專利名稱：不穩(wěn)定的dpiv抑制劑的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二肽基肽酶IV(DP IV)的不穩(wěn)定抑制劑的化合物，該化合物的通式為A-B-C，其中A是氨基酸，B是A和C之間的化學鍵或者是氨基酸，而C是DP IV的不穩(wěn)定抑制劑。
已知氨基?；邕蚧?thiazolidides)、氨基?；量┩榛?pyrrolidides)、N-二肽基化物(dipeptididyl)、O-酰基羥胺和其他化合物可作為血清酶二肽基肽酶IV(DP IV)及類似酶的抑制劑(參見DEMUTH,H.-U.,J.Enzyme Inhibition 3,249(1990)；DEMUTH,H.-U.,HEINS,J.,in Dipeptidyl Peptidase IV(B.Fleischer編輯)R.G.Landes,Biomedical Publishers,Georgetown,1995,1-37)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)T細胞介導的免疫應(yīng)答，例如移植時的免疫應(yīng)答，可通過二肽基肽酶IV的穩(wěn)定抑制劑來影響(參見KOROM,S.,DEMEESTER,I.,STADLBAUER,T.H.W.,CHANDRAKER,A.,SCHAUB,M.,SAYEGH,M.H.,BELYAEV,A.,HAEMERS,A.,SCHARPE,S.,KUPIEC-WEGLINSKI,J.W.,抑制CD26/二肽基肽酶IV的體內(nèi)活性延長接受大鼠的心臟同種異體移植的存活率(Inhibition of CD26/dipeptidyl peptidase IV activity in vivoprolongs cardiac allograft survival in rat recipients),Transplantation 63,1495(1997))。還可抑制風濕性關(guān)節(jié)炎(參見TANAKA,S.,MURAKAMI,T.,HORIKAWA,H.,SUGIURA,M.,KAWASHIMA,K.,SUGITA,T.,二肽基肽酶IV抑制劑對關(guān)節(jié)炎的抑制(Suppression of arthritis by the inhibitors ofdipeptidyl peptidase IV),Int.J.Immunopharmacol.19,15(1997))。
還發(fā)現(xiàn)，因為酶活性的相關(guān)的暫時性下降，給藥哺乳動物血液中DP IV或者DP IV類似酶活性的穩(wěn)定抑制劑(效應(yīng)物)，可使DP IV和DP IV樣酶導致的內(nèi)源性(或者其他外源性給藥的)促胰島素肽胃抑制劑多肽1-42(GIP1-42)和胰高血糖素樣肽酰胺-17-36(GLP-17-36)(或者GLP-17-37或者其類似物)分解的下降，因此減少或延遲了這些肽激素或其類似物濃度的下降。(內(nèi)源性存在或者外源性引入的)腸降血糖素或其類似物的更高穩(wěn)定性，由于DP IV效應(yīng)物的作用，改變了身體本身的胰島素作用，導致對治療生物中碳水化合物代謝的刺激作用，而所述DP IV效應(yīng)物可增加胰腺中Langerhans細胞的腸降血糖素受體的促胰島素性刺激作用的有效性。其結(jié)果是，所治療生物的血清中的血糖濃度下降至高血糖的特征葡萄糖濃度以下。因此，用DP IV抑制劑可防止或者緩解代謝異常，如過重、葡糖尿、高脂血、以及可能嚴重的代謝酸中毒和糖尿病，它們是血糖濃度長期升高的結(jié)果(參見DE 196 16 486)。
用DP IV抑制劑還可經(jīng)驗性地防止HIV對CD 26(DP IV)陽性細胞的滲透(參見WAKSELMAN,M.,NGUYEN,C.,MAZALEYRAT,J.-P.,CALLEBAUT,C.,KRUST,B.,HOVANESSIAN,A.G.用CD 26的DPP IV活性的強效環(huán)肽抑制劑抑制HIV-1對CD 26陽性而不是CD26細胞的感染(Inhibition of HIV-1 infection of CD 26+but not CD 26-cells by a potentcyclopeptidic inhibitor of the DPP IV activity of CD 26).Abstract P 44 of the24thEuropean Peptide Symposium 1996)。
還發(fā)現(xiàn)DP IV可調(diào)節(jié)神經(jīng)活性肽的活性，如神經(jīng)肽Y和CLIP(參見MENTLEIN,R.,DAHMS,P.,GRANDT,D.,KRUGER,R.,用二肽基肽酶IV對神經(jīng)肽Y和肽YY的蛋白酶解加工(Proteolytic processing of neuropeptideY and peptide YY by dipeptidyl peptidase IV).Regul.Pept.49,133(1993)；WETZL,W.,WAGNER,T.,VOGEL,D.,DEMUTH,H.-U.,BALSCHUN,D.,CLIP片段ACTH 20-24對REM睡眠期持續(xù)時間的作用(Effects of theCLIP fragment ACTH 20-24 on the duration of REM sleep episodes).Neuropeptides,31,41(1997))。
DP IV抑制劑的這些不同作用表明，當在組織的具體病理生理條件下使用時，它們的作用可對其他正常的生理狀態(tài)產(chǎn)生作用，例如在其他器官中。這些作用對于目標生物既有正面又有負面的后果。
因此，本發(fā)明的目的是提供DP IV的效應(yīng)物，其具有DP IV抑制劑的高生物利用度，而且在具體的目標組織或者目標生物中具有精確限定的作用時間。
特別是，本發(fā)明的目的是提供DP IV抑制劑，其具有精確限定的短作用時間和高生物利用度。
這些目的是通過二肽基肽酶IV(DP IV)的不穩(wěn)定抑制劑的化合物來解決的，該化合物具有通式A-B-C，其中A是氨基酸，B是A和C之間的化學鍵或者是氨基酸，而C是DP IV的不穩(wěn)定抑制劑。
當B代表一個鍵時，其特別是肽鍵；當B是氨基酸時，其優(yōu)選通過肽鍵連接在A和C上。
根據(jù)本發(fā)明，這些化合物可用作DP IV的抑制劑，它們的作用部位、作用的起始時間、以及作用的持續(xù)時間都可精確地限定。
在給藥時，該化合物例如由于合適酶的作用而斷裂，由此不穩(wěn)定的“C”抑制劑通過除去A-B基團而被釋放。該抑制劑可通過化學和酶機理釋放。例如，酯酶、蛋白酶和肽酶都可用于從根據(jù)本發(fā)明的化合物中釋放活性成分。所述酯酶、蛋白酶等例如公開在WO 97/45117、US5433955、US 5614379和US 5624894中。
所釋放的不穩(wěn)定抑制劑然后可與已經(jīng)存在的DP IV相互作用并對其進行抑制。其直接結(jié)果是，例如上述促胰島素肽被分解成更小的程度，并由此增加胰島素的作用。
已證明給藥DP IV的不穩(wěn)定抑制劑本身對于抑制DP IV不是有利的，這是因為它們在體內(nèi)快速分解，抑制劑的均勻分布、特別是在人體中的均勻分布由此是不可能的。具體而言，在口服給藥時，此等抑制劑非常不穩(wěn)定，使得它們實際上根本沒有活性。因此，穩(wěn)定的抑制劑目前特別是用于糖尿病的治療。
令人驚奇的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定的“C”抑制劑可通過將其掩蔽為式A-B-C的化合物來充分地穩(wěn)定。
該穩(wěn)定作用目前也是令人驚奇的，因為具有羰甲基吡啶翁基團的式A-B-C化合物在吡啶翁氮原子處是正電荷的。其結(jié)果是，亞甲基對在除去A-B基團后構(gòu)成抑制劑的活性親核反應(yīng)中心的基團產(chǎn)生吸電子作用。在所形成的反應(yīng)中心活化的基礎(chǔ)上，預期其親核性將增加至親核基團非特異性地“停留”在化合物A-B-C處的程度，而且抑制劑失活。但令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，抑制劑的此等失活沒有發(fā)生。
為通過DP IV抑制劑干擾僅需要對目標酶DP IV產(chǎn)生短期作用的生理控制循環(huán)，根據(jù)本發(fā)明提供例如作為組分C的抑制劑，其僅具有短的作用持續(xù)時間，而且在限定的半衰期后變成沒有抑制劑活性的化合物。
例如，為增強腸降血糖素在糖尿病中的作用，抑制劑幾分鐘的持續(xù)作用時間就已經(jīng)足夠，而例如抑制移植時的DP IV介導的免疫應(yīng)答則需要抑制劑的長期作用。
在釋放后，根據(jù)本發(fā)明的不穩(wěn)定抑制劑環(huán)化成例如吡嗪衍生物，并因此失活。該反應(yīng)同時發(fā)生，而且有助于N端氨基氮對二肽衍生物的C端羰基官能團的親核作用，并可通過氨基酸/酰亞胺鍵處的cis/trans異構(gòu)化來促進，該異構(gòu)化在包含脯氨酸的肽中可特別有利地進行。
而且，在化合物到達所希望的目標腔室例如血液循環(huán)并開始所希望的活性前，不會開始分解過程。
本發(fā)明化合物的這些性質(zhì)可根據(jù)本發(fā)明用于設(shè)計不同的DP IV抑制劑，以通過釋放后的分子內(nèi)環(huán)化來引發(fā)DP IV抑制劑的所希望的暫時性失活。
具體而言，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中C為在C端具有活性羰基的二肽衍生物。C優(yōu)選為二肽基氯烷基酮、二肽基硼酸或者二肽基氰化物或者二肽基吡啶翁甲基酮化合物。已證明此等抑制劑是特別有效的不穩(wěn)定DP IV抑制劑。二肽基例如是Ile-Thia、Ile-Pyr、Val-Thia和Val-Pyr。
根據(jù)本發(fā)明抑制劑(組分C)也可以是鹽形式，優(yōu)選為有機鹽，如乙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、或富馬酸鹽，或者優(yōu)選是無機酸鹽如硫酸鹽或者磷酸鹽。特別優(yōu)選的是富馬酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，化合物中B是脯氨酸、羥基脯氨酸、噻唑烷羧酸、脫氫脯氨酸、2-哌啶酸、氮雜環(huán)丁烷羧酸或者氮丙啶羧酸，其中特別優(yōu)選脯氨酸和羥基脯氨酸。
具體而言，根據(jù)本發(fā)明的化合物還具有根據(jù)個體患者的需要釋放DPIV抑制劑的優(yōu)點。
當根據(jù)本發(fā)明的化合物與DP IV分子相互作用時，其被酶斷裂為A-B基團和抑制劑C。抑制劑C將抑制DP IV分子，使其不能進一步斷裂該化合物。如果還存在DP IV分子，化合物將繼續(xù)被斷裂(如果已給藥足夠量的相應(yīng)化合物)，直至抑制最后的DP IV分子。剩余的化合物不再被分解，并由此構(gòu)成抑制劑儲存，直至DP IV分子的濃度又一次升高或者抑制劑分子被DP IV置換或者抑制劑分子被消除或失活，根據(jù)本發(fā)明的化合物再被斷裂并由此釋放抑制劑。
本發(fā)明的再一個優(yōu)點是，每種生物將釋放抑制已有DP IV所需要的精確量的抑制劑，其在每個情況下都是不同的。例如如果患者具有高濃度的DP IV，則就釋放大量的抑制劑；而如果僅有略高濃度的DP IV，則釋放少量的抑制劑。
具體而言，特別優(yōu)選的化合物是其中A-B是式Ile-Pro或者Gly-Pro的二肽。
本發(fā)明因此涉及絲氨酸肽酶二肽基肽酶IV的不穩(wěn)定抑制劑的新型化合物，該化合物可用于治療各種疾病，特別是治療與糖尿病有關(guān)的代謝紊亂。
令人驚奇的是，此等掩蔽抑制劑比未經(jīng)掩蔽的抑制更為有效如果使用相同量的未經(jīng)掩蔽的DP IV抑制劑和根據(jù)本發(fā)明的化合物，則根據(jù)本發(fā)明的化合物在Wistar大鼠中產(chǎn)生顯著提高的葡糖耐量。
本發(fā)明化合物的再一個優(yōu)點是，合適地選擇基團A-B可以暫時性控制DP IV抑制劑的作用起始和作用持續(xù)時間。具體而言，從根據(jù)本發(fā)明的化合物中釋放基團A-B取決于基團A氨基酸的性質(zhì)對于基團A,DPIV從化合物中釋放基團A-B的速率具體順序如下Ile＜Val＜Phe＜Pro＜Ala＜Gly。相應(yīng)的DP IV催化釋放速率常數(shù)為1-100s-1。因此就有了以精確暫時性的限定方式釋放DP IV抑制劑如果例如在攝入富葡萄糖的營養(yǎng)物時酶立即作用，所選擇的化合物A-B-C中例如具有氨基酸Gly作為A基團；如果延遲抑制劑的作用，則例如選擇氨基酸Ile作為基團A。
因此，通過根據(jù)本發(fā)明的化合物，可特別是實際上沒有任何延遲、例如實際上與營養(yǎng)物攝入同時地經(jīng)由小腸粘膜轉(zhuǎn)運DP IV抑制劑。
而且，DP IV抑制劑釋放的部位和它們作用的部位也可以通過基團A-B的性質(zhì)來控制。
除二肽基肽酶IV以外，各種其他氨基肽酶，如焦谷氨酰基氨基肽酶和脯氨?；被拿?，也存在于哺乳動物的血液中。合適地選擇基團A-B，可根據(jù)本發(fā)明測定釋放DP IV抑制劑的氨基肽酶，并因此確定抑制劑的作用發(fā)生在何處。根據(jù)本發(fā)明的化合物或者相應(yīng)的藥物組合物還因此可用于細胞、組織或者器官特異性DP IV抑制中?；鶊FA-B也可進行選擇，使得針對僅在血管中存在并以足夠快的速率釋放抑制劑的酶。
總之，通過本發(fā)明的不穩(wěn)定DP IV抑制劑的化合物，可完全令人驚奇地實現(xiàn)以下方面
1、增加抑制劑的作用；2、根據(jù)患者的需要釋放抑制劑；3、以暫時受控的方式從化合物中釋放抑制劑；4、控制從化合物中釋放抑制劑的部位；5、提高DP IV抑制劑的儲存；以及6．從其未掩蔽的時間起精確地限定作用的持續(xù)時間或者引發(fā)劑作用的結(jié)束。
根據(jù)本發(fā)明還提供特別適用于口服給藥的藥物組合物，其特征在于包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物，并任選與常規(guī)載體或賦形劑組合。
根據(jù)本發(fā)明的化合物或者包含該化合物的藥物組合物可用于治療或預防哺乳動物中可通過調(diào)節(jié)哺乳動物的DP IV活性來治療的疾病，例如人的代謝紊亂。
具體而言，所述化合物可用于治療哺乳動物中的受損葡糖耐量、葡糖尿、高脂血、代謝酸中毒、糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病和腎病、以及糖尿病的后遺癥。因為根據(jù)本發(fā)明的不穩(wěn)定抑制優(yōu)選具有短的作用持續(xù)時間，特別有可能最小化或者防止對人或動物體內(nèi)需要長期DP IV抑制作用的過程的影響。
反應(yīng)時間為5分鐘。在1.0mmol的Z-保護肽中添加2ml的HBr/冰乙酸(33％)，混合物在23℃下攪拌約10分鐘。然后進行真空濃縮。用乙醚使氫溴酸鹽的肽從甲醇中沉淀，抽濾，然后真空干燥。經(jīng)驗式C16H24N3O2Cl分子量325.84Da產(chǎn)率理論值的97.7％HPLC保留時間7.4分鐘，LiChrosper 100 RP-18(125-4),λ=220nm，流速0.5ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)MALDI-TOF-MS m/z:291.2 Da(M+H+，無氯離子)1.2合成H-Phe-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-a)Z-Phe-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-結(jié)構(gòu)式 制備將2ml吡啶添加在10mmol的Z-Phe-Pro-氯甲基酮中。該混合物在23℃下攪拌4天。在2mbar的真空下蒸餾掉過量的吡啶。粗產(chǎn)物在60g硅膠上進行純制。在氯仿/甲醇洗脫液(9∶1體積比)中首先收集產(chǎn)物，然后隨著洗脫液的極性增加，收集氯甲基酮。Z-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮最后進行HPLC純制。經(jīng)驗式C28H30N3O4Cl分子量508.01Da產(chǎn)率理論值的69.6％HPLC保留時間17分鐘，LiChrosper RP-8(Hibar),λ=220nm,流速8.0ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)保留時間3.4分鐘，LiChrosper RP 8(125*4),λ=220nm,流速1.5ml/min，梯度30-80％乙腈水溶液(0.1％TFA)25分鐘保留時間10.2分鐘，Nucleosil 7 C8,λ=220nm，流速8ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)1H NMR(DMSO-d6)δH:1.7-2.1(4H,m,H20和H21),2.7-3.0(2H,m,H11),3.4-3.9(2H,m,H19),4.4-4.6(1H,m,H9),4.6-4.8(2H,m,H24,H25),5.0-5.1(2H,dd,H7),5.7-5.8(1H,d,H18),5.9-6.1(2H,dd,H23),7.2-7.4(10H,m,H2-H6,H13-H17),8.6-8.8(1H,dd,H28),8.2-8.3(2H,d,H26和H27),8.8-8.9(1H,d,6Hz,NH)13C NMR(DMSO-d6)δC:136.8(C1),127.9(C2,C3),127.6(C4,C5),128.4(C6),65.5(C7),156.3(C8),54.1(C9),170.9(C10),36.4(C11),137.6(C12),126.6(C13,C14),128.4(C15,C16),129.3(C17),63.1(C18),46.9(C19),25.1(C20),27.6(C21),200.7(C22),66.3(C23),146.2(C24,C25),128.2(C26,C27),146.4(C28)MALDI-TOF-MS m/z:472.8 Da(M+H+，無氯離子)b)H-Phe-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-結(jié)構(gòu) 制備從Z-Phe-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-中脫除Z保護基，反應(yīng)時間為5分鐘。在1.0mmol的Z-保護肽中添加2ml的HBr/冰乙酸(33％)，混合物在23℃下攪拌約10分鐘。然后進行真空濃縮。
用乙醚使氫溴酸鹽形式的肽從甲醇中沉淀，抽濾，然后真空干燥。經(jīng)驗式C20H24N3O2Cl分子量373.88Da產(chǎn)率理論值的98％HPLC保留時間6.9分鐘，LiChrosper 100 RP-18(125-4),λ=220nm，流速0.5ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)MALDI-TOF-MS m/z:337.2 Da(M+H+，無氯離子)1.3合成H-Gly-Pro-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-a)Z-Gly-Pro-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-結(jié)構(gòu)式 制備將2ml吡啶添加在10mmol的Z-Gly-Pro-Val-Pro-氯甲基酮中。
該混合物在23℃下攪拌4天。在2mbar的真空下蒸餾掉過量的吡啶。Z-Gly-Pro-Val-Pro-吡啶翁甲基酮用HPLC進行純制。經(jīng)驗式C31H40N5O6Cl分子量614.14Da產(chǎn)率理論值的69.6％HPLC保留時間17.4分鐘，LiChrosper RP 8 Hibar,λ=220nm,流速8.0ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)保留時間5.4分鐘，LiChroCART 100 RP-18(125-4),λ=220nm，流速0.5ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)保留時間17.7分鐘，Nucleosil 100 7 C8,λ=220nm，流速8ml/min，非梯度50％乙腈水溶液(0.1％TFA)13C NMR(DMSO-d6)δC:134.4(C1),128.9(C2,C3),128.2(C4,C5),129.8(C6),65.3(C7),157.2(C8),39.0(C9),165.7(C10),56.0(C11),41.6(C12),24.6(C13),29.0(C14),170.5(C15),52.1(C16),171.9(C17),30.3(C18),18.6,19.3(C19,C20),58.9(C21),47.2(C22),25.0(C23),29.4(C24),196.5(C25),65.8(C26),137.9(C27,C28),129.1(C29,C30),146.5(C31)MALDI-TOF-MS m/z:579.7 Da(M+H+，無氯離子)b)H-Gly-Pro-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-結(jié)構(gòu) 制備從Z-Phe-Pro-CH2-(N+C5H5)/Cl-中脫除Z保護基，反應(yīng)時間為5分鐘。在1.0mmol的Z-保護肽中添加2ml的HBr/冰乙酸(33％)，混合物在23℃下攪拌約10分鐘。然后進行真空濃縮。
用乙醚使氫溴酸鹽形式的肽從甲醇中沉淀，抽濾，然后真空干燥。經(jīng)驗式C23H34N5O4Cl分子量480.0Da產(chǎn)率理論值的95％MALDI-TOF-MS m/z:443.9 Da(M+H+，無氯離子)1、不穩(wěn)定DP IV抑制劑以及它們掩蔽的形式在水溶液中的分解為分析在1.1和1.2中制各的抑制劑的穩(wěn)定性，在緩沖水溶液中溫育這些抑制劑，并用MALDI-TOF質(zhì)譜監(jiān)測它們的分子內(nèi)環(huán)化(圖2和3)。反應(yīng)產(chǎn)物為相應(yīng)的吡嗪衍生物(

圖1)。
分子量為337.2Da的H-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮分解為分子量是319.2Da的環(huán)狀吡嗪衍生物，其中除去水，該反應(yīng)在30分鐘的時間內(nèi)完全是定量的(圖2)。
分子量為291.2Da的H-Val-Pro-吡啶翁甲基酮分解為分子量是273.2Da的環(huán)狀吡嗪衍生物，其中除去水，該反應(yīng)在60分鐘的時間內(nèi)完全是定量的(圖3)。
在分子內(nèi)反應(yīng)期間形成吡嗪的雙鍵系統(tǒng)，使得能夠通過UV光譜計定量分析環(huán)化過程(圖4)。在0.1M HEPES緩沖液pH=7.6和25℃下由其中測定的不穩(wěn)定DP IV抑制劑的分子內(nèi)環(huán)化反應(yīng)速率常數(shù)見以下表1所示。
表1不穩(wěn)定DP IV抑制劑的環(huán)化反應(yīng)參數(shù)
與此相反的是，證明根據(jù)本發(fā)明的H-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)和H-Gly-Pro-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)化合物在相同條件下于24小時的時間中是完全穩(wěn)定的。2、不穩(wěn)定DP IV抑制劑或者根據(jù)本發(fā)明的包含二肽基肽酶IV的化合物在水溶液中的相互作用在存在底物時DP IV目標酶與不穩(wěn)定抑制劑溫育，首先觀察酶的抑制；由于平行地發(fā)生抑制劑的分子內(nèi)環(huán)化，抑制作用隨實驗時間的發(fā)展開始下降，這是因為反應(yīng)溶液中的抑制劑濃度由于同時發(fā)生的化學反應(yīng)而降低。該作用見圖5和6所示。因為抑制劑濃度的時間依賴性降低，底物的酶催化水解的速率隨時間增加。
與未掩蔽的DP IV抑制劑相反，已證明在沒有酶存在時根據(jù)本發(fā)明的化合物H-Gly-Pro-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)在緩沖水溶液中于24小時的時間內(nèi)都是穩(wěn)定的。僅在添加DP IV酶時釋放活性DP IV抑制劑H-Val-Pro-CH2-(N+C5H5)(在此也稱為釋放DP IV抑制劑)，其中除去N端二肽H-Gly-Pro-OH。因此，在質(zhì)譜(圖7)中，即使在溫育60分鐘后，根據(jù)本發(fā)明的溫育化合物中仍有50％以上可以被檢測出來。由于延遲釋放，還令人驚奇地發(fā)現(xiàn)除所希望地有效抑制目標酶外，與不穩(wěn)定DP IV抑制劑相比，明顯地延長了活性而且顯著降低根據(jù)本發(fā)明的化合物的濃度(圖8)。 圖1H-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮的分子內(nèi)環(huán)化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式。對相應(yīng)的原子給出用13C NMR和1H NMR測定的特征化學位移(ppm)。 圖2H-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮在pH=7.6的緩沖水溶液中的分子內(nèi)環(huán)化反應(yīng)的MALDI-TOF質(zhì)譜，其是根據(jù)溫育時間來記錄的。 圖3H-Val-Pro-吡啶翁甲基酮在pH=7.6的緩沖水溶液中的分子內(nèi)環(huán)化反應(yīng)的MALDI-TOF質(zhì)譜，其是根據(jù)溫育時間來記錄的。 圖4在0.1 MHEPES緩沖液pH=7.6中于30℃下溫育的H-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮水溶液的UV光譜。環(huán)化反應(yīng)的監(jiān)測時間為40分鐘。 圖5在0.1M HEPES緩沖液pH=7.6、30℃中有2.8×10-3M的H-Val-Pro-吡啶翁甲基酮、0.06μg/ml的DP IV、4×10-4M的H-Gly-Pro-pNA存在時DP IV對底物H-Gly-Pro-pNA的催化水解反應(yīng)曲線。 圖6在0.1M HEPES緩沖液pH=7.6、30℃中有2.1×10-4M的H-Phe-Pro-吡啶翁甲基酮、0.0(6μg/ml的DP IV、1.0×10-3mol/l的H-Gly-Pro-pNA存在時DP IV對底物H-Gly-Pro-pNA的催化水解反應(yīng)曲線。 圖7在有2.6×10-5mol/l的H-Gly-Pro-Val-Pro-吡啶翁甲基酮、0.06μg/ml的DP IV、2.0×10-4M的H-Gly-Pro-pNA、0.1M HEPES緩沖液pH=7.6存在時在30℃下DP IV對H-Gly-Pro-pNA的催化水解的溫育浴的MALDI-TOF質(zhì)譜。 圖8在0.1M HEPES緩沖液pH=7.6、30℃中有2.6×10-5mol/l的H-Gly-Pro-Val-Pro-吡啶翁甲基酮、0.06μg/ml的DP IV、2.0×10-4M的H-Gly-Pro-pNA存在時DP IV對H-Gly-Pro-pNA的催化水解的反應(yīng)曲線。
權(quán)利要求
1.二肽基肽酶IV(DP IV)的抑制劑的化合物，該化合物具有通式A-B-C，其中A是氨基酸，B是A和C之間的化學鍵或者是氨基酸，而C是DP IV的不穩(wěn)定抑制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，B是脯氨酸、羥基脯氨酸、噻唑烷羧酸、脫氫脯氨酸、2-哌啶酸、氮雜環(huán)丁烷羧酸或者氮丙啶羧酸。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于，B是脯氨酸和羥基脯酸。
4.如任一前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，C為在C端具有活性羰基的二肽衍生物，如二肽基烷基酮衍生物。
5.如任一前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，C是二肽基氯烷基酮、二肽基硼酸或者二肽基氰化物或者二肽基吡啶翁甲基酮基團。
6.如任一前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，所述抑制劑為鹽的形式。
7.如任一前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，A-B是式Ile-Pro或Gly-Pro的二肽。
8.特別是用于口服給藥的藥物組合物，其特征在于包括至少一種如任一前述權(quán)利要求所述的化合物以及任選的常規(guī)載體或賦形劑。
9.如任一前述權(quán)利要求所述的化合物或者藥物組合物在制備用于暫時性受控體內(nèi)抑制DP IV的藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1-7之一所述的化合物或藥物組合物在細胞、組織或器官特異性抑制DP IV中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求1-7之一所述的化合物或藥物組合物在治療哺乳動物中可通過調(diào)節(jié)哺乳動物的DP IV活性來治療的疾病中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其是用于治療人的代謝紊亂。
13.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其是用于治療哺乳動物中受損葡糖耐量、葡糖尿、高脂血、代謝酸中毒、糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病和腎病、以及糖尿病的后遺癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及二肽基肽酶Ⅳ(DPⅣ)的不穩(wěn)定抑制劑的化合物,該化合物具有通式A－B－C,其中A是氨基酸,B是A和C之間的化學鍵或者是氨基酸,而C是DPⅣ的不穩(wěn)定抑制劑。該化合物可用于治療哺乳動物中受損葡糖耐量、葡糖尿、高脂血、代謝酸中毒、糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病和腎病、以及糖尿病的后遺癥。
文檔編號A61P3/10GK1306541SQ99807628
公開日2001年8月1日 申請日期1999年6月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月24日
發(fā)明者漢斯-烏爾里?！さ履绿? 約恩·施米特, 托爾斯滕·霍夫曼, 康拉德·格隆德 申請人:前體生物藥物開發(fā)有限公司