專利名稱：用于預(yù)防手術(shù)粘連的含糊精的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防手術(shù)粘連，特別涉及發(fā)生在漿膜腔里，包括腹膜腔、心包腔、胸膜腔、諸如關(guān)節(jié)和肌腱的滑液腔里的粘連，和脊柱和/或顱手術(shù)后發(fā)生的粘連。下面涉及腹膜粘連的防止進行闡述，但應(yīng)當(dāng)明白本發(fā)明也可應(yīng)用于人體和動物體的其它漿膜腔。
腹部手術(shù)是改變迅猛的領(lǐng)域。許多形式的切開手術(shù)正在逐漸被腹腔鏡檢查過程所代替。雖然腹腔鏡手術(shù)后能馬上顯示出明顯的手術(shù)后益處，但沒有減少粘連的發(fā)生。間皮嚴(yán)重干燥起因于腹膜暴露于干燥氣體的時間延長(2-4小時氣腹)，這會比迄今為止切開手術(shù)中已經(jīng)遇到的全腹膜粘連的發(fā)生率更高。許多具有長期腹腔鏡手術(shù)經(jīng)驗的婦科學(xué)家認為切開手術(shù)和封閉手術(shù)粘連的發(fā)生率都同樣很高。
WO92/21354把手術(shù)粘連描述為各器官或組織彼此通過疤痕組織相附著。疤痕組織的形成被描述為手術(shù)或其它組織損傷的正常結(jié)果，是正常傷口痊愈中所需要的。但是，在一些病例中，瘢痕組織生長超出了預(yù)期的區(qū)域，產(chǎn)生了手術(shù)粘連。這些疤痕組織的手術(shù)粘連限制了被影響機體部位正常的運動和功能。WO92/21354揭示的發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)陰離子型聚合物能有效地抑制與不利的愈合過程相關(guān)的細胞的侵襲，即纖維化和疤痕化。特別是，某些抑制性的陰離子聚合物被用于抑制成纖維細胞的侵襲，從而調(diào)節(jié)愈合過程并防止纖維化。WO92/21354里的陰離子型聚合物包括硫酸葡聚糖，多硫酸戊聚糖和天然的蛋白聚糖，或蛋白聚糖的葡糖胺多糖(glycosaminoglycan)部分，包括硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素、硫酸乙酰肝素、肝素和藻酸鹽。
為了抑制成纖維細胞的侵襲，WO92/21354的方法是粘連后處理的一種，因為成纖維細胞的侵襲是后期階段，就是說，它在粘連形成后發(fā)生。WO92/21354旨在防止粘連永久化。相反的是，本發(fā)明涉及預(yù)防粘連的發(fā)生。
本發(fā)明的第一方面提供了預(yù)防或減少手術(shù)后在體腔里或與體腔相關(guān)的粘連的發(fā)生的方法，包括向體腔引入多糖糊精的含水溶液或懸浮液或凝膠制劑。
術(shù)語“糊精”表示葡萄糖聚合物，它通過淀粉水解產(chǎn)生，主要通過α-1,4鍵而將葡萄糖單位連接在一起。典型的糊精通過來自如小麥、稻子、玉米和木薯的各種天然產(chǎn)物的淀粉水解而產(chǎn)生。除了α-1,4鍵外，在特定的糊精里也有一定比例的α-1,6鍵，其含量根據(jù)淀粉起始原料而定。由于α-1,6鍵的生物降解率典型地低于α-1,4鍵，對許多應(yīng)用優(yōu)選的是α-1,6鍵的百分?jǐn)?shù)低于10％，更好的是低于5％。
任何糊精是不同鏈長度的聚葡萄糖分子的混合物。結(jié)果對這類聚合物的分子量不能用單個的數(shù)充分表征。因此，使用各種平均分子量，最常用的是重均分子量(Mw)和數(shù)均分子量(Mn)。Mw對聚合物高分子量含量的變化特別敏感，聚合物低分子量含量對Mn有極大的影響。
優(yōu)選的糊精的Mn為1,000-30,000，理想的是，Mw為3,000-50,000。更優(yōu)選的是，Mn為3,000-8,000，Mw是5,000-50,000。
術(shù)語“聚合度”(DP)也可用于聚合物混合物。對于單一聚合物分子，DP表示聚合單元數(shù)。對于不同DP的分子的混合物，重均DP和數(shù)均DP相應(yīng)于Mw和Mn。另外，DP也可通過說聚合物混合有某一百分比的聚合物其DP大于或小于特定數(shù)字而對聚合物表征。
優(yōu)選的是，糊精含有大于15％的DP大于12的聚合物，更優(yōu)選的是大于50％的DP大于12的聚合物。
用于本發(fā)明的糊精是水溶的，或至少在水中能形成懸浮液或凝膠制劑。用于本發(fā)明的糊精可為未取代糊精(通過水解淀粉得到)或可被一個或多個不同基團取代的糊精。取代基可為負電荷基團，如硫酸酯基團，中性基團，或正電荷基團，如季銨鹽基團。若取代基是硫酸酯，優(yōu)選的是硫酸酯化的多糖在每個糖(葡萄糖)單元里含至少一個硫酸酯基團。
本發(fā)明也提供了一種組合物，它包含多糖糊精的含水溶液或懸浮液或凝膠制劑，其中糊精的量能有效地預(yù)防或減少手術(shù)后粘連的發(fā)生。
本發(fā)明進一步提供了組合物在預(yù)防或減少手術(shù)后粘連發(fā)生中的應(yīng)用，所述的組合物包含多糖糊精的含水溶液或懸浮液或凝膠制劑。
本發(fā)明進一步提供了多糖糊精在制備用于預(yù)防或減少人體和動物體手術(shù)后發(fā)生粘連的包含糊精含水溶液或懸浮液或凝膠制劑的組合物中的應(yīng)用。
糊精是用于制備預(yù)防粘連組合物的有用材料，因為，它是無毒的，便宜并能留住體腔里的液體。它也容易在機體里代謝。
優(yōu)選的是，本發(fā)明組合物在手術(shù)后用于合適的體腔或區(qū)域。
優(yōu)選的是，本發(fā)明組合物能在體腔里保持至少2-3天，特別是在纖維蛋白滲出最大的期間留在體腔里。更優(yōu)選的是，組合物在體腔里保留多達7-8天，以便讓未粘連的表面被修復(fù)(間皮再生)。
優(yōu)選的是，本發(fā)明組合物應(yīng)以足以保持表面分離的體積施加于體腔。對于腹膜，優(yōu)選的用量范圍為500-2000毫升，更優(yōu)選的是，約1000-1500毫升。
優(yōu)選的是，應(yīng)當(dāng)以不同的濃度，理想的是2.5-18％重量，更理想的是3-5％重量，最理想的是約4％重量的組合物用于合適體腔或區(qū)域，所述的濃度范圍根據(jù)特定的時間跨度選擇，甚至更理想的是，濃度范圍在一段時間里進行選擇性的改變。
優(yōu)選的是，組合物應(yīng)當(dāng)包括一定的糊精濃度，結(jié)果在所述的組合物留在體腔期間大量液體被留住。當(dāng)組合物包括4％重量糊精時，一次輸注的合適溶脹時間為2-3天。高濃度易于使液體進入。在第3天進行第二次輸注會使總的溶脹時間延續(xù)6-7天。
或者，可用較小的體積(可能約750毫升)來使用糊精濃度為12-15％重量組合物，這可使液體進入。但是，單次輸注也可足以持續(xù)6-7天。
糊精與葡聚糖比較，后者具有相對不良的生物相容性。由于它在淋巴結(jié)里聚集，并缺乏可代謝性，故易引起免疫學(xué)上過敏。葡聚糖溶液或懸浮液的作用至多是分離表面，從而預(yù)防粘連，它簡單地作為潤滑劑。糊精有利地作為滲透劑，它維持了腹膜腔里的溶液體積。糊精溶液在腔里連續(xù)存在能分離組織，否則它們會彼此粘連。
使用糊精的溶液或懸浮液或凝膠制劑也可有利地與使用合成的膜貼劑、用于已經(jīng)發(fā)生最大損傷的特定區(qū)域的現(xiàn)有技術(shù)進行比較。但是，對于體腔，如腹膜，遠離手術(shù)點，特別是腹腔鏡的手術(shù)也易于發(fā)生損傷，這是由于發(fā)生了干燥。在一些全漿膜腔損傷中，其損傷面積有2平方米。
作為對創(chuàng)傷的反應(yīng)，機體促使循環(huán)的纖維蛋白原形成纖維蛋白，這樣產(chǎn)生的纖維蛋白與粘連的形成有關(guān)。需要鈣離子將纖維蛋白原聚合成纖維蛋白，因此，本發(fā)明組合物可包括鈣結(jié)合劑，如EDTA或檸檬酸鈉。
本發(fā)明組合物可包括合適的潤滑劑，如磷脂。
本發(fā)明組合物可包括透明質(zhì)酸鹽或糖胺聚糖(glycocosolaminoglycan)，后者是與漿膜潤滑有關(guān)的物質(zhì)，具有很強的抗粘連性質(zhì)。在此情況下，糊精溶液或懸浮液或凝膠制劑能有效地將透明質(zhì)酸鹽分散在整個腹膜里。
本發(fā)明的組合物可包括抗生素或與預(yù)防感染或細菌或異物之類聚集有關(guān)的物質(zhì)/藥物。包括這類物質(zhì)/藥物的組合物對預(yù)防或改善盆腔炎癥疾病尤為有利。
本發(fā)明組合物也可包括纖維蛋白溶解劑或其類似物，抗炎劑或其類似物，硫酸糊精和/或亞甲藍。
本發(fā)明提供了一種優(yōu)選的組合物，包括糊精的水溶液或懸浮液或凝膠，一種或多種磷脂和透明質(zhì)酸鹽。這類組合物不僅能高度有效地預(yù)防粘連，而且具有良好的保存期限。
已經(jīng)證明間皮能分泌出前列環(huán)素(prostacyclin)，該活性增加了間皮的非粘連性質(zhì)。本發(fā)明提供了包含糊精和前列環(huán)素或其類似物的組合物。
本發(fā)明的第二方面提供了一種供人體或動物體手術(shù)使用的生物相容的、生物可吸收的和無毒的預(yù)防手術(shù)后粘連的試劑盒，包括一種如上所述的糊精水溶液、懸浮液或凝膠制劑，任選地另外包含如上所述的鈣結(jié)合劑和/或如上所述的合適的潤滑劑和/或如上所述的前列環(huán)素或其類似物和/或如上所述的抗生素。
支持本發(fā)明的證據(jù)方案動物從Irish農(nóng)場(Norco,CA)購得130個雌性新西蘭白兔，2.4-2.7kg，使用前在USC動物園里隔離至少2天。130個兔子被隨機地分成13個治療組，然后進行手術(shù)。在12∶12的光亮∶黑暗循環(huán)里飼養(yǎng)兔子，任其隨意地進食和飲水。
材料溶液(7.5％[重量/體積]icodextrin-批號#98A06G33,20％[重量/體積]icodextrin-批號#SP184772和安慰劑用于icodextrin的電解質(zhì)溶液)-批號#SP184829，由ML實驗室Plc提供。icodextrin是[1→4]-α-葡聚糖，其85％分子的分子量為1,640-45,000，重均分子量約20,000。安慰劑電解質(zhì)溶液在1升注射用水中含有5.4克氯化鈉，4.5克乳酸鈉，257毫克氯化鈣，51毫克氯化鎂。用于關(guān)閉肌肉和皮膚的縫線是3-0涂覆DexonⅡ的縫線(Davis and Geck,Manati,PR)。
雙子宮角模型用55毫克/kg鹽酸氯胺酮和5毫克/kg賽拉嗪(Rompum)的混合物進行肌肉注射來麻醉兔子。在手術(shù)消毒準(zhǔn)備后，進行中線的剖腹手術(shù)。將雙側(cè)子宮角外置，通過用紗布磨擦漿膜表面直到形成點狀的出血點來形成創(chuàng)傷。通過除去側(cè)支血供來引起兩個子宮角局部缺血。子宮角剩余的血液供給是子宮肌層的子宮-陰道動脈血供的上升支。在手術(shù)末，給予10到75毫升(10,25,50,75毫升)7.5％或20％icodextrin,10或75毫升安慰劑或不作處理(對照)。7天后，處死兔子，測定子宮角粘連面積的于各器官的百分?jǐn)?shù)。另外，用下列系統(tǒng)對粘連的韌性劃分等級0=沒有粘連；1=輕微、容易分割的粘連；2=中度粘連；不可切開，不撕裂器官；3=緊密性粘連；不可切開，除去時會撕裂器官。
另外，對每個兔子進行考慮所有上述數(shù)值的總體評分。使用下列評分系統(tǒng)0 沒有粘連；0.5+輕度、薄的盆腔粘連，只涉及一個器官，典型地只有1或2處小粘連；1.0+輕度、薄的粘連，雖然比0.5的粘連范圍稍大，但不廣泛；1.5+比1等級的粘連稍堅韌和更廣泛；2.0+較堅韌的粘連，更廣泛一些，子宮角通常與腸和膀胱粘連；2.5+除了任一位點處的粘連不薄，且更為廣泛外，其它與2等級相同；3.0+比2的粘連更堅韌，更廣泛，兩個角都與腸和膀胱相連，子宮可以作一些運動；3.5+與3相同，但粘連得更廣泛一些也更堅韌；4.0+嚴(yán)重粘連，兩個角都與腸和膀胱相連，不撕開粘連，子宮就不能運動。
兔子由對先前的動物處理完全不知情的兩個獨立觀察者評分。若對于單個動物的評分不一致，取較高的分?jǐn)?shù)。
統(tǒng)計分析通過秩分析和方差分析來分析堅韌程度和總體評分。通過Studentt檢驗比較涉及各器官的角的面積百分?jǐn)?shù)。用Chi方分析分析粘連形成發(fā)生率的數(shù)據(jù)。表14顯示的與安慰劑的比較是在10毫升安慰劑組和接受10-25毫升icodextrin組之間，或在75毫升安慰劑組和接受50或75毫升icodextrin組之間進行。
結(jié)果來自用50毫升20％icodextrin處理的一個兔子手術(shù)后死亡，驗尸時沒有炎癥或水腫跡象，用另一個代替。在兔子的手術(shù)后評價期間，注意到一些給予較高體積的icodextrin在手術(shù)后開始數(shù)天有“凸出”的腹部。這在接受了75毫升7.5％icodextrin的3個兔子和接受了75毫升20％icodextrin的8個兔子發(fā)生。接受7.5％icodextrin的兔有24小時觀察到凸出，而在接受20％的icodextrin的兔有48～72小時。在接受了75毫升安慰劑的兔子組里觀察不到該凸出現(xiàn)象。驗尸時沒有觀察到任何icodextrin或安慰劑處理的兔子里有過量液體。在驗尸時發(fā)現(xiàn)接受了75毫升20％icodextrin的一個兔子皮下有少量液體。
表1-13列出了icodextrin對該兔模型中形成粘連的效應(yīng)。表14列出了icodextrin對粘連發(fā)生率的效應(yīng)。對于每個部位，給出了子宮角和該部位之間粘連的程度和堅韌度(括號里為堅韌度)。在每欄的最后一行(最右欄除外)，給出了每一部位程度評分的平均值和平均值的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)。在最后一欄的最后一行，給出了秩的平均值和平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。若秩與對照相比有所減少(p≤0.05)，該行注有*。在icodextrin給予較高體積(25至75毫升)時，顯著減少了粘連形成。但是，在該研究中注意到7.5％和20％溶液之間沒有差異。該效應(yīng)在于腹腔內(nèi)植入某些材料時并不出現(xiàn)炎癥。
結(jié)果顯示，高體積icodextrin(兩種百分?jǐn)?shù))能高度有效地減少該模型中的粘連形成，在給予50毫升或75毫升icodextrin后注意到此效應(yīng)。較低體積的icodextrin的效應(yīng)較低，安慰劑對粘連形成沒有作用。因此，我們證明本發(fā)明組合物能有效地減少手術(shù)后粘連形成的發(fā)生。
權(quán)利要求
1．一種組合物，包括含預(yù)防或減少手術(shù)后體腔里或與體腔有關(guān)的粘連發(fā)生的有效量的多糖糊精的含水制劑。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中含水制劑是溶液、懸浮液或凝膠。
3．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精中α-1,6-鍵的百分?jǐn)?shù)低于10％。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中糊精中α-1,6-鍵的百分?jǐn)?shù)低于5％。
5．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精的數(shù)均分子量(Mn)為1,000-30,000。
6．根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中糊精的Mn為3,000-8,000。
7．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精的重均分子量(Mw)為3,000-50,000。
8．根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中糊精的Mw是5,000-50,000。
9．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精含有多于15％的聚合度大于12的聚合物。
10．根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的組合物，其中糊精含有多于50％的聚合度大于12的聚合物。
11．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精是未取代糊精。
12．根據(jù)權(quán)利要求1-10任一所述的組合物，其中糊精被一個或多個選自負電荷基團，硫酸酯基團，中性基團，正電荷基團和季銨鹽基團的基團所取代。
13．根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中糊精是硫酸酯化的糊精，每個多糖(葡萄糖)單元里含有至少一個硫酸酯基團。
14．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，其中糊精的存在量為2.5-18％重量。
15．根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中糊精的存在量為3-5％重量。
16．根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的組合物，其中糊精的存在量約為4％重量。
17．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，它進一步包括鈣結(jié)合劑。
18．根據(jù)權(quán)利要求17所述的組合物，其中鈣結(jié)合劑是EDTA或檸檬酸鈉。
19．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，它進一步包括合適的潤滑劑。
20．根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中潤滑劑是磷脂。
21．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，它進一步包括透明質(zhì)酸鹽。
22．根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的組合物，它進一步包括一種或多種選自下列化合物的化合物糖胺聚糖(glycosolaminoglycan)，抗生素，前列環(huán)素或其類似物，纖維蛋白溶解劑或其類似物，抗炎劑或其類似物，硫酸糊精和/或亞甲藍。
23．一種預(yù)防或減少體腔里或與體腔有關(guān)的手術(shù)后粘連的發(fā)生的方法，該方法包括向體腔里引入含有多糖糊精的水性制劑。
24．根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中水性制劑選自溶液、懸浮液和凝膠。
25．根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中所述的組合物在進行手術(shù)后給予合適的體腔。
26．根據(jù)權(quán)利要求23-25所述的方法，其中讓組合物在體腔里最少保持2-3天。
27．根據(jù)權(quán)利要求23-26任一所述的方法，其中在纖維蛋白滲出最大期間，讓組合物保留在體腔里。
28．根據(jù)權(quán)利要求23-27任一所述的方法，其中組合物在體腔里的保留時間可多達7-8天，以便讓未粘連的表面修復(fù)(間皮再生)。
29．根據(jù)權(quán)利要求23-28任一所述的方法，其中組合物以足以保持組織表面分離的體積施加于給體腔。
30．根據(jù)權(quán)利要求23-29任一所述的方法，其中用于腹膜的組合物體積為500-2000毫升。
31．根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中用于腹膜的組合物體積為1000到1500毫升。
32．根據(jù)權(quán)利要求23-31任一所述的方法，其中用于合適體腔的糊精濃度為2．5-18％重量。
33．根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中用于合適體腔的糊精濃度為3-5％重量。
34．根據(jù)權(quán)利要求32或33所述的方法，其中用于合適體腔的糊精濃度為4％重量。
35．根據(jù)權(quán)利要求23-34任一所述的方法，其中糊精的濃度范圍在保留的時間內(nèi)作選擇性的改變。
36．一種供人體或動物體手術(shù)用的生物相容、生物可吸收和無毒的手術(shù)后粘連預(yù)防的試劑盒，包括糊精水性制劑。
37．根據(jù)權(quán)利要求36所述的試劑盒，其中水性制劑選自溶液、懸浮液和凝膠。
38．根據(jù)權(quán)利要求1所述和任選地包括一種或多種權(quán)利要求2-22特征的組合物在預(yù)防或減少體腔里或與體腔有關(guān)的手術(shù)后粘連發(fā)生中的應(yīng)用，包括向體腔里引入含有多糖糊精的水性制劑。
39．含有多糖糊精水性制劑和一種或多種如權(quán)利要求17-22所述的特征的產(chǎn)品作為組合制劑用于預(yù)防或減少體腔里或與體腔有關(guān)的手術(shù)后粘連的發(fā)生。
全文摘要
一種預(yù)防或減少體腔里或與體腔有關(guān)的手術(shù)后粘連的發(fā)生的方法,包括向體腔里引入含多糖糊精的含水溶液或懸浮液或凝膠制劑的組合物。
文檔編號A61K31/70GK1300226SQ9980608
公開日2001年6月20日 申請日期1999年5月13日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月13日
發(fā)明者C·布朗 申請人:ML實驗室plc