主觀和臨床條件下均有顯著改善。病人不再抱怨疼痛，麻痹的感覺(jué)消失，傷口區(qū)域不再有惡臭味。兩周后拆除剩余的縫合線，齒齦不顯示任何炎癥，病人沒(méi)有任何抱怨。齒齦完好無(wú)任何炎癥，它牢牢的與牙齒和/或牙槽骨附著，顏色為粉色(沒(méi)有炎癥區(qū)域內(nèi)存在的鮮紅色)，存在正常的牙齒間突起(非腫脹)。而且觀察到牙齒受傷部分的牙周膜重新出現(xiàn)，顯示出很好的改善效果，通過(guò)X-射線檢查可以觀察到新的牙槽骨沉積。實(shí)施例12相鄰牙齒和神經(jīng)的外傷愈合病例報(bào)告一個(gè)39歲的女性病人其下方左側(cè)的智齒(38)的周圍患有嚴(yán)重的冠周炎。在公共牙科診所其牙齒被部分摘除，在下顎留有牙齒的根尖部分，并伴有手術(shù)造成的根部骨折。由于疼痛，第二天，該病人給推薦到一個(gè)牙科手術(shù)的專家處以除去牙根碎片。手術(shù)后兩天，病人去見(jiàn)她的常務(wù)牙科醫(yī)生進(jìn)行處置。她的面頰左側(cè)腫脹，并且其左側(cè)下頜骨神經(jīng)顯示出持續(xù)的和完全的阻滯。臨床檢查和X-射線照片顯示手術(shù)時(shí)對(duì)下頜骨、37號(hào)牙齒的牙根末梢的三分之一根尖和下頜神經(jīng)槽造成嚴(yán)重的鉆開損害(見(jiàn)X-射線照片，圖1A)。對(duì)37號(hào)牙齒的探洞深度穿越末梢根部至牙冠頂端為25mm。為了誘導(dǎo)37號(hào)牙齒的骨骼和神經(jīng)的愈合和失去的牙周膜的再生，手術(shù)傷口被打開并仔細(xì)清理干凈。當(dāng)用鹽水去除殘余碎片后，37號(hào)牙齒暴露的骨頭，末梢根部的表面和下頜神經(jīng)使用EMODGAIN(30mg/ml，過(guò)量提供，約1ml)覆蓋，然后將傷口使用三針縫合在一起。病人被指導(dǎo)使用洗必太溶液(Corsodyl)在接下來(lái)的5天里每天漱口兩次，并開始使用青霉素(氨卞青霉素，660mg×4)進(jìn)行為期5天的預(yù)防治療。10天后，病人返回，拆除縫合線。此時(shí)腫脹消失，軟組織的愈合良好。然而下頜神經(jīng)的完全麻痹仍然存在，病人被告知其受損傷的神經(jīng)的前景至多是難以預(yù)料的。此時(shí)麻痹使得37號(hào)牙齒的存活難以預(yù)料。通常情況下，象這個(gè)病人呈現(xiàn)出來(lái)的根部損傷會(huì)導(dǎo)致牙髓壞死和牙齒僵硬。為了阻止這種并發(fā)癥，需要進(jìn)行牙髓治療。然而為了看到所使用的實(shí)驗(yàn)治療是否可以促進(jìn)牙周膜的愈合，病人同意此時(shí)不對(duì)牙齒進(jìn)行治療。此后病人被安排每月接受一次處置。上述處置兩個(gè)月后，病人左側(cè)下嘴唇出現(xiàn)過(guò)敏感覺(jué)，顯示出神經(jīng)愈合的跡象。37-38號(hào)牙之間區(qū)域的軟組織完全愈合無(wú)任何傷疤。X-射線也顯示出在摘除位置的牙槽出現(xiàn)新骨的形成。但37號(hào)牙齒和其周圍組織仍處于麻痹狀態(tài)。治療后四個(gè)月，麻痹消失，牙齒被證實(shí)存活，但處于過(guò)敏狀態(tài)，對(duì)溫度和電刺激均敏感。X-射線顯示摘除位置的牙槽明顯被骨填充，37號(hào)牙齒的根部末梢顯示出牙周再生的跡象。在使用EMODGAIN治療后5個(gè)月，37號(hào)牙齒的存活經(jīng)檢測(cè)正常。此時(shí)通過(guò)X-射線可以證實(shí)有功能的牙周膜的完全再生(圖1B)和正常外觀的新形成的牙槽骨已經(jīng)添滿骨骼缺損和摘除位置的牙槽。沒(méi)有僵硬的跡象。37號(hào)牙末梢的孔洞探測(cè)深度現(xiàn)僅約10mm，在釉質(zhì)牙骨質(zhì)界之下約1mm。經(jīng)過(guò)這種處置后，病人被認(rèn)為完全康復(fù)，只安排每一年一次的常規(guī)復(fù)診。評(píng)價(jià)在手術(shù)去除智齒后相鄰牙齒和神經(jīng)外傷的完全和快速愈合是很少見(jiàn)的。經(jīng)常出現(xiàn)的嚴(yán)重程度如上所述的并發(fā)癥往往以被損傷牙齒的完全摘除而結(jié)束，或者至少也是牙髓的去除和牙根填充，隨后出現(xiàn)伴有僵硬的骨愈合。受損傷的神經(jīng)一般需要8到12個(gè)月才能愈合，即使如此經(jīng)常在一些區(qū)域會(huì)出現(xiàn)麻痹現(xiàn)象，而且維持?jǐn)?shù)年。上文報(bào)道的良好和快速的愈合是非常少見(jiàn)的，應(yīng)被認(rèn)為是EMODGAIN傷口愈合能力的一個(gè)體現(xiàn)。X-射線A38號(hào)牙摘除后兩天的病人。注意到存在于牙齒37遠(yuǎn)中端的大的缺損并累及下頜管。而且37號(hào)牙齒遠(yuǎn)中頰的牙槽骨在手術(shù)中被摘除。B手術(shù)后5個(gè)月的病人。注意到在37號(hào)牙齒遠(yuǎn)在中根損傷處完全的、有功能的牙周膜(laminadura)跡象。沒(méi)有僵硬的跡象。此時(shí)可以看到下頜管的輪廓，并且摘除位置的牙槽完全被骨添滿。同時(shí)也觀察到37號(hào)牙周圍有新的遠(yuǎn)中頰牙槽骨的形成。實(shí)施例13釉基質(zhì)衍生物和釉基質(zhì)蛋白對(duì)小腿部潰瘍(靜脈潰瘍)愈合效應(yīng)的研究病人1病人為男性，生于1926年，有血栓病史和很嚴(yán)重的血栓后遺癥和反復(fù)發(fā)作的靜脈潰瘍。他采用過(guò)抗凝集香豆素衍生物的系統(tǒng)治療，潰瘍?cè)诰植渴褂肅rupodex(右旋糖單體)和3％的硼酸溶液治療。在開始啟動(dòng)EMODGAIN治療以前他的靜脈潰瘍?yōu)橐粋€(gè)橢圓形，大小5×4cm，深度為0.5mm，病程處于肉芽化階段，有很差的上皮化。傷口用3％的雙氧水消毒后，將500微升的EMODGAIN滴加施用并用無(wú)菌的拭子均勻鋪開。EMODGAIN在空氣中暴露10分鐘，然后傷口用10％的Prvidone碘藥膏浸濕的Inadine(Johnson&amp;Johnson)Rayon敷料覆蓋。5天后，在最接近潰瘍的位置出現(xiàn)上皮形成，潰瘍面減少至1.8×2.2cm，無(wú)任何副反應(yīng)(炎癥)。不再加EMODGAIN。12天后在最接近潰瘍的位置出現(xiàn)進(jìn)一步的上皮化，并且側(cè)部出現(xiàn)新的上皮化，面積大約為2×2cm。大約一半的潰瘍得到愈合。使用400微升的EMODGAIN。19天后在最接近潰瘍的位置和其側(cè)面出現(xiàn)進(jìn)一步的上皮化，但在遠(yuǎn)端部分未上皮化，潰瘍很深(大約1mm)。一半以上的潰瘍得到愈合。繼續(xù)使用300微升的EMODGAIN。自從啟動(dòng)了EMODGAIN的治療，病人與這種治療開始以前相比不再感覺(jué)潰瘍處有疼痛感。EMODGAIN再繼續(xù)每周使用一次至第40天(200微升)，在47天后潰瘍被認(rèn)為全部愈合。病人2該病人為女性，生于1949年，患有血管曲張，長(zhǎng)期靜脈供血不全和反復(fù)發(fā)作的靜脈潰瘍。她對(duì)于藥物(藥物，藥劑)多價(jià)過(guò)敏并靜脈曲張(excemavaricosum)。該病人曾使用Otosporin滴劑(硫酸多粘菌素B+硫酸新霉素+氫化可的松)和氫化可的松敷布接受過(guò)局部治療。在啟動(dòng)使用EMODGAIN治療時(shí)，她的靜脈潰瘍是直徑1cm，深度2mm。使用300微升的EMODGAIN。5天后，在傷口周圍(周長(zhǎng))2mm的范圍內(nèi)出現(xiàn)上皮化，無(wú)任何副反應(yīng)(炎癥)。此時(shí)不再使用EMODGAIN。12天后，潰瘍縮小到直徑大約2mm，此時(shí)再使用100微升的EMODGAIN。19天后潰瘍?nèi)詾橹睆?mm，但底部很好地肉芽化，潰瘍不再很深(僅大約0.2mm)。使用100微升的EMODGAIN。同樣是該病人在另一條腿出現(xiàn)一個(gè)大約0.3×1cm的潰瘍。此時(shí)使用200微升的EMODGAIN。7天后，出現(xiàn)新的上皮化，底部出現(xiàn)良好的肉芽化，潰瘍面積縮小到大約0.2×0.5cm。隨后針對(duì)每一個(gè)潰瘍每周使用100微升EMODGAIN直至第40天。47天后，潰瘍被認(rèn)為全部愈合。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)EMODGAIN的過(guò)敏反應(yīng)。在同一條腿上又形成另一個(gè)潰瘍，面積為0.5×0.3cm，使用了100微升EMODGAIN進(jìn)行治療。病人3該病人為女性，1929年生，患有丹毒后出現(xiàn)的嚴(yán)重靜脈血栓，在啟動(dòng)EMODGAIN治療前有15×19cm的大面積小腿潰瘍，并且由于使用了各種治療方法后幾乎沒(méi)有效果，病程處于發(fā)展中。700微升的EMODGAIN作用于從上邊開始3cm的面積。7天后沒(méi)有出現(xiàn)上皮生成，但治療區(qū)域變得更透明(更結(jié)構(gòu)類似)，并伴有小的分散區(qū)域的肉芽化，在這一區(qū)域無(wú)疼痛感和進(jìn)展現(xiàn)象。再使用700微升的EMODGAIN作用于同一區(qū)域。4周后，病人在未使用EMODGAIN治療的潰瘍遠(yuǎn)端出現(xiàn)感染，被確認(rèn)為假單胞菌所致。加入700微升的EMODGAIN。感染7天后消失。病人4該病人為女性，1947年出生，患有血管曲張和丹毒后引起的血栓性靜脈炎，在啟動(dòng)EMODGAIN治療時(shí)，她有一個(gè)面積為2×0.8cm的小腿潰瘍，潰瘍底部清潔但沒(méi)有肉芽化。先使用300微升的EMODGAIN。7天后，潰瘍面積減少至0.3×0.7cm，表皮生成開始出現(xiàn)，底部開始出現(xiàn)肉芽化。再使用200微升的EMODGAIN，隨后每周使用100微升EMODGAIN，共五周。潰瘍?cè)?周后被認(rèn)定全部愈合。實(shí)施例14EMODGAIN作為一種輔助物對(duì)平坦表面位置上的非手術(shù)牙周治療目的本研究的目的是評(píng)價(jià)EMODGAIN是否可以用于改善非手術(shù)牙周治療的愈合結(jié)果。本研究的特殊目的是評(píng)價(jià)在平表面位置上的效應(yīng)。研究設(shè)計(jì)本研究是針對(duì)一個(gè)個(gè)體在6個(gè)月的時(shí)間里的垂直試驗(yàn)進(jìn)行的。本研究采取雙盲，分說(shuō)(split-mouth)，安慰劑對(duì)照和隨機(jī)的設(shè)計(jì)。受檢者Goteborg大學(xué)的牙科學(xué)系中的14個(gè)病人被視做牙科臨床病人，需要對(duì)他們的中等嚴(yán)重程度的牙周疾病進(jìn)行治療。包括的標(biāo)準(zhǔn)在探測(cè)袋深度≥5mm的2個(gè)對(duì)側(cè)四分體的每一個(gè)，至少有3個(gè)平坦的牙齒表面部位，其中至少一對(duì)部位的探測(cè)袋深度≥6mm所選擇的牙齒必須有通過(guò)熱或電刺激確定為存活的牙髓，或者，如果進(jìn)行牙根管治療，必須是無(wú)癥狀的和沒(méi)有技術(shù)remars的。治療在進(jìn)行完基本檢查后，所有病人被告知疾病情況并被指導(dǎo)使用恰當(dāng)?shù)凝l上斑控制措施。進(jìn)行定位和牙根設(shè)計(jì)。當(dāng)袋流血停止時(shí)，24％的EDTA(購(gòu)自BioraAB，瑞典)作用于袋2分鐘。待用鹽水仔細(xì)清洗后加入測(cè)試物質(zhì)(EMODGAIN)或者對(duì)照物質(zhì)(PGA凝膠)。評(píng)估基線測(cè)定，1,2,3,8和24周跟蹤檢查包括以下變量1．口腔衛(wèi)生情況-出現(xiàn)或/沒(méi)有牙斑2．牙齦情況-(牙齦指數(shù)；Loe1967)3．探測(cè)袋深度4．探測(cè)附著水平5．探測(cè)出血-出現(xiàn)/未出現(xiàn)(15秒)6．牙質(zhì)超敏-鼓風(fēng)機(jī)刺激7．不舒適程度-在1,2和3周跟蹤檢查記錄，使用一個(gè)10cm＜＜視覺(jué)類似水平(VAS)牙斑平均值(sd)牙齦指數(shù)；平均值(sd)探測(cè)出血；％病人主觀評(píng)價(jià)；VAS得分第一周第三周結(jié)論病人僅有很輕的術(shù)后問(wèn)題，流血少，牙斑少，并有改進(jìn)的牙齦指數(shù)。這一結(jié)果支持了EMODGAIN對(duì)傷口愈合的效應(yīng)。實(shí)施例15豬中先導(dǎo)傷口愈合研究介紹目的該先導(dǎo)研究的目的是評(píng)價(jià)豬中深度裂口傷口的愈合和EMD對(duì)這些傷口的效應(yīng)選擇該種動(dòng)物物種的原因豬作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ捅贿x出是因?yàn)樵摲N動(dòng)物已被證實(shí)是評(píng)價(jià)人的傷口愈合的一個(gè)良好模型。材料和方法動(dòng)物本實(shí)驗(yàn)將在4個(gè)雌性SPF豬(丹麥鄉(xiāng)村雜交種，Yorkshire和Duroc)上進(jìn)行。在觀察初期動(dòng)物的體重大約35kg。觀察期需要1周，其間每天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行觀察以淘汰身體狀況不好的個(gè)體。所有的觀察需要記錄。飼養(yǎng)舍本研究在有濾過(guò)空氣供給，溫度21℃±3℃，濕度55％±15％和空氣變化10次/小時(shí)的動(dòng)物舍中進(jìn)行。室內(nèi)提供一個(gè)每天12小時(shí)照明和12小時(shí)黑暗的循環(huán)的條件。照明時(shí)間是從6點(diǎn)到18點(diǎn)。動(dòng)物在隔離欄中分開飼養(yǎng)。草墊草墊為軟木鋸屑”LIGNOCELH3/4”，購(gòu)自Hahn&amp;Co，D-24796Bredenbek-Kronsburg。對(duì)相關(guān)的可能污染物需要進(jìn)行定期分析。食物一種商購(gòu)豬食“Altromin”購(gòu)自Chr.PetersonA/S，DK-4100。食物按份提供(大約800g，每天2次)。對(duì)食物中主要的營(yíng)養(yǎng)成分和相關(guān)的可能性污染物的分析定期進(jìn)行。飲用水動(dòng)物每天被提供2次家庭質(zhì)量的飲用水。對(duì)相關(guān)的可能性的污染物的分析定期進(jìn)行。傷口傷口在第一天建立。動(dòng)物用StresnilVet.Janssen，比利時(shí)(40mgazaperone/ml，1ml/10kg)，和AtropinDAK，丹麥(1mg阿托品/ml，0.5mg/10kg)進(jìn)行一次肌肉內(nèi)注射而麻醉，，緊接著靜脈注射HypnodilJanssen，比利時(shí)(50mgmetomidate/ml，大約2ml)。動(dòng)物背部任何一面的一個(gè)側(cè)面區(qū)域被切開，用肥皂和清水洗滌，70％的乙醇消毒，無(wú)菌鹽水沖洗，最后用滅菌紗布敷干。使用ACCU-Dermatom(GA630，Aesculap)在制備區(qū)域獲得8個(gè)深度裂口傷口(25×25×0.4mm)，其中每四個(gè)位于脊柱的一側(cè)。動(dòng)物左側(cè)的傷口被編號(hào)為1(從頭部開始)至4(尾部)號(hào)，動(dòng)物右側(cè)的傷口被編號(hào)為4(從頭部開始)至8(尾部)號(hào)。凝集的血液用滅菌紗布除去。在即將手術(shù)前，手術(shù)停止后約8小時(shí)，和其后必要時(shí)的任何時(shí)間給動(dòng)物肌內(nèi)注射AnorfinA/SGEA，丹麥(0.3mg丁丙諾啡叔丁啡/ml，0.04ml/kg)。劑量受傷后傷口將按以下方式處理A=對(duì)照B=EMD在用藥前大約15分鐘，EMD配制品按照生產(chǎn)商的指導(dǎo)進(jìn)行制備。EMD配制品在制備后2小時(shí)使用。對(duì)于傷口的B治療，EMD將作為一個(gè)薄層作用于傷口表面。每4個(gè)傷口使用1瓶EMD。傷口敷料傷口用Tegaderm覆蓋。該敷料用無(wú)菌紗布覆蓋，F(xiàn)ixomul固定。敷料，紗布和Fixomul被網(wǎng)狀襪Bend-a-rete(Tesval，意大利)保持。每天觀察敷料的情況。敷料將在第二天(所有動(dòng)物)和第3天(動(dòng)物編號(hào)3和4)更換。在每次更換以前在動(dòng)物頸部肌肉注射Zoletil50Vet.，Virbac，法國(guó)(125mg替來(lái)他明和125mgzolazepam，溶解在5ml溶劑中，5ml)，RompunVet.，Bayer，德國(guó)(20mg甲苯噻嗪/ml，6.5ml)和MethadonDAK，丹麥(10mg美沙酮/ml，2.5ml)的混合物(1.0ml/10kg體重)而麻醉。傷口的觀察所有傷口分別在第二天(所用動(dòng)物)，第三天(所有動(dòng)物)和第四天(動(dòng)物編號(hào)3和4)進(jìn)行觀察和照相。滲出液和炎癥的水平將被評(píng)估。移植表皮的出現(xiàn)將被詳細(xì)記錄。臨床跡象所有可以觀察到的疾病健康和行為變化每天都被記錄。一些與正常情況的背離將按照出現(xiàn)的時(shí)間，持續(xù)的時(shí)間和強(qiáng)度進(jìn)行記錄。體重所有動(dòng)物在到來(lái)，傷口的出現(xiàn)日和研究結(jié)束時(shí)都要被稱重。終期觀察在第三天(大約傷口出現(xiàn)后56小時(shí))，1和2號(hào)動(dòng)物使用栓槍擊昏后，由鎖骨下靜脈和動(dòng)脈刺入致死。在第四天(大約傷口出現(xiàn)時(shí)72小時(shí))，3和4號(hào)動(dòng)物使用栓槍擊昏后，由鎖骨下靜脈和動(dòng)脈刺入致死。組織取樣每一個(gè)傷口分塊從骨骼肌肉組織切割下來(lái)。如果傷口與下層的骨骼肌肉組織發(fā)生一些粘連，部分肌肉將被包含在用于固定的材料中。每一個(gè)傷口切塊用含4％甲醛的中性磷酸緩沖液固定。組織學(xué)制備固定后從所有傷口中選擇4個(gè)有代表性的樣品包被在石蠟中，切成一般5μm的厚度，使用蘇木素和曙紅進(jìn)行染色。染色后使用柵欄在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。這種觀察可以對(duì)傷口的總長(zhǎng)度和表層面積進(jìn)行測(cè)定。取每個(gè)傷口的平均值，然后用于計(jì)算群平均值。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)經(jīng)加工后計(jì)算出群平均值和適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)方差。可能的出入也被鑒定出來(lái)。此后每一個(gè)連續(xù)的變化將用Bartllet′s實(shí)驗(yàn)測(cè)定變化的同質(zhì)性，如果這些差異是同質(zhì)的，即可對(duì)變化進(jìn)行差異的分析。如果檢測(cè)到一些有意義的差異，可能的群內(nèi)差異將用Dunnett’s實(shí)驗(yàn)評(píng)估。如果變化是異質(zhì)的，每一個(gè)變化將按通常的Shopiro-Wilk方法測(cè)定。在正常分布的情況下，可能的群內(nèi)差異將用Student′st-檢驗(yàn)鑒定，否則其它可能的群內(nèi)差異將用Kruskal-Wallis′s檢驗(yàn)評(píng)估。如果檢測(cè)到一些有意義的群內(nèi)差異，將使用WilcoxonRank-Sum檢驗(yàn)對(duì)這些群作隨后的鑒定。統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析將使用“SAS/STAT使用者指導(dǎo)，第6版，第4次編輯，Vol.1+2”，SASInstituteInc.，NorhtCarolina27513，美國(guó)”中介紹的SAS程序(版本6.12)進(jìn)行。序列表&lt;110&gt;拜奧拉公司&lt;120&gt;用于傷口愈口的基質(zhì)蛋白組合物&lt;130&gt;20542PCl&lt;160&gt;2&lt;170&gt;FastSEQ軟件，Windows3.0版&lt;210&gt;1&lt;211&gt;407&lt;212&gt;PRT&lt;213&gt;未知&lt;400&gt;1MetSerAlaSerLysIleProLeuPheLysMetLysGlyLeuLeuLeu151015PheLeuSerLeuValLysMetSerLeuAlaValProAlaPheProGln202530ArgProGlyGlyGlnGlyMetAlaProProGlyMetAlaSerLeuSer354045LeuGluThrMetArgGlnLeuGlySerLeuGlnGlyLeuAsnAlaLeu505560SerGlnTyrSerArgLeuGlyPheGlyLysAlaLeuAsnSerLeuTrp65707580LeuHisGlyLeuLeuProProHisAsnSerPheProTrpIleGlyPro859095ArgGluHisGluThrGlnGlnProSerLeuGlnProHisGlnProGly100105110LeuLysProPheLeuGlnProThrAlaAlaThrGlyValGlnValThr115120125ProGlnLysProGlyProHisProProMetHisProGlyGlnLeuPro130135140LeuGlnGluGlyGluLeuIleAlaProAspGluProGlnValAlaPro145150155160SerGluAsnProProThrProGluValProIleMetAspPheGlyAsp165170175ProGlnPheProThrValPheGlnIleAlaHisSerLeuSerArgGly180185190ProMetAlaHisAsnLysValProThrPheTyrProGlyMetPheTyr195200205MetSerTyrGlyAlaAsnGlnLeuAsnAlaProGlyArgIleGlyPhe210215220MetSerSerGluGluMetProGlyGluArgGlySerProMetGlyTyr225230235240GlyThrLeuPheProGlyTyrGlyGlyPheArgGlnThrLeuArgGly245250255LeuAsnGlnAsnSerProLysGlyGlyAspPheThrValGluValAsp260265270SerProValSerValThrLysGlyProGluLysGlyGluGlyProGlu275280285GlySerProLeuGlnGluProSerProAspLysGlyGluAsnProAla290295300LeuLeuSerGlnIleAlaProGlyAlaHisAlaGlyLeuLeuAlaPhe305310315320ProAsnAspHisIleProAsnMetAlaArgGlyProAlaGlyGlnArg325330335LeuLeuGlyValThrProAlaAlaAlaAspProLeuIleThrProGlu340345350LeuAlaGluValTyrGluThrTyrGlyAlaAspValThrThrProLeu355360365GlyAspGlyGluAlaThrMetAspIleThrMetSerProAspThrGln370375380GlnProProMetProGlyAsnLysValHisGlnProGlnValHisAsn385390395400AlaTrpArgPheGlnGluPro405&lt;210&gt;2&lt;211&gt;324&lt;212&gt;PRT&lt;213&gt;未知&lt;400&gt;2MetLysProAsnSerMetGluAsnSerLeuProValHisProProPro151015LeuProSerGlnProSerLeuGlnProHisGlnProGlyLeuLysPro202530PheLeuGlnProThrAlaAlaThrGlyValGlnValThrProGlnLys354045ProGlyProHisProProMetHisProGlyGlnLeuProLeuGlnGlu505560GlyGluLeuIleAlaProAspGluProGlnValAlaProSerGluAsn65707580ProProThrProGluValProIleMetAspPheGlyAspProGlnPhe859095ProThrValPheGlnIleAlaHisSerLeuSerArgGlyProMetAla100105110HisAsnLysValProThrPheTyrProGlyMetPheTyrMetSerTyr115120125GlyAlaAsnGlnLeuAsnAlaProGlyAr9IleGlyPheMetSerSer130135140GluGluMetProGlyGluArgGlySerProMetGlyTyrGlyThrLeu145150155160PheProGlyTyrGlyGlyPheArgGlnThrLeuArgGlyLeuAsnGln165170175AsnSerProLysGlyGlyAspPheThrValGluValAspSerProVal180185190SerValThrLysGlyProGluLysGlyGluGlyProGluGlySerPro195200205LeuGlnGluProSerProAspLysGlyGluAsnProAlaLeuLeuSer210215220GlnIleAlaProGlyAlaHisAlaGlyLeuLeuAlaPheProAsnAsp225230235240HisIleProAsnMetAlaArgGlyProAlaGlyGlnArgLeuLeuGly245250255ValThrProAlaAlaAlaAspProLeuIleThrProGluLeuAlaGlu260265270ValTyrGluThrTyrGlyAlaAspValThrThrProLeuGlyAspGly275280285GluAlaThrMetAspIleThrMetSerProAspThrGlnGlnProPro290295300MetProGlyAsnLysValHisGlnProGlnValHisAsnAlaTrpArg305310315320PheGlnGluPro權(quán)利要求1．一種活性釉質(zhì)物質(zhì)在制備用于傷口愈合的藥物或化妝品組合物中的應(yīng)用。2．一種活性釉質(zhì)物質(zhì)在制備用于改善傷口愈合的藥物或化妝品組合物中的應(yīng)用。3．一種活性釉質(zhì)物質(zhì)在制備用于軟組織再生或修復(fù)的藥物或化妝品組合物中的應(yīng)用。4．根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中傷口存在于口腔中。5．根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中傷口是身體損傷或與口腔手術(shù)包括牙周手術(shù)，拔牙術(shù)，牙髓治療，牙植入物的插入，假牙應(yīng)用相關(guān)的外傷。6．根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中傷口選自無(wú)菌傷口，挫傷傷口，切割傷口，撕裂傷口，非穿透?jìng)?，開放傷口，穿透?jìng)冢┛讉?，刺破傷口，膿毒傷口，梗死和皮下傷口?．根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中傷口選自缺血性潰瘍，褥瘡，瘺，嚴(yán)重咬傷，熱灼傷和供體部位傷口。8．根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中傷口是口瘡傷口，外傷傷口或與皰疹相關(guān)的傷口。9．一種活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑在制備用于預(yù)防和/或治療感染的藥物組合物中的應(yīng)用。10．根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中感染由微生物引起。11．根據(jù)權(quán)利要求9或10的應(yīng)用，用于預(yù)防或治療粘膜表面的微生物生長(zhǎng)。12．根據(jù)權(quán)利要求9或10的應(yīng)用，用于預(yù)防或治療指甲或牙齒表面的微生物生長(zhǎng)。13．根據(jù)權(quán)利要求9或10的應(yīng)用，其中感染存在于口腔中。14．根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，用于預(yù)防和/或治療口腔中的微生物癥狀。15．根據(jù)權(quán)利要求9-14任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中感染由如下細(xì)菌導(dǎo)致，即引起齲齒的細(xì)菌，例如突變鏈球菌；引起牙周疾病的細(xì)菌，例如伴放線放線桿菌，牙齦卟啉單胞菌，中間普雷沃氏菌，微小消化微鏈球菌，彎曲桿菌(梭桿菌，葡萄球菌)，B.forsythus；引起牙槽炎的細(xì)菌，例如葡萄球菌，放線菌和芽孢桿菌；和引起尖周損害的細(xì)菌，例如螺旋體。16．根據(jù)權(quán)利要求9-11任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中細(xì)菌存在于皮膚上。17．一種活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑在制備用于治療和/或預(yù)防炎癥的藥物組合物中的應(yīng)用。18．根據(jù)權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中炎癥存在于口腔。19．根據(jù)權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中炎癥存在于骨供體部位。20．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中所述活性釉質(zhì)物質(zhì)是釉基質(zhì)，釉基質(zhì)衍生物和/或釉基質(zhì)蛋白。21．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)選自釉質(zhì)蛋白(enamelin)，琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin))，簇質(zhì)蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。22．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE電泳確定多數(shù)為100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。23．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑包含不同分子量的活性釉質(zhì)物質(zhì)的混合物。24．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑包含選自琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，簇質(zhì)蛋白，簇蛋白(tuftprotein)，血清蛋白，唾液蛋白，成釉質(zhì)蛋白，成釉質(zhì)細(xì)胞蛋白，鞘質(zhì)蛋白，和它們的衍生物的至少兩種物質(zhì)。25．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量高至大約40,000。26．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量在大約5,000到25,000之間。27．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的主要部分的分子量大約20kDa。28．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)中至少有一部分呈聚集體形式或在體內(nèi)使用后可以形成聚集體。29．根據(jù)權(quán)利要求26的應(yīng)用，其中聚集體的顆粒大小從大約20nm至1μm。30．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)制劑中的蛋白質(zhì)含量從大約0.05％w/w到100％w/w，例如大約5-99％w/w，大約10-95％w/w，大約15-90％w/w，大約20-90％w/w，大約30-90％w/w，大約40-85％w/w，大約50-80％w/w，大約60-70％w/w，大約70-90％w/w或大約80-90％w/w。31．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中藥物組合物進(jìn)一步包含藥物學(xué)上可接受的賦形劑。32．根據(jù)權(quán)利要求31的應(yīng)用，其中藥物學(xué)上可接受的賦形劑是丙二醇藻酸鹽。33．根據(jù)權(quán)利要求31的應(yīng)用，其中藥物學(xué)上可接受的賦形劑是透明質(zhì)酸或其鹽或衍生物。34．EMDOGAIN或其包含的任何蛋白質(zhì)或肽根據(jù)權(quán)利要求1-31任一項(xiàng)的用于傷口治療的應(yīng)用。35．一種用于改善傷口愈合的方法，該方法包括給予有相應(yīng)需要的哺乳動(dòng)物治療和預(yù)防有效量的一種活性釉質(zhì)物質(zhì)。36．根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中傷口是身體損傷或與口腔手術(shù)包括牙周手術(shù)，拔牙術(shù)，牙髓治療，牙植入物的插入，假牙應(yīng)用相關(guān)的外傷；或者其中傷口選自無(wú)菌傷口，挫傷傷口，切割傷口，撕裂傷口，非穿透?jìng)?，開放傷口，穿透?jìng)?，穿孔傷口，刺破傷口，膿毒傷口，梗死和皮下傷口；或者其中傷口選自缺血性潰瘍，褥瘡，瘺，嚴(yán)重咬傷，熱灼傷和供體部位傷口；或者其中傷口是口瘡傷口，外傷傷口或與皰疹有關(guān)的傷口。37．根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)選自釉質(zhì)蛋白(enamelin)，琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin))，簇質(zhì)蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。38．根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE電泳確定多數(shù)為100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。39．根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中應(yīng)用于傷口上的活性釉質(zhì)物質(zhì)的量是相應(yīng)于每平方厘米的總蛋白從大約0.01mg到大約20mg，例如每平方厘米大約0.1mg到15mg。40．一種促進(jìn)軟組織再生和/或修復(fù)的方法，該方法包括給予有相應(yīng)需要的哺乳動(dòng)物預(yù)防或治療有效量的一種活性釉質(zhì)物質(zhì)。41．根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)選自釉質(zhì)蛋白(enamelin)，琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin))，簇質(zhì)蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。42．根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE電泳確定多數(shù)為100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。43．根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中應(yīng)用于傷口上的活性釉質(zhì)物質(zhì)的量是相應(yīng)于每平方厘米的總蛋白從大約0.01mg到大約20mg，例如每平方厘米大約0.1mg到15mg。44．一種預(yù)防或治療感染的方法，該方法包括給予有相應(yīng)需要的哺乳動(dòng)物預(yù)防或治療有效量的一種活性釉質(zhì)物質(zhì)。45．根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)選自釉質(zhì)蛋白(enamelin)，琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin))，簇質(zhì)蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。46．根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE電泳確定多數(shù)為100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。47．根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中感染是皮膚或粘膜表面的細(xì)菌感染。48．根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中細(xì)菌感染是發(fā)生在口腔的感染。49．根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中感染由如下細(xì)菌導(dǎo)致，即引起齲齒的細(xì)菌，例如突變鏈球菌；引起牙周疾病的細(xì)菌，例如伴放線放線桿菌，牙齦卟啉單胞菌，中間普雷沃氏菌，微小消化微鏈球菌，彎曲桿菌(梭桿菌，葡萄球菌)，B.forsythus；引起牙槽炎的細(xì)菌，例如葡萄球菌，放線菌和芽孢桿菌；和引起尖周損害的細(xì)菌，例如螺旋體。50．一種預(yù)防或治療炎癥的方法，該方法包括給予有相應(yīng)需要的哺乳動(dòng)物預(yù)防或治療有效量的一種活性釉質(zhì)物質(zhì)。51．根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)選自釉質(zhì)蛋白(enamelin)，琺瑯蛋白，非琺瑯蛋白，富含脯氨酸的非琺瑯蛋白，成釉質(zhì)蛋白(amelin)(成釉細(xì)胞蛋白(ameloblastin)，鞘質(zhì)蛋白(sheathlin))，簇質(zhì)蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。52．根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中活性釉質(zhì)物質(zhì)的分子量多數(shù)為大約120kDa，例如通過(guò)SDS-PAGE電泳確定多數(shù)為100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。53．根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中應(yīng)用于傷口上的活性釉質(zhì)物質(zhì)的量是相應(yīng)于每平方厘米的總蛋白從大約0.01mg到大約20mg，例如每平方厘米大約0.1mg到15mg。全文摘要活性釉質(zhì)物質(zhì)可以用來(lái)制備用于傷口愈合,改善傷口愈合、軟組織再生或修復(fù),或預(yù)防或治療炎癥感染的藥物組合物或化妝品組合物。文檔編號(hào)A61P17/02GK1297356SQ99805220公開日2001年5月30日申請(qǐng)日期1999年2月26日優(yōu)先權(quán)日1998年2月27日發(fā)明者斯蒂納·格斯特瑞里埃斯,拉爾斯·哈馬斯特倫,彼得·林斯塔多斯,克里斯特·安德松,伊萬(wàn)·斯拉比,托馬斯·哈馬爾格倫申請(qǐng)人:拜奧拉拜奧愛(ài)克斯公司