專利名稱：使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素治療眼科神經(jīng)退變性疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素治療眼部神經(jīng)退變性疾病發(fā)明背景原發(fā)型開角型青光眼(POAG)是一種導(dǎo)致視神經(jīng)破壞的進(jìn)行性疾病，最終將導(dǎo)致失明。對于導(dǎo)致本病的原因雖經(jīng)多年來廣泛的研究，但仍未達(dá)成充分的認(rèn)識。青光眼會導(dǎo)致視網(wǎng)膜和視神經(jīng)乳頭的神經(jīng)元性退變。即使使用進(jìn)取性治療和手術(shù)治療，本病一般仍會持續(xù)引起視網(wǎng)膜視神經(jīng)元(視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(“RGCs”))的逐漸減少，視覺功能的降低，并最終導(dǎo)致失明。(VanBuskirk et al.，低血壓療法治療青光眼性視神經(jīng)病變的結(jié)果預(yù)測，Am.J.Ophthalmol,volume 25,pages 636-640(1993)；Schumer et al.，青光眼的神經(jīng)學(xué)，Arch.Ophthalmol,volume 112,pages 37-44(1994))。
現(xiàn)已提出一些理論以闡明青光眼的病因?qū)W。一種理論認(rèn)為過高的眼內(nèi)壓(在某些病例中伴有視神經(jīng)乳頭，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞或視神經(jīng)的遺傳性缺陷)干擾了沿視神經(jīng)的正常軸突傳導(dǎo)，并最終導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷。
對視神經(jīng)軸突傳導(dǎo)的干擾將阻礙視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞體與神經(jīng)末梢之間的細(xì)胞內(nèi)分子轉(zhuǎn)運(yùn)。這些細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的分子中最重要的是一些神經(jīng)營養(yǎng)因子。神經(jīng)營養(yǎng)因子是一些刺激或維持神經(jīng)組織生長的肽類分子。從大腦到視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞體的神經(jīng)營養(yǎng)因子的轉(zhuǎn)運(yùn)，對于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活至關(guān)重要。失去神經(jīng)營養(yǎng)因子可以導(dǎo)致這些神經(jīng)元的凋亡(Raff et al.，細(xì)胞程序性死亡和細(xì)胞成活的調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)的啟示，Science,volume 262,pages695-700(1993))。
失去神經(jīng)營養(yǎng)因子可能是青光眼誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的原因，因?yàn)檫@種因果關(guān)系有大量實(shí)驗(yàn)證據(jù)的支持(請參閱Anderson et al.，眼內(nèi)壓對猴視神經(jīng)快速軸漿轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，Invest.Ophthalmol.,volume 13,page 771-783(1974)；Quigley et al.，急性眼內(nèi)壓升高導(dǎo)致的靈長類視神經(jīng)軸突轉(zhuǎn)運(yùn)障礙的動力學(xué)與位點(diǎn)研究，Invest.Ophthalmol.,volume 15,pages 606-616(1976)；Mansour-Robaey et al.，眼部損傷和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對培養(yǎng)物中的去軸突視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活與再生的影響，Neuron,volume 15,pages 805-819(1995)；and Cui et al.,Nt-4/5減少新生大鼠體內(nèi)自然發(fā)生性視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡，Neuroreport,volume 5,pages 1882-1884(1994))。這些營養(yǎng)因子包括神經(jīng)營養(yǎng)蛋白和其他細(xì)胞因子。
神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(“NT”)肽類家族包括神經(jīng)生長因子(NGF)，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),NT-3,NT-4/5，和NT-6。它們通過與神經(jīng)元表面受體(例如TrkA,TrkB,TrkC和p75NTR)結(jié)合而發(fā)揮作用。Trk類受體均為酪氨酸激酶。NGF選擇作用于TrkA受體，BDNF和NT-4/5選擇作用于TrkB受體，而NT-3選擇作用于TrkC受體。受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后，NT-受體復(fù)合物經(jīng)內(nèi)在化后，沿軸突被轉(zhuǎn)運(yùn)至神經(jīng)元胞體。這些受體經(jīng)過配體介導(dǎo)的磷酸化和二聚體化和后，激活了Ras蛋白介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的級聯(lián)反應(yīng)，從而影響神經(jīng)元的多種重要功能(Lewin et al.，神經(jīng)營養(yǎng)蛋白的生理學(xué)研究，Ann.Rev.Neurosci.,volume 19,pages 289-317(1997)；Segal et al.，神經(jīng)營養(yǎng)因子激活的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑，Ann.Rev.Neurosci.,volume 19,pages 463-489(1996)；Ebadi et al.，神經(jīng)損傷和修復(fù)中的神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體，Neurochem Int.,volume 30,pages 347-374(1997)；Kaplan et al.，神經(jīng)營養(yǎng)蛋白受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，Curr.Opin.Cell Biol.,volume 9,pages 213-221(1997))。因此，這類受體對調(diào)節(jié)處于發(fā)育階段的神經(jīng)元的存活和分化起到基礎(chǔ)性作用，同時(shí)也參與了成年階段中神經(jīng)元機(jī)制活動的維持。
在視網(wǎng)膜中，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、多巴胺能的無長突的神經(jīng)細(xì)胞和視神經(jīng)(“ON”)中均觀察到同時(shí)有TrkA和TrkB的mRNA存在。TrkA和TrkB的表達(dá)已被證明在神經(jīng)元發(fā)育階段是受高度調(diào)控的(請參閱Jelsma et al.，大鼠視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中占優(yōu)勢神經(jīng)營養(yǎng)蛋白受體trkB mRNA的不同形式J.Neurobiol.,volume 24,pages 1207-1214(1993)；Rickman et al.，大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育中原癌基因，trk，受體的表達(dá)，Vis.Neurosci.,volume 12,pages 215-222(1995)；Ugolini et al.，大鼠視網(wǎng)膜中TrkA,TrkB和p75 mRNA的表達(dá)在發(fā)育中的調(diào)控機(jī)制，Brain Res,volume 704,pages 121-124(1995)；Cellerino et al.，脊椎動物視網(wǎng)膜內(nèi)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子/神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-4受體TrkB定位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和多巴胺能的無長突細(xì)胞，J.Comp.Neurol,volume 386,pages149-160(1997))。作為TrkB受體選擇性配體，BDNF和NT-4/5已被證明可以有效的保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。許多研究表明這些神經(jīng)營養(yǎng)蛋白不僅可以促進(jìn)培養(yǎng)環(huán)境下的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活和神經(jīng)突的長出，而且可以顯著降低軸索顯微外科術(shù)在體內(nèi)誘導(dǎo)的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷，并且可以刺激再生的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞上軸突枝的生長(請參閱上文引用過的theAnderson et al.；Quigley et al.；Mansour-Robaey et al.；Meyer-Franke et al.；和Cui et al.的文章)。例如，在受傷后5天內(nèi)一次性玻璃體內(nèi)注射5μg BDNF會防止進(jìn)行過軸索顯微外科術(shù)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡(Mansour-Robaey etal.)。未進(jìn)行玻璃體內(nèi)注射的視網(wǎng)膜在軸索顯微外科術(shù)后喪失了近一半的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，與此相比，事實(shí)上在當(dāng)天進(jìn)行一次生注射BDNF后，所有的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞都會存活。視神經(jīng)手術(shù)后，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層中BDNF的mRNA的表達(dá)有顯著提高(Gao et al.，對視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的mRNA表達(dá)量升高的研究，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,volume 38,pages 1840-1847(1997))，這就進(jìn)一步提示了BDNF這種神經(jīng)營養(yǎng)蛋白在視網(wǎng)膜恢復(fù)中的潛在重要性。
除了對視網(wǎng)膜和/或視神經(jīng)的機(jī)械性破壞起保護(hù)作用以外，神經(jīng)營養(yǎng)蛋白也可以對其他類型的神經(jīng)元損傷起到保護(hù)作用。通過一種尚未可知的機(jī)制(但有可能是通過對調(diào)亡信號級聯(lián)的抑制)，BDNF保護(hù)了中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)元，使之免受谷氨酸類神經(jīng)毒素的損害(Lindholm et al.，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子是培養(yǎng)大鼠小腦顆粒神經(jīng)元的存活因子及其對抗谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性的作用，Eur.J.Neurosci.,volume 5,pages 1455-1464(1993)；并且已經(jīng)證明在體環(huán)境下，BDNF可以有效的防止大鼠視網(wǎng)膜缺血性細(xì)胞壞死(Unoki etal.，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子和基礎(chǔ)成纖維細(xì)胞生長因子對大鼠視網(wǎng)膜缺血性神經(jīng)損傷的保護(hù)性作用，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,volume 35,pages 907-915(1994))和海馬缺血性細(xì)胞壞死(Beck et al.，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對大鼠海馬缺血性細(xì)胞損傷的保護(hù)性作用，J.Cereb.BloodFlow Metab.,volume 14,pages 689-692(1994))。
睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)是支持神經(jīng)元存活的另一種營養(yǎng)因子。它是屬于在結(jié)構(gòu)上與神經(jīng)營養(yǎng)蛋白不相關(guān)的細(xì)胞因子家族。CNTF與其受體均在視網(wǎng)膜神經(jīng)退變和分化時(shí)由穆勒氏細(xì)胞(Muller glia)表達(dá)(Kirsch et al.，視網(wǎng)膜發(fā)育中睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)的多方面局部功能的證據(jù)CNTF及其受體的表達(dá)和離體狀態(tài)下對靶細(xì)胞的作用，J.Neurochem.,volume 68,pages979-990(1997))。雖然其效果不如BDNF,CNTF也可以用來預(yù)防青光眼性神經(jīng)病變，因?yàn)镃NTF可以預(yù)防視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷誘導(dǎo)性死亡(Mey et al.，玻璃體內(nèi)注射神經(jīng)營養(yǎng)因子有利于成年大鼠在體狀態(tài)下去軸突視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的存活，Brain Res,volume 602,pages 304-317(1993))和視神經(jīng)的軸突退化(Weibel et al.,Brain-derived neurotrophic factor(BDNF)prevents lession-induced axonal die-back in young rat optic nerve腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)可預(yù)防年輕大鼠視神經(jīng)中損傷誘導(dǎo)的軸突回模(die-back),Brain Res.,volume679,pages 249-254(1995))。
因此，神經(jīng)營養(yǎng)因子對青光眼性視網(wǎng)膜病變和一般性視網(wǎng)膜退變具有緩解作用。但是這類神經(jīng)營養(yǎng)因子屬于肽類分子，由于肽類藥物施用中普遍存在的生物利用度的問題，因此很難對這類神經(jīng)營養(yǎng)因子進(jìn)行藥品開發(fā)。因此，需要一種可以刺激受損視網(wǎng)膜組織中神經(jīng)營養(yǎng)活性的非肽類分子，這類分子將不會存在類似天然肽類分子的生物利用度問題。
科學(xué)文獻(xiàn)中報(bào)道過幾個神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素，例如AIT-82(Graul&Castaner,AIT-082,Drugs of the Future,volume 22,pages 945-947(1997))，艾地苯醌(Nabeshima et al.，口服神經(jīng)生長因子合成刺激劑可還原年老大鼠腦內(nèi)神經(jīng)生長因子含量及減輕大鼠前腦基底損傷引起的認(rèn)知障礙，Gerontology,volume 40,supplement 2,pages 46-56(1994)),ONO-2506(Matsui et al.,ONO-2506對大鼠大腦中動脈永久阻塞1周后神經(jīng)性缺陷及腦梗塞體積的保護(hù)性作用，Society for Neurosci.Abstracts,volume 24,page 254(1998)),NS521(Gronborg et al.，一種新型化合物NS521的神經(jīng)保護(hù)性功能，Society ofNeurosci.Abstracts,volume 24,page 1551(1998)),CB-1093(Aimone et al.,lα25(OH)2D3類似物CB-1093誘導(dǎo)非人類靈長類動物腦中神經(jīng)生長因子的產(chǎn)生，Society for Neurosci.Abstracts,volume 24,page 292,(1998))和克侖特羅(Clenbuterol)(Culmsee et al.,NGF反義寡聚核苷酸可阻斷克侖特羅對離體谷氨酸誘導(dǎo)的興奮毒性和體內(nèi)病灶性大腦局部缺血的保護(hù)作用，Society forNeurosci.Abstracts,volume 24,page 295(1998))。然而，本領(lǐng)域沒有披露或暗示使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素治療青光眼或其他眼部神經(jīng)病變。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及治療青光眼性神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜退行性疾病的組合物和方法。本組合物和方法包括使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素治療已被損害的和易被損害的視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭組織。
神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素是一類可以刺激視網(wǎng)膜營養(yǎng)因子產(chǎn)生或激活的化合物。在眼部刺激產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子可以緩解青光眼性神經(jīng)病變和其他視網(wǎng)膜與神經(jīng)乳頭退行性疾病。
優(yōu)選的組合物和方法均涉及神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素AIT-082(尼奧托洛芬(neotrofin))和艾地苯醌。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及治療青光眼性神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭退行性疾病的組合物和方法。本專利的組合物包括裝在一種制藥學(xué)中可適用的載體內(nèi)的一種或幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素。
這里使用的“神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素”是指那些能夠刺激視網(wǎng)膜中神經(jīng)營養(yǎng)因子的原位產(chǎn)生和提高其活性的化合物。這里使用的“神經(jīng)營養(yǎng)因子”是指NGF、BDNF、NT-3、NT-4/5、NT-6、CNTF或其他可以預(yù)防、治療或緩解視網(wǎng)膜神經(jīng)病變的營養(yǎng)因子。神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素的實(shí)例包括AIT-082(尼奧托洛芬)、艾地苯醌(idebenone)、ONO-2506、CB-1093、NS521((1-(1-丁基)-4-(2-氧-1-苯并咪唑酮)哌啶)、SS-701、KT-711和克倫特羅(clenbuterol)。本發(fā)明優(yōu)選的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素是AIT-082(尼奧托洛芬)。前面這些分子均可由商業(yè)渠道獲得或由本領(lǐng)域已知的方法合成得到。 實(shí)施例1以下實(shí)例顯示了一種神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素丙戊茶堿(propentofylline)在對抗視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷中的起到的保護(hù)性作用。
視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞存活率檢驗(yàn)視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)采用Takahashi等人的報(bào)告(見Takahashi N.et al.，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)物，Exp.Eye Res.Volume 53,pages 565-572(1991))。試驗(yàn)步驟包括將一種熒光染料Di-I注射到上丘(superior colliculi)中從而對神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行反向標(biāo)記。2-4天后，將視網(wǎng)膜細(xì)胞分離。在熒光顯微鏡下可用肉眼觀察到足量的Di-I產(chǎn)生的熒光從而識別出培養(yǎng)的視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞。
2-5日齡的Sprague-Dawley系新生大鼠經(jīng)低溫麻醉后，在橫竇尾部頭皮處延正中線開一2毫米的開口。注射器針頭(30號)插入頭骨頂部以下6毫米，注入5μl Di-I溶液，此溶液成分為3mg/ml Di-I(1,1’-二-十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基吲哚-高氯酸羰花青(參見Molecular Probes,Eugene,OR)溶解于90％乙醇和10％二甲基亞砜)。術(shù)后傷口由一滴柔性火棉膠覆蓋(參見Amend Drug&Chemical Co.,Irvington,NJ)。經(jīng)復(fù)溫并解除麻醉后，術(shù)后大鼠返回母體身邊。
注射Di-I 2-4天后，大鼠低溫麻醉并斷頭處死。取出兩側(cè)眼球并置于DMEM培養(yǎng)液營養(yǎng)混合物F12中(1∶1；DMEM/F12,Gibco Co.,Grand Island,NY)。剝落并分離兩側(cè)眼球的視網(wǎng)膜。將12個視網(wǎng)膜浸入5ml木瓜蛋白酶溶液中分離視網(wǎng)膜細(xì)胞。此溶液包含10mg木瓜蛋白酶(34units/ml；SigmaChemical Co.,St Louis,MO),2mg DL-半胱氨酸(3.3mM；Sigma,St Louis,MO)和2mg小牛血清白蛋白(0.4mg/ml；Sigrma)溶解于5mlDMEM/F12中，37℃溫浴25分鐘后，用5ml視網(wǎng)膜細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM,Gibco)將分離的視網(wǎng)膜細(xì)胞洗3次，加入10％小牛血清(Hyclone,Logan,UT),4mM谷氨酰胺(Gibco),100units/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(Sigma)。在視網(wǎng)膜碎片中加入額外的視網(wǎng)膜細(xì)胞培養(yǎng)液將終體積補(bǔ)齊至40ml。將視網(wǎng)膜碎片通過一次性移液管幾次研制直到細(xì)胞被分散。將細(xì)胞懸液(1.5ml包含約4.5×106個細(xì)胞)置于聚-右旋-賴氨酸包被的玻璃底培養(yǎng)皿中。細(xì)胞在95％空氣/5％二氧化碳，37℃的條件下培養(yǎng)3天。
在細(xì)胞與或不與各種制劑分離后3天，去除培養(yǎng)液中的胎牛血清。3天后，用熒光顯微鏡以200倍放大率觀察細(xì)胞，在計(jì)數(shù)20個視野中的Di-I標(biāo)記后發(fā)熒光的細(xì)胞，并取均值。結(jié)果見下表1表1神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素對視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞存活率的影響
注以血清存在條件下的視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞存活率定義為100％。所有數(shù)據(jù)以均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差表示(n=6)。*代表相對于無血清無作用物組，經(jīng)單向ANOVA后的Dunnett’t檢驗(yàn)所得p＜0.05。
表1顯示在胎牛血清(和血清中內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子)存在的條件下，視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的存活率較高。神經(jīng)營養(yǎng)因子BNDF在毛喉素存在的條件下表現(xiàn)出對損傷(例如，去除胎牛血清)的保護(hù)作用。同樣，丙戊茶堿已知可以在培養(yǎng)條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞中(Shinoda et al.，丙戊茶堿刺激體外培養(yǎng)小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞中神經(jīng)生長因子的合成和分泌，Biochem.Pharmacol.,volume 39,pages1813-1816(1990))和在體條件下年老大鼠的大腦中(Nabeshima et al.，老年癡呆模型的年老大鼠學(xué)習(xí)和記憶的破壞及其附屬癥狀口服丙戊茶堿引起年老大鼠腦力減少的神經(jīng)生長因子含量的恢復(fù)，Ipn.J.Psychol.Pharmacol.,volume 13,pages 89-95(1993))刺激神經(jīng)生長因子的產(chǎn)生，在本試驗(yàn)中也顯示出在細(xì)胞對抗血清喪失誘導(dǎo)性細(xì)胞死亡中的保護(hù)作用。這些數(shù)據(jù)顯示刺激神經(jīng)營養(yǎng)因子產(chǎn)生或提高其活性的化合物可以保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞特別是視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞免受由神經(jīng)營養(yǎng)因子喪失而誘導(dǎo)的損傷。
本發(fā)明涉及的方法包括對人類患者給與一種或幾種的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素以治療視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭的神經(jīng)性病變。
本發(fā)明涉及的方法特別是指使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素治療青光眼和其他視網(wǎng)膜外部疾病和紊亂，特別是衰老相關(guān)性視黃斑退化、視網(wǎng)膜缺血、創(chuàng)傷相關(guān)性急性視網(wǎng)膜病、術(shù)后并發(fā)癥、激光療法包括光動效應(yīng)療法(PDT)相關(guān)的損傷，以及手術(shù)光引起的醫(yī)源性視網(wǎng)膜病。這里使用的“視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭的神經(jīng)性病變”是指前述疾病中的任何一種或其他視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭的神經(jīng)退行性疾病。
本發(fā)明中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素可以依照相應(yīng)的配方技術(shù)包含在各種藥用組合物中。總體來說，神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素可以制成溶液或懸液制劑以方便眼局部或眼內(nèi)給藥，或者制成片劑、膠囊或溶液以方便系統(tǒng)給藥(例如，口服或靜脈內(nèi)的給藥)。
由于其給藥的簡便易行，優(yōu)選使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素的口服制劑?？诜苿┛梢圆捎靡后w或固體形式。一般來說，口服制劑包含有活性神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素和惰性賦形劑。一般來說，固體片劑或膠囊會含有各種賦形劑例如成型劑、附著劑、緩釋包衣、或其他通常是本領(lǐng)域已知的物質(zhì)。液體劑型將會含有載體、緩沖液、滋補(bǔ)劑，增溶劑或其他通常是本領(lǐng)域已知的物質(zhì)。
本發(fā)明的組合物可眼內(nèi)給藥，適用于視網(wǎng)膜和視神經(jīng)乳頭組織的創(chuàng)傷和/或其他急性缺血性損傷后給藥，也適用于手術(shù)前或手術(shù)中給藥以預(yù)防缺血性破壞或損傷。可用于眼內(nèi)給藥的配方一般可適用于眼內(nèi)注射或手術(shù)用沖洗液。眼內(nèi)注射用組合物一般包含水性溶液，例如，平衡鹽沖洗溶液。有關(guān)這種溶液的內(nèi)容見下文。
當(dāng)神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素在眼內(nèi)手術(shù)過程中給藥時(shí)，例如通過眼球后或眼周注射以及眼內(nèi)灌注或注射，最好適用平衡鹽沖洗液作為載體溶液。BSS、Sterile Irrigating solutions和BSS PlusSterile Intraocular Irrigating Solution(Alcon Laboratories,Inc.,Fort Worth,Texas,USA)就是這種生理性平衡眼內(nèi)沖洗液。在美國專利號4,550,022(Garabedian et al.)中描述了后一種沖洗液，該專利的內(nèi)容在此全面引用作為參考。眼球后和眼周注射是本領(lǐng)域已知的并在許多文章中均有描述，包括例如，Ophthalmic Surgery:Principles of Practice,Ed.,G.L.Spaeth,W.B.Sanders Co.,Philadelphia,PA,U.S.A.,pages 85-87(1990)。
一般來說，用于以上提及的用途的劑量會有變化，但均在可以預(yù)防、減輕或緩解視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭神經(jīng)病變的有效劑量之內(nèi)。這里所說的“藥用有效劑量”是指可以預(yù)防、減輕或緩解視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭神經(jīng)病變的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素的劑量。用于局部或眼內(nèi)給藥配方中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素的預(yù)期用量在重量體積比(“％w/v”)大約0.001％到10.0％之間。優(yōu)選的濃度范圍大約0.1-5％w/v。局部給藥制劑一般在有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師指導(dǎo)下每日滴眼1到6次。系統(tǒng)給藥制劑一般包含大約10-1000mg神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素，在有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師指導(dǎo)下每日1-4次。
這里所說的“適于用藥的載體”是指任何既安全又可以按所需的給藥途徑合理地釋放至少一種有效劑量神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素的制劑。
本發(fā)明的組合物可以包含附加藥用活性物質(zhì)，也可與其他藥用組合物同時(shí)使用。特別應(yīng)指出，在預(yù)防、治療或緩解哺乳動物的青光眼性視網(wǎng)膜病變時(shí)，本發(fā)明的組合物也許含有附加的“抗青光眼”制劑或與抗青光眼制劑同時(shí)或順次用藥?？骨喙庋壑苿┑囊恍?shí)例包括前列腺素或前列腺素類化合物、碳酸酐酶抑制劑、β-腎上腺素能激動劑和詰抗劑、α-腎上腺素能激動劑、或其他已知的抗青光眼制劑。
實(shí)施例2可用于治療青光眼性神經(jīng)病變的局部用藥配方
實(shí)施例3用于治療青光眼性神經(jīng)病變的一種優(yōu)選的局部用藥配方
以上制劑由以下方法制備而成首先將一部分純凈水倒入一個燒杯中并加熱至90℃。然后將羥丙基甲基纖維素(HPMC)加入熱水中，并劇烈振蕩攪拌混勻直至羥丙基甲基纖維素全部溶解。邊混合邊將制成的混合液降溫以水化羥丙基甲基纖維素。然后在裝有液體進(jìn)口和疏水性無菌吸濾器的容器中使用高壓滅菌的方法，將制成的溶液滅菌。
將氯化鈉和依地酸(二)鈉加入到另一部分純凈水中并溶解。然后將氯芐烷銨加入到溶液中，并用0.1M NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4。通過過濾方法滅菌。
AIT-082經(jīng)干熱法或用環(huán)氧乙烷兩種方法之一滅菌。如果選擇環(huán)氧乙烷滅菌法，必須在50℃下通氣至少72小時(shí)。無菌的化合物在無菌狀態(tài)下稱重并置于一個加壓的球形研磨器中。再在此容器中加入無菌液態(tài)的四丁酚醛溶液。加入無菌的玻璃球，將容器內(nèi)容物在無菌狀態(tài)下以225轉(zhuǎn)/分鐘研磨16小時(shí)，或者直到所有微粒的大小均在5微米之內(nèi)。
在無菌狀態(tài)下，將上一步形成的微米化的藥物懸液邊混合邊倒入羥丙基甲基纖維素溶液中。用含有氯化鈉、依地酸(二)鈉和、氯芐烷銨溶液漂洗球形研磨器和其中的玻璃球。在無菌狀態(tài)下將漂洗液加入到羥丙基甲基纖維素溶液中。然后如有需要，以純凈水補(bǔ)足該溶液的最終體積，并用0.1M NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4。
實(shí)施例4口服制劑片劑1-1000mg神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素與無活性成分，例如淀粉、乳糖和硬脂酸鎂相混合，可以已知的片劑制作程序制成片劑。
實(shí)施例5建議使用如下局部眼部用溶液配方
實(shí)施例6
優(yōu)選的口服制劑片劑50-500mg AIT-82(Neotrofin)與無活性組合物例如淀粉，乳糖和硬脂酸鎂相混合，可以已知的片劑制作程序制成片劑。
本發(fā)明較寬的范圍并不限于以上所指出和描述的特定細(xì)節(jié)。在所附的權(quán)利要求書范圍內(nèi)，在不偏離本發(fā)明原理及不損害其優(yōu)點(diǎn)的前提下，可以變更上述這些細(xì)節(jié)。
權(quán)利要求
1．一種治療視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭神經(jīng)病變的組合物，包括有效劑量的一種或幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素和一種制藥學(xué)中可適用的載體
2．權(quán)利要求1的組合物，其中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素選自AIT-082(尼奧托洛芬)、艾地苯醌、ONO-2506、CB-1093、NS521((1-(1-丁基)-4-(2-氧-1-苯并咪唑酮)哌啶)、SS-701、KT-711和克侖特羅。
3．權(quán)利要求2的組合物，其中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素是AIT-082(尼奧托洛芬)。
4．權(quán)利要求1的組合物，其中的組合物是一種口服制劑。
5．權(quán)利要求1的組合物，其中的組合物是一種局部眼用、或眼內(nèi)用制劑。
6．權(quán)利要求3的組合物，其中的組合物是一種口服制劑。
7．權(quán)利要求3的組合物，其中的組合物是一種局部眼用、或眼內(nèi)用制劑。
8．治療視網(wǎng)膜或視神經(jīng)乳頭神經(jīng)病變的方法，包括給哺乳動物施用一種含有效劑量的一種或幾種神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素和一種制藥學(xué)中可適用的載體的組合物。
9．權(quán)利要求8的方法，其中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素選自AIT-082(尼奧托洛芬)、艾地苯醌、ONO-2506、CB-1093、NS521((1-(1-丁基)-4-(2-氧-1-苯并咪唑酮)哌啶)、SS-701、KT-711和克侖特羅。
10．權(quán)利要求9的方法，其中的神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素是AIT-082(尼奧托洛芬)。
11．權(quán)利要求8的方法，其中的組合物是一種口服制劑。
12．權(quán)利要求8的方法，其中的組合物是一種局部眼用、或眼內(nèi)用制劑。
13．權(quán)利要求10的方法，其中的組合物是一種口服制劑。
14．權(quán)利要求10的方法，其中的組合物是一種局部眼用，或眼內(nèi)用制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一些治療視網(wǎng)膜和視神經(jīng)乳頭神經(jīng)病變的組合物和方法。此類組合物和方法特別與治療青光眼性神經(jīng)病變中使用神經(jīng)營養(yǎng)因子刺激素,例如AIT－082(尼奧托洛芬)直接相關(guān)。
文檔編號A61P25/02GK1325308SQ99813086
公開日2001年12月5日 申請日期1999年12月1日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月3日
發(fā)明者彭玉豪 申請人:艾爾科實(shí)驗(yàn)室公司