專利名稱：治療血栓形成疾病的三唑并吡啶的制作方法
本申請對美國臨時申請序號60/094231(1998年7月27日提交)提出了權(quán)利要求，其內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及的某些新的化合物、它們的合成及它們對治療血栓形成疾病用途。更具體地說，所述化合物是抑制血小板聚集的纖維蛋白原受體拮抗劑，并且在治療血栓形成的疾病中是有效的。
本發(fā)明背景血小板聚集構(gòu)成最初的止血反應(yīng)以減少由血管損傷引起的出血。然而，這一正常止血過程的病理學(xué)延伸可導(dǎo)致血栓形成。最終，血小板聚集的共同通道是纖維蛋白原與活化、暴露的血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)結(jié)合。因而中止纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa結(jié)合的藥劑可抑制血小板聚集。因此，這些藥劑對治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病如動脈和靜脈血栓形成、急性心肌梗塞、不穩(wěn)定型心絞痛、溶栓治療和血管成形術(shù)后的血管再閉塞、炎癥以及各種血管閉塞性疾病是有效的。通過刺激物如將結(jié)合域暴露給纖維蛋白原的兩個不同的肽區(qū)域α-鏈Arg-Gly-Asp(RGD)和γ-鏈His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val(HHLGGAKQAGDV,γ400-411)的ADP、膠原和凝血酶而活化所述纖維蛋白原受體(GPⅡb/Ⅲa)。由于這些肽片段本身已顯示抑制纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa結(jié)合，所以這些片段的模擬物也可用作拮抗劑。事實(shí)上，在本發(fā)明以前，已揭示以有效的RGD-為基礎(chǔ)的拮抗劑抑制纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa結(jié)合和血小板聚集，例如，Ro-438857(L.Alig,J.Med.Chem.1992,35,4393)在體外抗凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集中具有0.094μM的IC50。這些藥物中的一些在體內(nèi)也顯示了抗血栓形成藥的功效，并且在某些病例中，已與溶栓治療如t-PA或鏈激酶等聯(lián)合使用(J.A.Zablocki,CurrentPharmaceutical Design 1995,1,533)。
因此，本發(fā)明的目的是確認(rèn)為GPⅡb/Ⅲa拮抗劑的化合物。本發(fā)明的另一目的是確認(rèn)通過抑制纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa結(jié)合而抑制血小板聚集的化合物。本發(fā)明的再一個目的是確認(rèn)對治療血栓形成疾病有用的化合物。本發(fā)明的又一個目的是確認(rèn)用本發(fā)明的化合物治療血栓形成疾病的方法。
現(xiàn)在我們描述用作GPⅡb/Ⅲa拮抗劑并對治療血栓形成疾病有用的系列三唑并吡啶化合物。
優(yōu)選本發(fā)明的所述化合物為下式的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中M是(CH2)m、CH=CH或C≡C；而所有其它變量則如以上所定義。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案是式(Ⅰ)或(Ⅱ)的所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中M是(CH2)m或CH=CH；R5是C(O)NHQ(CHW)rCO2R8；其中Q選自CH2、CH-雜芳基或CH-取代的-雜芳基；W選自氫或N(R6)T-R7；其中R6是H；T是C(O)；R7選自C1-C8烷基、芳基、芳(C1-C8)烷基、芳(C1-C8)烷氧基、C1-C8烷氧基或(C1-C8)烷基氨基；R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立為C1-C8烷基；R10是氫；
R15選自氫或C1-C4烷基；r是1；而所有其它變量則如以上所定義。
在本發(fā)明的一類中是選自以下式(Ⅰ)的所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R8是氫或CH2CONEt2；R13選自氫、3-吡啶基或3-喹啉基；R14選自氫或NHCO2CH2Ph；和R15選自氫或甲基。
本發(fā)明的示范性例子是選自下列的式(Ⅰ)的所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-3-噻吩丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-8-甲基-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)Z-1-氟乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-4-吡啶丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-4-(3,5-二甲基異噁唑基)磺酰氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-喹啉基丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐基磺酰氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-3-吡啶基乙酰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-異丁氧基羰基氨基-丙酸；或β-[[[3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸。
本發(fā)明的示范性例子是包含藥學(xué)上可接受的載體和上述任何化合物的藥用組合物。本發(fā)明的示范性例子是通過混合上述任何化合物及藥學(xué)上可接受的載體而制成的藥用組合物。本發(fā)明的示范性例子是制備包含上述任何化合物及藥學(xué)上可接受的載體混合物的藥用組合物的方法。
本發(fā)明的進(jìn)一步的示例是在有此需要的患者中治療下列疾病的方法a)治療由GPⅡb/Ⅲa介導(dǎo)的疾病，b)治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病，和/或c)抑制血小板聚集，該方法包括給予所述患者治療有效量的上述任何化合物或藥用組合物。
優(yōu)選在本發(fā)明任何方法中使用的所述化合物的治療有效量為大約0.1至約300mg/Kg/日。
本發(fā)明還包括上述任何化合物在制備藥物中的用途，該藥物用于在有此需要的患者中a)治療由GPⅡb/Ⅲa介導(dǎo)的疾病，b)治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病和/或c)抑制血小板聚集。本發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用作GPⅡb/Ⅲa拮抗劑的三唑并吡啶化合物。更具體地說，式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物抑制纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa的結(jié)合，因而用于治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病。血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病的實(shí)例包括但不限于動脈和/或靜脈血栓形成、急性心肌梗塞、溶栓治療和/或血管成形術(shù)后的血管再閉塞、炎癥、不穩(wěn)定型心絞痛、再狹窄以及各種血管閉塞性疾病。這些化合物也作為抗血栓形成劑與溶栓治療(如t-PA或鏈激酶)聯(lián)合使用。
本發(fā)明的三唑并吡啶化合物是GPⅡb/ⅢⅡa拮抗劑。下文所述的藥理學(xué)研究的結(jié)果證明，所述化合物具有阻止纖維蛋白原與分離的GPⅡb/Ⅲa結(jié)合(大約0.0001-0.5μM的IC50)、在各種血小板刺激物存在時體外抑制血小板聚集(相對凝血酶大約0.01-10μM的IC50)、以及在動物模型中抑制來自體內(nèi)(ex vivo)的血小板聚集的能力。此外，這些藥物還在血栓形成的動物模型中展示出功效。本發(fā)明的所述化合物是憑借它們阻止血小板聚集的能力而表現(xiàn)出抗血栓形成藥的功效的三唑并吡啶。此外，由于本發(fā)明的所述化合物抑制整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)粘附，所以它們可能用于對抗再狹窄、炎癥、骨吸收、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等(D.Cox,Drug News&Perspectives 1995,8,197)。
本發(fā)明的所述化合物也可以藥學(xué)上可接受的鹽的形式給出。對于醫(yī)學(xué)中的使用，本發(fā)明化合物的鹽涉及無毒的“藥學(xué)上可接受的鹽”。然而，其它鹽可用于制備本發(fā)明的化合物或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。所述藥學(xué)上可接受的鹽通常采取其中在1-哌啶(吡咯烷、哌嗪)取代基上的氮用無機(jī)或有機(jī)酸質(zhì)子化的形式。代表性的有機(jī)或無機(jī)酸包括但不限于鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、高氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苦杏仁酸、甲磺酸、羥乙磺酸、苯磺酸、草酸、撲酸、2-萘磺酸、對-甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、水楊酸、糖精酸或三氟醋酸。
本發(fā)明包括在其范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物的前體藥物。通常，這種前體藥物是所述化合物的功能性衍生物，其在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為所需的化合物。因此，在本發(fā)明的治療方法中，術(shù)語“給予”將包括用特別公開的化合物或用未特別公開的化合物治療各種疾病，但是所述未特別公開的化合物在給予患者后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為特定的化合物。用于選擇和制備合適的前體藥物衍生物的常規(guī)方法描述于例如“前體藥物的設(shè)計(jì)”(H.Bundgaard編輯，Elsevier,1985)中。
按照本發(fā)明的所述化合物至少具有一個手性中心，因此它們可作為對映體存在。當(dāng)所述化合物擁有二個或多個手性中心的時，它們可另外作為非對映體存在。可以理解所有此類異構(gòu)體和它們的混合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。而且，所述化合物的某些結(jié)晶體形式可作為多形體存在并打算包括在本發(fā)明中。此外，某些所述化合物可形成與通常的有機(jī)溶劑或水的溶劑化物(即水合物)，并且這種溶劑化物也打算包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明也提供下式AA3’的新的中間體及其鹽 其中M是(CH2)m、CH=CH、CF=CH、CH=CF或C≡C；優(yōu)選(CH2)m、CH=CH或C≡C；A選自哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、NHR2或 其中R9選自氫、C1-C8烷基、CH=(NH)、CMe=(NH)、C2-C6?；?、C1-C8烷氧基羰基或芳(C1-C8烷氧基)羰基；R2選自氫、C1-C8烷基或C2-C6?；籖10選自氫或C(O)N(R1)YZ，其中R1選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；Y選自(CH2)p、CH(R3)(CH2)q、(CH2)qCH(R3)、(CH(CO2R4)CH2)q、(CH2)qCHOH或哌啶-3-羧酸；R3選自C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、芳基、芳(C1-C8)烷基或雜芳基；
R4選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；p是選自2或3的整數(shù)；q是選自1、2或3的整數(shù)；Z是CO2R8；R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；m是選自1、2或3的整數(shù)；R15和R16各自獨(dú)立選自氫或C1-C8烷基。
優(yōu)選具有下式的中間體及其鹽 本發(fā)明還提供形成式(Ⅰ)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的方法， 該方法包括將下式AA3’化合物 與式H2N-Q(CHW)CO2R8(AA4’)化合物反應(yīng)以形成式(Ⅰ)化合物。優(yōu)選該方法進(jìn)一步包括將下式AA2’化合物 溶解于選自醇或諸如氯苯或甲苯的芳香劑溶劑中以形成溶液，加熱該溶液形成化合物AA3’ 本文使用的術(shù)語“受試者”指為治療、觀察或試驗(yàn)對象的動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
本文使用的術(shù)語“治療有效量”指在由研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生選擇的組織系統(tǒng)、動物或人中引起生物學(xué)或醫(yī)藥反應(yīng)的活性化合物或藥物的量，所述生物學(xué)或醫(yī)藥反應(yīng)包括被治療的疾病或病癥癥狀的減輕。
如本文所使用的(除非另外指明)，烷基和烷氧基單獨(dú)使用或者作為取代基團(tuán)的部分使用，包括具有1-8碳原子或這一范圍內(nèi)的任一數(shù)目的碳原子的直鏈和支鏈。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基和2-甲基戊基。烷氧基是由前述直鏈或支鏈烷基基團(tuán)形成的氧醚。環(huán)烷基基團(tuán)含有3-8個環(huán)碳原子，優(yōu)選5-7個碳原子。同樣，鏈烯基和炔基基團(tuán)包括具有1-8個碳原子或這一范圍內(nèi)的任一數(shù)目的碳原子的直鏈和支鏈烯烴和炔烴。
術(shù)語“芳基”表示諸如苯基和萘基的芳香基基團(tuán)。
本文使用的術(shù)語“雜芳基”表示穩(wěn)定的5或6元單環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)或9或10元苯并稠合的雜芳環(huán)系，其包含碳原子和選自N、O或S的1-3個雜原子。所述雜芳基基團(tuán)可連接于導(dǎo)致穩(wěn)定結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的任何雜原子或碳原子上。雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并異噁唑基、苯并噁唑基、苯并吡唑基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基或喹啉基。優(yōu)選雜芳基基團(tuán)包括吡啶基、噻吩基、呋喃基和喹啉基。當(dāng)所述雜芳基基因是“取代的雜芳基”時，所述取代基是1-3個C1-C8烷基基團(tuán)。
術(shù)語“芳烷基”指用芳基取代的烷基基團(tuán)(如芐基、苯乙基)。同樣，術(shù)語“芳烷氧基”表示用芳基取代的烷氧基基團(tuán)(如芐氧基)。
本文使用的術(shù)語“酰基”指通過去除羥基而得自有機(jī)酸的具有2-6個碳原子的有機(jī)基團(tuán)(支鏈或直鏈)。
這就意味著在分子的特定位置的任何取代基或變量(如R8)的定義與其在該分子的另外位置的定義無關(guān)?？梢岳斫庠诒景l(fā)明化合物上的取代基及取代模式能夠由一個本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員選擇，以提供化學(xué)穩(wěn)定的并且能夠由本領(lǐng)域已知技術(shù)以及本文闡述的這些方法容易合成的化合物。
在本公開書中使用的標(biāo)準(zhǔn)命名法下，首先描述了指定側(cè)鏈的末端部分，隨后是連接于附著點(diǎn)的相鄰官能度。因此，例如，“苯基C1-C6烷基酰氨基C1-C6烷基”取代基表示下式基團(tuán) 本文使用的術(shù)語“組合物”意欲包括包含特定量的特定成分的產(chǎn)物，以及直接或間接由特定成分以特定的量組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)物。
按照本文實(shí)施例21-23所述的方法能夠確定所述化合物治療血栓形成疾病的效用。因此本發(fā)明提供了在有此需要的受試者中治療血栓形成疾病的方法，該方法包括以有效治療血栓形成疾病的量給予本文定義的任何化合物。所述化合物可通過任何給藥的常規(guī)途徑給予患者，包括但不限于靜脈、口服、皮下、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)和胃腸外。
本發(fā)明還提供了包含一種或多種本發(fā)明化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
為了制備本發(fā)明的藥用組合物，作為活性成分的本發(fā)明的一種或多種式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物或它們的鹽，按照常規(guī)藥物配合技術(shù)與藥用載體密切混合，該載體可根據(jù)例如口服或諸如肌肉內(nèi)的胃腸外給藥所需的劑型而采用多種不同的形式。在制備口服劑型的組合物中，可采用任何常用的藥物介質(zhì)。因此，對于液體口服制劑，例如混懸劑、酏劑和溶液，合適的載體和添加劑包括水、乙二醇、油、乙醇、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等；對于固體口服制劑，例如粉劑、膠囊、caplets、gelcaps和片劑，合適的載體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于它們易于給藥，所以片劑和膠囊劑代表了最有益的口服劑量單位形式，在這種情況下顯然使用固體藥用載體。如果需要的話，片劑可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行糖包衣或腸溶包衣。對于胃腸外使用的制劑，所述載體通常包含無菌水，可以包括其它例如用于助溶目的或防腐的成分。也可制備注射用混懸劑，在這種情況下可使用合適的液體載體、懸浮劑等。本文所述藥用組合物每個劑量單位如片劑、膠囊、粉劑、注射劑、一茶匙容量等含有必需釋放如上所述的有效劑量的活性成分的量。本文所述藥用組合物每個劑量單位如片劑、膠囊、粉劑、注射劑、栓劑、一茶匙容量等含有約0.03mg-100mg/kg(優(yōu)選0.1-30mg/kg)，并且以約0.1-300mg/kg/日的劑量給予(優(yōu)選1-50mg/kg/日)。然而，所述劑量可根據(jù)患者的需要、所治療疾病的嚴(yán)重性以及所使用的化合物而改變。既可采用每日給藥也可采用周期性給藥(post-periodicdosing)的用法。
優(yōu)選這些組合物為單位劑量形式諸如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、無菌胃腸外使用的溶液或混懸劑、計(jì)量氣霧劑或液體噴劑、滴劑、安瓿、自動注射裝置或栓劑；用于口服、胃腸外、鼻內(nèi)、舌下或直腸給藥，或用于吸入或吹入給藥?；蛘?，所述組合物以適合于每周一次或每月一次給藥的形式存在；例如，所述活性化合物的不溶解的鹽，如癸酸鹽，可適用于提供肌肉內(nèi)注射用的貯存(depot)制劑。對于制備固體組合物如片劑，將主要的活性成分與藥用載體混合，例如傳統(tǒng)制片成分如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹膠以及其它藥用稀釋劑(如水)，從而形成含有本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的均勻混合物的固體預(yù)配制組合物。當(dāng)將這些預(yù)配制組合物稱作均勻時，則意味著所述活性成分均勻分布于整個組合物，以便容易地將所述組合物細(xì)分到同樣有效的劑型中，如片劑、丸劑和膠囊劑。然后將該固體預(yù)配制組合物細(xì)分為含有0.1至約500mg的本發(fā)明活性成分的上述類型的單位劑型?？蓪⑺鲂碌慕M合物的片劑或丸劑包衣或另外混合以提供具有延長作用優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，所述片劑或丸劑可包含內(nèi)部藥劑和外部藥劑成分，后者以包封的形式包裹前者。這兩種成分能夠由用作胃內(nèi)抗崩解劑的腸溶層分隔并使所述內(nèi)部成分完整進(jìn)入十二指腸或延遲釋放。能使用多種材料作為這種腸溶層或包衣，這類材料包括多種高分子酸以及如蟲膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素這樣的物質(zhì)。
其中本發(fā)明的新組合物可摻入用于口服或注射給藥的液體形式包括水性溶液、適當(dāng)調(diào)味的糖漿、水性或油性混懸劑、用可食用油如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油調(diào)味的乳劑、以及酏劑和類似的藥用溶媒。用于水性混懸劑的合適的分散劑或懸浮劑包括合成和天然的樹膠如黃芪膠、阿拉伯膠、藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
在按照本發(fā)明的所述化合物的制備過程中產(chǎn)生立體異構(gòu)體混合物，這些異構(gòu)體可通過常規(guī)技術(shù)如制備層析分離。所述化合物可以以外消旋形式制備，或者各個對映體可通過對映特異性的合成或通過分解來制備。例如，所述化合物可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)解析為它們的成分對映體，例如通過用旋光性的酸如(-)-二對甲苯甲酰右酒石酸和/或(+)-二對甲苯甲酰左酒石酸形成鹽，隨后通過分步結(jié)晶和自由堿再生而形成非對映體對。所述化合物也可通過非對映體酯或酰胺的形成，隨后通過層析分離和手性輔助物的去除而拆分?；蛘?，所述化合物可使用手性HPLC柱拆分。
在本發(fā)明化合物的制備的任何步驟期間，可能需要和/或想要保護(hù)任何有關(guān)分子上的敏感的或反應(yīng)的基團(tuán)。依靠常規(guī)保護(hù)基團(tuán)可以實(shí)現(xiàn)這一目的，如在Protective Groups in Organic Chemistry,J.F.W.McOmie編輯，Plenum Press,1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wliey&Sons,1991中所描述那些基團(tuán)。采用本領(lǐng)域已知的方法可在適當(dāng)?shù)暮罄m(xù)階段去除所述保護(hù)基團(tuán)。
本發(fā)明描述的治療血栓形成疾病的方法也可采用包含本文定義的任何所述化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物進(jìn)行。所述藥用組合物可含有約001mg-100mg，優(yōu)選約5mg-50mg的所述化合物，并可構(gòu)成適用于所選擇的給藥模式的任何形式。載體包括必需的和惰性的藥用賦形劑，包括但不限于粘合劑、懸浮劑、潤滑劑、調(diào)味劑、甜味劑、防腐劑、染色劑和包衣劑。適合于口服給藥的組合物包括固體形式如丸劑、片劑、caplets、膠囊劑(每種包括即時釋放、定時釋放和緩釋劑型)、顆粒劑和粉劑，以及液體形式如溶液、糖漿、酏劑、乳劑和混懸劑。用于胃腸外給藥的形式包括無菌的溶液、乳劑和混懸劑。
有益的是，本發(fā)明化合物可以以單個日劑量給予，或者總的日劑量可以以每日二、三或四次分開的劑量給予。此外，本發(fā)明的化合物能夠以鼻內(nèi)劑型經(jīng)由合適的鼻內(nèi)載體的局部使用給藥，或者經(jīng)由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已熟知的透皮皮膚貼片使用。對于以透皮釋放系統(tǒng)的形式給藥，當(dāng)然所述藥劑給予在整個給藥方案中將是連續(xù)的而不是間歇的。
例如，對于以片劑或膠囊形式口服給藥，所述活性藥物成分能與口服無毒的藥學(xué)上可接受的惰性載體如乙醇、甘油、水等混合。而且，當(dāng)需要或必要時，合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑也能加入到該混合物中。合適的粘合劑包括但不限于淀粉、明膠、天然糖如葡萄糖或β乳糖、玉米甜料、天然及合成樹膠如阿拉伯膠、黃芪膠或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。
適當(dāng)調(diào)味的懸浮劑或分散劑如合成及天然樹脂，例如黃芪膠、阿拉伯膠、甲基纖維素等形成的液體形式。對于胃腸外給予，需要無菌的混懸劑和溶液。當(dāng)靜脈給予時，需要使用通常含有合適防腐劑的等滲制劑。
本發(fā)明的所述化合物還能以脂質(zhì)體釋放系統(tǒng)的形式給予，如小單層脂質(zhì)囊狀體(unilamellar vesicles)、大單層脂質(zhì)體和多層脂質(zhì)體。脂質(zhì)體能由多種磷脂形成，如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿。
通過使用單克隆抗體作為所述化合物分子與其偶聯(lián)的各個載體也可傳遞本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的所述化合物也可與作為靶向藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。這種聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺苯酚(methacrylamidephenol)聚羥基-乙基天冬酰胺苯酚(aspartamidephenol)或由棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷聚賴氨酸。此外，本發(fā)明的所述化合物可與一種用于實(shí)現(xiàn)藥物控制釋放的生物可降解的聚合物偶聯(lián)，例如聚乳酸、聚-ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二羥基吡喃(polydihydropyrans)、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或兩親性嵌段共聚物。
每當(dāng)需要治療血栓形成疾病時，本發(fā)明的化合物可以以任何前述組合物并按照本領(lǐng)域確立的藥劑方案給予。
所述產(chǎn)品的日劑量可以在每個成人每天0.01-1,000mg的寬范圍內(nèi)變化。對于口服給藥，所述組合物優(yōu)選以含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500毫克活性成分的片劑形式提供給治療的患者(根據(jù)癥狀調(diào)節(jié)劑量)。通常以每天每公斤體重約0.01mg-100mg的劑量水平供給接受所述藥物的有效量。優(yōu)選該范圍為每天每公斤體重約0.03-10mg。所述化合物可以以每日1-4次的方案給予。
給予的最佳劑量可容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，并且隨具體使用的化合物、給藥模式、制劑濃度、給藥模式以及疾病情況的進(jìn)展而改變。此外，伴隨著治療的具體患者的因素，包括患者年齡、重量、飲食及給藥時間，將導(dǎo)致需要調(diào)整劑量。
以下是在本說明書、具體的流程和實(shí)施例中使用的縮寫AcOH =醋酸Bn或Bzl =芐基Boc =叔丁氧基羰基BOC-ON=2-(叔丁氧基羰基氧基氨基)-2-苯乙腈BOP-Cl=雙(2-氧-3-噁唑烷基)-次膦酸氯BSA =牛血清白蛋白CBZ =芐氧基羰基CP=化合物DCE =1,2-二氯乙烷DCM =二氯甲烷DIC =二異丙基碳化二亞胺DIEA =二異丙基乙胺DMAP =4-二甲氨基吡啶DMF =N,N-二甲基甲酰胺DMSO =二甲亞砜EDC =乙基二甲氨基丙基碳化二亞胺EDTA =乙二胺四乙酸Et=乙基Et2O =乙醚EtOAc =乙酸乙酯EtOH =乙醇HBTU =2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽HEPES =4-(2-羥乙基)-1-哌嗪-乙磺酸HOBT =羥基苯并三唑i-Pr =異丙基
Me =甲基MeOH=甲醇MPK =每公斤毫克NMM =N-甲基嗎啉Nip =3-哌啶甲基(nipecotyl)(除非另有說明，否則在3-位外消旋)NT =未測試Ph =苯基PPT =沉淀物PTSA=ρ-甲苯磺酸RT =室溫Sat＇d =飽和的TEA =三乙胺TFA =三氟乙酸THF =四氫呋喃TMS =三甲基硅烷Z =芐氧基羰基本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物包括示于表1的那些化合物。其中應(yīng)該注意字母“R”表示絕對構(gòu)型(順序規(guī)則)。
表1 號 R8R13R14R15鍵1 H 3-吡啶基 HH單2 H HHH單3 H HNHCO2CH2Ph H單4 CH2CONEt23-吡啶基 HH單5 H HNHCO2CH2Ph H雙6 CH2CONEt2HNHCO2CH2Ph H單7 H 3-噻吩基aHH單8 H HNHCO2CH2Ph Me 單9 參見以下結(jié)構(gòu)10 H 4-吡啶基aHH雙11 H H NHSO2-3,5-Me2-4-異噁唑基 H雙12 H 3-吡啶基 HH雙13 H 3-喹啉基 HH雙14 H HNHSO2CH2Ph H雙15 H H NHCOCH2-3-吡啶基 H雙16 H H NHCO2CH2CHMe2H雙17 參見以下結(jié)構(gòu)
a. 外消旋的。
如流程AA所示可以制備本發(fā)明的所述化合物，其中R10是H、R5是C(O)NHQ(CHW)rCO2R8和A是哌啶-4-基。按照PCT國際專利說明書WO97/41102中的細(xì)節(jié)以及按照出版物(J.Rico,J.Org.Chem.1993,58,7948)制備中間體AA4。以四個步驟制備羧酸AA3，開始用三乙基氧鎓四氟硼酸鹽使AA1進(jìn)行O-乙基化作用、用N-CBZ-4-哌啶丙酰肼(如PCT國際專利說明書WO97/41102中所述由4-哌啶丙酸和肼/HBTU制備)縮合、然后amridazone AA2經(jīng)由甲醇回流環(huán)化。對于化合物3,4和6-8，使N-Boc-4-哌啶丙酰肼(PCT國際專利說明書WO97/41102中的制備物)用于與O-乙基化的AA1的反應(yīng)中。接下來，用氫氧化鋰皂化三唑乙酯獲得AA3。采用標(biāo)準(zhǔn)的酰胺鍵偶合條件，使用β-氨基酯如AA4和AA3以及HBTU和乙腈中的HOBT。如對1所示制備化合物2；如對AA4所示制備拆分的β-氨基酯原料(參見AA4實(shí)驗(yàn))。
流程AA
從Aldrich化學(xué)公司購買2-氯-N,N-二乙基乙酰胺。可以以一個步驟由2-氯乙酰氯和合適的胺制備氯乙酰胺(流程AB；K,Krakowiak,J.Heterocyclic Chem.1989,26,661)。在這一步驟中，將2-氯乙酰氯和氫氧化鈉水溶液在室溫滴加到胺/DCM的溶液中并反應(yīng)1-2小時。流程AB 為了制備其中A是N-烷基-哌啶(R9=烷基)的化合物，例如，用乙醛/氰基氫硼化鈉的乙醇溶液處理化合物1獲得N-烷基哌啶。例如，通過周甲亞氨酸乙酯(ethyl formimidate)·HCl的乙醇溶液處理化合物1制備亞胺甲基氨基哌啶；使用S-2-萘基甲基硫代乙亞氨酸酯(thioacetimidate)·HCl的乙醇溶液制備相應(yīng)的亞胺乙基(acetamidino)哌啶(B.Shearer,Tetrahedron Lett.1997,38,179)。
流程AC 如流程AC所示可以制備中間體N-Boc-4-哌啶丙烯酸AC3。采用標(biāo)準(zhǔn)的Swern條件(草酰氯/DMSO)將乙醇AC1氧化為相應(yīng)的乙醛AC2。采用Wittig試劑在二氯甲烷中將AC2轉(zhuǎn)化為烯酯。然后在氫氧化鈉中將該酯皂化為所述酸獲得AC3。如流程AA所描述的將AC3轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰肼(AC4；肼/HBTU)并用于制備中間體AC6。通過氫氧化鋰皂化作用和隨后的HCl-介導(dǎo)的皂化作用使中間體AC6繼續(xù)反應(yīng)獲得烯屬產(chǎn)物如5和10-16。
流程AD 如流程AD所示采用標(biāo)準(zhǔn)烷基化方法可以制備R15為烷基的化合物。然后如流程AA所示可將烷基化的中間體AD2轉(zhuǎn)化為三唑并吡啶目標(biāo)物。
通過用丙酸乙酯鉀(碳酸鉀/丙酸乙酯)替換N-Boc-4-甲磺酰氧基哌啶制備M為乙炔基的化合物以產(chǎn)生N-Boc-4-哌啶丙-3-炔酸甲酯(T.Jeffery,Tetrahedron Lett.1989,30,2225)。然后將該酯皂化為相應(yīng)的羧酸并采用HBTU與肼偶合。
按照流程AA描述的方法采用合適取代的三唑并吡啶作為原料來制備R10為C(O)N(R1)YZ及R5為H的化合物。流程AE 如流程AE所示可以采用Homer-Emmons方法學(xué)制備氟乙烯中間體AE1。本文將乙醛AC2與2-氟膦?；宜崛阴?DBU/氯化鋰反應(yīng)獲得酯AE1。然后如流程AA所述，使該酯繼續(xù)反應(yīng)得到氟乙烯拮抗劑(參見9)。
流程AF 如流程AF所示可以制備不飽和三唑并吡啶化合物如17。在此，使氯代煙酸酯AF1與肼反應(yīng)獲得肼基吡啶中間體，然后將其與EDC活化的AF2縮合獲得酰基肼中間體。在醋酸存在下將該物質(zhì)加熱環(huán)化為AF3。然后如流程AA所述，使中間體AF3繼續(xù)反應(yīng)得到最終物質(zhì)17。
以下實(shí)施例的闡述有助于理解本發(fā)明，而并不意味著和不應(yīng)解釋為以任何方式限制下文的權(quán)利要求書中闡述的本發(fā)明。
保護(hù)的氨基酸從Aldrich Chemical或Bachem Bioscience公司購買。N-α-CBZ-L-二氨基丙酸從Fluka購買。2-氧代-3-哌啶羧酸乙酯從Aldrich Chemical公司購買及其它化學(xué)公司。在Bruker AC-360分光儀上以360MHz記錄高場1H NMR光譜，并以Herz給出偶合常數(shù)。熔點(diǎn)在Mel-TempⅡ型熔點(diǎn)測定儀上測定并且未加修正。在RobertsonMicrolit實(shí)驗(yàn)室，Inc.,Madison,New Jersey進(jìn)行微量分析，并以每個總分子量的各個元素的量以百分比(重量)表示。在這些情況時，所述產(chǎn)物作為鹽獲得，所述自由堿通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法如通過堿離子交換純化獲得。在Bruker AM-360(360MHz)分光儀上用四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)在指定的溶劑中測定氫原子的核磁共振(NMR)光譜。以TMS的每百萬低場部分表示該值。采用解吸化學(xué)電離技術(shù)，在Finnigan3300分光儀上(甲烷)測定質(zhì)譜(MS)。除非另有指明，否則實(shí)施例中使用的物質(zhì)從市售供應(yīng)商方便地獲得或由化學(xué)合成領(lǐng)域中任何技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法合成。除非另有指明，否則在實(shí)施例之間變化的取代基是氫。
實(shí)施例1(S)-3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸甲酯·2HCl(AA4)將3-吡啶甲醛(0.47mol)、EtOH(100mL)、NH4OAc(0.47mol)和丙二酸(0.70mol)的混合物回流加熱6小時，冷卻并過濾。所述白色固體用EtOH和MeOH洗滌并干燥(E.Profft,J.Prakt.Chem.1965,30,18)。將該固體溶于2∶1的丙酮/水(360mL)中，用三乙胺(0.72mol)和苯乙酰氯(0.36mol)處理并攪拌22小時。蒸發(fā)該混合物，將殘余物溶于水(500mL)中并調(diào)節(jié)pH至12(1N NaOH)。將含水層調(diào)節(jié)至pH為2(濃HCl)，用Et2O萃取，并蒸發(fā)為白色泡沫。該泡沫通過硅膠層析(10％MeOH/DCM)純化獲得外消旋的3-苯乙酰氨基-3-(3-吡啶基)丙酸。使用KOH(3.0N)將該化合物(0.22mol)的水(600mL)溶液在室溫調(diào)節(jié)至pH為7.5并用青霉素酰胺酶(91520單位，Sigma)處理。攪拌該混合物47小時，用HCl(濃)酸化至pH為1，生成物ppt通過硅藻土過濾。濾液用Et2O(3×300mL)萃取，真空濃縮并用MeOH/濃NH4OH(9∶1)處理。通過硅膠層析(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH,78∶18∶4)純化含有該產(chǎn)物的溶液獲得(S)-3-苯乙酰氨基-3-(3-吡啶基)丙酸銨鹽。該產(chǎn)物用HCl(6.0N,292mL)處理，回流加熱5小時，冷卻至室溫，并用Et2O(3×200mL)萃取。將含水層調(diào)節(jié)至pH為12，真空濃縮，生成的固體用MeOH(2×300mL)研磨。蒸發(fā)該溶液獲得鈉鹽。用MeOH(500mL)、2,2-二甲氧基丙烷(44mL)及HCl(4N二噁烷，84mL)處理，并在室溫?cái)嚢?0小時。過濾該混合物并真空濃縮濾液。用Et2O(2×150mL)研磨灰白色生成物并干燥獲得白色非晶形固體化合物AA4(96％ee)。
實(shí)施例2β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸(1)將三乙基氧鎓四氟硼酸鹽(11.7mL,1.0M在DCM中)加入到2-氧-3-哌啶-羧酸乙酯(AA1,2.0g,11.7mmol)的DCM(5.7mL)溶液中并攪拌4小時。加入溶于DCM(7.3mL)的N-CBZ-4-哌啶-丙酰肼(3.6g,11.8mmol)，將所得混合物攪拌18小時。該混合物用DCM(100mL)稀釋并用飽和氯化鈉(40mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)獲得白色固體(AA2)。將該固體溶于MeOH(200mL)并回流6小時。冷卻并蒸發(fā)該混合物。將白色固體再次溶于MeOH(200mL)并回流20小時。冷卻并蒸發(fā)該混合物獲得白色固體。將該白色固體(2.2g)溶于THF(5mL)，冷卻至0℃，用LiOH(0.21g在2.0mL水中)水溶液處理。將該反應(yīng)物攪拌1小時獲得AA3·Li，加入MeCN(50mL)，隨后加入AA4(1.5g)、HBTU(3.8g)、HOBT(1.1g)和NMM(1.2mL)。攪拌該混合物20小時，用DCM(100mL)稀釋，用飽和氯化銨(30mL)洗滌，分離各層。干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)有機(jī)層。粗制混合物通過中性氧化鋁層析(洗脫液DCM/MeOH,98/2)純化獲得甲酯。將該甲酯溶于THF(28mL)，冷卻至0℃，并用LiOH(0.18g在70mL水中)水溶液處理。將該反應(yīng)物攪拌1小時，用醋酸(4mL)酸化，并用DCM(3×50mL)萃取。干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)合并的有機(jī)物獲得相應(yīng)的羧酸。將該酸(0.65g)溶于二噁烷(30mL)和水(30mL)中。加入5％鈀炭(0.11g)并用50磅氫氫化該混合物0.5小時。該混合物通過硅藻土過濾，用水(10mL)和乙酸乙酯(20mL)洗滌。分離各層并凍干含水層獲得白色固體(1)mp97-100℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.99(t,1H),8.55(m,1H),8.41(m,1H),7.75(t,1H),7.23-7.39(m,2H),5.16(t,1H),3.78-3.91(m,2H),3.09-3.55(m,4H),2.57-2.84(m,4H),1.97-2.10(m,2H),1.76-1.91(m,3H),1.56-1.71(m,2H),1.15-1.51(m,3H)；MS m/e 427(MH+)。
實(shí)施例3β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-丙酸(2)采用HBTU/HOBT將中間體AA3(0.90mmol)和β-Ala-OMe(0.90mmol)偶合，并且如實(shí)施例1所述使該產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)獲得2。分離化合物2，為白色薄片mp86-90℃。1HNMR(DMSO-d6)δ3.89-3.99(m,1H),3.31-3.49(m,3H),2.89-3.08(m,3H),2.83(t,1H),2.38(t,1H),2.12-2.28(m,4H),1.89-2.08(m,4H),1.73-1.80(m,1H),1.56-1.63(m,2H),1.39-1.50(m,4H)；MS m/e 350(MH+)。
實(shí)施例4β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸(3)采用HBTU/HOBT將中間體AA3(使用N-Boc衍生物并在合成結(jié)束時用4N HCl的二噁烷溶液去保護(hù)，0.80mmol)和Nα-Cbz-Dpr-OMe(0.80mmol)偶合，并且如對化合物1的描述使該產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)獲得3。分離為白色薄片的化合物3:mp142-145℃；MS m/e499(MH+)。C25H34N6O5·2.8HCl·1.7H2O(631.30)的分析計(jì)算值C,47.57；H,6.42；N,13.32；Cl,15.73。實(shí)測值C,47.20；H,6.39；N,13.70；Cl,15.96。
實(shí)施例5β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯(4)采用HBTU/HOBT將中間體AA3(使用N-Boc衍生物并在合成結(jié)束時用4N HCl的二噁烷溶液去保護(hù)，1.0mmol)和3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸2-二乙基氨基-2-氧代乙酯(1.0mmol)偶合，并且如對化合物1的描述使該產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)獲得4。3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸2-二乙基氨基-2-氧代乙酯的制備如下。將3-N-Boc-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸(1.9mmol；采用與在實(shí)施例2中制備其苯乙酰胺衍生物同樣的方法制備)溶于EtOAc(50mL)和TEA(0.3mL)并用2-Cl-N,N-二乙基乙酰胺(0.60mL)處理。攪拌該混合物22小時，用飽和氯化銨(30mL)稀釋，分離各層。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)、蒸發(fā)并通過硅膠層析(8％EtOH/DCM)純化獲得玻璃樣物。用HCl(4N在二噁烷中，10mL)處理該玻璃樣物，攪拌3小時，蒸發(fā)并用乙醚(50mL)研磨，獲得作泡沫狀的3-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸2-二乙基氨基-2-氧代乙酯的二鹽酸鹽。分離為白色粉末的化合物4:mp110-113℃；MS m/e 540(MH+)。C28H41N7O4·3.0HCl·2.5H2O·0.7二噁烷(755.77)的分析計(jì)算值C,48.95；H,7.28；N,12.97；Cl,14.07。實(shí)測值C,48.99；H,7.09；N,12.60；Cl,13.69。
實(shí)施例6N-叔丁氧基羰基-4-哌啶-3-丙酸(AC3)在-78℃向草酰氯(24.8mL+50mmol)的DCM(200mL)溶液中滴加DMSO(7.0mL)。攪拌該混合物30分鐘，用AC1(8.2g,38mmol)處理并攪拌2小時。滴加加入三乙胺(31.7mL)，將該混合物溫?zé)嶂潦覝兀⒂盟?30mL)稀釋該混合物。分離各層；有機(jī)層用飽和氯化銨(30mL)和飽和氯化鈉(30mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，蒸發(fā)，并通過硅膠層析(20％EtOAc/己烷)純化獲得白色固體的AC2。在5℃用AC2(7.3g)處理，2-(三苯基亞正膦基)乙酸乙酯(13.1g,38mmol)和DCM(40mL)的溶液溫?zé)嶂潦覝?，攪?.5小時，蒸發(fā)至干燥。用戊烷(50mL)處理該固體，并通過過濾去除氧化三苯基膦。將所述戊烷溶液濃縮，所述固體通過硅膠層析(10％EtOAc/己烷)純化獲得玻璃樣物。將所述玻璃樣物溶于EtOH(60mL)并用水(60mL)和氫氧化鈉(59mL,+1.0N)在室溫處理該溶液。攪拌該混合物4小時，用檸檬酸(8g)酸化，用DCM(3×100mL)萃取。將合并的有機(jī)物干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)獲得白色固體的AC3。MS m/e 256(MH+)。
實(shí)施例7β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸(5)在5℃攪拌中間體AC3(11.2g,45mmol)、無水肼(45mmol)、HBTU(60mmol)、HOBT(60mmol)、MeCN(200mL)和NMM(90mmol)4小時。該混合物用DCM(200mL)稀釋，用飽和氯化銨(50mL)洗滌，分離各層。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)獲得AC4。在室溫?cái)嚢鐳CM(100mL)、三甲基氧鎓四氟硼酸鹽(6.6g)和AA1(7.6g)4小時，用AC4(溶于30mL DCM中)處理并攪拌21小時。該混合物用DCM(200mL)稀釋，并用飽和氯化鈉(30mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。殘余物溶于MeOH(420mL)并回流24小時。冷卻并蒸發(fā)該混合物獲得白色固體。將所述白色固體溶于THF(10mL)，冷卻至0℃，并用LiOH一水合物水溶液(0.96g在10mL水中)處理。將該反應(yīng)物攪拌6小時，加入MeCN(200mL)，隨后加入αS-芐氧基羰基氨基-丙酸甲酯鹽酸鹽(6.0g)、HBTU(16g)、HOBT(3.1g)和NMM(5.0mL)。將該混合物攪拌20小時冷卻，用DCM(100mL)稀釋，用飽和氯化銨(30mL)洗滌，分離各層。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗制混合物通過中性氧化鋁層析(洗脫液DCM/MeOH,99/1)純化，獲得甲酯AC6。將該甲酯溶于THF(28mL)，冷卻至0℃，并用LiOH一水合物水溶液(0.25g在100mL水中)處理。將該反應(yīng)物攪拌1小時，用檸檬酸(15mL)酸化，并用Et2O/THF(1∶1,150mL)萃取。將合并的有機(jī)物干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，獲得相應(yīng)的羧酸。用二噁烷(16mL)和HCl(12mL,4N在二噁烷中)處理所述羧酸，攪拌7小時，蒸發(fā)成泡沫狀物。用溫MeCN(50mL)和Et2O(100mL)研制所述泡沫狀物，干燥獲得如白色薄片的化合物5:mp86-90℃；MS m/e 497(MH+)。C25H32N6O5·1.7HCl·2.5H2O·0.3二噁烷(630.02)的分析計(jì)算值C,49.95；H,6.58；N,13.34；Cl,9.57。實(shí)測值C,50.13；H,6.56；N,12.98；Cl,9.64。
實(shí)施例8β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯(6)采用HBTU/HOBT將中間體AA3(使用N-Boc衍生物并在合成結(jié)束時用4 N HCl的二噁烷溶液去保護(hù)，1.0mmol)和Nα-Cbz-Dpr2-二乙氨基-2-氧代乙酯(如化合物4的描述由Nα-Cbz-Dpr(Boc)-OH和2-Cl-二乙基乙酰胺制備，1.0mmol)偶合，并且如化合物1的描述使該產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)獲得6。分離出如白色粉末的化合物6:mp108-111℃；MS m/e 612(MH+)。C31H45N7O6·2.2HCl·0.5H2O·0.4二噁烷(736.21)的分析計(jì)算值C,53.19；H,7.04；N,13.32；Cl,10.59。實(shí)測值C,53.37；H,7.20；N,13.00；Cl,10.60。
實(shí)施例9β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-3-噻吩丙酸(7)采用HBTU/HOBT將中間體AA3(使用N-Boc衍生物并在合成結(jié)束時用4 N HCl的二噁烷溶液去保護(hù)，1.5mmol)和3-氨基-3-(3-噻吩基)丙酸(1.5mmol)偶合，并且如化合物1的描述使該產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)獲得7。分離出如白色粉末的化合物7:mp127-131℃；MS m/e432(MH+)。C21H29N5O3S·2.4HCl·1.7H2O·0.4二噁烷(584.93)的分析計(jì)算值C,46.41；H,6.55；N,11.97；Cl,14.55。實(shí)測值C,46.58；H,6.58；N,11.64；Cl,14.56。
實(shí)施例10β-[[[5,6,7,8-四氫-8-甲基-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸(8)采用3的所述方法制備化合物8，不同的是，在與Meerwein’s試劑(3.0mmol)和隨后與N-Boc-4-哌啶丙酰肼(3.0mmol)的反應(yīng)中使用8-甲基中間體AD2(3.0mmol)而不是AA1。分離出如灰白色薄片的化合物8:mp140-143℃；MS m/e 513(MH+)。C26H36N6O5·2.9HCl·1.9H2O(652.58)的分析計(jì)算值C,47.86；H,6.60；N,12.88；Cl,15.76。實(shí)測值C,47.76；H,7.00；N,13.22；Cl,16.03。
實(shí)施例11β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)Z-1-氟乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸(9)采用流程AE中描述的方法制備化合物9。如下制備中間體AE1。將氯化鋰(0.39g)加入到冷卻至0℃的三乙基2-氟-2-膦酰基乙酸酯(1.84mL)和1,8二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(1.15mL)的乙腈(6mL)溶液中。攪拌該混合物直到所述氯化鋰溶解形成均勻的溶液。將N-Boc-哌啶-4-甲醛(1.61g)的乙腈(2.0mL)加入到該混合物并在室溫?cái)嚢?4小時。用飽和氯化銨(20mL)淬火該反應(yīng)，用乙酸乙酯(150mL)稀釋并用飽和氯化鈉(50mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)獲得2.27g(E)-2-氟-3-(N-Boc-哌啶-4-基)丙酸乙酯(AE1)。如流程AA所示使AE1繼續(xù)反應(yīng)獲得9。分離出如白色薄片的化合物9:mp147-150℃；MS m/e 515(MH+)。C25H31FN6O5·2.3HCl·1.6H2O(627.25)的分析計(jì)算值C,47.88；H,5.87；N,13.40,Cl,13.00。實(shí)測值C,48.26；H,6.02；N,12.90；Cl,12.74。
實(shí)施例12β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-4-吡啶丙酸(10)如對化合物5的描述由中間體AC3(1.5mmol)和3-氨基-3-(4-吡啶基)丙酸甲酯(1.0mmol)制備化合物10。分離出如黃色薄片的化合物10:mp235℃；MS m/e 425(MH+)。C22H28N6O3·3.1HCl·3.0H2O(635.63)的分析計(jì)算值C,45.35；H,6.52；N,13.22；Cl,17.29。實(shí)測值C,45.67；H,6.59；N,12.94；Cl,17.30。
實(shí)施例13β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-4-(3,5-二甲基異噁唑基)磺酰氨基-丙酸(11)如化合物5的描述由中間體AC3(4.0mmol)和3-氨基-αS-4-(3,5-二甲基異噁唑基)磺酰氨基丙酸甲酯(3.0mmol)制備化合物11。分離出如玻璃樣物的化合物11:mp145-148℃；MS m/e 522(MH+)。C22H31N7O6S·2.8HCl·2.0H2O·0.5二噁烷(703.78)的分析計(jì)算值C,40.96；H,5.99；N,13.93；Cl,14.11。實(shí)測值C,40.63；H,5.82；N,14.00；Cl,13.11。
實(shí)施例14β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸(12)在室溫下攪拌DCM(100mL)、三甲基氧鎓四氟硼酸鹽(3.0g)和AA1(2.0g)24小時，用AC4(5.4g，溶于17mL DCM中)處理并攪拌24小時。所述混合物用DCM(100mL)稀釋，并用飽和氯化鈉(50mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)。將黃色泡沫樣物溶于MeOH(179mL)并回流24小時。冷卻該混合物，蒸發(fā)并在硅膠上(MeOH/DCM/NH4OH,5∶94∶1)純化獲得固體。將該固體溶于THF(7mL)，冷卻至0℃，用LiOH一水合物水溶液(0.89g在19mL水中)處理。攪拌該反應(yīng)物6小時，并加入MeCN(190mL)，隨后加入AA4鹽酸鹽(4.8g)、HBTU(13.5g)、HOBT(2.6g)和NMM(4.7mL)。將所述混合物攪拌20小時冷卻，用DCM(300mL)稀釋，用水(100mL)洗滌，分離各層。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)。粗制混合物通過中性氧化鋁層析(洗脫液DCM/MeOH,99/1)純化，獲得甲酯AC6。將該甲酯溶于THF(46mL)，冷卻至0℃，并用LiOH一水合物水溶液(0.29g在116mL水中)處理。將該反應(yīng)物攪拌0.5小時，用醋酸(15mL)酸化，并用DCM(300mL)萃取。將合并的有機(jī)物干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)，獲得相應(yīng)的羧酸。用二噁烷(20mL)和HCl(3mL,4N在二噁烷中)處理所述羧酸，攪拌1小時，并蒸發(fā)成泡沫狀物。用溫MeCN(50mL)和Et2O(100mL)研制所述泡沫狀物，然后從水中凍干獲得如澄明薄片的化合物12:mp134-137℃；1H NMR(DMSO-d6)δ9.55-9.59(m,1H),8.94-9.24(m,2H),8.81(d,1H),8.53-8.65(m,1H),8.01-8.04(m,1H),7.02-7.09(m,1H),6.54(d,1H),5.29-5.35(m,1H),4.11-4.26(m,2H),3.26-3.49(m,2H),2.93-3.00(m,3H),2.63-2.69(m,1H),1.91-2.43(m,8H),1.65-1.69(m,2H)；MS m/e 425(MH+)。C22H28N6O3·2.8HCl·3.2H2O(562.62)的分析計(jì)算值C,47.08；H,6.25；N,14.72；Cl,17.69。實(shí)測值C,47.00；H,6.09；N,14.37；Cl,17.82。
實(shí)施例15β-([[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-喹啉基丙酸(13)如對化合物5的描述由中間體AC3(3.0mmol)和3-氨基-3S-(3-吡啶基)丙酸甲酯(2.4mmol)制備化合物13。分離出白色泡沫樣化合物13:mp130-133℃；MS m/e 475(MH+)。C26H30N6O3·3.6HCl·3.9H2O·1.6二噁烷(798.05)的分析計(jì)算值C,47.03；H,6.82；N,14.22。實(shí)測值C,46.64；H,7.02；N,14.58。
實(shí)施例16β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐基磺酰氨基-丙酸(14)如對化合物5的描述由中間體AC3(4.0mmol)和3-氨基-αS-芐基磺酰氨基丙酸甲酯(3.0mmol)制備化合物14。分離出如玻璃樣的化合物14:mp125-128℃；MS m/e 517(MH+)。C24H32N6O5S·2.9HCl·2.0H2O(658.38)的分析計(jì)算值C,43.78；H,5.96；N,12.76；Cl,15.62。實(shí)測值C,43.42；H,6.12；N,12.57；Cl,15.37。
實(shí)施例17β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-3-吡啶基乙酰氨基-丙酸(15)如對化合物5的描述由中間體AC3(5.0mmol)和3-氨基-αS-3-吡啶基乙酰氨基丙酸甲酯(4.0mmol)制備化合物15。分離出如白色薄片的化合物15:mp128-131℃；MS m/e 482(MH+)。
實(shí)施例18β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-異丁氧基羰基氨基-丙酸(16)如對化合物5的描述由中間體AC3(3.3mmol)和3-氨基-αS-異丁基氧基羰基氨基丙酸甲酯(2.1mmol)制備化合物16。分離出如白色薄片的化合物16:mp130-133℃；MS m/e 463(MH+)。C22H34N6O5·2.2HCl·2.0H2O·1.0二噁烷(666.90)的分析計(jì)算值C,46.83；H,7.28；N,12.60；Cl,11.70。實(shí)測值C,47.21；H,7.08；N,12.27；Cl,11.46。
實(shí)施例19β-[[[3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸(17)如流程AF所述制備化合物17。在60℃將吡啶AF1(2.0g,0.0108mol)和肼(0.40mL,1當(dāng)量)的二噁烷(54mL)溶液加熱2小時，冷卻至室溫，并蒸發(fā)至干燥。該產(chǎn)物用DCM(55mL)、AF2(2.8g,1當(dāng)量)、EDC鹽酸鹽(2.5g,1.2當(dāng)量)、NMM(1.5mL)和HOBT(2mg)處理，并在室溫?cái)嚢?8小時。該混合物用DCM(100mL)稀釋，有機(jī)層用水(3×50mL)洗滌、干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至泡沫樣物。該泡沫樣物用甲苯(106mL)、4A分子篩和醋酸(6mL)處理，并在Dean-Stark裝置中加熱22小時。將該反應(yīng)物冷卻，蒸發(fā)，殘余物通過硅膠層析(2％MeOH/DCM)純化獲得如黃褐色固體的AF3(1.65g)。如流程AA所述(參見1)使中間體AF3繼續(xù)反應(yīng)得到17。分離出如白色粉末的化合物17:mp117-120℃；MS m/e 423(MH+)。C22H26N6O3·3.0HCl·2.0H2O(567.89)的分析計(jì)算值C,46.53；H,5.86；N,14.80；Cl,18.73。實(shí)測值C,46.59；H,5.84；N,14.51；Cl,18.42。
實(shí)施例20如口服組合物的特別的實(shí)施方案，用足夠細(xì)分散的乳糖配制100mg的實(shí)施例2的化合物1以提供580-590mg的總量來填充0號硬膠囊。
本發(fā)明的三唑并吡啶化合物是GPⅡb/Ⅲa拮抗劑。例如，當(dāng)以3mg/kg劑量口服時，化合物1表現(xiàn)出長達(dá)360分鐘的對犬體內(nèi)血小板聚集的阻斷(參見表Ⅲ)。所述化合物中止纖維蛋白原與血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)的結(jié)合，因而抑制血小板聚集。因此，這些化合物對治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病如動脈和靜脈血栓形成、急性心肌梗塞、溶栓治療和血管成形術(shù)后的血管再閉塞以及各種血管閉塞性疾病是有效的。由于正常血小板聚集的最后共同通道是纖維蛋白原與活化、暴露的GPⅡb/Ⅲa結(jié)合，因此這一結(jié)合的抑制表示了似乎合理的抗血栓形成方法。通過刺激物如ADP、膠原和凝血酶活化所述受體，將結(jié)合區(qū)域暴露給纖維蛋白原的兩個不同的肽區(qū)域α-鏈Arg-Gly-Asp(RGD)和γ-鏈400-411。如下文描述的藥理學(xué)研究結(jié)果證明，本發(fā)明的所述化合物顯示了阻斷纖維蛋白原與分離的GPⅡb/Ⅱa結(jié)合(IC50’s 0.0004-0.0072μM)、在各種血小板刺激物存在時體外抑制血小板聚集(IC50’s 0.016-1.3μM對凝血酶)以及在動物模型中抑制體內(nèi)血小板聚集的能力。
實(shí)施例21體外固相純化糖蛋白ⅡB/ⅢA結(jié)合分析。
用溶于10mM HEPES、150mM NaCl、1mM MgCl2(pH7.4)的RGD-親和純化的GPⅡb/Ⅲa(有效范圍0.5-10μg/mL)以50μl/孔包被96孔Immulon-2微量滴定板(Dynatech-Immulon)。覆蓋該板并在4℃孵育過夜。棄去所述GPⅡb/Ⅱa溶液，加入150μl 5％BSA并在室溫孵育1-3小時。用改良的Tyrodes緩沖液過量洗滌該板。將生物素化纖維蛋白原(25μl/孔)以2×終濃度加入到含有所述試驗(yàn)化合物(25μl/孔)的孔中。覆蓋該板并在室溫孵育2-4小時。孵育完成前20分鐘，將一滴A試劑(Vecta Stain ABC辣根過氧化物酶試劑盒，Vector實(shí)驗(yàn)室，Inc.)和一滴B試劑加入混合為5mL改良的Tyrodes緩沖液混合物中并使其靜置。棄去所述配體溶液并用改良的Tyrodes緩沖液洗滌(5×200μl/孔)該板。加入Vecta Stain HRP-生物素-抗生物素蛋白試劑(50μl/孔，如上制備)并在室溫孵育15分鐘。棄去所述Vecta Stain溶液，并且所述孔用改良的Tyrodes緩沖液洗滌(5×200μl/孔)。加入展開緩沖液(10mL的50mM檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液＠pH5.3,6mg鄰苯二胺，6μl 30％H2O2；50μl/孔)并在室溫孵育3-5分鐘，然后加入2N H2SO4(50μl/孔)。在490nM讀取吸光度。結(jié)果顯示于表Ⅱ。
實(shí)施例22凝血酶誘導(dǎo)凝膠過濾的血小板聚集的體外抑制分析。
計(jì)算血小板聚集的百分率作為化合物處理組血小板濃度比對照處理組血小板濃度增加的透光度。將從未用藥的正常供體獲得的人血加入到含有0.13M枸櫞酸鈉的試管中。通過在25℃以200×g離心全血10分鐘收集富含血小板的血漿(PRP)。將所述PRP(5mL)通過瓊脂糖2B(柱床體積50mL)凝膠過濾，并將血小板計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)至每樣本2×107個血小板。以相當(dāng)于350μl、50μl的20mM鈣和50μl的試驗(yàn)化合物的量將下列成分加入到硅化比色杯濃縮血小板濾液和Tyrode’s緩沖液(0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.012M NaHCO3、0.76mM Na2HPO4、0.0055M葡萄糖、2mg/mL BSA和5.0mMHEPES＠pH7.4)。加入激動劑(1單位/mL的凝血酶50μl)以后，在BIODATA聚集測定儀(agregometer)中監(jiān)測聚集3分鐘。結(jié)果示于表Ⅱ。
表Ⅱ體外試驗(yàn)結(jié)果纖維蛋白原結(jié)合 血小板聚集*Cp# ％抑制(50μM) IC50(nM) ％抑制(50μM)IC50(μM)1 100％ 0.40 100％ 0.0162 98％ 7.298％ 1.303 100％ 0.48 100％ 0.0684 100％ 44.7 100％ 16.45 100％ 0.10 100％ 0.0236 100％ 8.2100％ 1.97 100％ 0.75 100％ 0.358 100％ 18.1 100％ 2.19 100％ 1.7100％ 0.5010100％ 0.94 100％ 0.1811100％ 1.1100％ 0.1112100％ 0.14 100％ 0.03013100％ 0.44 100％ 0.05714100％ 0.51 100％ 0.04315100％ 1.4100％ 0.1216100％ 0.60 100％ 0.601790％ 443NT ＞1*凝血酶誘導(dǎo)凝膠過濾的血小板的聚集。
實(shí)施例23狗體內(nèi)試驗(yàn)研究用戊巴比妥鈉(35mg/kg，靜脈注射)麻醉成年雜種狗(8-13kg)并予人工呼吸。采用將頂端帶壓力傳感器的Millar導(dǎo)管插入股動脈測定動脈血壓和心率。將另一Millar傳感器經(jīng)頸動脈置入左心室(LV)測定LV末期舒張壓和心肌收縮指數(shù)。從肢體電極記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。將導(dǎo)管分別置于股動脈和股靜脈以采集血樣和輸注藥物。采用Modular Instrument數(shù)據(jù)獲取系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)。
抽取動脈血樣(5-9mL)，置入含有3.8％枸櫞酸鈉的試管中以制備富含血小板的血漿(PRP)并測定對血凝參數(shù)的影響凝血酶原時間(PT)和活化部分凝血致活酶時間(APTT)。抽取單獨(dú)的血樣(1.5mL)置入EDTA中以測定紅細(xì)胞壓積和細(xì)胞計(jì)數(shù)(血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞)。采用symplate切割裝置和Whatman濾紙從口腔面頰表面獲得模板流血時間(template bleeding times)。
采用BioData聚集測定儀測定PRP聚集。全血聚集使用Chronolog阻抗聚集測定儀。用BioData或ACL 3000+凝聚分析儀測定PT和APTT。用Sysmex K-1000計(jì)數(shù)細(xì)胞。
將化合物溶于少量的二甲基甲酰胺(DMF)中并用生理鹽水稀釋至10％DMF的終濃度。用Harvard輸注泵經(jīng)靜脈途徑給予化合物。在15分鐘內(nèi)以0.33ml/min的恒定率給予藥劑。在每次給藥后及給藥結(jié)束后30分鐘內(nèi)獲取數(shù)據(jù)。以水溶液經(jīng)由注射器給予口服藥劑。
化合物引起得自體內(nèi)的血小板聚集反應(yīng)的顯著抑制。因此，在全血中，所述化合物以0.1-10mg/kg的劑量抑制膠原刺激的(或ADP)聚集，同時伴有膠原刺激的血小板ATP釋放的顯著抑制。在PRP中，所述化合物在0.1-10mg/kg時也抑制膠原刺激的具有顯著活性的血小板聚集?；衔镌谝灾敝?mg/kg劑量靜脈給藥時沒有可測到的血液動力學(xué)影響。所述藥物在0.1-1mg/kg時引起模板流血時間增加，而在治療后迅速恢復(fù)。以所述化合物的任何劑量在治療期間均沒有觀察到對凝聚的影響(PT或APTT)，而且血小板、白細(xì)胞和RBC計(jì)數(shù)沒有改變。
該結(jié)果表明，所述化合物在以03-1.0mg/kg范圍劑量靜脈給藥或以3mg/kg口服給藥后，是來自體內(nèi)的血小板聚集的廣譜有效的抑制劑(拮抗膠原和ADP兩種途徑)。在較高劑量時所述抗聚集作用伴有出血時間的增加。沒有觀察到其它血液動力學(xué)或血液學(xué)的作用。所述結(jié)果示于表Ⅲ。表Ⅲ狗體內(nèi)試驗(yàn)研究結(jié)果靜脈給藥 口服給藥化合物# 劑量 持續(xù)時間*劑量 時間*1 0.3mpk180min 3mpk 360min3 0.1mpk120min 1mpk 300min4 NT 1mpk ＜30min5 0.1mpk120min 1mpk 360min8 NT 1mpk ＜30min120.1mpk150min 1mpk 360min*表示抑制＞50％的ADP誘導(dǎo)的得自體內(nèi)的血小板聚集的持續(xù)時間。NT=未檢測。
雖然前面的說明書講授了本發(fā)明的原理，為了說明的目的提供有實(shí)施例，而要理解的是本發(fā)明的實(shí)踐包括來自以下權(quán)利要求及它們的等同物的范圍內(nèi)的所有通常的變異、改編和/或修飾。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)或(Ⅱ)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中M是(CH2)m、CH=CH、CH=CF、CF=CH或C≡C；n是選自0、1或2的整數(shù)；A選自哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、NHR2或 其中R9選自氫、C1-C8烷基、CH=(NH)、CMe=(NH)、C2-C6?；?、C1-C8烷氧基羰基或芳(C1-C8烷氧基)羰基；R2選自氫、C1-C8烷基或C2-C6?；?；R10選自氫或C(O)N(R1)YZ，其中R1選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；Y選自(CH2)p、CH(R3)(CH2)q、(CH2)qCH(R3)、(CH(CO2R4)CH2)q、(CH2)qCHOH或哌啶-3-羧酸；R3選自C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、芳基、芳(C1-C8)烷基或雜芳基；R4選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；p是選自2或3的整數(shù)；q是選自1、2或3的整數(shù)；Z是CO2R8；R5選自氫或C(O)NHQ(CHW)rCO2R8；其中Q選自CH2、CH-芳基、CH-雜芳基、CH-取代的-雜芳基或CH-(C1-C8)烷基；W選自氫或N(R6)T-R7；R6選自氫、C1-C8烷基或C2-C6酰基；T選自C(O)、C(N-CN)或SO2；R7選自C1-C8烷基、芳基、芳(C1-C8)烷基、芳(C1-C8)烷氧基、C1-C8烷氧基、(C1-C8)烷基氨基或未取代或取代的雜芳基(C0-C8)烷基；和R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立地選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；m是選自1、2或3的整數(shù)；r是選自0或1的整數(shù)；和R15選自氫或C1-C8烷基。
2．權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R5是C(O)NHQ(CHW)rCO2R8。
3．權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中M是(CH2)m或CH=CH；R5是C(O)NHQ(CHW)rCO2R8；其中Q選自CH2、CH-雜芳基或CH-取代的-雜芳基；W選自氫或N(R6)T-R7；其中R6是H；T是C(O)；R7選自C1-C8烷基、芳基、芳(C1-C8)烷基、芳(C1-C8)烷氧基、C1-C8烷氧基或(C1-C8)烷基氨基；R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立為C1-C8烷基；R10是氫；R15選自氫或C1-C4烷基；和r是1。
4．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中M是(CH2)m、CH=CH或C≡C；和n是1。
5．選自下列結(jié)構(gòu)式的權(quán)利要求3的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R8是氫或CH2CONEt2；R13選自氫、3-吡啶基或3-喹啉基；R14選自氫或NHCO2CH2Ph；和R15選自氫或甲基。
6．下式的權(quán)利要求4的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
7．權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽選自β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酯；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-3-噻吩丙酸；或β-[[[5,6,7,8-四氫-8-甲基-3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)Z-1-氟乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-β-4-吡啶丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-4-(3,5-二甲基異噁唑基)磺酰氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-喹啉基丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐基磺酰氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-3-吡啶基乙酰氨基-丙酸；β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-異丁氧基羰基氨基-丙酸；或β-[[[3-[2-(4-哌啶基)乙基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸。
8．權(quán)利要求7的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽選自β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-αS-芐氧基羰基氨基-丙酸；或β-[[[5,6,7,8-四氫-3-[2-(4-哌啶基)E-乙烯基]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶-8-基]羰基]氨基]-βS-3-吡啶基丙酸。
9．藥用組合物，包括藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1的化合物。
10．藥用組合物，其通過使權(quán)利要求1的化合物與藥學(xué)上可接受的載體混合來制備。
11．制備藥用組合物的方法，其包括使權(quán)利要求1的化合物與藥學(xué)上可接受的載體混合。
12．在有此需要的患者中治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病的方法，包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
13．權(quán)利要求12的方法，其中所述化合物的治療有效量是約0.1至約300mg/Kg/日。
14．在有此需要的患者中治療由GPⅡb/Ⅲa介導(dǎo)的疾病的方法，包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
15．權(quán)利要求14的方法，其中所述化合物的治療有效量是約0.1至約300mg/Kg/日。
16．在有此需要的患者中治療由GPⅡb/Ⅲa介導(dǎo)的疾病的方法，包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求9的組合物。
17．權(quán)利要求16的方法，其中所述化合物的治療有效量是約0.1至約300mg/Kg/日。
18．在有此需要的患者中抑制血小板聚集的方法，包括給予所述患者治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
19．權(quán)利要求18的方法，其中所述化合物的治療有效量是約0.1至約300mg/Kg/日。
20．式AA3’的化合物及其鹽 其中M是(CH2)m、CH=CH或C≡C；A選自哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、NHR2或 其中R9選自氫、C1-C8烷基、CH=(NH)、CMe=(NH)、C2-C6?；?、C1-C8烷氧基羰基或芳(C1-C8烷氧基)羰基；R2選自氫、C1-C8烷基或C2-C6酰基；R10選自氫或C(O)N(R1)YZ，其中R1選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；Y選自(CH2)p、CH(R3)(CH2)q、(CH2)qCH(R3)、(CH(CO2R4)CH2)q、(CH2)qCHOH或哌啶-3-羧酸；R3選自C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、芳基、芳(C1-C8)烷基或雜芳基；R4選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；p是選自2或3的整數(shù)；q是選自1、2或3的整數(shù)；Z是CO2R8；R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立地選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；m是選自1、2或3的整數(shù)；R15和R16各自獨(dú)立地選自氫或C1-C8烷基。
21．下式的權(quán)利要求20的化合物及其鹽。
22．選自下列結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽。
23．形成式(Ⅰ)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的方法， 包括使式AA3’化合物 與式H2N-Q(CHW)CO2R8(AA4’)化合物反應(yīng)以形成式(Ⅰ)化合物，其中M是(CH2)m、CH=CH或C≡C；A選自哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、NHR2或 其中R9選自氫、C1-C8烷基、CH=(NH)、CMe=(NH)、C2-C6?；?、C1-C8烷氧基羰基或芳(C1-C8烷氧基)羰基；R2選自氫、C1-C8烷基或C2-C6?；?；R10選自氫或C(O)N(R1)YZ，其中R1選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；Y選自(CH2)p、CH(R3)(CH2)q、(CH2)qCH(R3)、(CH(CO2R4)CH2)q、(CH2)qCHOH或哌啶-3-羧酸；R3選自C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、芳基、芳(C1-C8)烷基或雜芳基；R4選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；p是選自2或3的整數(shù)；q是選自1、2或3的整數(shù)；Z是CO2R8；R5是C(O)NHQ(CHW)CO2R8；其中Q選自CH2、CH-芳基、CH-雜芳基、CH-取代的-雜芳基或CH-(C1-C8)烷基；W選自氫或N(R6)T-R7；R6選自氫、C1-C8烷基或C2-C6?；籘選自C(O)、C(N-CN)或SO2；R7選自C1-C8烷基、芳基、芳(C1-C8)烷基、芳(C1-C8)烷氧基、C1-C8烷氧基、(C1-C8)烷基氨基或未取代或取代的雜芳基(C0-C8)烷基；和R8是氫、C1-C8烷基或CH2C(O)NR11R12；其中R11和R12各自獨(dú)立地選自氫、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基；m是選自1、2或3的整數(shù)；以及R15和R16各自獨(dú)立地選自氫或C1-C8烷基。
24．權(quán)利要求23的方法，該方法還包含將下式AA2’化合物 溶解于選自醇或諸如氯苯或甲苯的芳香劑溶劑中以形成溶液，加熱該溶液形成化合物AA3’
全文摘要
本發(fā)明涉及新的用作GPⅡb/Ⅲa拮抗劑的三唑并吡啶衍生物。還公開了包含本發(fā)明的三唑并吡啶衍生物的藥用組合物、治療由GPⅡb/Ⅲa介導(dǎo)的疾病的方法(如治療血小板介導(dǎo)的血栓形成疾病的方法)以及制備所述化合物和新的中間體的方法。
文檔編號A61P7/02GK1320125SQ99811380
公開日2001年10月31日 申請日期1999年7月21日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月27日
發(fā)明者W·J·赫科斯特拉, E·C·勞森, B·E·馬雅諾夫 申請人:奧索-麥克尼爾藥品公司