專利名稱：作為激酶抑制劑的4－氨基吡咯并嘧啶的制作方法
相關(guān)申請本中請要求1998年9月18日提交的美國臨時申請No.60/100954的優(yōu)先權(quán)，并且是1998年3月17日提交的美國申請No.09/042702的部分連續(xù)申請，這些參考申請的全部內(nèi)容都引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
至少有400種酶被確定為蛋白激酶。這些酶催化靶蛋白底物的磷酸化反應(yīng)。磷酸化反應(yīng)一般是使磷酸基從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白底物上的反應(yīng)。靶底物中磷酸基轉(zhuǎn)移到其上面的特定結(jié)構(gòu)是酪氨酸，絲氨酸或蘇氨酸殘基。因為這些氨基酸殘基是磷酰基轉(zhuǎn)移的靶結(jié)構(gòu)，所以這些蛋白激酶常常被稱為酪氨酸激酶或絲氨酸/蘇氨酸激酶。
酪氨酸，絲氨酸和蘇氨酸殘基上的磷酸化反應(yīng)和與之相抵銷的磷酸酶反應(yīng)涉及不計其數(shù)的細胞過程，這些過程支承對多種多樣的細胞內(nèi)信號的反應(yīng)(一般由細胞受體介導(dǎo))，細胞功能的調(diào)節(jié)，和細胞過程的激活或失活。一連串的蛋白激酶經(jīng)常參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，并且是實現(xiàn)這些細胞過程所必需的。由于蛋白激酶在這些過程中的遍在性，人們發(fā)現(xiàn)蛋白激酶為質(zhì)膜的內(nèi)在部分或胞質(zhì)酶或位于核中，經(jīng)常是酶復(fù)合物的組分。在很多情況下，這些蛋白激酶是酶和結(jié)構(gòu)蛋白復(fù)合物的必需元件，所述酶和結(jié)構(gòu)蛋白復(fù)合物決定著細胞內(nèi)何處和何時發(fā)生細胞過程。
蛋白質(zhì)酪氨酸激酶。蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)是催化細胞蛋白質(zhì)中的特定酪氨酸殘基磷酸化的酶。這些底物蛋白質(zhì)(經(jīng)常是酶自身)的翻譯后修飾可用作分子開關(guān)，用于調(diào)節(jié)細胞增殖，激活或分化(參見例如Schlessinger和Ulrich，1992，神經(jīng)元9383-391)。已在很多疾病中觀察到異?；蜻^量的PTK活性，所述疾病包括良性和惡性增殖性疾病以及由免疫系統(tǒng)不恰當(dāng)?shù)募せ钜鸬募膊?例如自身免疫病)，同種異體移植排斥和移植物抗受試者疾病。另外，內(nèi)皮細胞特異性受體PTK，如KDR和，Tie-2介導(dǎo)血管生成過程，因此參與支持癌癥和其它涉及不恰當(dāng)血管化的疾病(例如糖尿病性視網(wǎng)膜病，由與年齡相關(guān)的斑點退化引起的脈絡(luò)膜新血管生成，牛皮癬，關(guān)節(jié)炎，早熟視網(wǎng)膜病，嬰兒血管瘤)的進程。
酪氨酸激酶可以是受體-型(具有細胞外，跨膜和細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域)或非-受體型(完全是細胞內(nèi)的)。
受體酪氨酸激酶(RTK)。RTK包括一大群具有多種多樣生物活性的跨膜受體。目前，至少已鑒定出19種不同的RTK亞族。受體酪氨酸激酶(RTK)家族包括對多種細胞類型的生長和分化至關(guān)重要的受體(Yarden和Ullrich，生物化學(xué)年評，57433-478，1988；Ullrich和Schlessinger，細胞，61243-254，1990)。RTK的固有功能經(jīng)配體結(jié)合被激活，導(dǎo)致受體和多個細胞底物磷酸化，繼而導(dǎo)致多個細胞反應(yīng)(Ullrich & Schlessinger，細胞，61203-212，1990)。因此，受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)由與特定生長因子(配體)的細胞外相互作用起始，接下來一般是受體二聚體化，內(nèi)在蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性的刺激和受體轉(zhuǎn)磷酸作用。籍此產(chǎn)生細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的結(jié)合位點，與一系列便于適當(dāng)細胞反應(yīng)(例如細胞分裂，分化，代謝作用，細胞外微環(huán)境的變化)的胞質(zhì)信號分子形成復(fù)合物(例見Schlessinger和Ulrich，1992，神經(jīng)元91-20)。
具有SH2(src同源物-2)或磷酸酪氨酸結(jié)合(PTB)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)以高親和性與激活的酪氨酸激酶受體及其底物結(jié)合以將信號傳播至細胞內(nèi)。這兩個結(jié)構(gòu)域識別磷酸酪氨酸(Fantl等，1992，細胞，69413-423；Songyang等，1994，分子細胞生物學(xué)，142777-2785；Songyang等，1993，細胞，72767-778；和Koch等，1991，科學(xué)，252668-678；Shoelson，Curr.Opin.Chem.Biol(1997)，1(2)，227-234；Cowburn，Curr.Opin.Struct.Biol.(1997)，7(6)，835-838)。已鑒定出幾個與受體酪氨酸激酶(RTK)結(jié)合的細胞內(nèi)底物蛋白質(zhì)?？蓪⑺鼈兎譃閮蓚€大組(1)具有催化結(jié)構(gòu)域的底物；和(2)缺乏該結(jié)構(gòu)域但可用作銜接子并與具有催化活性的分子結(jié)合的底物(Songyang等，1993，細胞，72767-778)。受體或蛋白質(zhì)與其底物的SH2或PTB結(jié)構(gòu)域之間的相互作用的特異性由緊接磷酸化酪氨酸殘基周圍的氨基酸殘基決定。例如，SH2結(jié)構(gòu)域和特定受體上磷酸酪氨酸殘基周圍的氨基酸序列之間的結(jié)合親和性差異與所觀察到的其底物磷酸化分布圖的差異相關(guān)(Songyang等，1993，細胞，72767-778)。觀察結(jié)果表明各個受體酪氨酸激酶的功能不僅僅由其表達模式和配體的可利用性決定，也由被特定受體激活的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑陣列以及那些刺激的時間選擇和維持時間的長短決定。因此，磷酸化提供了重要的調(diào)節(jié)步驟，可以決定由特定的生長因子受體以及分化因子受體所征集的信號途徑的選擇性。
據(jù)認為諸如FGFR-1，PDGFR，TIE-2和e-Met的幾種受體酪氨酸激酶和與其結(jié)合的生長因子對血管生成起作用，但其中的一些可間接促進血管生成(Mustonen和Alitalo，細胞生物學(xué)雜志，129895-898，1995)。一種這樣的受體酪氨酸激酶(已知為“胎肝激酶1”(FLK-1))是III型RTK亞類的成員。人FLK-1的另一個名稱是“含有激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體”(KDR)(Terman等，癌基因61677-83，1991)。FLK-1/KDR的另一個名稱是“血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2”(VEGFR-2)，因為它以高親和性與VEGF結(jié)合。鼠FLK-1/VEGFR-2也被稱為NYK(Oelrichs等，癌基因8(1)11-15，1993)。已分離出編碼小鼠，大鼠和人FLK-1的DNA，已報道了核苷酸和編碼的氨基酸序列(Matthews等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，889026-30，1991；Terman等，1991，文獻同上；Terman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.1871579-86，1992；Sarzani等，文獻同上；和Millauer等，細胞，72835-846，1993)。多項研究(例如Millauer等，文獻同上所報道的)表明VEGF和FLK-1/KDR/VEGFR-2是配體-受體對，它們在血管內(nèi)皮細胞增殖，血管形成和快速生長(分別被稱為血管發(fā)生和血管生成)中起著重要作用。
另一種被稱為“fms-樣酪氨酸激酶-1”(Flt-1)的III型RTK亞類與FLK-1/KDR相關(guān)(DeVries等，科學(xué)，255989-991，1992；Shibuya等，癌基因，5519-524，1990)。Flt-1的另一個名稱是“血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1”(VEGFR-1)。目前，已發(fā)現(xiàn)FLK-1/KDR/VEGFR-2和F1t-1/VEGFR-1亞族的成員主要在內(nèi)皮細胞上表達。這些亞類的成員被血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)配體家族的成員特異性刺激(Klagsburn和D’Amore，細胞因子&生長因子評論7259-270，1996)。相對于與FLK-1/KDR的結(jié)合而言，血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)以較高的親和性與Flt-1結(jié)合，并且對血管內(nèi)皮細胞有促分裂作用(Terman等，1992，文獻同上；Mustonen等，文獻同上；DeVries等，文獻同上)。據(jù)信在血管發(fā)育過程中Flt-1是內(nèi)皮結(jié)構(gòu)的形成所必需的。Flt-1的表達與小鼠胚胎中的早期血管發(fā)育相關(guān)，并與創(chuàng)傷愈合過程中的新血管生成相關(guān)(Mustonen和Alitalo，文獻同上)。Flt-1在單核細胞，破骨細胞和成骨細胞以及成人組織，如腎小球中的表達顯示出該受體的另一個功能，該功能與細胞生長不相關(guān)(Mustonen和Alitalo，文獻同上)。
如上文所述，最新證據(jù)表明VEGF對正常和病理性血管生成起著刺激作用(Jakeman等，內(nèi)分泌學(xué)，133848-859，1993；Kolch等，乳腺癌研究和治療，36139-155，1995；Ferrara等，內(nèi)分泌評論，18(1)；4-25，1997；Ferrara等，血管生成的調(diào)節(jié)(由L.D.Goldberg和E.M.Rosen編)，209-232，1997)。另外，VEGF還參與控制和增強血管的通透性(Connolly等，生物化學(xué)雜志，26420017-20024，1989；Brown等，血管生成的調(diào)節(jié)(由L.D.Goldberg和E.M.Rosen編)，233-269，1997)。已報道了由mRNA的另一種剪接產(chǎn)生的不同形式的VEGF，包括Ferrara等(細胞生物化學(xué)雜志，47211-218，1991)描述的4種形式。Ferrara等，文獻同上已鑒定出分泌型VEGF和主要與細胞結(jié)合的VEGF，已知該蛋白質(zhì)以由二硫鍵連接的二聚體形式存在。
最近，已鑒定出幾種相關(guān)的VEGF同系物。然而，仍未闡明它們在正常生理和疾病過程中的作用。另外，在很多組織中，VEGF家族的成員經(jīng)常與VEGF共同表達，它們通常能與VEGF形成異二聚體。該特性可能會改變異二聚體的受體特異性和生物學(xué)作用，并使下文所述的其特異性功能的闡明進一步復(fù)雜化(Korpelainen和Alitalo，細胞生物學(xué)最新觀點，159-164，1998和其中提及的參考文獻)。
胎盤生長因子(PIGF)具有與VEGF序列顯著同源的氨基酸序列(Park等，生物化學(xué)雜志，26925646-54，1994；Maglione等，癌基因8925-31，1993)。關(guān)于VEGF，由mRNA的另一種剪接方式產(chǎn)生了不同種的PIGF，該蛋白質(zhì)以二聚體的形式存在(Park等，文獻同上)。PIGF-1和PIGF-2以高親和性與Flt-1結(jié)合，PIGF-2也傾向于結(jié)合neuropilin-1(Migdal等，生物化學(xué)雜志，273(35)22272-22278)，它們都不與FLK-1/KDR結(jié)合(Park等，文獻同上)。據(jù)報道當(dāng)VEGF以低濃度(據(jù)稱是由于異二聚體形成所致)存在時，PIGF可以增強血管通透性和VEGF對內(nèi)皮細胞的促分裂作用(Park等，文獻同上)。
VEGF-B以兩種同種型(167和185個殘基)出現(xiàn)，它似乎也能結(jié)合Flt-1/VEGFR-1。它在通過調(diào)制尿激酶型纖溶酶激活物和纖溶酶激活物抑制劑1的表達和活性以調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)降解，細胞粘附和遷移方面起作用(Pepper等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(20)11709-11714)。
VEGF-C起初是作為主要由淋巴內(nèi)皮細胞表達的VEGFR-3/Flt-4配體被克隆的。經(jīng)完全加工的VEGF-C也結(jié)合KDR/VEGFR-2，并能刺激體外內(nèi)皮細胞的增殖和遷移以及體內(nèi)模型的血管生成(Lymboussaki等，美國病理學(xué)雜志，1998，153(2)395-403；Witzenbichler等，美國病理學(xué)雜志，1998，153(2)，381-394)。轉(zhuǎn)基因過量表達VEGF-C僅導(dǎo)致淋巴管增殖和擴張，而不會對血管產(chǎn)生影響。與VEGF不同的是，VEGF-C的表達不能被低氧誘導(dǎo)(Ristimaki等，生物化學(xué)雜志，1998，273(14)，8413-8418)。
最新發(fā)現(xiàn)的VEGF-D在結(jié)構(gòu)上與VEGF-C非常相似。據(jù)報道，VEGF-D至少能結(jié)合并激活兩種VEGFR，即VEGFR-3/Flt-4和KDR/VEGFR-2。起初，它是作為成纖維細胞的c-fos誘導(dǎo)型促分裂原被克隆的，它主要在肺和皮膚的間充質(zhì)細胞內(nèi)表達(Achen等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1998，95(2)，548-553和其中提及的參考文獻)。
關(guān)于VEGF，據(jù)稱在Miles試驗中，當(dāng)注射至皮膚組織時，VEGF-C和VEGF-D能在體內(nèi)誘導(dǎo)血管通透性的增加(PCT/US97/14696；WO98/07832，Witzenbichler等，文獻同上)。這些配體在調(diào)制血管高通透性和表達該配體的組織中的內(nèi)皮細胞反應(yīng)方面的生理學(xué)作用和意義仍不明確。
最近報道了一種由病毒編碼的新型血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF-E(NZ-7VEGF)，它優(yōu)先利用KDR/Flk-1受體并具有強有力的促分裂活性，而不含有與肝素結(jié)合的結(jié)構(gòu)域(Meyer等，EMBO J.1999，18(2)，363-374；Ogawa等，生物化學(xué)雜志，1998，273(47)，31273-31282)。VEGF-E序列與哺乳動物VEGF具有25％同源性，并由副痘病毒Orf病毒(OV)編碼。副痘病毒會感染綿羊和山羊，偶爾也會感染人，產(chǎn)生伴隨血管生成的損害。VEGF-E是約為20kDa的二聚體，它不含堿性結(jié)構(gòu)域，對肝素也無親和性，但具有所有哺乳動物VEGF中都存在的特征性半胱氨酸結(jié)基元，令人驚奇的是，它還具有類似于VEGF-A與肝素-結(jié)合的VEGF165同種型的效力和生物活性，即這兩種因子都能刺激體外組織因子(TF)釋放，培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞的增殖，趨化性和快速生長，和體內(nèi)血管生成。與VEGF165一樣，VEGF-E能以高親和性與VEGF受體-2(KDR)結(jié)合，導(dǎo)致受體自身磷酸化，游離的細胞內(nèi)Ca2+濃度雙相增加，與VEGF165相反的是VEGF-E不與VEGF受體-1(Flt-1)結(jié)合。
根據(jù)不斷發(fā)現(xiàn)的其它VEGF和VEGFR同系物以及配體和受體異二聚體化的先例，所述VEGF同系物的作用包括形成VEGF配體異二聚體，和/或使受體異二聚體化，或與仍未被發(fā)現(xiàn)的VEGFR結(jié)合(Witzenbichler等，文獻同上)。另外，最新的報道表明neuropilin-1(Migdal等，文獻同上)或VEGFR-3/Flt-4(Witzenbichler等，文獻同上)或除KDR/VEGFR-2以外的受體可能參與誘導(dǎo)血管通透性(Stacker，S.A.，Vitali，A.，Domagala，T.，Nice，E.，和Wilks，A.F.，“血管生成和癌癥”會議，美國癌癥研究會，1998年1月，Orlando，F(xiàn)L；Williams，Diabetelogia 40S118-120(1997))。
Tie-2(TEK)是最近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮細胞特異性受體酪氨酸激酶家族的成員，它參與關(guān)鍵的血管生成過程，例如血管分支，快速生長，重新制作模型，成熟和穩(wěn)定。Tie-2是第一個哺乳動物受體酪氨酸激酶，已鑒定出它的激動劑配體(例如刺激受體自身磷酸化和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的angiopoietin 1(“Angl”))和拮抗劑配體(例如angiopoietin2(“Ang2”))。對Tie-2及其配體的表達進行的敲除和轉(zhuǎn)基因操作表明對Tie-2信號在空間和時間上進行嚴(yán)格的控制是新血管系統(tǒng)適當(dāng)發(fā)育所必需的。最新的模型表明通過Ang1配體刺激Tie-2激酶直接參與新血管的分支，快速生長和長出，周圍內(nèi)皮細胞的征集和相互作用支持對維持血管完整和誘導(dǎo)疾病被遏制狀態(tài)至關(guān)重要的細胞。Tie-2的Ang1刺激的缺乏或通過Ang2抑制Tie-2自身磷酸化(在血管退化位點以高水平產(chǎn)生)會導(dǎo)致血管結(jié)構(gòu)和基質(zhì)接觸的損失，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞死亡，尤其是在缺乏生長/存活刺激時更是如此。然而，這種情況更加復(fù)雜，因為最近已報道了至少兩種另外的Tie-2配體(Ang3和Ang4)，已闡明多種激動劑和拮抗劑形式的angiopoietin異寡聚體化，籍此修飾它們的活性的能力。因此，靶向Tie-2配體-受體相互作用作為抗血管生成的治療方法較為不利，優(yōu)選使用激酶抑制策略。
Tie-2可溶性細胞外結(jié)構(gòu)域(“ExTek”)可以破壞乳腺腫瘤異種移植和肺轉(zhuǎn)移模型和腫瘤細胞-介導(dǎo)的眼新血管生成中腫瘤血管系統(tǒng)的建立。通過腺病毒感染，可在嚙齒動物中體內(nèi)產(chǎn)生mg/ml水平的ExTek達7至10天，而無有害的副作用。這些結(jié)果表明在正常健康的動物中破壞Tie-2信號途徑能被較好地耐受。針對ExTek的Tie-2抑制反應(yīng)可能是螯合配體和/或產(chǎn)生具有全長Tie-2的非生產(chǎn)性異二聚體的后果。
最近，已發(fā)現(xiàn)人關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)的血管滑液關(guān)節(jié)翳中Tie-2表達顯著上調(diào)，這與不適當(dāng)?shù)男卵苌勺饔靡恢?。這一發(fā)現(xiàn)表明Tie-2在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的進展中起作用。已在人靜脈畸形疾病中鑒定出產(chǎn)生組成型激活的Tie-2形式的點突變。因此，Tie-2抑制劑可用于治療這種疾病，并可用于其它不適當(dāng)新血管生成的情況。
非-受體酪氨酸激酶。非-受體酪氨酸激酶代表缺乏細胞外和跨膜序列的細胞酶的集合。目前，已鑒定出超過24個獨立的非受體酪氨酸激酶，其包括11個亞族(Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，Zap70，F(xiàn)es/Fps，F(xiàn)ak，Jak，Ack和LIMK)。目前，非受體酪氨酸激酶的Src亞族由最大數(shù)目的PTK組成，其包括Src，Yes，F(xiàn)yn，Lyn，Lck，Blk，Hck，F(xiàn)gr和Yrk。該酶的Src亞族與癌癥發(fā)生和免疫應(yīng)答相關(guān)。有關(guān)非受體酪氨酸激酶的更詳細的討論可參見Bohlen，1993，癌基因82025-2031(列入本文作為參考)。
已發(fā)現(xiàn)很多酪氨酸激酶(不論是RTK還是非受體酪氨酸激酶)參與細胞信號途徑，所述途徑與多種病理狀態(tài)，包括癌癥，牛皮癬和其它過度增殖性疾病或過度免疫應(yīng)答相關(guān)。
開發(fā)能調(diào)制PTK的化合物。鑒于PTK在控制，調(diào)節(jié)和調(diào)制細胞增殖，與異常細胞增殖相關(guān)的疾病和紊亂方面推測的重要性，人們使用多種方法進行了很多嘗試以鑒定出受體和非-受體酪氨酸激酶“抑制劑”，所述方法包括使用突變的配體(美國專利4,966,849)，可溶性受體和抗體(申請?zhí)朩O94/10202；Kendall & Thomas，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.9010705-09；Kim等，1993，自然362841-844)，RNA配體(Jellinek等，生物化學(xué)3310450-56；Takano等，1993，細胞分子生物學(xué)4358A；Kinsella等，1992，Exp.Cell Res.19956-62；Wright等，1992，細胞生理學(xué)雜志，152448-57)和酪氨酸激酶抑制劑(WO 94/03427；WO 92/21660；WO 91/15495；WO 94/14808；美國專利5,330,992；Mariani等，1994，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.352268)。
最近，已嘗試鑒定可用作酪氨酸激酶抑制劑的小分子。例如，雙單環(huán)，雙環(huán)或雜環(huán)芳基化合物(PCT WO 92/20642)和亞乙烯基-氮雜吲哚衍生物(PCT WO 94/14808)通常被描述為酪氨酸激酶抑制劑。苯乙烯基化合物(美國專利5,217,999)，苯乙烯基-取代的吡啶基化合物(美國專利5,302,606)，某些喹唑啉衍生物(EP申請?zhí)?566 266 A1；Expert Opin.Ther.Pat.(1998)，8(4)475-478)，硒雜吲哚和硒化物(PCT WO 94/03427)，三環(huán)多羥基化合物(PCT WO 92/21660)和芐基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)被描述為可用作能治療癌癥的酪氨酸激酶抑制劑的化合物。苯胺基噌啉(PCT WO97/34876)和喹唑啉衍生的化合物(PCT WO97/22596；PCT WO97/42187)被描述為血管生成和血管通透性的抑制劑。
另外，還嘗試鑒定可用作絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑的小分子。例如，雙(吲哚基馬來酰亞胺)化合物被描述為能抑制特定的PKC絲氨酸/蘇氨酸激酶同種型，在VEGF-相關(guān)疾病中，所述同種型的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能與改變的血管通透性有關(guān)(PCT WO97/40830；PCT WO97/40831)。Plk-1激酶抑制劑Plk-1是絲氨酸/蘇氨酸激酶，它是細胞周期進程的重要調(diào)節(jié)劑。它在有絲分裂紡錘體裝置的裝配和動態(tài)功能方面起著重要作用。已知Plk-1和相關(guān)的激酶與其它細胞周期調(diào)節(jié)劑，如細胞周期蛋白-依賴型激酶的激活和滅活密切相關(guān)。高水平的Plk-1表達與細胞增殖活性相關(guān)。經(jīng)常能在多種來源的惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)Plk-1。Plk-1的抑制劑有望通過破壞涉及有絲分裂紡錘體和不適當(dāng)激活的細胞周期蛋白-依賴型激酶來阻斷癌細胞增殖。Cdc2/細胞周期蛋白B激酶抑制劑(Cdc2也稱為cdk1)Cdc2/細胞周期蛋白B是另一種屬于細胞周期蛋白-依賴型激酶(cdks)家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶。這些酶參與細胞周期進程的多個時期之間的重要轉(zhuǎn)換。據(jù)信失控的細胞增殖(癌癥的標(biāo)志)依賴于這些細胞中升高的cdk活性。通過cdc2/細胞周期蛋白B激酶抑制劑抑制癌細胞中升高的cdk活性能抑制增殖，并可恢復(fù)對細胞周期進程的正?？刂啤?br> 調(diào)節(jié)CDK的激活是復(fù)雜的，但需要聯(lián)合CDK和調(diào)節(jié)亞單位細胞周期蛋白家族的成員(Draetta，細胞生物學(xué)趨勢，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，自然，339275-280(1989)；Solomon等，細胞的分子生物學(xué)，313-27(1992))。通過激活和滅活CDK亞單位的磷酸化可進行另一種水平的調(diào)節(jié)(Draetta，細胞生物學(xué)趨勢，3287-289(1993))；Murray和Kirsclmer，自然，339275-280(1989)；Solomon等，細胞的分子生物學(xué)，313-27(1992)；Ducommun等，EMBO J，103311-3319(1991)；Gautier等，自然339626-629(1989)；Gould和Nurse，自然，3423945(1989)；Krek和Nigg，EMBO J，103331-3341(1991)；Solomon等，細胞，631013-1024(1990))。同等激活和滅活不同的細胞周期蛋白/CDK復(fù)合物是細胞周期正常進程所必需的(Pines，生化科學(xué)趨勢，18195-197(1993)；Sheir，細胞，731059-1065(1993))。必不可少的G1-S和G2-M轉(zhuǎn)換由不同細胞周期蛋白/CDK活性的激活控制。據(jù)認為在G1期中，細胞周期蛋白D/CDK4和細胞周期蛋白E/CDK2介導(dǎo)S-期的開始(Matsushima等，分子&細胞生物學(xué)，142066-2076(1994)；Ohtsubo和Roberts，科學(xué)，2591908-1912(1993)；Quelle等，基因&發(fā)育，71559-1571(1993)；Resnitzky等，分子&細胞生物學(xué)，141669-1679(1994))。經(jīng)過S-期的進程需要細胞周期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，細胞，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBOJ，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，自然，354314-317(1991)；Zindy等，生物化學(xué)&生物物理學(xué)研究通訊，1821144-1154(1992))，而細胞周期蛋白A/cdc2(CDK1)和細胞周期蛋白B/cdc2的激活是中期開始所必需的(Draetta，細胞生物學(xué)趨勢，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，自然，339275-280(1989)；Solomon等，細胞的分子生物學(xué)，313-27(1992)；Girard等，細胞，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO J，ll961-971(1992)；Rosenblatt等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89282-2828(1992)；Walker和Maller，自然，354314-317(1991)；Zindy等，生物化學(xué)&生物物理學(xué)研究通訊，1821144-1154(1992))。因此，CDK調(diào)節(jié)的失控?zé)o疑是過度增殖性疾病和癌癥中的多發(fā)事件(Pines，細胞生物學(xué)最新觀點，4144-148(1992)；Lees，細胞生物學(xué)最新觀點，7773-780(1995)；Hunter和Pines，細胞，79573-582(1994))。
參與介導(dǎo)或維持疾病狀態(tài)之激酶的抑制劑代表著這些疾病的新療法。所述激酶的例子包括但不限于(1)抑制癌癥中的c-Src(Brickell，Critical Reviews in Oncogenesis，3401406(1992)；Courtneidge，癌癥生物學(xué)研討會，5236-246(1994)，raf(Powis，藥物學(xué)&治療劑，6257-95(1994))和細胞周期蛋白-依賴型激酶(CDK)1，2和4(Pines，細胞生物學(xué)最新觀點，4144-148(1992)；Lees，細胞生物學(xué)最新觀點，7773-780(1995)；Hunter和Pines，細胞，79573-582(1994))，(2)抑制再狹窄中的CDK2或PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92225-2262(1995))，(3)抑制Alzheimers中的CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，生物化學(xué)雜志(東京)，117741-749(1995)；Aplin等，神經(jīng)化學(xué)雜志，67699-707(1996)，(4)抑制骨質(zhì)疏松中的c-Src激酶(Tanaka等，自然，383528-531(1996)，(5)抑制2型糖尿病中的GSK-3激酶(Borthwick等，生物化學(xué)&生物物理學(xué)研究通訊，210738-745(1995)，(6)抑制炎癥中的p38激酶(Badger等，藥物學(xué)和實驗治療劑雜志，2791453-1461(1996))，(7)抑制涉及血管生成之疾病中的VEGF-R1-3和TIE-1和-2激酶(Shawver等，今日藥物發(fā)現(xiàn)，250-63(1997))，(8)抑制病毒感染中的UL97激酶(He等，病毒學(xué)雜志，71405411(1997))，(9)抑制骨和造血疾病中的CSF-1R激酶(Myers等，生物有機&藥物化學(xué)通訊，7421-424(1997)，和(10)抑制自身免疫病和移植排斥中的Lck激酶(Myers等，生物有機＆藥物化學(xué)通訊，7417-420(1997))。
另外，當(dāng)某些激酶未被錯誤調(diào)節(jié)，但卻仍然是維持疾病狀態(tài)所必需時，這些激酶的抑制劑可用于治療疾病。此時，抑制激酶活性可以治愈或減輕這些疾病。例如，諸如人乳頭瘤病毒的很多病毒破壞細胞周期并使細胞進入細胞周期的S-期(Vousden，F(xiàn)ASEB J，78720879(1993))。在病毒感染之后通過抑制必需的S-期起始活性，如CDK2來防止細胞進入DNA合成可以通過防止病毒復(fù)制而破壞病毒生命周期?？墒褂孟嗤脑肀Ｗo身體的正常細胞免受周期-特異性化學(xué)治療劑的毒性(Stone等，癌癥研究，563199-3202(1996)；Kohn等，細胞生物化學(xué)雜志，5444-452(1994))。抑制CDK 2或4可以防止進入正常細胞周期，并限制對S-期，G2或有絲分裂起作用的細胞毒素的毒性。另外，已證明CDK2/細胞周期蛋白E活性可調(diào)節(jié)NF-kB。抑制CDK2活性可刺激NF-kB-依賴型基因表達(通過與p300共激活物相互作用而介導(dǎo)的事件)(Perkins等，科學(xué)，275523-527(1997))。NF-kB調(diào)節(jié)涉及炎癥反應(yīng)的基因(如造血生長因子，趨化因子和白細胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，免疫學(xué)年評，12141-179(1994))，并可參與抑制細胞內(nèi)的細胞凋亡信號(Beg和Baltimore，科學(xué)，274782-784(1996)；Wang等，科學(xué)，274784-787(1996)；VanAntwerp等，科學(xué)，274787-789(1996))。因此，抑制CDK2可經(jīng)由涉及NF-kB的機制抑制由細胞毒藥物誘導(dǎo)的細胞凋亡。由此表明抑制CDK2活性也可用于NF-kB調(diào)節(jié)在疾病病原學(xué)中起作用的其它場合。其它例子包括真菌感染曲霉病是無免疫能力之患者的常見感染(Armstrong，臨床傳染病，161-7(1993))。抑制曲霉屬激酶Cdc2/CDC28或Nim A(Osmani等，EMBO J，102669-2679(1991)；Osmani等，細胞，67283-291(1991))可導(dǎo)致真菌受抑制或死亡，改善患有這些感染之患者的治療效果。
因此，必需鑒定有效的小化合物，該化合物應(yīng)能通過調(diào)制受體和非受體酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶的活性特異性抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞增殖，從而調(diào)節(jié)和調(diào)制異?；虿贿m當(dāng)?shù)募毎鲋常只虼x。尤其是，鑒定特異性抑制酪氨酸激酶之功能的方法和化合物是有利的，所述酪氨酸激酶是血管生成過程或?qū)е赂∧[，腹水，滲漏，滲出和大分子外滲和基質(zhì)沉積以及相關(guān)疾病的血管通透性過高的形成所必需的。
發(fā)明概要本發(fā)明提供式I化合物 和其藥用鹽。
在式I中，A環(huán)是六員芳香環(huán)或五或六員雜芳香環(huán)。A環(huán)任選地被一個或多個下列取代基取代取代或未取代的脂族基，鹵素，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的雜芳香基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳烷基，氰基，硝基，-NR4R5，-C(O)2H，-OH，取代或未取代的烷氧羰基，-C(O)2-鹵代烷基，取代或未取代的烷硫基醚，取代或未取代的烷基亞砜，取代或未取代的烷基砜，取代或未取代的芳硫基醚，取代或未取代的芳基亞砜，取代或未取代的芳基砜，取代或未取代的烷基羰基，-C(O)-鹵代烷基，取代或未取代的脂族醚，取代或未取代的芳香醚，取代或未取代的甲酰氨，四唑基，三氟甲基磺酰氨基，三氟甲基羰基氨基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基酰氨基，取代或未取代的芳基酰氨基，取代或未取代的苯乙烯基和取代或未取代的芳烷基酰氨基。L是下列連接基之一-O-；-S-；-S(O)-；-S(O)2-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)-；-CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-； -CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-； -N(R)C(O)-；-N(R)S(O)-；-N(R)S(O)2-；-OC(O)N(R)-；-N(R)C(O)N(R)-；-NRC(O)O-；-S(O)N(R)-；-S(O)2N(R)-；N(C(O)R)S(O)-；N(C(O)R)S(O)2-；-N(R)S(O)N(R)-；-N(R)S(O)2N(R)-；-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)N(R)C(O)-；-S(O)2N(R)C(O)-；-OS(O)N(R)-；-OS(O)2N(R)-；-N(R)S(O)O-；-N(R)S(O)2O-；-N(R)S(O)C(O)-；-N(R)S(O)2C(O)-；-SON(C(O)R)-；-SO2N(C(O)R)-；-N(R)SON(R)-；-N(R)SO2N(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(OR’)O-；-N(R)P(OR’)-；-N(R)P(O)(OR’)O-；-N(R)P(O)(OR’)-；-N(C(O)R)P(OR’)O-；-N(C(O)R)P(OR’)-；-N(C(O)R)P(O)(OR’)O-或-N(C(O)R)P(OR’)-.R和R’各自獨立地是-H，?；?，取代或未取代的脂族基，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的雜芳香基，或取代或未取代的環(huán)烷基。
或者，L是-RbN(R)S(O)2-，-RbN(R)P(O)-，或-RbN(R)P(O)O-。Rb是亞烷基，當(dāng)其與所連接的磺酰胺，次膦酰胺，或膦酰胺基一起時形成與A環(huán)稠合的五或六員環(huán)。
或者，L表示下列結(jié)構(gòu)式之一 R85完成5-，6-，或7-員芳香，雜芳香或雜環(huán)烷基環(huán)系。
在式I中，R1是-H，2-苯基-1，3-二氧六環(huán)-5-基，C1-C6烷基，C3-C8環(huán)烷基，C5-C7環(huán)烯基或任選取代的芳基(C1-C6烷基)。當(dāng)R1是烷基，環(huán)烷基和環(huán)烯基時，可以任選地被一個或多個式-ORa的基團取代，條件是-ORa不在與氮連接的碳原子上。Ra是-H，C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基。
在式I中，R2是-H，取代或未取代的脂族基團，取代或未取代的環(huán)烷基，鹵素，-OH，氰基，取代或未取代的芳香基團，取代或未取代的雜芳香基團，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳烷基，-NR4R5，或-C(O)NR4R5。
在式I中，R3是取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的芳香基團，取代或未取代的雜芳香基團，取代或未取代的雜環(huán)烷基。當(dāng)L是NRSO2-，NRC(O)-，-NRC(O)O-，-SO2NR-，-C(O)NR-或-OC(O)NR-時，R3還可以是烷基，烯基或芳烷基。
在式I中，R4，R5和氮原子一起形成3，4，5，6或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代或未取代的雜芳香基。
或者，R4和R5各自獨立地是-H，氮雜雙環(huán)烷基，取代或未取代的烷基或Y-Z。
Y是-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，SO2NH-，一CONH-，(CH2)pO-，-(CH2)pNH-，-(CH2)pS-，-(CH2)pS(O)-或-(CH2)pS(O)2-.
p是0至6的整數(shù)。
Z是取代或未取代的烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基或取代或未取代的雜環(huán)烷基。
j是0至6的整數(shù)。
但是，當(dāng)L是-CH2NR-，-C(O)NR-或-NRC(O)-，而R3是氮雜環(huán)烷基或氮雜雜芳基時，j是0。另外，當(dāng)L是-O-且R3是苯基時，j是0。
本發(fā)明化合物可用作絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶抑制劑。特別是本發(fā)明化合物可用作對于過度增殖性疾病，尤其是癌癥和血管生成過程很重要的酪氨酸激酶的抑制劑。例如，這些化合物中的某些是諸如KDR，F(xiàn)lt-1，F(xiàn)GFR，PDGFR，c-Met，TIE-2或IGF-1-R受體激酶的抑制劑。因為這些化合物中的某些是抗血管生成劑，因此它們是用于抑制當(dāng)血管生成是一個重要因素時的病癥發(fā)展的重要物質(zhì)。本發(fā)明的某些化合物作為絲氨酸/蘇氨酸激酶如PKCs，erk，MAP激酶，MAP激酶激酶，MAP激酶激酶激酶，cdks，plk-1或Raf-1的抑制劑是有效的。這些化合物可用于治療癌癥，過度增殖性疾病。另外，某些化合物是非受體激酶如Src(例如，Iek，blk和lyn)，Tee，Csk，jak，Map，Nik和Syk族激酶的有效抑制劑。這些化合物可用于治療癌癥，過度增殖性疾病和免疫疾病。
當(dāng)在VEGF-相關(guān)的刺激存在下，或與其聯(lián)合應(yīng)用時，本發(fā)明某些化合物是選擇性的TIE-2激酶抑制劑，它們可能是抗血管生成劑(尤其是與一種或多種VEGFR抑制劑聯(lián)合)，或前血管生成劑(pro-angiogenic)。以這種方式，這類抑制劑可以被用于促進治療性血管生成，從而治療例如，局部缺血，梗塞或閉塞，或促進創(chuàng)傷愈合。
本發(fā)明提供抑制酪氨酸激酶和絲氨酸/蘇氨酸激酶的激酶活性的方法，包括對所述的激酶施用其濃度足以抑制所述激酶的酶活性的式I所示的化合物。
本發(fā)明還包括這些化合物在包含藥用有效量的上述化合物和藥用載體或賦形劑的藥物組合物中的用途。這些藥物組合物可以對個體給藥從而減緩或停止在血管生成輔助的疾病中血管生成的進程，或治療水腫，滲漏，滲出或腹水，和其它與血管滲透性過高有關(guān)的疾病。某些藥物組合物可以對個體給藥，通過抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶如cdks，plk-1，erk等治療癌癥和過度增殖性疾病。發(fā)明詳述第一優(yōu)選組的式I化合物中取代基的定義在下面給出。
優(yōu)選地，L是-N(R)S(O)2-，-S(O)2N(R)-，-N(R)C(O)-或-C(O)N(R)-，-NH-，-NR-或-O-。
優(yōu)選地，R3是取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的苯并三唑基，取代或未取代的四氫吡喃基，取代或未取代的四氫呋喃基，取代或未取代的二氧六環(huán)，取代或未取代的二氧戊環(huán)，取代或未取代的喹啉，取代或未取代的噻唑，取代或未取代的異噁唑，取代或未取代的環(huán)戊基，取代或未取代的苯并呋喃，取代或未取代的苯并噻吩，取代或未取代的咪唑，取代或未取代的吡咯，取代或未取代的嘧啶基，取代或未取代的indolynyl，取代或未取代的苯并異噁唑基，取代或未取代的苯并異噻唑，取代或未取代的苯并噻唑，取代或未取代的苯并噁唑，取代或未取代的苯并咪唑，取代或未取代的苯并噁二唑，取代或未取代的苯并噻二唑，取代或未取代的異喹啉基，取代或未取代的喹喔啉基，取代或未取代的吲哚或取代或未取代的吡唑，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的吡啶氧基。在一個方案中，R3是取代或未取代的苯基。
R3可以被一個或多個取代基取代。對于R3優(yōu)選的取代基有F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，-CHO，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，吡啶氧基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的噻唑基，取代或未取代的芐基，取代的或未取代的苯磺酰基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S(O)x-(取代或未取代的芳基)，-S(O)x-其中x＝0，1，2-(取代或未取代的雜芳基)，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc。
Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代或未取代的雜芳基。
或者，Rf和Rg各自獨立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
Rc是氫，或取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH，或-W-(CH2)tNH-C(O)Rft是0至約6的整數(shù)。
W是化學(xué)鍵或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-。
Rk是-H或烷基。
Rd， Re和與其連接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基或取代或未取代的雜雙環(huán)基。
或者，Rd和Re各自獨立地是-H，烷基，烷?；?K-D。
K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接鍵(directbond)。
D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳香基，取代或未取代的雜芳烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基環(huán)烷基，COORi，或取代或未取代的烷基。
Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
對于R3更優(yōu)選取代基是F，Cl，Br，I，氰基，硝基，OCF3，CH3，和CF3。
優(yōu)選地，A環(huán)是取代或未取代的苯基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或取代或未取代的吲哚。在一個方案中，A環(huán)是取代或未取代的苯基。
A環(huán)可以被一個或多個取代基取代。對于A環(huán)優(yōu)選的取代基有F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的芐基，取代或未取代的苯磺?；?，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的雜芳基)，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc。Rf，Rg和Rc如上定義。
A環(huán)更優(yōu)選地被F，Cl，和硝基取代。
R2優(yōu)選地是氫。
優(yōu)選地，R1是環(huán)戊基或異丙基。
本文所用的芳香基團包括碳環(huán)系(例如芐基和肉桂基)和稠合多環(huán)芳香環(huán)系(例如萘基和1，2，3，4-四氫萘基)。本文所用的芳基指芳香基團。
本文所用的雜芳香基團包括雜芳基環(huán)系(例如噻吩基，吡啶基，吡唑基，異噁唑基，噻二唑基，噁二唑基，吲唑基，呋喃基，吡咯基，咪唑，吡唑，三唑，嘧啶，吡嗪，噻唑，異噁唑，異噻唑，四唑，或噁二唑)和其中碳環(huán)芳香環(huán)，碳環(huán)非芳香環(huán)或雜環(huán)與一個或多個其它雜環(huán)稠合的芳香環(huán)系(例如苯并(b)噻吩，苯并咪唑，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，苯并噁二唑基，吲哚，四氫吲哚，氮雜吲哚，吲唑，咪唑并吡啶，嘌呤，吡咯并[2，3-d]嘧啶，吡唑并[3，4-d]嘧啶)和其N-氧化物。
本文所用的芳烷基是通過具有1至約6個碳原子的脂族基與化合物連接的芳香取代基。
本文所用的雜芳烷基是通過具有1至約6個碳原子的脂族基與化合物連接的雜芳香取代基。
本文所用的雜環(huán)烷基是具有3至8個原子，并包括至少一個雜原子，如氮，氧，或硫的非芳香環(huán)系。
本文所用的?；?C(O)NRxRz，-C(O)ORx，-C(O)Rx，其中Rx和Rz各自獨立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基團。
本文所用的脂族基團包括直鏈，支鏈或環(huán)狀完全飽和的或含有一個或多個不飽和單元的C1-C8烴基?！暗图壨榛笔蔷哂?至6個碳原子的飽和脂族基。
式I化合物可以存在與藥用酸所鹽。本發(fā)明包括這類鹽。這類鹽的例子包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，甲磺酸鹽，硝酸鹽，馬來酸鹽，乙酸鹽，檸檬酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽[例如(+)酒石酸鹽，(-)-酒石酸鹽或其混合物包括外消旋混合物]，琥珀酸鹽，苯甲酸鹽和與氨基酸如谷氨酸的鹽。這些鹽可以通過本專業(yè)已知的方法制備。
某些具有酸性取代基的式I化合物可以存在與藥用堿的鹽。本發(fā)明包括這類鹽。這類鹽的例子包括鈉鹽，鉀鹽，賴氨酸鹽和精氨酸鹽。這些鹽可以通過本專業(yè)已知的方法制備。
某些式I化合物可以存在多于一種晶型，本發(fā)明包括各種晶型和其混合物。
某些式I化合物和其鹽也可以以溶劑化物，例如水合物形式存在，本發(fā)明包括各種溶劑化物和其混合物。
某些式I化合物可以含有一個或多個手性中心，并以不同的光學(xué)活性形式存在。當(dāng)式I化合物含有一個手性中心時，化合物存在兩種對映體形式，本發(fā)明包括這兩種對映體和對映體的混合物，如外消旋混合物。對映體可以通過本專業(yè)已知的方法拆分，例如通過形成可以例如，通過結(jié)晶分開的非對映體鹽；形成可以例如通過結(jié)晶，氣-液色譜或液相色譜分開的非對映體衍生物或配合物；一種對映體與對映體-專一試劑的選擇性反應(yīng)，例如酶催化酯化；或在手性環(huán)境下的氣-液或氣相色譜，例如脂族手性載體例如結(jié)合有手性配體的硅膠或者在手性溶劑存在下。應(yīng)該理解，當(dāng)所需的對映體通過上述分離工藝之一轉(zhuǎn)化為另一化學(xué)本體時，需要另一步驟來釋放所需的對映體形式。另外，特定的對映體可以通過用光學(xué)活性試劑，底物，催化劑或溶劑，不對稱合成，或通過不對稱轉(zhuǎn)移將一種對映體轉(zhuǎn)化為另一種。
當(dāng)式I化合物含有多于一個手性中心時，可以存在非對映體形式。非對映體對可以通過本專業(yè)已知的方法，例如色譜或結(jié)晶而分離，而各對中的單個對映體可以如上所述分離。本發(fā)明包括式I化合物的各種非對映體和其混合物。
某些式I化合物可以存在不同的互變異構(gòu)形式或不同的幾何異構(gòu)體，本發(fā)明包括式I化合物的各種互變異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體，和其混合物。
某些式I化合物可以存在不同的可被分離的穩(wěn)定構(gòu)象形式。由于不對稱單鍵，例如因為立體位阻或環(huán)張力而限制旋轉(zhuǎn)的扭力不對稱，使得不同構(gòu)象異構(gòu)體的分離成為可能。本發(fā)明包括式I化合物的各種構(gòu)象異構(gòu)體和其混合物。
某些式I化合物可以存在兩性離子形式，本發(fā)明包括式I化合物的各種兩性離子形式和其混合物。
優(yōu)選的式I化合物包括如下N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-硝基苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-4-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氰基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-硝基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氟-1-苯磺酰胺，Nl-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3，4-三氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3，4-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-溴-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4，6-三氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-碘-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2，5-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氰基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-6-甲基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-氯-2-甲基-1-苯磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4，5-二溴-2-噻吩磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-溴-2-噻吩磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-溴-5-氯-2-噻吩磺酰胺，N3-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氯-3-噻吩磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-氯-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-氯-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-(2-硝基苯基)甲磺酰胺，和N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二溴-3，6-二氟-1-苯磺酰胺。
本發(fā)明化合物具有抗血管生成性質(zhì)。這些抗血管生成性質(zhì)是因為至少部分抑制對于血管生成過程必要的蛋白酪氨酸激酶。為此，這些化合物可以用作抗諸如關(guān)節(jié)炎，動脈粥樣硬化，再狹窄，牛皮癬，血管瘤，心肌血管生成，冠狀或腦血管側(cè)突，局部缺血性肢血管生成，局部缺血/再灌注損傷，創(chuàng)傷愈合，消化道潰瘍螺旋菌相關(guān)的疾病，病毒引起的血管生成性疾病，骨折，Crow-Fukase綜合征(POEMS)，子癇前期，月經(jīng)頻多，貓抓熱，潮紅，新血管青光眼和視網(wǎng)膜病如與糖尿病性視網(wǎng)膜病，早熟的視網(wǎng)膜病，或與年齡有關(guān)的黃斑變性之類病癥的活性劑。另外，這些化合物中的某些可以用作抗實體腫瘤，惡性腹水，von Hippel Lindau病，造血癌和過度增殖性疾病如甲狀腺增殖(尤其是Grave，s病)，和囊腫(如多囊卵巢綜合征的特征(Stein-Leventhal綜合征)性的卵巢基質(zhì)的多血管和多囊腎病)的活性劑。
而且，這些化合物中的某些可以用作燒傷，慢性肺病，中風(fēng)，息肉，過敏癥，慢性和過敏性炎癥，延遲型超敏反應(yīng)，卵巢過度刺激綜合征，腦瘤相關(guān)的腦水腫，高原癥，外傷或缺氧引起的腦或肺水腫，眼或黃斑水腫，腹水，腎小球性腎炎和其它以血管滲透性過高，滲漏，滲出，蛋白外滲，或水腫為表現(xiàn)的疾病的活性劑。這些化合物也可用于治療其中蛋白外滲導(dǎo)致纖維蛋白和細胞外基質(zhì)沉積，促進基質(zhì)增殖(例如瘢痕疙瘩，纖維變性，硬變和腕管綜合征)的疾病。增多的VEGF產(chǎn)生加強了炎癥過程如單核細胞補充和激活。本發(fā)明的化合物也可用于治療炎癥如腸炎(IBD)和Crohn’s病。
VEGF’s是獨特的，其是已知僅有的導(dǎo)致血管滲透性過高和水腫形成的血管生長因子。實際上，與許多其它生長因子的表達或給藥有關(guān)的血管滲透性過高和水腫似乎是由VEGF產(chǎn)生而介導(dǎo)的。炎性胞質(zhì)分裂刺激VEGF產(chǎn)生。缺氧導(dǎo)致許多組織中VEGF的明顯上調(diào)，此后情況包括梗塞，閉塞，局部缺血，貧血，或典型地引起VEGF/VPF介導(dǎo)的應(yīng)答的循環(huán)損傷。常常伴隨血細胞滲出的血管滲透性過高，相關(guān)水腫，閹割的皮交換和大分子外滲可以導(dǎo)致過量基質(zhì)沉積，異常的基質(zhì)增殖，纖維變性，等等。因此，VEGF介導(dǎo)的高滲透性可以明確地導(dǎo)致具有這些病因?qū)W特征的疾病。
因為胚泡植入，胎盤發(fā)育和胚胎生成是血管生成依賴性的，本發(fā)明某些化合物可用作避孕藥和抗受精劑。
設(shè)想上述疾病由包括KDR/VEGFR-2和/或Flt-1/VEGFR-1和/或TIE-2酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶活性介導(dǎo)到顯著的程度。通過抑制這些酪氨酸激酶的活性，所列出的疾病進程被抑制，因為該病癥的血管生成或相關(guān)高滲透性成分被嚴(yán)重消減。通過其對特異性酪氨酸激酶的選擇性，本發(fā)明某些化合物的作用導(dǎo)致副作用的最小化，而這些副作用在使用選擇性較小的酪氨酸激酶抑制劑時會存在。本發(fā)明某些化合物也是FGFR，PDGFR，c-Met和IGF-1-R的有效抑制劑。這些受體激酶可以直接或間接地在各種疾病中強化血管生成和過度增殖應(yīng)答，因此其抑制可以阻止疾病的進程。
本發(fā)明化合物對蛋白激酶具有抑制活性。即，這些化合物通過蛋白激酶調(diào)節(jié)信號傳導(dǎo)。本發(fā)明化合物抑制絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶類的蛋白激酶。特別是，這些化合物選擇性地抑制KDR/FLK-1/VEGFR-2酪氨酸激酶的活性。本發(fā)明某些化合物也抑制其它酪氨酸激酶如Flt-1/VEGFR-1，Tie-2，F(xiàn)GFR，PDGFR，IGF-1-R，c-Met，Src-亞族激酶如Lck，Src，fyn，yes等等的活性。另外，本發(fā)明某些化合物明顯地抑制在細胞增殖和細胞周期進程中扮演必要角色的絲氨酸/蘇氨酸激酶如PKC，MAP激酶，erk，CDKs，plk-1，或Raf-1。本發(fā)明一般化合物對特定蛋白激酶的效力和特異性常?？梢酝ㄟ^取代基(即，R1，R2，R3，A和環(huán)1)性質(zhì)，數(shù)量和排列的改變和構(gòu)象限制而改變和最佳化。另外，某些化合物的代謝物也具有明顯的蛋白激酶抑制活性。
當(dāng)對需要這類化合物的個體給藥時，本發(fā)明化合物在這些個體內(nèi)抑制血管滲透性過高和水腫形成。據(jù)信，這些化合物通過抑制與血管滲透性過高和水腫形成有關(guān)的KDR酪氨酸激酶的活性而發(fā)揮作用。KDR酪氨酸激酶也被稱為FLK-1酪氨酸激酶，NYK酪氨酸激酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。當(dāng)血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)或其它活化配體(如VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E或HIV Tat蛋白)與處于血管內(nèi)皮細胞表面的KDR酪氨酸激酶受體結(jié)合時，KDR酪氨酸激酶被激活。隨著這類KDR酪氨酸激酶的激活，血管的高滲透性就發(fā)生了，液體從血流中流出血管壁進入間質(zhì)空間，從而形成水腫區(qū)。血細胞滲出常常伴隨著此反應(yīng)。類似地，過度的血管滲透性過高可以擾亂在關(guān)鍵組織和器官(例如，肺和腎)中穿過內(nèi)皮的正常分子交換，從而引起大分子外滲和沉積。隨著對被認為加速隨后血管生成過程的KDR刺激的急性反應(yīng)，延長的KDR酪氨酸激酶刺激導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞的增殖和趨化性和新血管形成。通過抑制KDR酪氨酸激酶活性，通過阻斷活化配體的產(chǎn)生，通過阻斷活化配體與KDR酪氨酸激酶受體結(jié)合，通過防止受體二聚和磷酸轉(zhuǎn)移作用，通過抑制KDR酪氨酸激酶的酶活性(抑制酶的磷酸化功能)或一些其它中斷其下游信號傳導(dǎo)的機制(D.Mukhopedhyay等，Caner Res.581278-1284(1998)和其參考文獻)，高滲透性和相關(guān)的外滲，隨后的水腫形成和基質(zhì)沉積，和血管生成反應(yīng)，可以被抑制和最小化。
一組優(yōu)選的本發(fā)明化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性而不明顯抑制Flt-1酪氨酸激酶活性(Flt-1酪氨酸激酶也稱為VEGFR-1酪氨酸激酶)。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶兩者分別通過VEGF與KDR酪氨酸激酶受體和Flt-1酪氨酸激酶受體結(jié)合而被激活。某些優(yōu)選的本發(fā)明化合物是獨特的，因為它們抑制被活化配體激活的一種VEGF-受體酪氨酸激酶(KDR)，而不抑制由某些活化配體激活的其它受體酪氨酸激酶，如Flt-1。這樣的話，某些優(yōu)選的本發(fā)明化合物在其酪氨酸激酶抑制活性方面是選擇性的。
在一個方案中，本發(fā)明提供治療病人的蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥的方法，包括對病人施用治療或預(yù)防有效量的一種或多種式I化合物。
蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥”是醫(yī)學(xué)病癥，如疾病或其它不好的生理狀態(tài)，其產(chǎn)生和發(fā)展至少部分依賴于至少一種蛋白激酶的活性。蛋白激酶可以是，例如，蛋白酪氨酸激酶或蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶。
被治療的患者可以是任何動物，并且優(yōu)選地是哺乳動物，如家畜或牲畜。更優(yōu)選地，患者是人。
“冶療有效量”是完全或部分抑制病癥的進程，或至少部分緩解病癥的一種或多種癥狀的式I化合物或兩種或多種這類化合物組合的量。治療有效量也可以是預(yù)防有效量。治療有效量將取決于患者的體重和性別。被治療的病癥，病情和所需的結(jié)果。對于給定的患者，治療有效量可以通過本專業(yè)已知的方法確定。
本發(fā)明的方法可用于治療蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥，如任何上述病癥。在一個實施方案中，蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥的特征是討厭的血管生成，水腫，或基質(zhì)沉積。例如，該病癥可以是一種或多種潰瘍，如由細菌或真菌感染引起的潰瘍，Mooren潰瘍和潰瘍性結(jié)腸炎。該病癥也可以是由微生物感染引起的，如Lyme病，膿毒病，膿毒性休克或被單純皰疹，帶狀皰疹，人免疫缺損病毒，原生動物，弓形體病或副痘病毒感染；血管生成疾病，如von Hippel Lindau病，多囊腎病，類天皰瘡，Paget’s病和牛皮癬；再生性疾病，如子宮內(nèi)膜異位，卵巢過度刺激綜合征，子癇前期或月經(jīng)頻多；纖維變性和水腫性病癥，如肉樣瘤病，纖維變性，硬變，甲狀腺炎，高粘滯性綜合征系，Osler-Weber-Rendu病，慢性閉塞性肺病，哮喘，燒傷后的水腫，創(chuàng)傷，放射，中風(fēng)，缺氧或局部缺血；或炎癥/免疫學(xué)病癥，如系統(tǒng)性狼瘡，慢性炎癥，腎小球性腎炎，滑膜炎，炎性腸病，Crohn’s病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和移植排異反應(yīng)。合適的蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥也包括鐮形細胞貧血，骨質(zhì)疏松癥，骨硬化病，腫瘤-引起的血鈣過多和骨遷移。其它可用本發(fā)明方法治療的蛋白激酶-介導(dǎo)的病癥包括眼病如眼和黃斑水腫，眼新血管病，鞏膜炎，放射狀角膜切開術(shù)，眼色素層炎，vitritis，近視，眼窩(opticpits)，慢性視網(wǎng)膜脫離，后-激光并發(fā)癥，結(jié)膜炎，Stargardt’s病和Eales病，以及視網(wǎng)膜病和黃斑變性。
本發(fā)明化合物也可用于治療心血管病如動脈粥樣硬化，再狹窄，血管閉塞和頸動脈阻塞病。
本發(fā)明化合物也可用于治療癌癥相關(guān)的指征如實體腫瘤，肉瘤(尤其是Ewing’s肉瘤和骨肉瘤)，成視網(wǎng)膜細胞瘤，橫紋肌肉瘤，成神經(jīng)細胞瘤，造血性癌，包括白血病和淋巴瘤，腫瘤引起的胸膜或心包滲出，和惡性腹水。
本發(fā)明化合物也可用于治療Crow-Fukase(POEMS)綜合征和糖尿病性癥如青光眼，糖尿病性視網(wǎng)膜病和微血管病。
激酶的Src，Tec，Jak，Map，Csk，NFkB和Syk族在免疫功能的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。Src家族現(xiàn)在包括Fyn，Lck，F(xiàn)gr，F(xiàn)es，Lyn，Src，Yrk，F(xiàn)yk，Yes，Hck，和Blk?，F(xiàn)在理解Syk家族只包括Zap和Syk。TEC家族包括Tec，Btk，Rlk和Itk。激酶的Janus家族與生長因子原炎性胞質(zhì)分裂信號經(jīng)多個受體的傳導(dǎo)有關(guān)。雖然BTK和ITK作為激酶Tec家族的成員在免疫學(xué)中起著較少被認識的作用，但其通過抑制劑的調(diào)節(jié)作用可以證明治療優(yōu)點。Csk家族現(xiàn)在被認為包括Csk和Chk。激酶的RIP，IRAK-2，NIK，p38MAP激酶，Jnk，IKK-1和IKK-2與關(guān)鍵的原炎性胞質(zhì)分裂，如TNF和IL-1信號傳導(dǎo)途徑有關(guān)。由于其抑制這些激酶一種或多種的能力，式I化合物可以作為免疫調(diào)節(jié)劑，用于保持同種異體移植，治療自身免疫失調(diào)和治療膿毒病，膿毒性休克。由于其調(diào)節(jié)T細胞，B細胞，肥大細胞，單核細胞和中性白細胞的遷移或活化，這些化合物可被用于治療諸如自身免疫疾病和膿毒病的疾病。移植排斥的預(yù)防，即受試者對實體器官移植物，或移植物對受試者骨髓的排斥預(yù)防，受到現(xiàn)有免疫抑制劑毒性的限制，并從改進治療指數(shù)的有效藥物獲得好處。基因靶實驗已經(jīng)證實了Src在破骨細胞生物學(xué)中的主要角色，該細胞對骨吸收有反應(yīng)。由于其調(diào)節(jié)Src的能力，式I化合物也可用于治療骨質(zhì)疏松癥，骨硬化病，Paget’s病，腫瘤-引起的血鈣過多和骨遷移。
許多蛋白激酶已經(jīng)被證明為原癌基因。染色體斷裂(在染色體5的ltk激酶斷裂點)，如在Abl基因的情況下由BCR(Philadelphia染色體)的易位，在諸如c-Kit或EGFR情況下的截短，或突變(例如Met)導(dǎo)致調(diào)節(jié)異常蛋白的產(chǎn)生，使其從原癌基因轉(zhuǎn)化為癌基因產(chǎn)物。在其它腫瘤中，癌變由自分泌或旁分泌配體/生長因子受體相互作用驅(qū)動。src-族激酶成員典型地與下游信號傳導(dǎo)有關(guān)，從而加強癌變，它們本身可以通過超表達或突變而變?yōu)榘┗?。通過抑制這些蛋白的激酶活性，疾病進程可以被破壞。血管再狹窄可能與FGF和/或PDGF-促進的平滑肌和內(nèi)皮細胞增殖有關(guān)。FGFR，PDGFR，IGF1-R和c-Met的體內(nèi)配體刺激是原血管生成的，并強化血管生成依賴性疾病。單獨或聯(lián)合抑制FGFr，PDGFr，c-Met，或IGF1-R激酶活性可能是抑制這些現(xiàn)象的有效戰(zhàn)略。因此，抑制正?；虍惓５腸-kit，c-met，c-fms，src-族成員，EGFr，erbB2，erbB4，BCR-Abl，PDGFr，IGF1-R和其它受體或胞質(zhì)酪氨酸激酶的激酶活性的式I化合物可能在治療良性和腫瘤增殖疾病中有價值。
在許多病癥(例如，實體原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移，Kaposi’s瘤，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，由于不良的眼新血管化引起的失明，牛皮癬和動脈粥樣硬化)中，疾病進程依持續(xù)的血管生成而定。多肽生長因子常常由疾病組織或相關(guān)的炎性細胞產(chǎn)生，而其相應(yīng)的內(nèi)皮細胞特異性受體酪氨酸激酶(例如，KDR/VEGFR-2，flt-1/VEGF-1，Tie-2/Tek和Tie)對于刺激內(nèi)皮細胞生長，遷移，器官化，必要的新功能性脈管系統(tǒng)的區(qū)分和確定是很重要的。作為VEGF的血管滲透性因子活性在介導(dǎo)血管滲透性過高方面的結(jié)果，VEHFR激酶的VEGF-刺激也被認為在腫瘤腹水，腦和肺水腫形成，胸膜和心包滲出，延遲型過敏反應(yīng)，創(chuàng)傷，燒傷，局部缺血之后的，組織水腫和器官機能障礙，糖尿病并發(fā)癥，子宮內(nèi)膜異位，成年性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，后心肺旁路相關(guān)的第血壓和高滲透性，眼水腫導(dǎo)致青光眼或異常新相關(guān)形成致盲中扮演重要角色。除VEGF之外，最近確定的VEGF-C和VEGF-D，和病毒編碼的VEGF-E或HIV-Tat蛋白經(jīng)VEGFR激酶的刺激也能引起血管滲透性過高反應(yīng)。KDR/VEGFR-2和Tie-2也在選定群的生血莖細胞中表達。該群中的某些成員是多性能的，并且可以用生長因子刺激，異化為內(nèi)皮細胞，并參與血管發(fā)生的血管生成過程。為此，這些已經(jīng)被稱為內(nèi)皮祖先細胞(EPCs)(J.Clin.Investig.1031231-1236(1999))。在一些祖先中，Tie-2可以在其恢復(fù)，粘結(jié)，調(diào)節(jié)和演變中扮演角色(Blood，4317-4317(1997))。根據(jù)式I的某些可以阻斷內(nèi)皮細胞特異性激酶的激酶活性的藥劑可以抑制與這些狀況有關(guān)的疾病進程。
Tie-2拮抗劑配體(Ang-2)的血管失衡被認為在內(nèi)皮中誘導(dǎo)不穩(wěn)定的“可塑的”狀態(tài)。在高VEGF水平存在下，可以產(chǎn)生強的血管生成反應(yīng)；但是，在沒有VEGF或VEGF-相關(guān)的刺激時，可以發(fā)生癥狀明顯的血管退化和內(nèi)皮細胞凋亡(Genes and Devel.131055-1066(1999))。以類似的方式，Tie-2激酶抑制劑可以分別在有或沒有VEGF-相關(guān)的刺激存在下是促血管生成的(proangiogenic)或抗血管生成的。因此，Tie-2抑制劑可以與適當(dāng)?shù)那把苌纱碳ぃ鏥EGF用于在諸如創(chuàng)傷，梗塞和局部缺血的情況下促進治療性血管生成。
式I化合物或其鹽或含有治療有效量該化合物的藥物組合物可被用于治療蛋白激酶介導(dǎo)的病癥，例如如前所述的良性和贅生的增殖性疾病和免疫系統(tǒng)疾病。例如，這類疾病包括自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，甲狀腺炎，1型糖尿病，多發(fā)性硬化，肉瘤病，炎性腸病，Crohn’s病，重癥肌無力和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；牛皮癬，器官移植排異(例如腎排異，移植對受試者病)，良性和贅生的增殖性疾病，人類癌癥如肺癌，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，結(jié)腸癌，胰腺癌，卵巢癌，前列腺癌和直腸癌，和造血性癌(白血病和淋巴瘤)，和與討厭的血管形成有關(guān)的疾病，例如糖尿病型視網(wǎng)膜病，早熟的視網(wǎng)膜病，由于與年齡有關(guān)的黃斑變性的脈絡(luò)膜新血管形成，和人類嬰兒的血管瘤。另外，這類抑制劑可以由于治療與VEGF介導(dǎo)的水腫，腹水，滲出，和滲出液有關(guān)的病癥，包括，例如黃斑水腫，腦水腫，急性肺損傷和成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)。
本發(fā)明化合物也可用于預(yù)防上述疾病。
設(shè)想上述疾病由包括VEGF受體(例如KDR，F(xiàn)lt-1和/或Tie-2)的蛋白酪氨酸激酶活性介導(dǎo)到明顯的程度。通過抑制這些酪氨酸激酶的活性，所列出的疾病進程被抑制，因為該病癥的血管生成或相關(guān)高滲透性成分被嚴(yán)重消減。通過其對特異性酪氨酸激酶的選擇性，本發(fā)明某些化合物的作用導(dǎo)致副作用的最小化，而這些副作用在使用選擇性較小的酪氨酸激酶抑制劑時會存在。
本發(fā)明另一方面提供用作醫(yī)藥，尤其是作為蛋白激酶活性例如酪氨酸激酶活性，絲氨酸和蘇氨酸激酶活性的抑制劑的如前定義的式I化合物。本發(fā)明還一方面提供如前定義的式I化合物在生產(chǎn)用于抑制蛋白激酶活性的醫(yī)藥中的用途。
在本發(fā)明中，可用下列定義“生理上可接受的鹽”指保持游離堿的生物效力和性質(zhì)，通過與無機酸如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸或有機酸如芳基磺酸，羧酸，有機磷酸，甲磺酸，乙磺酸，對甲苯磺酸，水楊酸，乳酸，酒石酸，馬來酸等等反應(yīng)所得的鹽。
“烷基”指飽和脂肪烴，包括具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈基團，或具有3至6個碳原子的環(huán)狀烴基。
“烷氧基”指“O-烷基”，其中“烷基”如上定義。藥物制劑本發(fā)明化合物可以本身或者以與合適的載體或賦形劑混合的藥物組合物以治療或改善血管滲透性過高，水腫和相關(guān)疾病的劑量對病人給藥。這些化合物的混合物也可以以簡單混合物或者以配制的藥物組合物對病人給藥。治療有效劑量還指足以對新血管形成，過度增殖性疾病進程，水腫，VEGF-相關(guān)的高滲透性和/或VEGF-相關(guān)的低血壓產(chǎn)生預(yù)防或緩解作用的化合物量。用于配制和給藥本申請化合物的技術(shù)可以在“Remington’s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最近的版本中找到。
給藥途徑合適的給藥途徑可以，例如，包括口服，滴眼，直腸，經(jīng)粘膜，局部，或盲腸給藥；腸胃外輸送，包括肌內(nèi)，皮下，髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)，直接心室內(nèi)，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，或眼內(nèi)注射。
另外，也可以局部而非系統(tǒng)的方式給藥化合物，例如直接往水腫區(qū)注射化合物，通常是以儲存或緩釋制劑給藥。
而且，可以在靶藥物輸送系統(tǒng)，例如，在用內(nèi)皮細胞-特異性抗體包衣的脂質(zhì)體內(nèi)給藥。組合物/制劑本發(fā)明的藥物組合物可以用已知的方法生產(chǎn)，例如，通過常規(guī)混合，溶解，造粒，制丸，研末，乳化，膠囊化，捕集或凍干法。
用于本發(fā)明中的藥物組合物可以用常規(guī)方式，用一種或多種生理上可接受的載體包括促進活性化合物加工的賦形劑和輔助劑配制成可藥用的制劑。合適的制劑取決于所選擇的給藥途徑。
對于注射，本發(fā)明的藥劑可以被配制成水溶液，優(yōu)選在生理上可共容的緩沖液，如Hanks’s溶液，Ringer’s溶液，或生理鹽水緩沖液中的溶液。對于經(jīng)髓內(nèi)給藥，與被滲透的屏障相適應(yīng)的滲透劑被用于制劑中。這類滲透劑是本專業(yè)公知的。
為了口服給藥，化合物可以被容易地通過使活性化合物與本專業(yè)公知的藥用載體結(jié)合而配制。這類載體可以使本發(fā)明化合物配制成片劑，小丸，糖丸，膠囊，液體，凝膠，糖漿，漿狀物，懸浮液等，由被治療的病人口服攝入。口服的藥物制劑可以通過將活性化合物與固體賦形劑結(jié)合，任選地研磨產(chǎn)生的混合物，加入輔助劑之后，如果需要，加工顆粒的混合物，得到片劑或糖丸芯。合適的賦形劑有，特別是，填充劑如糖類，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇，或山梨糖醇；纖維素制劑如，例如，玉米淀粉，小麥淀粉，大米淀粉，馬鈴著淀粉，明膠，黃蓍膠，甲基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要，加入崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮，瓊脂，或藻酸或其鹽如藻酸鈉。
糖衣丸芯用合適的包衣裝配。為此，可以使用濃糖溶液，該溶液任選地含有阿拉伯膠，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，carbopol膠，聚乙二醇，和/或二氧化鈦，生漆溶液，和合適的有機溶劑或溶劑混合物。染料或顏料可以被加入片劑或糖丸包衣中用于區(qū)分和特性化活性化合物劑量的不同組合。
可用于口服的藥物制劑包括由明膠制造的推入配合膠囊，以及由明膠和增塑劑，如甘油或山梨糖醇制造的密封軟膠囊。推入配合膠囊可以含有與填充劑如乳糖，黏合劑如淀粉，和/或乳化劑如滑石或硬脂酸鎂，和任選地穩(wěn)定劑混合的活性成分。
在軟膠囊中，活性化合物可以溶于或懸浮于合適的液體，諸如脂肪油，液體石蠟，或液體聚乙二醇。此外，可以加入穩(wěn)定劑。所有用于口服的制劑應(yīng)當(dāng)是適合口服給藥的劑量。
對于口腔含化給藥，組合物可能采取傳統(tǒng)方式配制的片劑或錠劑。
對于吸入給藥，本發(fā)明使用的化合物常規(guī)的通過壓力包裝以氣霧劑噴射傳遞或噴霧器傳遞，使用適當(dāng)?shù)耐七M劑，例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟甲烷，二氧化碳或其他合適的氣體。對于壓縮氣霧劑，可能提供閥釋放測定量來確定劑量單位。用于吸入或吹入器的例如明膠等制成的膠囊或筒可以通過含有化合物的粉末混合物以及適當(dāng)?shù)姆勰┗|(zhì)諸如乳糖或淀粉來制成。
化合物可以配制成用于通過注射，例如快速(bolus)注射或連續(xù)灌注腸胃外給藥。用于注射的制劑可以以單位劑量形式存在，例如在安瓿中或在多劑量容器中，加入防腐劑。該組合物可以采取諸如在油或水性載體中的懸浮液，溶液或乳化液的形式，并可以含有諸如懸浮劑，穩(wěn)定劑和/或分散劑的配制劑。
用于腸胃外給藥的藥物制劑包括水溶形式活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可以制成油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如蓖麻油，或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或三甘油酸酯，或脂質(zhì)體。含水注射液或懸浮液可以含有增加懸浮液黏性的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇，或葡聚糖。任選地，懸浮液也可以含有合適的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解性的藥劑，從而制備高度濃縮的溶液。
或者，活性成分在使用之前可以是與合適的載體，例如無菌的無熱原水配制的粉末形式。
化合物也可以被配制成直腸用組合物，如栓劑或保留灌腸劑，例如，含有普通栓劑基如可可脂或其它甘油酯。
除前面所述的制劑外，化合物也可以被配制成儲存制劑。這類長時間作用制劑可以通過植入給藥(例如皮下或肌內(nèi)或通過肌內(nèi)注射)。因此，例如，化合物可以用合適的聚合物或疏水物質(zhì)配制(例如在合適的油中的乳化液)或與離子交換樹脂配制，或難溶衍生物，例如難溶鹽配制。
用于本發(fā)明疏水化合物的藥用載體的例子是共溶劑體系，包括芐基醇，非極性表面活性劑，水-混溶性有機聚合物，和水相。共溶劑體系可以是VPD-共溶劑體系。VPD是3％w/v芐基醇，8％w/v非極性表面活性劑聚山梨酸酯80，和65％w/v聚乙二醇300，在絕對乙醇中加至體積。VPD-共溶劑體系(VPD5W)由用5％糊精水溶液1∶1稀釋的VPD組成。該共溶劑體系能夠很好地溶解疏水化合物，并在系統(tǒng)給藥時產(chǎn)生低毒性。自然，共溶劑體系可以有相當(dāng)大的變化而不破壞其溶解性和毒性特征。而且，共溶劑成分的同一性可以變化例如，其它低毒性非極性表面活性劑可以被用于代替聚山梨酸酯80；聚乙二醇的級分大小可以變化；其它生物共容聚合物可以代替聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；其它糖或多糖可以取代糊精。
或者，可以使用疏水藥用化合物的其它輸送系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳化液是疏水藥物輸送載體的已知例子。某些有機溶劑如二甲亞砜也可被使用，盡管其毒性較大。另外，化合物可以用緩釋系統(tǒng)輸送，如含有治療劑的固體疏水聚合物的半滲透基塊。各種緩釋物質(zhì)已經(jīng)確定并且是本專業(yè)技術(shù)人員已知的。根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，緩釋膠囊可以在幾周直至100天。根據(jù)治療劑的化學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)穩(wěn)定性，也可以使用其它用于蛋白穩(wěn)定的戰(zhàn)略。
藥物組合物也可以包括合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣，磷酸鈣，各種糖，淀粉，纖維素衍生物，明膠，和諸如聚乙二醇的聚合物。
許多本發(fā)明化合物可以是與藥學(xué)上共容的抗衡離子的鹽。藥學(xué)上共容的鹽可以與許多酸，包括但不限于鹽酸，硫酸，乙酸，乳酸，酒石酸，蘋果酸，琥珀酸等等形成。鹽與相應(yīng)的游離堿形式相比，在水或其它質(zhì)子性溶劑中有更大溶解性。有效劑量適用于本發(fā)明的藥物組合物包括其中含有有效量活性成分以實現(xiàn)其預(yù)定目的的組合物。更具體地，治療有效量指能有效預(yù)防病癥的發(fā)展或減輕存在的癥狀。有效量的確定在本專業(yè)技術(shù)人員的能力之內(nèi)。
對于用于本發(fā)明方法中的任何化合物，治療有效劑量可以從細胞分析開始估計。例如，劑量可以在細胞和動物模型中配制，以實現(xiàn)循環(huán)濃度范圍，包括在細胞分析中測定的IC50(即，實現(xiàn)給定蛋白激酶活性一半最大抑制的試驗化合物濃度)。在一些情況下，需要在3至5％血清白蛋白存在下測定IC50，因為這類測定接近血漿蛋白與化合物的結(jié)合效果。這類信息可以用于更精確地測定在人體內(nèi)的有用劑量。而且，用于系統(tǒng)給藥的最優(yōu)選化合物在完整的細胞中以在血漿中安全地獲取的水平有效地抑制蛋白激酶信號傳導(dǎo)。
治療有效劑量指導(dǎo)致病人癥狀改善的化合物量。這類化合物的毒性和治療效力可以通過在細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏械臉?biāo)準(zhǔn)藥學(xué)過程測定，例如，用于測定最大耐受劑量(MTD)和ED50(50％最大響應(yīng)的有效劑量)。在毒性和治療效果之間的劑量比治療指數(shù)，它可以以MTD和ED50之間的比例表達。顯示高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。從這些細胞培養(yǎng)分析和動物研究所得的數(shù)據(jù)可被用于配制用于人體內(nèi)的劑量范圍。這類化合物的劑量優(yōu)選地取決于包括具有小毒性或無毒性的ED50的循環(huán)濃度范圍。該劑量可以在此范圍內(nèi)根據(jù)所用的劑形和所用的給藥途徑變化。具體的制劑，給藥途徑和劑量可以由具體醫(yī)師根據(jù)病情選擇。(參見例如Fingl等，1975，在“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，Ch.l pl)。在治療危象時，接近MTD的急性快速(bolus)或灌注給藥需要得到快速響應(yīng)。
劑量和間隔可以被個別調(diào)節(jié)以提供使活性部分的血漿濃度足以保持激酶調(diào)節(jié)作用，或最小有效濃度(MEC)。MEC將對于各化合物變化，但可以從體外數(shù)據(jù)估計；例如，用本文所述的分析實現(xiàn)50-90％蛋白激酶抑制需要的濃度。需要實現(xiàn)MEC的劑量將取決于個體的特征和給藥途徑。但是，HPLC分析或生物試驗可被用于測定血漿濃度。
劑量間隔也可以用MEC值測定。化合物將用使血漿水平超過10-90％的時間，優(yōu)選30-90％，最優(yōu)選50-90％的模式給藥，直至達到所需的癥狀改善。在局部給藥或選擇性攝取的情況下，藥物的有效局部濃度可能與血漿濃度無關(guān)。
當(dāng)然，被給藥組合物的量將取決于被治療的受試者，受試者重量，病情，給藥方式和主治醫(yī)師的判斷。包裝如果需要，組合物存在于可以含有活性成分的一個或多個單位劑型的包裝，或調(diào)劑裝置中。該包裝可以例如包括金屬或塑料箔，如發(fā)泡包裝。包裝，或調(diào)劑裝置可以附有給藥裝置。包含配制于共容藥用載體中的本發(fā)明化合物也可以被制備，放置于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，并?biāo)記治療的適應(yīng)癥。
在一些制劑中，以非常小的尺寸，例如通過流體能量磨所得的顆粒形式使用化合物是有益的。
本發(fā)明化合物在生產(chǎn)藥物組合物中的用途由如下敘述說明。在該敘述中，術(shù)語“活性化合物”指本發(fā)明的任何化合物，但特別是作為一個前面的實施例中的最終產(chǎn)物的任何化合物。a)膠囊在膠囊的制備中，10份重的活性化合物和240份重的乳糖可以被分散并摻混?；旌衔锟梢员惶畛涞接材z囊中，各膠囊含有單位劑量或單位劑量的一部分的活性化合物。b)片劑可以從下列成分制備片劑重量份數(shù)活性化合物10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯基吡咯烷酮 10硬脂酸鎂 3活性化合物，乳糖和一些淀粉可以被分散，摻混，產(chǎn)生的混合物可以用聚乙烯基吡咯烷酮的乙醇溶液造粒。干燥的顆粒可以與硬脂酸鎂和剩余的淀粉摻混。然后將混合物在壓片機內(nèi)壓制，給出各含有有單位劑量或單位劑量的一部分活性化合物的片劑。c)腸衣片劑可以通過上面(b)所述的方法制備片劑。該片劑可以用20％纖維素乙酸酯苯二甲酸酯和3％鄰苯二甲酸二乙酯在乙醇∶二氯甲烷(1∶1)中的溶液以常規(guī)方法包腸衣。d)栓劑在栓劑的制備中，100份重的活性化合物可以被摻入1300份重的三甘油酯栓劑基中，使混合物形成各含有治療有效量的活性成分的栓劑。
在本發(fā)明的組合物中，如果需要，活性化合物可以與其他可相容的藥理活性成分結(jié)合。例如，本發(fā)明化合物可以與一種或多種其他抑制或預(yù)防VEGF或血管形成素(angiopoietin)產(chǎn)生，減弱對VEGF或血管形成素的細胞內(nèi)反應(yīng)，阻斷細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制血管滲透性過高，減輕炎癥，或抑制或預(yù)防水腫或新血管形成的藥劑聯(lián)合給藥。本發(fā)明化合物可以在之前，之后或者與其他藥劑同時給藥，只要給藥過程是合適的。其他藥劑包括但不限于消炎或消水腫甾類，NSAIDS，ras抑制劑，抗-TNF劑，抗-IL1劑，抗組胺劑，PAF-拮抗劑，COX-1抑制劑，COX-2抑制劑，NO合成酶抑制劑，Akt/PTB抑制劑，IGF-1R抑制劑，PKC抑制劑和PI3激酶抑制劑。本發(fā)明化合物和其他藥劑要么累加性地作用，要么協(xié)同性地作用。因此，抑制血管生成，血管滲透性過高和/或抑制水腫形成的物質(zhì)這類聯(lián)合給藥與任一物質(zhì)單獨給藥相比，可以更大減輕過度增殖疾病，血管生成，血管滲透性過高或水腫的不利作用。在治療惡性疾病時，預(yù)計與抗增殖或細胞毒性化療聯(lián)合，高溫治療，大量供氧或放射治療聯(lián)合。
本發(fā)明也包括使用式I化合物作為醫(yī)藥。
本發(fā)明另一方面提供式I化合物或其鹽在生產(chǎn)用于治療哺乳動物，尤其是人類血管滲透性過高，血管生成-依賴性疾病，增殖性疾病和/或免疫系統(tǒng)疾病的藥物中的用途。
本發(fā)明也提供治療哺乳動物，尤其是人類血管滲透性過高，血管生成-依賴性疾病，增殖性疾病和/或免疫系統(tǒng)疾病的方法，該方法包括對需要治療的哺乳動物，尤其是人類施用治療有效量的式I化合物。
化合物在抑制這些蛋白激酶中的體外效力可以通過下面詳細給出的方法測定。
化合物的效力可以通過由試驗化合物相對于對照的外源性底物(例如，合成的肽(Z.Songyang等，Nature.373536-539)的磷?；种屏繙y定。用桿狀病毒系統(tǒng)生產(chǎn)KDR酪氨酸激酶用從HUVEC細胞分離的cDNA經(jīng)PCR產(chǎn)生人KDR細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(aa789-1354)的編碼序列。聚-His6序列被引入此蛋白的N-端。該片斷在Xba I和Not I位點被克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1393。重組桿狀病毒(BV)用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)經(jīng)共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生。重組BV被噬斑純化并經(jīng)Western分析證實。為了生產(chǎn)蛋白質(zhì)，將SF-9細胞以2×106/ml的密度在SF-900-II培養(yǎng)基中生長，并以每個細胞0.5個噬斑形成單位(MOI)進行感染。在感染后48小時收獲細胞。KDR的純化通過將50ml Triton X-100裂解緩沖液(20mM Tris，pH8.0，137mMNaCl，10％甘油，1％Triton X-100，1mM PMSF，10μg/ml抑蛋白酶肽，1μg/ml亮抑蛋白酶肽)加入從1L細胞培養(yǎng)物所得的細胞沉淀物而裂解表達(His)6KDR(aa789-1354)的SF-9細胞。裂解液在4℃于SorvalSS-34轉(zhuǎn)子中以19000rpm離心30分鐘。將細胞裂解液上樣于5ml用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡過的NiCl2螯合瓊脂糖凝膠柱。用含有0.25M咪唑的相同緩沖液洗脫KDR。用測定激酶活性的SDS-PAGE和ELISA試驗(下面)分析柱級分。純化的KDR被交換到25mM HEPES，pH7.5，25mM NaCl，5mM DTT緩沖液中并在-80℃貯存。人Tie-2激酶生產(chǎn)和純化用從人胎盤分離的cDNA作為模板，經(jīng)PCR產(chǎn)生人Tie-2細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(aa775-1124)的編碼序列。聚-His6序列被引入此蛋白的N-端，該構(gòu)建體在Xba I和Not I位點被克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1393。用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)經(jīng)共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生重組BV。重組BV被噬斑純化并經(jīng)Western分析證實。為了生產(chǎn)蛋白質(zhì)，將SF-9細胞以2×106/ml的密度在SF-900-II培養(yǎng)基中生長，并以每個細胞0.5個噬斑形成單位(MOI)進行感染。用于篩選的His-標(biāo)記激酶的純化與對于KDR所述的類似。人Flt-1酪氨酸激酶生產(chǎn)和純化使用桿狀病毒表達載體pVL1393(Phar Mingen，Los Angeles，CA)。編碼聚His6的核苷酸序列被置于編碼人Flt-1整個細胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域(氨基酸786-1338)的核苷酸區(qū)的5’方向。使用從HUVEC細胞分離的cDNA文庫經(jīng)PCR產(chǎn)生編碼激酶結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列。組氨酸殘基使得蛋白質(zhì)親和純化類似于KDR和ZAP70。以0.5的感染復(fù)數(shù)感染SF-9昆蟲細胞，感染后48小時收獲細胞。EGFR酪氨酸激酶來源EGFR從sigma購買(Cat#E-3641；500單位/50μl)，而EGF配體從Oncogene Research Products/Calbiochem獲得(Cat#PF011-100)。ZAP70的表達使用的桿狀病毒表達載體是pVL1393(Pharmingen，Los Angeles，CA)。編碼氨基酸M(H)6LVPR9S的核苷酸序列被置于編碼整個ZAP70(氨基酸1-619)的核苷酸區(qū)的5’方向。用從Jurkat無限增殖的T-細胞分離的cDNA文庫經(jīng)PCR產(chǎn)生編碼ZAP70編碼區(qū)的核苷酸序列。組氨酸殘基使得蛋白質(zhì)(見下文)能夠親和性純化。L VPR9S橋構(gòu)成凝血酶蛋白裂解識別序列，能夠從酶中除去親和性標(biāo)記。以0.5感染復(fù)數(shù)來感染SF-9昆蟲細胞，并在感染后48小時收獲細胞。ZAP70的提取和純化通過在由20mM Tris，pH8.0，137mM NaCl，10％甘油，1％ TritonX-100，1mM PMSF，1μg/ml亮抑蛋白酶肽，10μg/ml抑蛋白酶肽和1mM原釩酸鈉組成的緩沖液中裂解SF-9細胞。將可溶性的裂解液上樣于用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡過的螯合瓊脂糖凝膠HiTrap柱(Pharmacia)。融合蛋白用25mM咪唑洗脫。將酶貯存在50mM HEPES，pH7.5，50mM NaCl和5mM DTT緩沖液中。蛋白激酶來源Lck，F(xiàn)yn，Scr，Blk，Csk，和Lyn，和其截短的形式可以購買(例如從Upstate Biotechnology Inc.(Saranac Lake，N.Y)和Santa CruzBiotechnology Inc.(Santa Cruz，Ca.))，或用常規(guī)的方法從已知的天然或重組的來源提純。
PTK酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)被用于檢測和測量酪氨酸激酶活性的存在。根據(jù)例如，Voller等，1980，‘酶聯(lián)免疫吸附試驗”在臨床免疫學(xué)手冊，第2版，由Rose和Friedman，pp 359-371美國微生物學(xué)學(xué)會(華盛頓)中所述的已知方案進行ELISA。
所公開的方案適于測定特異性PTK的活性。例如，進行ELISA實驗的優(yōu)選方案在下面給出。這些測定化合物活性的方案適合于受體PTK家族其它成員，和非受體酪氨酸激酶的適應(yīng)性變化在本專業(yè)技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。為了測定抑制劑選擇性，通用的PTK底物(例如聚(Glu4Tyr)的無規(guī)共聚物，20000-50000MW)與ATP(典型地5μM)以大約兩倍于表觀Km的濃度一起在試驗中應(yīng)用。
下列過程被用于分析本發(fā)明化合物對KDR，F(xiàn)lt-1，Tie-2，EGFR，F(xiàn)GFR，PDGFR，IGF-1-R，c-Met，Lck，Blk，Csk，Src，Lyn，F(xiàn)yn和ZAP70酪氨酸激酶活性的抑制作用緩沖液和溶液PGTPoly(Glu，Tyr)4∶1在-20℃貯存粉末。將粉末溶于磷酸緩沖的鹽水(PBS)得到50mg/ml溶液。在-20℃貯存1ml等分試樣。當(dāng)制板時，在Gibco PBS中稀釋至250μg/ml。反應(yīng)緩沖液100mM Hepes，20mM MgCl2，4mM MnCl2，5mM DTT，0.02％BSA，200μM NaVO4，pH7.10ATP在-20℃貯存100mM等分試樣。在水中稀釋至20μM洗滌緩沖液含0.1％Tween 20的PBS抗體稀釋緩沖液PBS中的0.1％牛血清白蛋白(BSA)TMB底物在使用之前混合TMB底物和過氧化物溶液9∶1，或使用Neogen的K-Blue底物終止溶液1M磷酸過程1.板的制備在PBS中將PGT儲液(50mg/ml，冷凍)稀釋至250μg/ml。在Corning修飾的平底高親和力ELISA板(Corning #25805-96)的每孔加入125μl。在空白對照孔中加入125μlPBS。用密封帶蓋住并在37℃溫育過夜。用250μl洗滌緩沖液洗滌1次，在干燥溫箱中于37℃干燥約2小時。在密封的包內(nèi)于4℃貯存涂覆的板直至使用。
2.酪氨酸激酶反應(yīng)-在20％的DMSO水溶液中以4倍的濃度制備抑制劑溶液。-制備反應(yīng)緩沖液-制備酶溶液，使所需的單位為50μl，例如對于KDR，制成1ng/μl，在反應(yīng)中每孔總共50ng。貯存在冰上。-從100mM水中的儲液制造4份20μM的ATP溶液。貯存在冰上-每孔加入50μl酶溶液(根據(jù)激酶的特異活性，典型地為5-50ng酶/孔)-加入25μl 4×抑制劑-加入25μl用于抑制劑分析的4×ATP-在室溫溫育10分鐘-通過每孔加入50加入25μl 0.05N Hcl終止反應(yīng)-洗板**反應(yīng)的最終濃度5μM ATP，5％DMSO3.抗體結(jié)合-將1mg/ml PY20-HRP(Pierce)抗體(磷酰酪氨酸抗體)的等分試樣通過兩步稀釋(100×，然后200×)在0.1％BSA的PBS溶液中稀釋至50ng/ml-每孔加入100μl Ab。在室溫溫育1小時。在4℃溫育1小時。-洗滌4×板4.著色反應(yīng)-制備TMB底物，并且每孔加入100μl-在650nm檢測0D，直至達到0.6-用1M磷酸終止。在板讀數(shù)計上振動。-立即在450nm讀取0D最佳溫育時間和酶反應(yīng)條件隨酶制備而輕微變化，各批憑經(jīng)驗測定。
對于Lck，在類似的分析條件下所用的反應(yīng)緩沖液是100mMMOPSO，pH6.5，4mM MnCl2，20mM MgCl2，5mM DTT，0.2％BSA，200mMNaVO4。
式I化合物在治療與已確定的，包括上面未提到的，和未確定的被式I化合物抑制的蛋白酪氨酸激酶有關(guān)的疾病方面有治療作用。所有在本文舉例的化合物在50mM或更低濃度都明顯地抑制FGFR，PDGFR，KDR，Tie-2，Lck，F(xiàn)yn，Blk，Lyn或Src。一些本發(fā)明化合物也在50mM或更低濃度都明顯地抑制其它酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸激酶如cdc2(cdk1)。cdc2來源人重組酶和分析緩沖液可以購買(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)，或用常規(guī)的方法從已知的天然或重組的來源提純。
cdc2分析所用的方案是由購買的試劑提供，很少改變。簡單地說，反應(yīng)在用新鮮300μM ATP(31μCi/ml)和30μg/ml組蛋白IIIss型最終濃度補充的，由50mM Tris pH 7.5，100mM NaCl，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2組成的緩沖液(商品緩沖液)中進行。體積為80μl含有酶單位的反應(yīng)在有或沒有抑制劑存在下于25℃進行20分鐘。通過加入120μl 10％乙酸終止反應(yīng)。通過將混合物點在磷酸纖維素紙上，接著各用75mM磷酸3洗滌5分鐘而從未摻入的標(biāo)記物分離出底物。在液體閃爍計存在下通過β計數(shù)器計數(shù)。
某些本發(fā)明化合物在低于50μM的濃度明顯地抑制cdc2。PKC激酶來源PKC的催化亞基可以商購(Calbiochem)。PKC激酶試驗按照公開的方法(Yasuda，I.，kirshimoto，A.，Tanaka，S.，Tominaga，M.，Sakurai，A.，Nishizuka，Y.生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊3166，1220-1227(1990))進行放射活性激酶試驗。簡單地說，所有反應(yīng)都在，由50mM Tris-HCl pH7.5，10mM MgCl2，2mMDTT，1mM EGTA，100μM ATP，8μM肽，5％DMSO和33P ATP(Ci/mM)組成的緩沖液中進行。將化合物和酶在反應(yīng)器中混合，通過加入ATP和底物混合物啟動反應(yīng)。通過加入10μL終止緩沖液(5mM ATP在75mM磷酸中的溶液)終止反應(yīng)，一部分混合物被點在磷酸纖維素濾紙上。所點的樣品在室溫下在75mM磷酸中5至15分鐘內(nèi)洗滌3次。通過液體閃爍計數(shù)器將摻入的放射標(biāo)記物定量。Erk2酶來源重組的鼠酶和分析緩沖液可以購買(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)，或用常規(guī)的方法從已知的天然或重組的來源提純。
Erk2酶分析簡單地說，反應(yīng)在用新鮮300μM ATP(31μCi/ml)和30μM髓鞘質(zhì)堿性蛋白補充的，由50mM Tris pH7.5，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2組成的緩沖液(商品緩沖液)中，在提供者推薦的條件下進行。摻入放射活性物試驗的反應(yīng)體積和方法如對于PKC(參看上文)所述。T-細胞激活的體外模型基于由促細胞分裂原或抗原的激活，T-細胞被誘導(dǎo)分泌IL-2，支持其隨后的增殖相的一種生長因子。因此，可以測量原代T-細胞或作為用于T-細胞激活代替物的適當(dāng)T-細胞系的IL-2的產(chǎn)生或細胞增殖。這些試驗都在文獻中詳細描述過，其參數(shù)也都作成文獻(在CurrentProtocols in Imuunology，Vol2，7.10.1-7.11.2中)簡單地說，T-細胞可以通過與同種異體刺激素細胞共培養(yǎng)，一種稱之為單向混合的淋巴細胞反應(yīng)被激活。反應(yīng)者和刺激者外周血單核細胞通過每個生產(chǎn)者指導(dǎo)的Ficoll-Hypaque梯度(Pharmacia)提純。刺激細胞通過用絲裂霉素C(Sigma)或γ射線治療而有絲分裂失活。反應(yīng)者和刺激者細胞在有或沒有試驗化合物存在下，以2∶1的比例共培養(yǎng)。典型地，105個反應(yīng)者與5×104個刺激者混合并平鋪(200μl體積)在U型底微滴板(Costar Scientific)上。細胞在用熱失活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)或從雄性供體所得的人體混合的AB血清，5×10-5M 2巰基乙醇和0.5％DMSO補充的RPMI1640中培養(yǎng)，在收獲之前(典型地為3天)，培養(yǎng)物用0.5μCi3H胸腺嘧啶(Amersham)脈沖一天。培養(yǎng)物被收獲(Betaplate harvester，Wallac)，通過液體閃爍器(Betaplate，Wallac)評價同位素的攝取。
相同的培養(yǎng)體系可以用于通過測量IL-2的生產(chǎn)評價T-細胞的激活。培養(yǎng)啟動18至24小時后，除去上清液，通過按照生產(chǎn)者的指導(dǎo)進行ELISA(R和D體系)測量IL-2濃度。T-細胞激活的體內(nèi)模型化合物的體內(nèi)效力可以用已知直接測量T-細胞激活或T-細胞已經(jīng)被證明為效應(yīng)子的動物模型進行試驗。T-細胞可以在體內(nèi)通過T-細胞受體與單克隆抗-CD3抗體(Ab)恒定區(qū)部分的連接作用而激活。在此模型中，BALB/c小鼠在放血前2小時腹膜內(nèi)給予10μg抗-CD3 Ab。在抗-CD3 Ab給藥1小時之前，用單劑量化合物預(yù)處理接受試驗藥物的動物。通過ELISA測量促炎細胞因子干擾素-γ(INF-γ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的血清濃度(T-細胞激活指示劑)。類似的模型利用以特異性抗原(如匙孔嘁血藍蛋白(KLH))進行體內(nèi)T細胞引發(fā)，接著以相同抗原再次對染色淋巴結(jié)細胞進行體外攻擊。如上所述，測定細胞因子的產(chǎn)生以評估培養(yǎng)細胞的激活狀態(tài)。簡單地說，在第0天，用100微克用完全弗氏佐劑(CFA)乳化的KLH皮下免疫C57BL/6小鼠。在免疫前1天，隨后在免疫后1，2和3天用化合物預(yù)處理動物。在第4天收集染色的淋巴結(jié)，以6×106個細胞/ml的密度在組織培養(yǎng)基(添加有熱滅活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)5×10-5M 2-巰基乙醇和0.5％DMSO)中將淋巴結(jié)細胞培養(yǎng)24小時和48小時。然后經(jīng)ELISA評估培養(yǎng)物上清液中的自泌T細胞生長因子白細胞介素-2(IL-2)和/或IFN-γ水平。
也可以在人疾病的動物模型中檢測前導(dǎo)化合物。例如實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)和膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)動物模型。已描述過大鼠和小鼠的EAE模型，該模型模擬人多發(fā)性硬化的表征(參見FASEB J.52560-2566，1991；鼠模型Lab.Invest.4(3)278，1981；嚙齒類動物模型免疫學(xué)雜志，146(4)1163-8，1991)。簡單地說，用髓鞘質(zhì)堿性蛋白質(zhì)(MBP)乳劑或其神經(jīng)發(fā)生肽衍生物和CFA免疫小鼠或大鼠。加入細菌毒素，如百日咳博德特氏桿菌以誘導(dǎo)急性疾病。通過經(jīng)MBP/肽免疫之動物的T細胞過繼轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)復(fù)發(fā)/減輕疾病。
可在DBA/1小鼠中通過用II型膠原免疫誘導(dǎo)CIA(免疫學(xué)雜志142(7)2237-2243)。早在抗原攻擊后10天，小鼠即產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎的征兆，在免疫后長達90天內(nèi)對關(guān)節(jié)炎癥狀進行評分。在EAE和CIA模型中，可以預(yù)防性地或在疾病開始時施用化合物。有效的藥物應(yīng)能降低嚴(yán)重性和/或發(fā)病率。
本發(fā)明的某些化合物可以降低這些模型中的關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重性和發(fā)病率，因為這些化合物能抑制一種或多種血管生成受體PTK和/或參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的蛋白激酶(如1ck)。
也可在小鼠同種異體移植模型，如皮膚(參見免疫學(xué)年評，10333-58，1992；移植57(12)1701-1706，1994)或心臟(Am.J.Anat113273，1963)中檢測化合物。簡單地說，將C57BL/6小鼠的全厚皮膚移植物移植至BALB/c小鼠。從第6天開始每天檢查移植物是否被排斥。在小鼠新生心臟移植模型中，C57BL/6小鼠的新生心臟被異位移植至成年CBA/J小鼠的耳廓。移植后4至7天心臟開始跳動，使用解剖顯微鏡尋找跳動的停止以肉眼評估排斥。細胞受體PTK試驗使用下列細胞試驗測定本發(fā)明的不同化合物對KDR/VEGFR2的活性和作用水平?？墒褂帽绢I(lǐng)域眾所周知的技術(shù)，沿著相同的思路為其它酪氨酸激酶設(shè)計利用特異性配體刺激物的類似受體PTK試驗。
Western印跡測定的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)中由VEGF-誘導(dǎo)的KDR磷酸化1.HUVEC細胞(得自集中的供體)購自Clonetics(San Diego，CA)并根據(jù)廠商說明進行培養(yǎng)。此試驗僅使用早期的幾代(3-8代)。使用完全EBM培養(yǎng)基(Clonetics)，在100mm培養(yǎng)皿(組織培養(yǎng)用Falcon；Becton Dickinson；P1ymouth，英國)中培養(yǎng)細胞。
2.為了評價化合物的抑制活性，用胰蛋白酶消化細胞，并以0.5-1.0×105個細胞/孔的密度接種于6-孔聚簇板(Costar；Cambridge，MA)的每孔中。
3.接種后3至4天，板被90-100％鋪滿。從所有孔中除去培養(yǎng)基，用5至10ml PBS沖洗細胞，與5ml不合添加物的EBM基本培養(yǎng)基(即血清饑餓)保溫18至24小時。
4.在1ml EBM培養(yǎng)基中的細胞內(nèi)加入連續(xù)稀釋的抑制劑(終濃度為25μM，5μM或1μM)，于37℃保溫1小時。然后在含2ml EBM培養(yǎng)基的所有孔中加入人重組VEGF165(R & D Systems)至終濃度為50ng/ml，并于37℃保溫10分鐘。使用未經(jīng)處理或僅用VEGF處理的對照細胞評估背景磷酸化和VEGF誘導(dǎo)的磷酸化。
然后用5至10ml含有1mM正釩酸鈉(Sigma)的冷PBS沖洗所有的孔，刮下細胞并在200微升含有蛋白酶抑制劑(PMSF 1mM，抑蛋白酶肽1μg/ml，胃酶抑制劑1μg/ml，亮抑蛋白酶肽1μg/ml，釩酸鈉1mM，氟化鈉1mM)和1μg/ml DNA酶的RIPA緩沖液(50mM Tris-HCl，pH7，150mM NaCl，1％NP-40，0.25％脫氧膽酸鈉，1mM EDTA)中裂解細胞(所有化合物均得自Sigma Chemical Company，St Louis，M0)。以14,000rpm的轉(zhuǎn)速離心裂解物以除去核。
然后通過加入冷(-20℃)乙醇(2倍體積)最少1小時或至多過夜以沉淀等量蛋白質(zhì)。在含有5％2-巰基乙醇的Laemli樣品緩沖液(BioRad；Hercules，CA)中重建沉淀物并煮沸5分鐘。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(6％，1.5mm Novex，San Deigo，CA)分辨蛋白質(zhì)并使用Novex系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。用牛血清白蛋白(3％)封閉之后，于4℃用抗-KDR多克隆抗體(C20，Santa Cruz Biotechnology；SantaCruz，CA)或用抗磷酸酪氨酸單克隆抗體(4G10，UpstateBiotechnology，Lake Placid，NY)探測蛋白質(zhì)過夜。洗滌并與HRP-綴合的山羊抗-兔或山羊抗-小鼠IgG的F(ab)2保溫1小時之后，使用發(fā)射化學(xué)發(fā)光(ECL)系統(tǒng)(Amersham Life Sciences，ArlingtonHeight，IL)肉眼觀察帶。本發(fā)明的某些例子以低于50μM的濃度顯著抑制細胞VEGF-誘導(dǎo)的KDR酪氨酸激酶磷酸化。體內(nèi)子宮水腫模型該試驗測定了化合物抑制小鼠在用雌激素刺激之后的前幾個小時發(fā)生的子宮重量急劇增加的能力。已知子宮重量早期增加可能是由子宮血管系統(tǒng)通透性增加引起的水腫所致。Cullinan-Bove和Koss(內(nèi)分泌學(xué)(1993)，133829-837)闡明了雌激素刺激的子宮水腫與子宮中VEGF mRNA表達增加在時間上的密切關(guān)系。使用針對VEGF的中和單克隆抗體證實了這些結(jié)果，所述抗體能顯著降低雌激素刺激之后子宮重量的急劇增加(WO 97/42187)。因此，該系統(tǒng)可用作體內(nèi)抑制VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和相關(guān)高通透性和水腫的模型。材料作為凍干粉末所有激素均購自Sigma(St.Louis，MO)或CalBiochem(La Jolla，CA)，并根據(jù)廠商說明進行制備。載體成分(DMSO，Cremaphor EL)購自Sigma(St.Louis，MO)。小鼠(Balb/c，8至12周齡)購自Taconic(Germantown，NY)，并根據(jù)研究用動物關(guān)懷和使用委員會指南(institutional Animal Care andUse Committee Guidelines)在無病原體的動物房中進行圈養(yǎng)。方法第1天給Balb/c小鼠腹膜內(nèi)(i.p.)注射12.5個單位懷孕的母馬血清促性腺素(PMSG)。第3天給小鼠腹膜內(nèi)注射15個單位的人絨毛膜促性腺素(hCG)。第4天將小鼠隨機分成5至10組，根據(jù)溶解性和載體，經(jīng)腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)或p.o.途徑，以1-100mg/kg的劑量施用試驗化合物。載體對照組僅接受載體，留下兩組不經(jīng)處理。
30分鐘后，給實驗組，載體組和1個未經(jīng)處理組腹膜內(nèi)注射17-雌二醇(500μg/kg)。2至3小時之后，通過吸入二氧化碳處死動物。沿中線切開之后，分離出各個子宮，緊靠宮頸下方并在子宮和輸卵管的連接處切割以摘下子宮。小心除去脂肪和結(jié)締組織，在稱重(濕重)之前不要破壞子宮的完整性。通過在兩層濾紙之間用1升盛滿水的玻璃瓶擠壓以吸干子宮中的流體，在吸干水分之后給子宮稱重(干重)。濕重和干重之間的差值即為子宮中的流體含量。將處理組的平均流體含量與未處理或載體處理組的相比較。通過Student’s檢驗測定顯著性。使用未經(jīng)刺激的對照組監(jiān)測雌二醇反應(yīng)。
結(jié)果表明當(dāng)通過多種途徑全身施用本發(fā)明的某些化合物時能抑制水腫形成。
身為血管生成受體酪氨酸激酶抑制劑的本發(fā)明的某些化合物也在新血管生成的Matrigel植入模型中顯示出活性。Matrigel新血管生成模型涉及皮下植入的細胞外基質(zhì)清晰的“marble”內(nèi)新血管形成，所述新血管生成是由產(chǎn)生促血管生成因子的腫瘤細胞的存在誘導(dǎo)的(例見Passaniti，A等，Lab.Investig(1992)，67(4)，519-528；Anat.Rec，1997，249(1)，63-73；國際癌癥雜志，1995，63(5)，694-701；Vasc.Biol.1995，15(11)，1857-6)。優(yōu)選將該模型保留3至4天，終點包括動物中除去移植物之后較之于未用抑制劑處理對照進行新血管生成的肉眼觀察/顯象評分，顯微鏡微血管密度測定和血紅蛋白的定量測定(Drabkin法)。此模型也可使用bFGF或HGF作為刺激物。
能抑制一種或多種癌基因，原癌基因或增殖-依賴型蛋白激酶或血管生成受體PTK的本發(fā)明的某些化合物也能抑制小鼠中原發(fā)性鼠，大鼠或人異種移植腫瘤的生長，或抑制鼠模型中的腫瘤轉(zhuǎn)移。舉例現(xiàn)在描述式I化合物的制備方法。這些方法形成本發(fā)明的另一方面。該方法優(yōu)選地在大氣壓下進行。
式I化合物可以通過下式化合物 其中R1，R2，R3，L和A環(huán)如前定義，與甲酰胺在50至250℃的溫度范圍，任選地在例如4-二甲基氨基吡啶的催化劑存在下縮合而制備。
式I化合物可以通過式(III)化合物 其中Rx是溴或碘，與下列化合物之一R3B(OH)2，R3SnCH3或式III表示的化合物 其中R3如上定義，在催化劑例如鈀(O)化合物如Pd(Ph3)4存在下反應(yīng)而制備。
其中R1表示烷基或芳烷基的式I化合物可以通過使式(IV)化合物 其中R2和R3如前定義，用其中R1表示烷基或芳烷基，而X’表示離去基，例如鹵原子，甲磺酰氧基或甲苯磺酰氧基的式R1X’化合物烷基化而制備。
其中R1表示任選取代的環(huán)狀醚，如四氫呋喃基或四氫吡喃基的式I化合物可以通過使式IV化合物 其中R2和R3如前定義，用其中X’如前定義，R1表示任選取代的環(huán)狀醚的式R1X’化合物烷基化而制備。
其中R1表示任選被甲?；〈沫h(huán)狀醚，如四氫呋喃基或四氫吡喃基的式I化合物可以通過使式IV化合物用其中R1表示通過本專業(yè)技術(shù)人員已知的方法，例如縮醛(參見例如Tetr.Letts.30(46)，1989，6259-6262)保護的甲?；〈沫h(huán)狀醚的式R1X化合物烷基化，接著脫保護而制備。其中R1表示被(任選取代的氨基)甲基取代的環(huán)狀醚，如四氫呋喃基或四氫吡喃基的化合物可以通過使其中R1表示被甲酰基取代的環(huán)狀醚化合物還原性氨基化而制備。
其中R1表示任選取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的式I化合物可以通過4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶與合適的雜芳基硼酸在銅鹽催化劑，例如醋酸銅(II)存在下，在反應(yīng)物的溶劑，例如鹵代溶劑，如二氯甲烷存在下，在干燥劑，例如4分子篩存在下，在有機堿，例如三乙胺或吡啶存在下，在0-50℃的溫度范圍，優(yōu)選室溫進行反應(yīng)而制備。(對于條件，參見Tet.Letts.(1998)，Vol.392942-2944，和其參考文獻，該論文的全文引作本文參考)。這些化合物可以通過本專業(yè)已知的方法調(diào)配，給出其中R1表示被甲?；〈倪秽?，噻吩基或吡咯基的式I化合物。在這些化合物中，甲?；梢酝ㄟ^本專業(yè)已知的方法制備性氨基化，給出其中R1表示被氨基甲基取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的式I化合物。或者，其中R1表示呋喃基，噻吩基或吡咯基的中間體可以進行Mannich反應(yīng)，給出中R1表示被氨基甲基取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的中間體。
式I化合物可以通過使式V化合物 其中R1，R2，R3，L和A環(huán)如前定義，而Ry表示離去基，例如鹵原子或苯氧基，與氨或銨鹽，例如醋酸銨，在15-250℃的溫度范圍，優(yōu)選地在壓力容器中反應(yīng)而制備。
其中R2表示氯，溴或碘的式I化合物可以通過使式VI化合物 其中R1，R2，R3，L和A環(huán)如前定義，與鹵化劑，例如碘化劑，例如N-碘代琥珀酰亞胺，或溴化劑，例如N-溴代琥珀酰亞胺，或氯化劑，例如N-氯代琥珀酰亞胺反應(yīng)而制備。
其中-L-R3表示-NHC(O)R3的式I化合物可以通過使式VII化合物 其中R1，R2，R3，L和A環(huán)如前定義，而Y表示被保護的胺，與其中Rx表示離去基，例如氯的式R3CORx的化合物反應(yīng)而制備。或者，其中Y表示鹵原子，例如氯的式VII化合物可以與式R3CORx的化合物反應(yīng)，其產(chǎn)物與氨反應(yīng)給出式I化合物。類似的方法可以用于制備其中-L-R3是-NRSO2R3的式I化合物。類似的方法可被用于制備其中-L-R3是-NRCO2-R3或-NRCONR’的化合物，R和R’如前定義。
其中-L-R3是-OSO2-的式I化合物可以通過使式VIII化合物 其中R1，R2和A環(huán)如前定義，與式R4SO2Rx的化合物反應(yīng)而制備。
式I化合物然后可以從這類中間體按照后面所述的圖解2或圖解2的可替換方法制備。
式II化合物可以如圖解1所示制備，其中IPA表示丙-2-醇。
圖解I 本專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該理解，式I化合物可以通過已知的化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為其它式化合物。例如，烷氧基可以被裂解給出羥基，而硝基可以被還原為胺，胺又可以被?；?，磺?；蛄柞；鳱-?；衔锟梢员凰鉃榘?。其中-L-是S的式I化合物可以通過本專業(yè)技術(shù)人員已知的方法被氧化給出其中-L-分別表示SO和SO2的式I化合物。
式III化合物是可以購買到的，或者通過本專業(yè)技術(shù)人員已知的方法制備。
其中R2表示氫的式IV化合物可以如圖解2所示制備。其氨基可以在最后步驟之前被保護，然后在圖解2的最后步驟之后，通過本專業(yè)技術(shù)人員已知的方法脫保護。其中R2不是氫的式IV化合物可以通過類似的方法制備(參見J.Med.Chem.(1990)，33，1984)。
圖解2 在圖解2中可替換地，(A環(huán))-L-R3在胺化之前可以首先被偶聯(lián)。而如前定義的取代基R1可替換地可以在進行任一步驟之前存在。
式V化合物可以如圖解3所示制備。
圖解3 其中(A環(huán))-L-R3不存在的化合物可以如圖解4和如J.Med.Chem.，(1998)，31390和其所引用的參考文獻所述制備。其中(A環(huán))-L-R3不是氫的化合物可以通過類似的方法制備。
圖解4 式VII化合物可以通過類似于制備式IV化合物所述的方法，偶聯(lián)5-碘化合物而制備。
本專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該理解，在取代基與所述方法之一中已經(jīng)被修飾過的官能團相同，或相似的情況下，這些取代基在該方法進行之前需要保護，在過程后脫保護。否則的話，競爭性副反應(yīng)就會發(fā)生。或者，可以使用另一上述方法，其中取代基不干擾。合適的保護基和其加入和除去方法的例子可以在T.W.Green，John Wiley and Sons，1981出版的教科書“Protective Groups in Organic Synthesis”中找到。例如，合適的胺保護基是甲?；蛞阴；?br> 下列實施例化合物用在上面概括的一般制備方法制備實施例1N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺a)N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將4-溴-2-甲氧基苯胺(34.0g，0.17mol)和重碳酸二叔丁基酯(44.5g，0.20mol)在四氫呋喃(350ml)中的混合物加熱回流22小時。使混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。將殘余物溶于乙酸乙酯(350ml)，并用1N檸檬酸(200ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯黃色油狀物(純度80％，57.10g，0.15mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(s，1H)，7.63(d，1H)，7.17(d，1H)，7.07(dd，1H)，3.82(s，3H)，1.45(s，9H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝2∶1)Rf0.67b)N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(純度80％)(6.25g，16.56mmol)，二硼頻那醇酯(5.05g，19.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)配合物與二氯甲烷(1∶1)(0.41g，0.50mmol)和乙酸鉀(4.88g，49.80mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中的混合物在80℃于氮氣氛中加熱過夜。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去大部分溶劑。將二氯甲烷(100ml)加入殘余物中，在硅膠墊上濾除產(chǎn)生的固體。將濾液濃縮給出黑色油狀物，將其通過快速硅膠柱層析純化，用二氯甲烷/正庚烷(1∶2)與2.5％三乙胺作流動相，給出N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體(純度65％，4.25g，7.92mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93(s，1H)，7.83(d，1H)，7.25(d，1H)，7.16(s，1H)，3.83(s，3H)，1.46(s，9H)，1.30(s，12H)；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf18.28min.
c)N-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯將水(25ml)和N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(純度65％)(4.25g，7.92mmol)的混合物冷凍，并置于真空中，接著在解凍時用氮氣填充。加入4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.83g，5.28mmol)，四(三苯膦)鈀(O)(0.37g，0.32mmo)，碳酸鈉(1.40g，13.20mmol)和乙二醇二甲基醚(50ml)，產(chǎn)生的混合物在80℃于氮氣氛中加熱過夜。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑，給出殘余物，將其分配在水和乙酸乙酯之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯萃取兩次。合并的乙酸乙酯萃取液用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)，給出黑色油狀物，將其用快速硅膠柱層析純化，用正庚烷/乙酸乙酯(3∶1)與2％三乙胺作流動相。收集合適的部分，合并并濃縮，給出N-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體(1.90g，4.29mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.65(s，1H)，7.94(s，2H)，7.74(d，1H)，7.19(d，1H)，7.07(dd，1H)，5.22(m，1H)，3.87(s，3H)，2.19(m，2H)，1.99(m，2H)，1.91(m，2H)，1.73(m，2H)，1.48(s，9H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝1∶1)Rf0.58d)4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺在0℃將三氟乙酸(2m1)滴加到N-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.58g，1.31mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。移走冰浴，反應(yīng)混合物在室溫攪拌3小時。減壓除去大部分三氟乙酸和二氯甲烷。殘余物再溶于二氯甲烷，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺白色固體(0.45g，1.31mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.61(s，1H)，7.78(s，1H)，6.97(d，1H)，6.85(dd，1H)，6.67(d，1H)，5.20(m，1H)，4.78(寬，2H)，3.81(s，3H)，2.18(m，2H)，1.88-2.00(m，4H)，1.72(m，2H)；MH+343.
e)5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺(0.45g，1.31mmol)，氨(15ml，SG0.88)和1，4-二噁烷(15ml)的混合物在120℃于壓力器內(nèi)加熱攪拌過夜。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑，給出殘余物，將其分配在水和乙酸乙酯之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯萃取兩次。合并的乙酸乙酯萃取液用飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺褐色固體(0.32g，0.99mmol)1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ8.09(s，1H)，7.24(s，1H)，6.88(d，1H)，6.79(dd，1H)，6.71(d，1H)，6.01(寬，2H)，5.06(m，1H)，4.79(寬，2H)，3.81(s，3H)，2.10(m，2H)，1.87-1.92(m，4H)，1.68(m，2H)；MH+324.
f)N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.026g，0.08mmol)，4-氰基苯磺酰氯(0.019g，0.10mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在室溫攪拌過夜。減壓除去大部分溶劑，殘余物通過制備性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，21ml/min.)純化，給出N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺黃色固體(0.018g，0.04mmol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ9.91(s，1H)，8.13(s，1H)，8.05(d，2H)，7.89(d，2H)，7.44(s，1H)，7.27(d，1H)，7.00(dd，1H)，6.98(d，1H)，6.07(寬，2H)，5.07(m，1H)，3.49(s，3H)，2.11(m，2H)，1.88(m，4H)，1.69(m，2H)；MH+489；TLC(乙酸乙酯/甲醇＝9∶1)Rf0.49；RP-HPLC(Hypersil C18，5μum，200A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf14.65min.實施例2N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺相同的方法合成實施例2的化合物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.90(s，1H)，8.22(s，1H)，7.96(s，4H)，7.55(m，1H)，7.29(d，2H)，7.01(m，2H)，5.09(m，1H)，3.49(s，3H)，2.10(m，2H)，1.90(m，4H)，1.69(m，2H)；MH-530；TLC(乙酸乙酯/甲醇＝9∶1)Rf0.64，RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf17.78min.實施例3 N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺相同的方法合成實施例3的化合物。
1H NMR(CDCl3.400MHz)δ8.30(s，1H)，7.86(d，2H)，7.59(d，1H)，7.27(d，2H)，7.13(寬，1H)，7.05(dd，1H)，7.00(s，1H)，6.86(d，1H)，5.26(s，2H)，5.19(m，1H)，3.68(s，3H)，2.26(m，2H)，1.89(m，4H)，1.79(m，2H)；MH+548；TLC(乙酸乙酯)Rf0.34；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf18.18min.實施例4 N2-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺a)將如Heterocycles，1989，28，1115所述制備的2-吡啶磺酰氯在0℃通入2-吡啶硫醇(2.00g，17.99mmol)在濃鹽酸(30ml)中的溶液3小時。反應(yīng)混合物被倒入冰冷的水(40ml)中，過濾收集產(chǎn)生的沉淀。該沉淀再用冰冷的水洗滌，然后在真空用五氧化磷在0℃干燥2小時，給出2-吡啶磺酰氯白色固體(2.00g，11.26mmol)。
b)N2-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺將5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.040g，0.12mmol)，2-吡啶磺酰氯(0.026g，0.15mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在0℃攪拌3小時。反應(yīng)混合物用乙醚稀釋，產(chǎn)生的溶液依次用2N鹽酸，水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機層濃縮給出殘余物，通過制備性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，21ml/min.)純化，給出N2-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺白色固體 (0.022g，0.05mmol)1H NMR(CDCl3.400MHz)δ8.71(d，1H)，8.31(s，1H)，8.01(d，1H)，7.87(m，1H)，7.64(d，1H)，7.47(m，1H)，7.41(m，1H)，6.99(m，2H)，6.87(s，1H)，5.19(m，1H)，5.07(s，2H)，3.79(s，3H)，2.23(1m，2H)，1.76-1.88(m，4H)，1.63(m，2H)；MH+465；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf12.65min.實施例5 N3-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺a)如Heterocyclo.Chem.，1992，29，61所述制備3-吡啶磺酰氯。將3-吡啶磺酸(1.45g，9.01mmol)和五氯化磷(2.00g，9.62mmol)的混合物在110℃加熱3小時。使混合物冷卻至室溫，減壓(0.1mmHg)蒸餾(b.p.60-65℃)，給出3-吡啶磺酰氯白色固體(1.12g，6.31mmol)。
b)N3-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺將5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.040g，0.12mmol)，3-吡啶磺酰氯(0.030g，0.17mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在0℃攪拌0.5小時。將水加入反應(yīng)混合物中，接著減壓除去大部分吡啶和水。殘余物通過制備性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，21ml/min.)純化，給出N3-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺白色固體(0.020g，0.04mmol)1HNMR(CDCl3.400MHz)δ8.97(d，1H)，8.76(d，1H)，8.29(s，1H)，8.10(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.40(m，1H)，7.05(d，1H)，7.00(s，1H)，6.85(s，1H)，5.31(寬，2H)，5.20(m，1H)，3.68(s，3H)，2.26(m，2H)，1.80-2.00(m，6H)；MH+465；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf12.23min.實施例6N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺a)N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺在0℃，氮氣氛中，攪拌下將苯磺酰氯(1.06g，6.00mmol)滴加到4-溴-2-(三氟甲基)苯胺(1.20g，5.00mmol)和吡啶(1.98g，25.0mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中?；旌衔锉粶?zé)嶂潦覝?，并攪?6小時。混合物用乙酸乙酯(35ml)稀釋，并用水(3×10ml)，2N檸檬酸(3×10ml)和食鹽水(10ml)洗滌，然后真空蒸發(fā)。殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用3∶2庚烷∶二氯甲烷作洗脫劑，給出N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(1.3g)白色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.10(1H，s)，7.60-8.16(7H，m)，6.9(1H，dd)；tR＝24.27min(RP-HPLC，5-100％乙腈-0.1％TFA，30min)b)N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺將N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(0.5g，1.31mmol)，二(頻那醇基)二硼(0.402g，1.58mmol)，醋酸鉀(0.387g，3.95mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(32mg，0.04mmol)在DMF(10ml)中的混合物在100℃加熱17小時。將混合物冷卻，加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(32mg，0.04mmol)，然后繼續(xù)在100℃再攪拌24小時。然后真空除去溶劑，殘余物用25ml 4∶1庚烷∶二氯甲烷研制，通過硅藻土墊濾除固體。真空除去溶劑，產(chǎn)生膠狀殘余物(0.42g)，將其中的(123mg，0.28mmol)加入1，2-二甲氧基乙烷(2.5ml)和水(1.25ml)。將碳酸鈉(39mg，0.36mmol)，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(50mg，0.144mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(9.0mg，0.008mol)加入混合物中，然后在氮氣氛中加熱回流16小時，冷卻并真空除去溶劑。殘余物被分配在乙酸乙酯(10ml)和水(6ml)之間。分出水層并用乙酸乙酯(10ml)洗滌。合并的有機層被蒸發(fā)，殘余物溶于1，4-二噁烷(5ml)和濃氫氧化銨(5ml)，然后在封管內(nèi)于120℃加熱16小時。真空除去溶劑，通過逆向MPLC純化，用C18柱和25-75％乙腈-0.1TFA，25min作洗脫劑，接著凍干給出N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(9mg)褐色無定形固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.05(1H，brs)，8.38(1H，s)，7.57-7.87(10H，m)，7.09(1H，d)，5.11(1H，m)，2.14(2H，m)，1.95(4H，m)，1.7(2H，m)；低分辨MS，m/e(MH+)，502；TR＝16.78min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)實施例7N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基-苯基]-1-苯磺酰胺a)2-氨基-5-溴聯(lián)苯將2，4，4，6-四溴-2，5-環(huán)己二烯-1-酮(12.1g，29.55mmol)分批2-氨基聯(lián)苯(5.0g，29.55mmol)的二氯甲烷(65ml)溶液中，同時保持溫度在-5℃和-10℃之間。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪?0小時。溶液用1N氫氧化鈉(1×50ml，1×20ml)萃取兩次，然后硫酸鎂干燥，用活性炭處理，濾過硅藻土并蒸發(fā)給出2-氨基-5-溴聯(lián)苯(7.2g)黑色油狀物，放置固化。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.36-7.48(5H，m)，7.2(1H，dd)，7.08(1H，d)，6.7(1H，d)，4.95(2H，bs)；低分辨MS m/e 249(MH+)；tR=16.03min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ144.5，138.2，131.9，130.6，128.8，128.5，127.7，127.3，117.1，107.1b)1-(4-溴-2-苯基-苯基)-1-苯磺酰胺在＜0℃，氮氣氛中將苯磺酰氯(1.71g，9.67mmo1)滴加到2-氨基-5-溴聯(lián)苯(2.0g，8.06mmol)和吡啶(3.19g，40.3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?6小時。然后將混合物用乙酸乙酯(75ml)稀釋，并用水(3×15ml)，2N檸檬酸水溶液(3×15ml)，食鹽水(15ml)洗滌，硫酸鎂干燥，用木炭處理并濾過硅藻土。真空蒸發(fā)溶劑，給出N1-(4-溴-2-苯基苯)-1-苯磺酰胺(2.9g)褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.62(1H，s)，7.34-8.07(10H，m)，7.19(2H，m)，7.01(1H，d)；低分辨MS m/e388(MH+)；tR=21.2min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)c)N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺將N1-(4-溴-2-苯基苯基)-1-苯磺酰胺(0.388g，1.00mmol)，二(頻那醇基)二硼(0.305g，1.20mmol)，醋酸鉀(0.294g，3.00mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(25mg，0.030mmol)在DMF(10ml)中的混合物在100℃加熱16.5小時。真空蒸發(fā)DMF，殘余物通過快速硅膠柱層析用二氯甲烷/庚烷7∶3加2％三乙胺純化，給出N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺(0.135g)油狀物。tR＝23.13min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)；低分辨MS m/e 434(M-H+)d)N1-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基苯基]-1-苯磺酰胺將碳酸鈉(57mg，0.54mmol)，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(75mg，0.216mmol)，N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基苯]-1-苯磺酰胺(135mg，四(三苯基膦)鈀(0)(12.5mg，0.0108mmol)，水(1.25ml)和DMK(2.5ml)的混合物在氮氣氛中加熱回流16小時，冷卻并真空萃取溶劑。殘余物分配在乙酸乙酯(10ml)和水(5ml)之間。將有機層蒸發(fā)，殘余物通過快速硅膠柱層析純化，給出N1-[4-(2-苯-4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-苯基]-1-苯磺酰胺(55mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.56(1H，s)，8.65(1H，s)，8.03(1H，s)，7.3-7.65(12H，m)，7.08(1H，d)，5.21(1H，m)，2.17(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)；tR=23.77min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)e)N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基苯基]-1-苯磺酰胺將N1-[4-(2-苯基-4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]-1-苯磺酰胺(55mg，0.104mmol)，濃氫氧化銨水溶液(5ml)，和1，4-二噁烷(5ml)的混合物在120℃于封管內(nèi)加熱16小時。將溶液冷卻至室溫并真空除去溶劑。通過MPLC用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min作洗脫劑純化，接著凍干給出N1-[4-(4-氨基-2-苯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-苯基]-1-苯磺酰胺(14mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.56(1H，s)，8.13(1H，s)，7.31-7.65(13H，m)，7.1(1H，d)，6.08(2H，s)，5.07(1H，m)，2.08(2H，m)，1.9(4H，m)，1.67(2H，m)，低分辨MS m/e510(MH+)；tR＝19.22min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)實施例87-環(huán)戊基-5-[1-(苯磺?；?-2，3-二氫-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺a)5-溴-1-(苯磺?；?二氫吲哚在＜0℃，在氮氣氛中，攪拌下將苯磺酰氯(1.85g，10.53mmol)滴加5-溴二氫吲哚(2.0g，8.77mmol)和吡啶(3.47g，43.9mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。混合物被溫?zé)嶂潦覝夭嚢?6小時。然后將混合物用二氯甲烷(30ml)稀釋，并用2N檸檬酸(3×20ml)，食鹽水(20ml)洗滌，硫酸鎂干燥，用木炭處理并濾過硅藻土。真空蒸發(fā)溶劑，給出5-溴-1-(苯磺?；?二氫吲哚(3.2g)。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ7.83(2H，d)，7.68(1H，t)，7.61(2H，t)，7.31-7.43(3H，m)，3.93(2H，t)，2.92(2H，t)；tR＝19.30min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)b)1-(苯磺?；?-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)二氫吲哚將5-溴-1-(苯磺?；?二氫吲哚(1.0g，3.07mmol)，二(頻那醇基)二硼(0.935g，3.68mmol)，醋酸鉀(0.902g，9.202mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(88mg，0.092mmol)在DMF(20ml)中的混合物在100℃加熱16小時。真空蒸發(fā)DMF，殘余物用甲苯(20mD研制，然后濾過硅藻土除去固體。濾液用水(3×15ml)洗滌，然后硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，殘余物用于下一步。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.83(2H，d)，7.43-7.68(6H，m)，3.94(2H，t)，2.94(2H，t)，1.26(12H，s)；tR＝21.23min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)c)7-環(huán)戊基-5-[1-(苯磺?；?-2，3-二氫-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將碳酸鈉(92mg，0.087mmol)，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(100mg，0.288mmol)，1-(苯磺酰基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)二氫吲哚(200mg，0.431mmol)，四(三苯基膦)鈀(O)(17mg，0.014mmol)，水(3ml)和DME(6ml)的混合物在氮氣氛中加熱回流16小時，冷卻并真空萃取溶劑。殘余物分配在乙酸乙酯(10ml)和水(5ml)之間。將有機層蒸發(fā)，殘余物溶于1，4-二噁烷(6ml)和濃氫氧化銨水溶液(6ml)，然后在120℃封管內(nèi)加熱16小時。將溶液冷卻并真空除去溶劑。通過逆向MPLC用C18柱和25-75％乙腈-0.1N醋酸銨，25min作洗脫劑純化，接著凍干給出7-環(huán)戊基-5-[1-(苯磺酰基)-2，3-二氫-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(23mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.11(1H，d)，7.85(2H，d)，7.70(1H，t)，7.54-7.61(3H，m)，7.25-7.33(3H，m)，6.0(2H，s)，5.06(1H，m)，3.96(2H，t)，2.95(2H，t)，2.11(2H，m)，1.90(4 H，m)，1.67(2H，m)；tR＝16.37min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)實施例9N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺a)N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺在氮氣氛中，攪拌下將苯磺酰氯(2.11g，12.0mmo1)滴加到4-溴-2-氯苯胺(2.06g，10.0mmol)，吡啶(3.95g，50mmol)和二氯甲烷(15ml)溶液中?；旌衔锉粩嚢?小時，然后用乙酸乙酯(75ml)稀釋，并用水(3×20ml)，食鹽水(20ml)洗滌，然后硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)給出3.2g(92％)N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺橙色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.10(1H，s)，7.7(2H，d)，7.53-7.65(4H，m)，7.46(1H，d)，7.18(1H，d)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ140.0，131.1，133.0，132.0，130.8，130.3，129.2，128.8，126.6，119.0；低分辨MS m/e346(M－H+)b)N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺在0℃，氮氣氛中將N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺(1.0g，2.89mmol)的DMF(8ml)溶液加入氫化鈉(0.14g在礦物油中的60％分散體，3.47mmol)在DMF(7ml)中的混合物。混合物然后用碘代甲烷(0.452g，3.18mmol)處理，同時保持溫度＜0℃。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?6小時，然后加入水(100ml)?；旌衔镉靡宜嵋阴?3×20ml)萃取，合并的有機層用水(3×20ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)給出N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.55g)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.87(1H，s)，7.55-7.80(6H，m)，7.00(1H，d)，3.11(3H，s)；tR＝19.58min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)c)N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺將N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.5g，1.389mmol)，二(頻那醇基)二硼(0.423g，1.66mmol)，醋酸鉀(0.408g，4.167mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(34mg，0.042mmol)在DMF(20ml)中的混合物在100℃加熱16小時。真空蒸發(fā)DMF，殘余物用甲苯(15ml)研制，然后濾過硅藻土，給出N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.25g)黑色油狀物，用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93(2H，d)，7.57-7.75(5H，m)，7.07(1H，d)，3.12(3H，s)，1.29(12H，s)d)N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺將碳酸鈉(92mg，0.087mmol)，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(100mg，0.288mmol)，N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(244mg(72％重量純度)0.432mmol)，四(三苯膦)鈀(O)(17mg，0.0144mmol)，水(3ml)和DME(6ml)的混合物在氮氣氛中加熱回流16小時，冷卻并真空除去溶劑。將殘余物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)之間。蒸發(fā)有機層，殘余物溶于1，4-二噁烷(7ml)和濃氫氧化銨水溶液(7ml)，然后在120℃于封管內(nèi)加熱16小時。將溶液冷卻并真空除去溶劑。通過逆向MPLC用C18柱和25-75％乙腈-0.1N醋酸銨，25min作洗脫劑純化，接著凍干給出N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固體。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.15(1H，s)，7.74-7.80(3H，m)，7.64-7.66(2H，m)，7.60(1H，s)，7.39(1H，d)，7.08(1H，d)，6.20(2H，s)，3.16(3H，s)，2.14(2H，m)，1.91(4H，m)，1.69(2H，m)；低分辨MS m/e481(M－H+)；tR＝22.45min(RP-HPLC，25-75％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)實施例10N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯將5-溴-2-吡啶胺(4.0g，23.1mmol)和重碳酸二叔丁基酯(6.31g，28.9mmol)在四氫呋喃(50ml)中的混合物加熱回流20小時?；旌衔锉焕鋮s至室溫，減壓除去溶劑。加入二氯甲烷(30ml)和乙酸乙酯(30ml)，混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(25ml)萃取。有機層被真空蒸發(fā)，約四分之一的殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用95∶5正庚烷/乙酸乙酯作洗脫劑，給出N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(0.6lg)油狀物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(1H，s)，8.34(1H，d)，7.93(1H，dd)，7.77(1H，d)，1.47(9H，s)b)N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(0.5g，1.83mmol)，六甲基二錫(0.6g，1.832mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(130mg，0.107mmol)和二甲氧基乙烷(10ml)的混合物在80℃于氮氣氛中加熱15小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。將殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脫劑，給出N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(242mg)油狀物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.31(1H，s)，8.15(1H，s)，7.65-7.72(2H，m)，1.44(9H，s)，0.24(9H，s)；低分辨MS m/e 481c)N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(230mg，0.644mmol)，4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(225mg，0.644mmol)，三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(30mg，0.0322mmol)，三苯胂(50mg，0.161mmol)和DMF(8ml)的混合物在氮氣氛中于80℃加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑，給出的殘余物分配在水(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之間。分出有機層，并再用水(5ml)和食鹽水(5ml)萃取，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(8∶2)作洗脫劑，給出N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(170mg)褐色固體；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.66(1H，s)，8.58(1H，s)，8.35(1H，s)，7.89(1H，s)，7.82(2H，m)，5.2(1H，m)，2.16(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)，1.47(9H，s)；d)5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺在0℃將三氟乙酸(2ml)滴加到N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(165mg，0.4mmol)的二氯甲烷(7ml)溶液中。移走冰浴，反應(yīng)混合物在室溫攪拌6小時。真空除去溶劑，然后將殘余物再溶于乙酸乙酯(55ml)，并用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(133mg)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.63(1H，s)，8.05(1H，dd)，7.86(1H，d)，7.55(1H，d)，6.52(1H，d)，6.06(2H，bs)，5.20(2H，m)，2.16(2H，m)，1.97(4H，m)，1.72(2H，m)；低分辨MS，m/e(MH+)314.
e)N1-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺在氮氣氛中，攪拌下，將苯磺酰氯(366mg，2.07mmol)加入5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(125mg，0.4mmol)和吡啶(294mg，3.7mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。混合物在封管內(nèi)于80℃加熱20小時。將混合物冷卻并真空蒸發(fā)溶劑。殘余物再溶于二氯甲烷(50ml)并用飽和碳酸氫鈉(15ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯作洗脫劑，給出N1-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(90mg)褐色固體。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.3(1H，bs)，8.66(1H，s)，8.2(1H，bs)，7.89-7.99(4H，m)，7.54-7.62(3H，m)，7.2(1H，bs)，5.2(1H，m)，2.16(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)；低分辨 MS，m/e(MH+)454.
f)N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺將N1-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(90mg)，濃氫氧化銨水溶液(5ml)，和1，4-二噁烷(5ml)的混合物在120℃于封管內(nèi)加熱16小時。將溶液冷卻至室溫并真空除去溶劑。通過MPLC用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min作洗脫劑純化，接著凍干，給出N1-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.12(1H，s)，8.08(1H，bs)，7.92(2H，d)，7.79(2H，d)，7.60(3H，m)，7.44(1H，s)，7.23(1H，d)，6.19(2H，bs)，5.05(1H，m)，2.10(2H，m)，1.91(4H，m)，1.67(2H，m)；低分辨MS m/e 435(MH+).實施例11N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺a)5-(4-氨基-3-氯苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺通過與5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺相同的方法制備實施例11中的該化合物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.29(s，2H)，7.12(dd，1H)，6.88(d，1H)，6.00(寬，2H)，5.41(s，2H)，5.06(m，1H)，2.09(m，2H)，1.87(m，4H)，1.68(m，2H)；MH+329；TLC(乙酸乙酯)Rf0.27；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈 -0.1M醋酸銨25min，lml/min)Rf14.02min.
b)N1-[4-(4-氨基-3-氯苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺將5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.098g，0.30mmol)，2-氰基苯磺酰氯(0.072g，0.36mmol)和吡啶(0.98ml)的混合物在室溫攪拌16小時。減壓除去大部分吡啶，殘余物通過制備性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，21ml/min.)純化，給出N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺白色固體(0.025g，0.05mmol)1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.31(s，1H)，8.17(d，1H)，7.70-7.82(m，5H)，7.44(s，1H)，7.40(dd，1H)，7.00(s，1H)，5.27(寬，2H)，5.00(m，1H)，2.23(m，2H)，1.79-1.90(m，6H)；MH+493；TLC(乙酸乙酯)Rf0.30；RP-HPLC(Rainin C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf15.27min.實施例12N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-氰基-1-苯磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(實施例11)相同的方法制備實施例12的化合物。
1H NMR(CDC13，400MHz)δ8.30(s，1H)，8.07(m，2H)，7.86(d，1H)，7.73(d，1H)，7.65(dd，1H)，7.43(s，2H)，7.05(s，1H)，5.30(寬，2H)，5.20(m，1H)，2.44(m，2H)，1.77-1.89(m，6H)；MH+493；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf15.52min.實施例13N3-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-吡啶磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(實施例11)相同的方法制備實施例13的化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.97(s，1H)，8.81(dd，1H)，8.33(s，1H)，8.13(dd，1H)，7.77(d，1H)，7.44(m，3H)，7.02(s，1H)，5.21(m，1H)，5.06(寬，2H)，2.24(m，2H)，1.78-1.89(m，6H)；MH+469；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf13.03min.實施例14N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-三氟甲基-1-苯磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(實施例11)相同的方法制備實施例14的化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.33(s，1H)，8.09(d，1H)，7.92(d，1H)，7.72(m，2H)，7.64(m，1H)，7.41(s，1H)，7.36(d，1H)，7.00(s，1H)，5.21(多重峰，1H)，5.01(寬，2H)，2.25(m，2H)，1.77-1.91(m，6H)；MH+536；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf18.15min.實施例15N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-三氟甲基-1-苯磺酰胺用與N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(實施例11)相同的方法制備實施例15的化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.29(s，1H)，8.04(d，2H)，7.85(d，1H)，7.77(d，1H)，7.65(m，1H)，7.38(m，2H)，7.07(s，1H)，6.01(寬，2H)，5.20(m，1H)，2.27(m，2H)，1.79-1.90(m，6H)；MH+536；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf18.43min.實施例16N1-4-[4-氨基-7-(3-羥基環(huán)戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺a)4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-環(huán)戊烯-1-醇將二甲亞砜(3.5ml)脫氣然后在氮氣氛中攪拌。保護反應(yīng)器不受光照，然后加入4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(570mg，2.03mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(0.05g，0.041mmol)?；旌衔锉粩嚢?分鐘然后冷卻至0℃。然后將混合物用2，4a-二氫-1aH-環(huán)戊烷并[b]環(huán)氧乙烯(200mg，2.44mmol)處理，即將其溶于四氫呋喃(3.5ml)，在約15分鐘內(nèi)滴加。反應(yīng)混合物在0℃攪拌3小時，然后溫?zé)嶂潦覝?，并攪?5小時。然后將混合物用另一批環(huán)氧化物(85mg，1.04mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(0.025g，0.020mmol)處理，并繼續(xù)再攪拌24小時。然后將混合物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)之間。分層，水層用二氯甲烷(3×20ml)洗滌。將有機層合并，用水(20ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物用逆向MPLC純化，用C18柱和25-50％乙腈-0.1N醋酸銨，15min作洗脫劑，接著蒸發(fā)乙腈并過濾收集產(chǎn)生的固體，給出4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-環(huán)戊烯-1-醇(365mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.66(1H，s)，7.87(1H，s)，6.20(1H，m)，5.93(1H，m)，5.77(1H，m)，5.27(1H，d)，4.72(1H，m)，2.89(1H，m)，1.62(1H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ150.9，150.4，149.9，139.7，133.8，130.9，116.2，73.5，57.8，52.2，41.1；低分辨MS m/e 362(MH+).
b)N1-2-氯-4-[4-氯-7-(4-羥基-2-環(huán)戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺將碳酸鈉(130mg，1.213mmol)，4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-環(huán)戊烯-1-醇(175mg，0.485mmol)，N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺(475mg，0.727mmol)，四(三苯膦)鈀(0)(30mg，0.024mmol)，水(4ml)和DME(8ml)的混合物在氮氣氛中加熱回流16小時，冷卻并真空萃取溶劑。殘余物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(5ml)之間。水層在用乙酸乙酯(20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗滌。合并的有機層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)給出一油狀物，放置固化。通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(7∶3)作洗脫劑，給出N1-2-氯-4-[4-氯-7(4-羥基-2-環(huán)戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺(45mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.06(1H，s)，8.69(1H，s)，7.29-7.80(9H，m)，6.1 9(1H，m)，5.96(1H，m)，5.85(1H，m)，5.22(1H，d)，2.92(1H，m)，1.68(1H，m)；低分辨MS m/e 501(MH+)；tR=14.82min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min).
c)N1-4-[4-氨基-7-(4-羥基-2-環(huán)戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺將N1-2-氯-4-[4-氯-7(4-羥基-2-環(huán)戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺(45mg)溶于1，4-二噁烷(7ml)和濃氫氧化銨水溶液(7ml)，然后在120℃于封管內(nèi)加熱16小時。將溶液冷卻至室溫并真空除去溶劑給出N1-4-[4-氨基-7-(4-羥基-2-環(huán)戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺，不經(jīng)進一步純化用于下步。低分辨MS m/e 482(MH+)；tR＝10.75min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min)。
d)N1-4-[4-氨基-7-(3-羥基環(huán)戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺將烯烴(45mg)和10％Pd/C(25mg)混合物在氫氣氛中于室溫和大氣壓下攪拌19小時，然后濾過0.2μm筒式過濾器，并真空除去溶劑。通過逆向MPLC純化，用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸銨，25min作洗脫劑，接著凍干給出N1-4-[4-氨基-7-(3-羥基環(huán)戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.03(1H，bs)，8.15(1H，s)，7.77(2H，d)，7.29-7.67(7H，m)，6.12(1H，bs)，5.14(1H，m)，4.98(1H，d)，4.23(1H，d)，2.37(1H，m)，2.02-2.12(2H，m)＜1.77(3H，m)；低分辨MS m/e 484(MH+)；tR=11.00 min(RP-HPLC，25-100％乙腈.0.1N醋酸銨，25min)實施例17N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸新戊基酯在氮氣中，攪拌下，于0℃將氯甲酸新戊基酯(28μ1，0.186mmol)滴加到5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)在吡啶(1ml)和二氯甲烷(1ml)的溶液中。10分鐘后，移走冰浴，將產(chǎn)生的混合物攪拌4小時。蒸發(fā)溶劑，殘余物溶于乙酸乙酯。將有機層洗滌，干燥并蒸發(fā)。固體用制備性TLC純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流動相，給出N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸新戊基酯。1HNMR(CDCl3)δ1.00(s 9H)，1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.91(s，2H)，3.94(s，3H)，5.22(m，3H)，6.22(s，1H)，7.01(s，1H)，7.08(d，J=8Hz，1H)，7.25(s，1H)，8.17(br.d，1H)，8.32(s，1H)；LC/MS(MH+＝438).實施例18N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-吡啶甲基酯a)4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯在氮氣中，攪拌下，于0℃將N-甲基嗎啉(2.0ml，18.5mmol)滴加到氯甲酸p-硝基苯基酯(2.49g，12.3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。20分鐘后，移走冰水浴，混合物被溫?zé)嶂潦覝亍Ｍ旌衔镏屑尤?-吡啶基甲醇(1.0ml，10.3mmol)，產(chǎn)生的溶液被攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，并用水，飽和碳酸氫鈉，食鹽水洗滌。將有機層干燥(硫酸鎂)，過濾并蒸發(fā)，給出深褐色固體。該固體用乙酸乙酯和庚烷重結(jié)晶，給出4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯。1H NMR(CDCl3)δ5.32(s，2H)，7.38(m，3H)，7.79(m 1H)，7.28(m，2H)，8.66(d，J＝4Hz，1H)，8.72(s，1H).
b)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯往5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(79mg，0.244mmol)的吡啶(1ml)溶液中加入4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯(111mg，0.405mmol)，接著加入催化量的N，N-二甲基吡啶。產(chǎn)生的混合物在氮氣氛中于室溫攪拌2天。將溶劑蒸發(fā)，殘余物溶于乙酸乙酯。將有機層洗滌，干燥并蒸發(fā)。固體通過制備性TLC純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流動相，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯。
1H NMR(CDCl3)δ1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.91(s，3H)，5.25(m，5H)，6.98(s，1H)，7.01(s，1H)，7.09(d，J＝8Hz，1H)7.32(m，1H)，7.77(d，J＝8Hz，1H)，8.20(br.d，1H)，8.32(s，1H)，8.64(m，1H)，8.70(s，1H)；LC/MS(MH+＝459).
c)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯鹽酸鹽將N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯(50mg，0.109mmol)溶于乙酸乙酯(3.0ml)?；旌衔锉焕鋮s至0℃，并通入氯化氫氣體半分鐘。立即形成沉淀。將燒瓶加蓋，溶液在0℃攪拌10分鐘。過濾收集固體，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯鹽酸鹽。1HNMR(DMSO-d6)δ1.72(m，2H)，1.93(m，4H)，2.16(m，2H)，3.87(s，3H)，5.15(m，1H)，5.26(s，1H)，7.06(d，J＝2Hz，1H)，7.14(s，1H)，7.64(d，J＝5Hz，1H)7.81(m，2H)，8.10(d，J＝8Hz，1H)，8.47(s，1H)，8.66(d，J＝5Hz1H)，8.78(s，1H)，8.87(s，1H)；LC/MS(MH+＝459)實施例19N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-氯環(huán)己基酯在氮氣中，攪拌下，于0℃將氯甲酸3-氯環(huán)己基酯(34mg，0.186mmol)加入5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)的吡啶(1ml)和二氯甲烷(1ml)溶液中。10分鐘后，移走冰浴，將產(chǎn)生的混合物攪拌4小時。蒸發(fā)溶劑，殘余物溶于乙酸乙酯。將有機層洗滌，干燥并蒸發(fā)。固體用制備性TLC純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流動相，給出N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-氯環(huán)己基酯。1H NMR(CDCl3)δ1.46(m，2H)，1.78(m，4H)，1.88(m，4H)，2.00(m，2H)，2.28(m，4H)，3.93(m，4H)，4.84(m，1H)，5.22(m，1H)，5.27(s，2H)，6.97(s，1H)，7.03(s，1H)，7.08(d，J＝8Hz，1H)，7.31(s，1H)，8.18(br.d，1H)，8.32(s，1H)；LC/MS(MH+＝484).實施例20N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-N’-芐基脲在氮氣中，攪拌下，將芐基異氰酸酯(241μl，0.194mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液滴加到5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)的N，N-二異丙基乙基胺(153μl，0.881mmol)和二氯甲烷(2ml)的溶液中。產(chǎn)生的混合物被攪拌24小時。蒸發(fā)溶劑，固體用制備性TLC純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流動相，給出N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-N’-芐基脲。1HNMR(CDCl3)δ1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.86(s，3H)，4.48(d，J＝6Hz，3H)，5.24(m，4H)，6.93(s，1H)，6.98(s，1H)，7.00(s，1H)，7.04(d，J＝8Hz，1H)，7.29(m，5H)，8.17(d，J＝8Hz，1H)，8.31(s，1H)；LC/MS(MH+＝457).實施例21N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.025g，0.08mmol)，氯甲酸芐基酯(0.016g，0.09mmol)，吡啶(0.50ml)和二氯甲烷(0.50ml)的混合物在室溫下攪拌過周末并倒入水中。過濾收集產(chǎn)生的沉淀，通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/正庚烷(9∶1)作流動相，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯白色固體(0.002g，0.004mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，8.13(s，1H)，7.74(d，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.10(d，1H)，7.02(dd，1H)，6.08(寬，2H)，5.16(s，2H)，5.08(m，1H)，3.86(s，3H)，2.11(m，2H)，1.91(m，4H)，1.69(m，2H)；MH+458；TLC(乙酸乙酯) Rf0.32；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈 -0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)Rf19.00min.實施例22N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯a)5-溴-2-甲氧基苯胺將4-溴-1-甲氧基-2-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮氣中加熱。加入鐵粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃攪拌1小時。使混合物冷卻至室溫，然后加入水(100ml)，用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉(3×25ml)洗滌，然后用食鹽水洗滌。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，濾液被減壓蒸發(fā)，給出一殘余物。將該物質(zhì)通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脫劑，給出5-溴-2-甲氧基苯胺(2.0g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ6.76(s，1H)，6.71(d，1H)，6.61(d，1H)，4.99(bs，2H)，3.74(s，3H)；(TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.5；RP-HPLC(Hypersil HyPurity EliteC18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨25min，1ml/min)tr＝13.33min.；MSMH+443.
b)N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將5-溴-2-甲氧基苯胺(1.50g，7.43mmol)，重碳酸二叔丁基酯(1.95g，8.91mmol)在THF(20ml)中的混合物加熱回流20小時。混合物被冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。產(chǎn)生的油狀物通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶9)作洗脫劑，給出N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.19g)無色油狀物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.05(s，1H)，7.93(d，1H)，7，16(d，1H)，6.95(d，1H)，3.8(s，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷2∶8)Rf0.4；RP-HPLC(HypersilHvPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M醋酸銨25min，1ml/min)tr＝21.8min.
c)N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.10g，3.64mmol)，二硼頻那醇酯(1.11g，4.37mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)配合物與二氯甲烷(1∶1)(0.09g，0.11mol)和乙酸鉀(1.07g，10.9mol)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物在80℃于氮氣氛中加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去大部分溶劑。將二氯甲烷(20ml)加入殘余物中，在硅膠墊上濾除產(chǎn)生的固體。將濾液濃縮給出黃色油狀物，將其通過快速硅膠柱層析純化，用二氯甲烷/正庚烷(2∶8)作流動相，給出N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體(0.96g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.03(s，1H)，7.86(s，1H)，7.35(d，1H)，7.0(d，1H)，3.82(s，3H)，1.46(s，9H)，1.28(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 2∶8)Rf=0.35；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)Rf22.8min.
d)N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯將4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.524g，1.5mmol)，四(三苯膦)鈀(O)(0.07g，0.06mmo)，碳酸鈉(0.265g，2.5mmol)的混合物在和乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮氣氛中加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑，給出殘余物，將其分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取兩次。合并的有機萃取液用水(3×20ml)洗滌，然后硫酸鎂干燥，過濾，將濾液減壓濃縮為油狀殘余物，將其用快速硅膠柱層析純化，用正庚烷/乙酸乙酯(5∶1)作洗脫劑給出N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，7.93(s，1H)，7.87(m，2H)，7.17(d，1H)，7.06(d，1H)，5.21(m，1H)，3.86(s，3H)，1.65-2.25(m，8H)，1.45(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝24.25min.MSMH+443.
e)5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g，0.735mmol)的二氯甲烷(14m1)溶液冷卻至0℃，然后用三氟乙酸(1.4ml)處理。溶液在0℃攪拌5分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝?，并再攪?6小時。減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物分配在二氯甲烷(30ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)之間。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)，給出一泡沫體。將其溶于二噁烷(4ml)和濃(28-30％)氫氧化銨(4ml)，產(chǎn)生的溶液在120℃于密封的壓力管內(nèi)加熱20小時。溶劑被蒸發(fā)，殘余物通過制備性C18 RP-HPLC純化，凍干后給出5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(85mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.21(s，1H)，6.87(d，1H)，6.74(s，1H)，6.58(d，1H)，5.06(1H，m)，4.87(bs，2H)，3.8(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸銨25min，1ml/min)tr11.87min.；MSMH+324.
f)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯將5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.124mmol)的二氯甲烷(1ml)和吡啶(1ml)溶液冷卻至0℃，然后用氯甲酸芐基酯(32mg，0.786mmol)處理，同時保持溫度低于5℃。將溶液在0℃再攪拌1小時，然后減壓除去溶劑。通過制備性RP-HPLC純化，然后凍干給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯白色固體(25mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.11(s，1H)，7.75(s，1H)，7.1-7.4(m，8H)，6.2(bs，2H)，5.15(s，2H)，5.07(m，1H)，3.8(s3H)，1.6-2.2(m，8H)，RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1 M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.63min.；MSMH+458.實施例23N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸芐基酯a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯以類似于化合物(2)所述的方法，從5-溴-2-吡啶胺制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(s，1H)，8.49(d，1H)，7.93(dd，1H)，7.78(d，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 5∶95)Rf0.28；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.50min.
b)N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，6.12mmol)，六甲基二錫(2.0g，6.12mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(0.424g，0.367mmol)在乙二醇二甲基醚(30ml)中的混合物中于80℃在氮氣氛中加熱15小時?；旌衔锉焕鋮s至室溫，然后減壓除去溶劑。產(chǎn)生的物質(zhì)通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脫劑，給出N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(1.11g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ％98(s，1H)，8.2(t，1H)，7.74(m，2H)，1.47(s，9H)，0.30(t，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯 95∶5)Rf0.2；MSMH+359.
c)N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.25g，0.72mmol)，N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，1.08mmol)，四(trwas)(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(0.033g，0.076mmo)和三苯基胂(0.055g，0.18mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的混合物在65℃于氮氣氛中加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。產(chǎn)生的物質(zhì)用快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(75∶25)作洗脫劑，給出N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.83(s，1H)，8.68(s，1H)，8.40(d，1H)，8.02(s，1H)，7.85-7.93(m，2H)，5.21(m，1H)，1.65-2.25(m，8H)，1.49(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯
8∶2)Rf0.18；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝21.68min.
d)5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺將N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g，0.315mmol)的二氯甲烷(5.5ml)溶液冷卻至0℃，然后用三氟乙酸(0.6ml)處理。溶液在0℃攪拌5分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝?，并再攪?8小時。減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物分配在二氯甲烷(30ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)之間。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)，給出5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺(92mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1 M醋酸銨25min，1ml/min)tT＝10.73min；MSMH+314.
e)5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺(92mg，0.292mmol)溶于二噁烷(2ml)和濃(28-30％)氫氧化銨(2ml)，產(chǎn)生的溶液在120℃于密封的壓力管內(nèi)加熱24小時。溶劑被蒸發(fā)給出5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)tr＝6.33min；MsMH+295f)N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯將5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg，0.29mmol)的二氯甲烷(1.5ml)和吡啶(1.5ml)溶液冷卻至0℃，然后用氯甲酸芐基酯(75mg，0.44mmol)處理，同時保持溫度低于5℃。將溶液溫?zé)嶂潦覝?，然后攪?小時。加入氯甲酸芐基酯(75mg，0.44mmol)，混合物被攪拌18小時，再加入氯甲酸芐基酯(75mg，0.44mmol)，混合物再攪拌24小時。加入氯甲酸芐基酯(150mg，0.88mmol)和吡啶(1ml)，混合物被再攪拌24小時。減壓蒸發(fā)溶劑，然后將殘余物分配在乙酸乙酯(25ml)和水(10ml)之間。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)濾液給出一殘余物。通過制備性RP-HPLC純化，然后用乙醚研制給出N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯白色粉末(21mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.33(s，1H)，8.36(d，1H)，8.14(s，1H)，7.91(d，1H)，7.84(d，1H)，7.33-7.47(m，6H)，6.11(bs，2H)，5.2(s，2H)，5.06(m，1H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝16.22min；MSMH+429.實施例24N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯a)4-溴-3-甲氧基苯胺將1-溴-2-甲氧基-4-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮氣中加熱。加入鐵粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃攪拌1小時。使混合物冷卻至室溫，然后加入水(100ml)，用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉(3×25ml)洗滌，然后用食鹽水洗滌。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，濾液被減壓蒸發(fā)，給出一殘余物。將該物質(zhì)通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脫劑，給出4-溴-3-甲氧基苯胺(1.22g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.1(d，1H)，6.31(s，1H)，6.1(d，1H)，5.27(bs，2H)，3.72(s，3H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.33；RP-HPLC(Hypersil HyPurity EliteC18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨25min，1ml/min)tr＝11.05min.
b)N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(2)所述的方法，從4-溴-3-甲氧基苯胺制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.46(s，1H)，7.4(d，1H)，7.35(s，1H)，6.95(d，1H)，3.78(s，3H)，1.48(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.37；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.60min.
c)N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯以化合物(3)所述的方法，從N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制備該化合物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.44(s，1H)，7.41(d，1H)，7.17(s，1H)，7.01(d，1H)，3.68(s，3H)，1.48(s，9H)，1.24(s，12H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.28；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.83min.
d)N-(4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(4)所述的方法，從N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.41(s，1H)＜8.59(s，1H)，7.72(s，1H)，7.33(s，1H)，7.15(d，1H)，7.04(d，1H)，5.17(m，1H)，3.66(s，3H)，1.6-2.2(m，3H)，1.49(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M 醋酸銨25min，1ml/min)tr＝21.22min；MSMH+443.
e)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯以將化合物(4)轉(zhuǎn)化為化合物(6)的方式，從N-(4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.87(s，1H)，8.08(s，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.09-7，18(m，3H)，5，79(bs，2H)，5.18(s，2H)，5.04(m，1H)，3.7(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝16.87min；MSMH+458.實施例25N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯a)4-[{[7-環(huán)戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基樹脂Rink酰胺樹脂[負載0.66mmol/g的4-(2’，4’-二甲氧基苯基-Fmoc氨基甲基)苯氧基樹脂](6.55g，4.32mmol)通過用N，N-二甲基甲酰胺(2×2min)，哌啶的20％N，N-二甲基甲酰胺溶液(1×5min，1×15min)，N，N-二甲基甲酰胺(5×2min)，二氯甲烷(3×2min)，然后甲醇(3×2min)洗滌而脫保護。該樹脂在40℃減壓干燥。脫保護的樹脂，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.80g，5.19mmol)，二甲亞砜(100ml)，和N，N-二異丙基乙胺(4.5ml)在100℃加熱3天，冷卻至室溫，然后過濾收集樹脂，并用N，N-二甲基甲酰胺洗滌。然后將樹脂與乙酸(0.13g，2.16mmol)，四氟硼酸O-苯并噻唑-1-基-N，N，N’N’-四甲基脲(0.69g，2.16mmol)，N，N-二異丙基乙胺(0.56g，4.32mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30ml)一起攪拌。過濾收集樹脂，并用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷和甲醇洗滌。將樹脂減壓干燥至恒重(6.25g)。將樹脂，二硼頻那醇酯(1.11g，4.37mmol)，醋酸鉀(0.822g，9.39mmol)和四(三苯膦)鈀(0.24g，0.21mmol)在二甲亞砜(125ml)中，在氮氣氛中于85℃加熱17小時。過濾收集樹脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，乙酸乙酯，然后乙醚洗滌。將樹脂減壓干燥至重5.49克。
b)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯將4-[{[7-環(huán)戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基樹脂(0.5g，0.254mmol)，4-溴-2-氟苯胺(0.484g，2.54mmol)，四(三苯膦)鈀(0.044g，0.038mmol)，2M磷酸鉀水溶液(1.27ml，2.54mmol)和二甲亞砜(10ml)的混合物在85℃加熱18小時。將混合物冷卻，過濾收集樹脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗滌。然后使樹脂第二次處于上述偶合條件。將樹脂懸浮于二氯甲烷(2ml)和吡啶(2ml)，然后將混合物冷卻至0℃，并用氯甲酸芐基酯(0.44g，2.6mmol)處理。在0℃攪拌1小時后，使混合物溫?zé)嶂潦覝?8小時。過濾收集樹脂，并用5％三氟乙酸的二氯甲烷(10ml)溶液處理30分鐘。濾除樹脂，產(chǎn)生的濾液被減壓蒸發(fā)，給出一殘余物，通過制備性C-18 RP-HPLC純化，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯(約10mg)RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 10min，1ml/min)tr＝11.47min；MSMH+446.實施例27N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于實施例25所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝12.07min；MsMH+496實施例28N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氰基苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于實施例25所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr10.93min；MsMH+453實施例295-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-{[(芐氧基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯以類似于實施例25所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝13.28min；MsMH+486實施例30N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲基苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于實施例25所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝11.25min；MsMH+442實施例31N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于實施例25所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝11.27min；MsMH+428實施例32N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(27mg，0.083mmol)溶于二氯甲烷(0.8ml)。加入吡啶(0.8ml)，接著加入苯磺酰氯(19mg，0.105mmol)。攪拌過夜后，加入另外19mg苯磺酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺(9mg，0.0188mmol)。
1H NMR (DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.28(m，2H)，3.85(s，3H)，4.38(s，2H)，5.23(m，3H)，6.08(bs，1H)，6.99(m，2H)，7.27，(m，2H)，7.33(m，3H)，7.58(d，J＝8.17Hz，1H)，8.34(s，1H).LC/MS MH+＝478實施例33N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(28mg，0.086mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接著加入2-苯基乙酰氯(14μL，0.105mmol)。攪拌過夜后，加入另外14μL苯基乙酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺(7mg，0.0158mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.77(s，3H)，3.79(s，2H)，5.21(m，1H)，5.56(bs，2H)，6.89(s，1H)，6.99(s，1H)，7.05(a，J＝8.22，1H)，7.36(m，5H)，7.81(s，1H)，8.27(s，1H)，8.43(d，J＝8.23Hz，1H).LC/MS MH+＝442.實施例34N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(31mg，0.096mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接著加入2-(2-噻吩基)乙酰氯(14μL，0.113mmol)。攪拌過夜后，加入另外14μL 2-(2-噻吩基)乙酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺(14mg，0.031mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.82(s，3H)，3.99(s，2H)，5.19(bs，2H)，5.21(m，1H)，6.93(s，1H)，6.94(s，1H)，7.06(m，3H)，7.31(m，1H)，8.02(s，1H)，8.32(s，1H)，8.42(d，J＝8.22Hz，1H).LC/MS MH+＝448.實施例35-108(一般方法)在表J中列出的實施例化合物是通過苯酚與表I所列出的氟苯如下列圖解所示反應(yīng)而制備的。 R1是異丙基。R100如上所示 經(jīng)Gilson 215液體自動加樣器將5-(4-羥基苯基)-7-異丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1摩爾當(dāng)量)在N，N-二甲基甲酰胺中的貯備溶液(6g溶于240ml)加入隔膜密封管中的氟苯(1.25摩爾當(dāng)量)和碳酸鉀(2摩爾當(dāng)量)的混合物。將反應(yīng)物在振動下于120℃加熱4小時，再于140℃加熱1小時，然后在離心蒸發(fā)器中蒸發(fā)至干。
反應(yīng)殘余物溶于乙酸乙酯/三乙胺(1ml)(9∶1)，并用9∶1乙酸乙酯/三乙胺(4×2ml)洗過二氧化硅墊(3g SiO212mm直徑×20mm高)。合并的柱體洗出物被蒸發(fā)，給出蠟狀固體，涂片或膨脹的泡沫體產(chǎn)物。表I
所得的產(chǎn)物在表J中給出。R100如前所述。
LCMS中所用的條件在后面給出。HPLC RT(mins)是以分鐘表示的HPLC保留時間。產(chǎn)物
表J
RT＝以分鐘表示的保留時間1＝2-噻吩甲酰基2＝稠合的環(huán)給出萘基3.P＝2-甲?；?1-甲基吡咯-4-基羰基4.A＝2-氨基-5-氯苯基在實施例35-108中制備的化合物如下。實施例354-[4-(4-氨基-7-并丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苯甲醛實施例364-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苯乙酮實施例374-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苯甲醛實施例384-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮實施例394-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲醛實施例402’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-三氟甲基苯丙酮實施例412’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3’-三氟甲基苯乙酮實施例422-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-甲?；?6-二甲基氨基芐腈實施例432-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苯甲醛實施例442’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4’-甲氧基苯乙酮實施例452-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯苯甲醛實施例462’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-氟苯乙酮實施例472’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基苯乙酮實施例482-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-甲氧基苯甲醛實施例492’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯丙酮實施例502-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟苯甲醛實施例512’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮實施例522-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲醛實施例534’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基苯丙酮實施例544-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基2-噻吩基-酮實施例554’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-三氟甲基苯乙酮實施例564-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基苯甲醛實施例574’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-1’-萘乙酮實施例584-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-甲氧基苯甲醛實施例592-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基苯丙酮實施例602-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基苯乙酮實施例612-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基苯乙酮實施例622-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯-5-甲基苯乙酮實施例632-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苯甲醛實施例644-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲?；?1-甲基吡咯-2-醛實施例654’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-(甲磺?；?苯乙酮實施例665-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-1-二氫茚酮實施例672-氨基-2’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-氯二苯酮實施例682’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苯乙酮實施例694-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基芐腈實施例704-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯芐腈實施例714-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-氯芐腈實施例724-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟芐腈實施例734-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐腈實施例742-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-甲基苯硫基)芐腈實施例752-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-吡啶硫基)芐腈實施例76{3-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-氰基苯硫基)乙酸甲酯實施例772-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基芐腈實施例782-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基芐腈實施例792-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(吡咯-1-基)芐腈實施例802-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基芐腈實施例812-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐腈實施例825-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-硝基苯甲醛實施例834-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-硝基苯基甲基砜實施例841-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-硝基-4-三氟甲基苯實施例854’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-氯苯乙酮實施例864’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-甲基苯乙酮實施例877-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-苯基二氫茚-1-酮實施例882-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-三氟甲基苯乙酮實施例891-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-9-芴酮實施例906-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3，4-二甲氧基苯甲醛實施例912-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基苯乙酮實施例922-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-氧代吖庚因-3-基氨基)芐腈實施例932-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5基)苯氧基]-6-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基芐腈實施例942-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-咪唑-1-基)丙基氨基]芐腈實施例952-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-[2-(4-吡啶基)乙基氨基]芐腈實施例962-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-噻吩基甲基氨基)芐腈實施例972-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-氰基哌啶-1-基)芐腈實施例982-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-吡啶基甲基氨基)芐腈實施例992-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-甲基苯氧基)芐腈實施例1002-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-硫雜嗎啉代芐腈實施例1012-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-[(3-二甲基氨基)丙基氨基]芐腈實施例1022-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)芐腈實施例1032-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-甲氧基丙基氨基)芐腈實施例1042-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-二甲基氨基芐腈實施例1052-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基芐腈實施例1062-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-氟芐腈實施例1071-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-硝基-2-三氟甲基苯實施例1081-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-氯-2-硝基-4-三氟甲基苯通過下述-般方法制備實施例109-137的化合物。一般方法在表J中列出的羰基化合物(大約50mg)被溶于甲醇(2ml)，然后加入聚合物支載的硼氫化鈉[在Amberlite上；IRA-400；每克樹脂2.5mmol硼氫化鈉；2當(dāng)量(50mg原料，0.106至0.1345mmol)]。
將混合物在室溫振動(軌道振動)24小時，然后過濾，并用甲醇(2×1ml)洗滌樹脂，將濾液蒸發(fā)，分析殘余物。所得的產(chǎn)物列于表K。HPLCRT是以分鐘表示的保留時間。 表K產(chǎn)物
1-Th＝噻吩基2＝稠合的環(huán)給出萘基在表K中制備的化合物列于如下實施例1094-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基芐基醇實施例1104-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯-α-甲基芐基醇實施例1114-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯芐基醇實施例1124-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮實施例1134-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐基醇實施例1142’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-三氟甲基-α-乙基芐基醇實施例1152’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3’-三氟甲基-α-甲基芐基醇實施例1162-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-羥甲基-6-(二甲基氨基)芐腈實施例1172-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基芐基醇實施例1182’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4’-甲氧基-α-甲基芐基醇實施例1192-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯芐基醇實施例1202’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-氟-α-甲基芐基醇實施例1212’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基-α-甲基芐基醇實施例1222-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-甲氧基芐基醇實施例1232’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-乙基芐基醇實施例1242-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟芐基醇實施例1252’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-甲基芐基醇實施例1262-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐基醇實施例1274’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基-α-乙基芐基醇實施例1284-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-(2-噻吩基)芐基醇實施例1294’-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-三氟甲基-α-甲基芐基醇實施例1304-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基芐基醇實施例1311-{1-4-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]萘基}乙醇實施例1324-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-甲氧基芐基醇實施例1332-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基-α-乙基芐基醇實施例1342-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基-α-甲基芐基醇實施例1352-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基-α-甲基芐基醇實施例1362-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯-5-甲基-α-甲基芐基醇實施例1372-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基芐基醇列于表L中的實施例化合物通過式(AL)的醛與二乙胺在Na(OAc)3BH存在下反應(yīng)，給出式(AM)的化合物而制備。起始的醛通過在表中給出的較早的實施例中制備。 一般方法該醛用1ml的THF(50ml)和二乙胺(2ml)的儲存溶液[相對于40μl二乙胺]處理，并在隔膜密封管中于室溫1小時。往各反應(yīng)物中加入Na(OAc)3BH(20mg±2mg)，然后用氮氣沖洗，再加蓋，并在室溫放置24小時。往各酮反應(yīng)中加入溶于100ml THF的乙酸溶液(3ml)，并在室溫放置過周末。通過加入飽和碳酸鈉水溶液(1ml)淬滅反應(yīng)，并通過振動加蓋的試管萃取到二氯甲烷(2ml)中，收集，蒸發(fā)。對所有產(chǎn)物進行LCMS，在各種情況下找到靶塊。產(chǎn)物 表L
1.p＝1-甲基-2-(二乙基氨基甲基)吡咯-3-羰基在表L中制備的化合物列于如下。實施例1384-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲酰基-1-甲基-2-(二乙基氨基甲基)吡咯實施例1395-[4-(4-二乙基氨基甲基-2-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1405-[4-(4-二乙基氨基甲基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1412-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-二乙基氨基甲基-6-(二甲基氨基)芐腈實施例1425-[4-(2-二乙基氨基甲基-6-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1435-[4-(2-二乙基氨基甲基-5-甲氧基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1445-[4-(2-二乙基氨基甲基-6-氟苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1455-[4-(2-二乙基氨基甲基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1465-[4-(4-二乙基氨基甲基-3-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1475-[4-(4-二乙基氨基甲基-5-甲氧基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1485-[4-(4-二乙基氨基甲基-4，5-二甲氧基苯氧基)苯基]-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺通式Q實施例149至158的化合物通過式(AL2)的化合物與式(AM2)的胺如下面圖解所示的用在-般方法中概述的工藝反應(yīng)而制備，其中R100如前所述。所得的產(chǎn)物示于表Q。 一般方法Q將醛(440mg)的THF(11ml)貯備溶液等量分在11個隔膜密封的小瓶中。各反應(yīng)(含有40mg的CHO，0.1075mmol)用過量的列于表Q中的胺(3-10摩爾當(dāng)量)和Na(OAc)3BH(113mg；0.5375mmol)處理，并在室溫放置48小時?；旌衔镉蔑柡吞妓徕c水溶液(1ml)淬滅并振動1小時，萃取到二氯甲烷(3ml)中，用Empore筒分離。使有機層在室溫蒸發(fā)過夜，殘余物溶于乙酸乙酯(2ml)并用2N鹽酸(1ml)萃取并渦旋混合。酸層被吸出，用乙酸乙酯(2×1ml)洗滌，吸出操作幾次，用4N氫氧化鈉堿化?；旌衔镉靡宜嵋阴?2ml)萃取，渦旋混合/吸出分離，并用水(2×1ml)洗滌。最終的乙酸乙酯層通過小EMPORE筒(cartridge)分離，并蒸發(fā)至干。表Q
在表Q制備的化合物如下實施例1494-{4-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}哌嗪-1-羧酸乙酯實施例1501-{[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}哌啶-2-羧酸乙酯實施例151N-{4-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}氨基乙酸乙酯實施例152N-{2-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基甲基}-2-氨基乙醇實施例1537-異丙基-5-[4-(2-二甲基氨基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1547-異丙基-5-[4-(2-(2-噻唑基氨基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1557-異丙基-5-[4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1567-異丙基-5-[4-(2-嗎啉代甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1577-異丙基-5-[4-(2-哌啶子基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺實施例1587-異丙基-5-[4-(2-吡咯烷子基(pyrrolodino)甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺在實施例35-158中的LCMS所用的條件在下面給出。實施例35-52，64-84和109-126柱Peco R Activity 3mm×3×m C18-PK/5(Perkin Elmer)流動相0.1M醋酸銨緩沖液[pH 4.55]乙腈(梯度-如下)條件 10-100％乙腈5分鐘100％腈1分鐘100-10％腈2分鐘(總分析時間8分鐘)波長范圍 250-320nm流速 1ml/分鐘注射體積 20μlMS方法 APCI11H離子化APcI+ve/-ve質(zhì)量范圍 100-700m/z實施例53-63，85-108和126-137柱5μl Hypersil 100×2.1mm BDS C18流動相0.1M醋酸銨緩沖液[pH4.55]乙腈(梯度-如下)條件 10-100％腈8分鐘100-10％乙腈3分鐘(總分析時間11分鐘)波長范圍 250-320nm流速 1ml/分鐘注射體積 20°μlMS方法 APCI11H離子化APcI+ve/-ve質(zhì)量范圍 100-700m/z實施例138-158柱5μl Hypersil 100×2.1mm BDS C18流動相0.1M醋酸銨緩沖液[pH 4.55]乙腈(梯度-如下)條件 10-100％乙腈8分鐘100％乙腈1分鐘100-10％腈2分鐘
(總分析時間11分鐘)波長范圍 250-320nm流速 1ml/分鐘注射體積 20°μlMS方法 APCI11H離子化 APcI+ve/-ve質(zhì)量范圍 100-700m/z實施例1597-異丙基-5-(4-(嘧啶-2-基氧基)苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺a)攪拌下，將碘(52.9g)加入4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(29.1g，J.Chem.Soc.1960，131)的N，N-二甲基甲酰胺(400ml)溶液中。往冷卻的混合物中分批加入氫氧化鉀小丸(31.9g)，使反應(yīng)混合物的溫度保持在20℃左右，該混合物在室溫攪拌2小時。以穩(wěn)定的流量加入硫代硫酸鈉溶液(900ml 10％水溶液)，通過外部冷卻保持溫度在30℃?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?，將合并的萃取液干燥，過濾并減壓蒸發(fā)，給出的殘余物被加入水(1L)，并用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液被干燥并蒸發(fā)，給出的固體用乙酸乙酯重結(jié)晶。所得的固體與甲醇(800ml)一起攪拌，過濾除去不溶物。將濾液蒸發(fā)至干，給出淺黃色固體，鑒定為4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶，m.p.219-221℃b)在0℃，攪拌下，氮氣氛中將4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(10.0g，見實施例17)分批加入氫化鈉(1.6g在礦物油中60％的分散液)的N，N-二甲基甲酰胺(250ml)懸浮液。加完后，使混合物溫?zé)嶂潦覝兀?dāng)沒有氣體逸出時，滴加異丙基溴(34.0ml)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后在外部冰冷的情況下加入水(300ml)淬滅。混合物用乙酸乙酯(3×300ml)洗滌，合并的有機層用水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出4-氯-5-碘-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶黃色固體，m.p.116-118℃。其結(jié)構(gòu)被1H NMR證實。
c)將4-氯-5-碘-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.8g)，4-甲氧基苯硼酸(1.32g)，二(三苯膦)氯化鈀(II)(625mg)，甲苯(85ml)，乙醇(11ml)，水(22ml)和碳酸氫鈉(2.2g)的混合物在氮氣中于105℃加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，然后分配在乙酸乙酯(100ml)和食鹽水(100ml)之間。分出有機層，水層用乙酸乙酯(2×50ml)洗滌。合并的有機層用水洗滌，干燥，過濾并減壓蒸發(fā)，給出黑色油狀物，冷卻時固化。此物通過快速硅膠柱層析純化，用環(huán)己烷/乙酸乙酯(7∶3)作流動相。合并所需的級分并減壓濃縮，給出黃色油狀物，放置固化，給出4-氯-7-異丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其結(jié)構(gòu)被1HNMR證實。
d)將4-氯-7-異丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.6g)，濃氨水(80ml，S.G..880)和1，4-二噁烷(80ml)的混合物在壓力器中于120℃加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑，給出的固體被分配在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之間。水層用乙酸乙酯萃取，合并的有機層用水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出4-氨基-7-異丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其結(jié)構(gòu)被1HNMR證實。
e)在-10℃，氮氣中，攪拌下將三溴化硼(14.4ml的1M二氯甲烷溶液)滴加到4-氨基-7-異丙基-5-(4-甲氧基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.35g)的二氯甲烷(100ml)溶液中。反應(yīng)混合物被溫?zé)嶂?℃，并在此溫度攪拌1小時。在-10℃再加入三溴化硼(9.6ml的1M二氯甲烷溶液)，反應(yīng)混合物被溫?zé)嶂?℃，并在此溫度攪拌1小時。通過滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)淬滅反應(yīng)混合物?；旌衔锉环胖眠^夜并分出二氯甲烷層。過濾除去中間的不溶物，干燥給出4-氨基-5-(4-羥基苯基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其結(jié)構(gòu)被1HNMR證實。
f)4-氨基-5-(4-羥基苯基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.05g)，2-氯嘧啶(23mg)，碳酸鉀(39mg)和二甲基甲酰胺(3ml)在振動下于90℃加熱26.5小時。然后將混合物在室溫再振動24小時。反應(yīng)混合物被分配在乙酸乙酯(20ml)和2M氫氧化鈉溶液(20ml)之間。分出水層并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液被合并，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的固體通過快速硅膠柱層析純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流動相，給出的固體通過液相色譜LCMS鑒定為7-異丙基-5-(4-(嘧啶-2-基氧基)苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺。其結(jié)構(gòu)被1HNMR證實。實施例1604-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛a)將4-氯-5-碘-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.5g)，4-甲酰基苯硼酸(0.48g)，二(三苯膦)氯化鈀(II)(112mg)，甲苯(15ml)，乙醇(2ml)，水(4ml)和碳酸氫鈉(0.40g)的混合物于105℃加熱8小時。使混合物冷卻至室溫，然后用鹽水稀釋，并用乙酸乙酯萃取，給出的油狀物通過快速硅膠柱層析純化，用從20％至40％逐步增加的乙酸乙酯/環(huán)己烷作流動相，給出4-(4-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛，m.p.138-140℃。
b)將步驟a)的產(chǎn)物(2.7g)，濃氨水(75ml，S.G.0.880)和1，4-二噁烷(50ml)的混合物在壓力器中于120℃加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。將水加入，混合物用乙酸乙酯萃取，給出的固體用乙酸乙酯研制，過濾，給出的固體被LCMS鑒定為4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛，m.p.198-200℃。實施例161∝-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]芐基醇在-78℃，氮氣中，攪拌下將苯基氯化鎂(1.5ml的2MTHF溶液)滴加到4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛(0.25g)的甲苯/THF(1∶1，16ml)溶液中。加完后，使混合物溫?zé)嶂?℃，并在此溫度保持40分鐘。在0℃通過滴加飽和氯化銨溶液(4ml)淬滅反應(yīng)。使混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒃诖藴囟确胖眠^夜。減壓除去溶劑，所得的固體殘余物用水洗滌并過濾。殘余物用熱乙酸乙酯研制，過濾收集，LCMS鑒定為∝-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]芐基醇，m.p.279-281℃。實施例1627-異丙基-5-(3-[(苯基-4-基)亞甲基]-2-羥基吲哚(oxindole))-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺將4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛(0.2g)，2-羥基吲哚(95mg)，哌啶(0.02ml)和乙醇(5ml)的混合物沸騰回流3小時?；旌衔锉焕鋮s至室溫，過濾收集形成的固體，用乙醇重結(jié)晶，給出7-異丙基-5-(3-[(苯基-4-基)亞甲基]-2-羥基吲哚)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺。實施例1635-[4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基芐基醇a)將5-溴-2-氟苯甲醛(20.0g)，苯酚(9.26g)，碳酸鉀(16.4g)和二甲基甲酰胺(200ml)的混合物在160℃加熱5小時?；旌衔锉焕鋮s，用水稀釋，然后用乙酸乙酯萃取，給出5-溴-2-苯氧基苯甲醛油狀物。
b)將步驟a)的產(chǎn)物(5.71g)，六甲基二錫(10.0g)，四(三苯膦)鈀(O)(1.5g)和甲苯(200ml)的混合物在氮氣中沸騰回流攪拌5小時?；旌衔锉焕鋮s并過濾，將濾液蒸發(fā)，給出的殘余物通過快速柱層析純化，用2.5-7.5％增加的乙醚中的b.p.40-60℃的石油醚作流動相，給出5-三甲基錫烷基-2-苯氧基苯甲醛。
c)將步驟b)的產(chǎn)物(2.0g)，4-氯-5-碘-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.99g)，三苯胂(0.235g)，和三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(0.4lg)和二甲基甲酰胺(20ml)的混合物在氮氣中于65℃加熱攪拌18小時。將混合物冷卻并加入水?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?，給出的殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用增加量的環(huán)己烷中的乙酸乙酯(5-20％)作流動相，給出5-[4-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基苯甲醛。
d)將步驟c)的產(chǎn)物(0.325g)，硼氫化鈉(32mg)和甲醇(5ml)的混合物在0℃攪拌30分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝?，并在此溫度攪?小時?；旌衔镉?0％冰醋酸(2ml)淬滅。減壓除去溶劑，往殘余物中加入水，然后用乙酸乙酯萃取，給出5-[4-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基芐基醇固體，m.p.157-159℃。
e)將步驟d)的產(chǎn)物(0.18g)，濃氨水溶液(20ml，sg 0.880)和1，4-二噁烷(20ml)的混合物在壓力器中于120℃加熱攪拌16小時?；旌衔锉焕鋮s，并分配在乙酸乙酯和水之間。蒸發(fā)乙酸乙酯萃取液，給出的油狀物通過快速柱層析純化，給出5-[4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基芐基醇，m.p.92-94℃。實施例1644-氨基-7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲腈(carbonitrile)a)將4-苯氧基苯乙酮(150.0g)溶于乙酸(2L)，并在50℃攪拌，同時分批加入吡啶鎓三溴化物(251.6g)。將該褐色的溶液加入水(3L)中，混合物用甲苯(1×800ml然后2×400ml)萃取。合并的甲苯萃取液用水洗滌，然后用碳酸氫鈉水溶液洗滌，直至泡騰停止。將合并的甲苯萃取液分出，干燥并過濾，直接用于下面的步驟b)。
b)在氮氣中，攪拌下將步驟a)所得的2-溴-4’-苯氧基苯乙酮的甲苯溶液加入環(huán)戊基胺(154ml)的甲苯(1L)溶液中，同時保持溫度低于5℃。然后將混合物在保持溫度低于10℃的情況下攪拌2.5小時，將混合物過濾。濾液通過滴加濃鹽酸(120ml)處理，同時保持溫度低于10℃。過濾收集沉淀，用丙-2-醇/乙醚(1∶1)研制，給出的固體在40℃真空干燥6.5小時，給出2-環(huán)戊基氨基-4’-苯氧基苯乙酮鹽酸鹽。
c)在氮氣中將步驟b)的產(chǎn)物(35.1g)加入丙二腈(9.5g)的甲醇(500ml)溶液中，然后在30分鐘內(nèi)滴加氫氧化鉀(17.0g)的水(75ml)溶液，同時保持溫度在0和5℃之間。將混合物沸騰回流2.5小時。再加入丙二腈(1.0g)的甲醇(10ml)溶液，混合物再沸騰回流3小時。使混合物在室溫放置18小時，然后減壓除去甲醇，殘余物保持在氮氣中。將殘余物溶于二氯甲烷(600ml)，用水洗滌，然后用食鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的褐色固體用乙醚研制，給出2-氨基-3-氰基-1-環(huán)戊基-4-(4-苯氧基苯基)吡咯，直接用于本實施例的下步。
d)將步驟c)的產(chǎn)物溶于甲酰胺(155ml)，N，N-二甲基甲酰胺(52ml)和甲酸(20.2ml)的混合物中，混合物在氮氣中于166℃的外溫下加熱4小時?；旌衔锉焕鋮s，倒入水(3.5L)，然后用乙酸乙酯3×1500ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的固體用乙醚研制并過濾，給出的固體用工業(yè)甲基化的酒精重結(jié)晶，給出7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.178-179。
e)將步驟d)的產(chǎn)物(3.7g)在氮氣中于無水的二甲基甲酰胺(120ml)中攪拌，同時在黑暗中于氮氣中分批加入N-溴代琥珀酰亞胺(1.8g)?；旌衔镌诤诎抵袛嚢?8小時，然后處理，給出6-溴-7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.161.5-162.5℃。
f)將步驟e)的產(chǎn)物(449mg)，氰化鋅(75mg)和N-甲基吡咯烷酮(10ml)的混合物用三(2-呋喃基)膦(63mg)處理，然后在氮氣中徹底除氧，加入三(二亞芐基丙酮)鈀(O)(45mg)?；旌衔锉患訜嶂?0℃，并保持在該溫度20小時。加入乙酸乙酯(20ml)，接著加入氨水溶液(20ml的2M溶液)。將混合物攪拌，然后分出乙酸乙酯層，水層再用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯層和洗出液被干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯作流動相，給出4-氨基-7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲腈，m.p.117.5-118.5℃。實施例1656-氨基甲基-7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺將前面實施例的產(chǎn)物(0.88lg)溶于溫?zé)岬囊掖?20ml)，該溶液被加入用氨飽和的乙醇(200ml)中。加入Raney鎳(2×1ml)，混合物在氫氣中振動6小時。加正壓，并周期性地從裝置中排空氣體。2小時后，容器被抽空幾次，并充入氫氣。再過2小時后，重復(fù)此過程。最后的混合物被振動1.5小時，然后過濾。將濾液蒸發(fā)，給出的固體用乙醚研制，過濾收集，給出的粗固體被溶于乙酸乙酯。分批加入馬來酸(0.2g)的乙酸乙酯溶液，直至不再形成沉淀。產(chǎn)生的混合物被溫?zé)岷脱兄?，然后冷卻16小時。過濾收集固體，給出6-氨基甲基-7-環(huán)戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.196.5-197.5℃。實施例1667-叔丁基-5-(N-甲?；?4-苯基氨基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶將7-叔丁基-5-(4-碘苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1.0g)，甲酰苯胺(1.0g)，無水碳酸鉀(1.0g)，碘化銅(I)(100mg)，銅粉(80mg)和N-甲基吡咯烷(5ml)的混合物在107℃于氮氣中攪拌22小時?；旌衔锉焕鋮s并加入水?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?，給出的殘余物通過逆向制備性HPLC純化，給出7-叔丁基-5-(N-甲?；?4-苯基氨基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶，m.p.163-164℃。實施例1673-{4-[4-氨基-7-叔丁基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}芐基醇以類似于前面實施例的方法，使7-叔丁基-5-(4-碘苯基)吡咯并[2，3-]嘧啶-4-基胺(392mg)與3-羥基芐基醇(372mg)反應(yīng)，給出3-{4-[4-氨基-7-叔丁基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]芐基醇。實施例168N-[2-[(4-氨基-7-異丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}將5-[4-(2-氨基苯氧基)苯基]-7H-異丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(43mg)，氰化鉀(11mg)，冰醋酸(7ml)和乙醇(3ml)的混合物在70℃加熱2小時。再加入冰醋酸(7ml)和氰化鉀(11mg)，并繼續(xù)在75℃加熱6小時。將混合物減壓蒸發(fā)。往殘余物中加入水，混合物用二氯甲烷萃取，給出N-[2-[(4-氨基-7-異丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}脲固體。實施例1697-(2-羥基乙基)-5-{4-[4-(2-羥基乙氧基)苯氧基]苯基}吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺通過5-{4-[4-(2-羥基)苯氧基]苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺與碳酸亞乙基酯在含有催化量的氫氧化鈉粉末的N，N-二甲基甲酰胺中于沸點反應(yīng)1小時制備7-(2-羥基乙基)-5-{4-[4-(2-羥基乙氧基)苯氧基]苯基}吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.166-166.5℃。在處理并通過快速硅膠柱層析純化后得到產(chǎn)物。實施例1705-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]二氫茚-1-醇通過按照實施例109至137的方法還原實施例32的產(chǎn)物，制備5-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]二氫茚-1-醇。實施例1716-氨基-2-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐腈按照實施例35至108的方法制備6-氨基-2-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]芐腈。實施例1722-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基芐腈按照實施例35至108的方法制備2-[4-(4-氨基-7-異丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基芐腈。實施例1737-異丙基磺酰基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺將5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1.57g)溶于干燥的二甲基甲酰胺(30ml)，并在攪拌下加入氫化鈉(0.22g在礦物油中的60％分散液)。將混合物攪拌30分鐘，然后加入異丙基磺酰氯(0.74g)，混合物在室溫下攪拌18小時。往混合物中加入水直至沒有沉淀產(chǎn)生。過濾收集固體，通過快速硅膠柱層析純化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流動相，給出7-異丙基磺?；?5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.162-162.5℃。實施例1747-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]雙環(huán)[3.3.0]辛-3-醇a)在0℃將硼氫化鈉(547mg)分批加入順式-雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3，7-二酮(2.0g)的甲醇(20ml)溶液中?；旌衔镌?℃攪拌1小時，然后溫?zé)嶂潦覝兀⑹蛊湓谑覝胤胖?8小時。混合物用2M氫氧化鈉溶液淬滅，然后減壓濃縮。將殘余物分配在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之間。分出水層并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液被干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的油狀物放置結(jié)晶，給出順式-雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3，7-二醇。
b)將步驟a)的二醇(0.8g)，吡啶(10ml)和對甲苯磺酰氯(1.17g)的混合物在0℃攪拌2小時，然后在室溫放置18小時。混合物被倒入5M鹽酸中，并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用2M鹽酸洗滌，然后干燥，過濾并蒸發(fā)，給出主要含有順式-7-甲苯磺酰氧基雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-醇的油狀物，直接用于本實施例的下步。
c)在氮氣中，于0℃攪拌下將5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(193mg)加入氫化鈉(52mg，在礦物油中的60％分散液)在二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物。混合物在室溫攪拌1小時，然后在攪拌下加入步驟c)的產(chǎn)物(190mg)?；旌衔锉粶?zé)嶂?0℃，然后在此溫度加熱6小時。將混合物冷卻至室溫，并分配在水和乙酸乙酯之間。分出乙酸乙酯層，水層用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液用水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，給出的油狀物通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯，然后用含有逐漸增加量的直到10％的甲醇的乙酸乙酯作流動相。收集合適的級分，合并和蒸發(fā)，給出的固體用冷乙醚洗滌，給出7-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]雙環(huán)[3.3.0]辛-3-醇，m.p.193-194℃。實施例1754-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]環(huán)己醇在攪拌下-次性將硼氫化鈉(500mg，13mmol)加入4-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]環(huán)己-1-酮(780mg，2.0mmol)的甲醇(500ml)溶液中，混合物在氮氣氛中攪拌1小時，然后放置過夜。減壓除去溶劑，殘余物分配在2M氫氧化鈉水溶液(100ml)和二氯甲烷(100ml)之間。分出有機層，水層再用二氯甲烷(2×100ml)萃取。合并的有機萃取液用水(150ml)洗滌，碳酸鉀干燥，并用Biotage 40S柱層析純化，用乙酸乙酯/三乙胺(98∶2至95∶5)和乙酸乙酯/乙醇(95∶5)作流動相，給出4-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]環(huán)己醇白色固體(750mg，1.9mmol)，熔點199-200deg.C.LC/MSHypersil BDS C18(100×2.1mm)0.1M醋酸銨/乙腈，10-100％乙腈，8分鐘)MH+401，tr＝4.12分鐘。實施例176N-[5-(4-氨基--7--環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯a)5-溴-2-甲氧基苯胺將4-溴-1-甲氧基-2-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮氣氛中加熱。加入鐵粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃的溫度下攪拌1小時。將混合物冷卻至室溫，然后加入水(100ml)，混合物用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉(3×25ml)洗滌，然后用食鹽水洗滌。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)濾液，給出殘余物。該物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脫劑，給出5-溴-2-甲氧基苯胺(2.0g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)6.76(s，1H)，6.71(d，1H)，6.61(d，1H)，4.99(bs，2H)，3.74(s，3H)；(TLC(庚烷/乙酸乙酯 1∶1)Rf0.5；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5m，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝13.33min.；MSMH+443.
b)N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2)將5-溴-2-甲氧基苯胺(1.50g，7.43mmol)，和重碳酸二叔丁基酯(1.95g，8.91mmol)在THF(20ml)中的混合物加熱回流20小時。混合物被冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。產(chǎn)生的油狀物通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶9)作洗脫劑，給出N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.19g)無色油狀物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.05(s，1H)，7.93(d，1H)，7，16(d，1H)，6.95(d，1H)，3.8(s，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 2∶8)Rf0.4；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨25min，1ml/min)tr＝21.8min.
c)N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(3)將N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.10g，3.64mmol)，二硼頻那醇酯(1.11g，4.37mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)配合物與二氯甲烷(1∶1)(0.09g，0.11mmol)和乙酸鉀(1.07g，10.9mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物在80℃于氮氣氛中加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。將二氯甲烷(20ml)加入殘余物中，在硅膠墊上濾除產(chǎn)生的固體。將濾液濃縮給出黃色油狀物，將其通過快速硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶8)作流動相，給出N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.96g)
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.03(s，1H)，7.86(s，1H)，7.35(d，1H)，7.0(d，1H)，3.82(s，3H)，1.46(s，9H)，1.28(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷2∶8)Rf＝0.35；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5um，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨25min，1ml/min)tr＝22.8mmd)N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4)將4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.524g，1.5mmol)，四(三苯膦)鈀(O)(0.07g，0.06mmo)和碳酸鈉(0.265g，2.5mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中于80℃在氮氣氛中加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。殘余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有機萃取液用水(3×20ml)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，將濾液減壓濃縮為油狀物。將其用快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(5∶1)作流動相，給出N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，7.93(s，1H)，7.87(m，2H)，7.17(d，1H)，7.06(d，1H)，5.21(m，1H)，3.86(s，3H)，1.65-2.25(m，8H)，1.45(s，9H)；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨25min，1ml/min)tr＝24.25min.MSMH+443.
e)5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將N-(5-(氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g，0.735mmol)的二氯甲烷(14ml)溶液冷卻至0℃，然后用三氟乙酸(1.4ml)處理。該溶液在0℃攪拌5分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝夭嚢?6小時。減壓除去溶劑，殘余物分配在二氯甲烷(30ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)之間。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸發(fā)為泡沫體。此物被溶于二噁烷(4ml)和濃(28-30％)氫氧化銨(4ml)，產(chǎn)生的溶液在120℃于密封的壓力管中加熱20小時。蒸發(fā)溶劑，殘余物通過制備性C18 RP-HPLC純化，凍干后給出5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(85mg)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.21(s，1H)，6.87(d，1H)，6.74(s，1H)，6.58(d，1H)，5.06(1H，m)，4.87(bs，2H)，3.8(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝11.87min.；MSMH+324.
f)N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯將5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.124mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液和吡啶(1ml)冷卻至0℃，然后用氯甲酸芐基酯(32mg，0.186mmol)處理，同時保持溫度低于5℃。將溶液在0℃再攪拌1小時，然后減壓除去溶劑。通過制備性RP-HPLC純化，然后凍干給出N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯(25mg)白色粉末1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.11(s，1H)，7.75(s，1H)，7.1-7.4(m，8H)，6.2(bs，2H)，5.15(s，2H)，5.07(m，1H)，3.8(s3H)，1.6-2.2(m，8H)，RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.63min.；MSMH+458.實施例177N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸芐基酯a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(2)所述的方法從5-溴-2-吡啶胺制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(s，1H)，8.49(d，1H)，7.93(dd，1H)，7.78(d，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.28；RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.50min.
b)N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，6.12mmol)，六甲基二錫(2.0g，6.12mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(0.424g，0.367mmol)在乙二醇二甲基醚(30ml)中的混合物在80℃于氮氣氛中加熱15小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。將殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脫劑，給出N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.11g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.98(s，1H)，8.2(t，1H)，7.74(m，2H)，1.47(s，9H)，0.30(t，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯95∶5)Rf0.2；MSMH+359.
c)N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯將4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.25g，0.72mmol)，N-[5-(1，1，1-三甲基錫烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，1.08mmol)，三(trwas)(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(0.033g，0.076mmol)和三苯胂(0.055mg，0.18mmol)和在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的混合物在氮氣氛中于65℃加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。給出的殘余物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(75∶25)作洗脫劑，給出N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.83(s，1H)，8.68(s，1H)，8.40(d，1H)，8.02(s，1H)，7.85-7.93(m，2H)，5.21(m，1H)，1.65-2.25(m，8H)，1.49(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯 8∶2)Rf0.18；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/mm)tr＝21.68min.
d)5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺將N-[5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g，0.315mmol))的二氯甲烷(5.5ml)溶液冷卻至0℃，然后用三氟乙酸(0.6ml)處理。溶液在0℃攪拌5分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝兀⑶以贁嚢?8小時。減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物分配于二氯甲烷(30ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)之間。有機層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，給出5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(92mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)tr＝10.73min；MSMH+314e)5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺將5-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(92mg，0.291mmol)溶于二噁烷(2ml)和濃(28-30％)氫氧化銨(2ml)，產(chǎn)生的溶液在封管內(nèi)于120℃加熱24小時。蒸發(fā)溶劑給出5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.)tr＝6.33min；MSMH+295f)N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯將5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg，0.29mmol)的二氯甲烷(1.5ml)溶液和吡啶(1.5ml)冷卻至0℃，然后用氯甲酸芐基酯(75mg，0.44mmol)處理，同時保持溫度低于5℃。將溶液溫?zé)嶂潦覝兀缓髷嚢?小時。加入氯甲酸芐基酯(75mg，0.44mmol)，混合物再攪拌24小時。加入氯甲酸芐基酯(150mg，0.88mmol)和吡啶(1ml)，混合物再攪拌24小時。減壓除去溶劑，然后將殘余物分配在乙酸乙酯(25ml)和水(10ml)之間。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)濾液給出殘余物。通過制備性RP-HPLC純化，然后用乙醚研制給出N-[5-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯(21mg)白色粉末1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.33(s，1H)，8.36(d，1H)，8.14(s，1H)，7.91(d，1H)，7.84(d，1H)，7.33-7.47(m，6H)，6.11(bs，2H)，5.2(s，2H)，5.06(m，1H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝16.22min；MSMH+429.實施例178N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯a)4-溴-3-甲氧基苯胺將1-溴-2-甲氧基-4-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮氣氛中加熱。加入鐵粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃的溫度下攪拌1小時。將混合物冷卻至室溫，然后加入水(100ml)，混合物用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉(3×25ml)洗滌，然后用食鹽水洗滌。有機溶液用硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)濾液，給出殘余物。該物通過快速硅膠柱層析純化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脫劑，給出4-溴-3-甲氧基苯胺(1.22g)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.1(d，1H)，6.31(s，1H)，6.1(d，1H)，5.27(bs，2H)，3.72(s，3H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.33；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝11.05min.
b)N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以類似于化合物(2)的方法從4-溴-3-甲氧基苯胺制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.46(s，1H)，7.4(d，1H)，7.35(s，1H)，6.95(d，1H)，3.78(s，3H)，1.48(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.37；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.60min.
c)N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯以類似于化合物(3)的方法從N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.44(s，1H)，7.41(d，1H)，7.17(s，1H)，7.01(d，1H)，3.68(s，3H)，1.48(s，9H)，1.24(s，12H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.28；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝18.83min.
d)N-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以類似于化合物(4)的方法，從N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制備該化合物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.41(s，1H)＜8.59(s，1H)，7.72(s，1H)，7.33(s，1H)，7.15(d，1H)，7.04(d，1H)，5.17(m，1H)，3.66(s，3H)，1.6-2.2(m，3H)，1.49(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18.5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋 酸銨 25min，1ml/min)tr＝21.22min；MSMH+443.
e)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于將化合物(4)轉(zhuǎn)化為化合物(6)的方法，從N-[4-(4-氯-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制備該化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.87(s，1H)，8.08(s，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.09-7，18(m，3H)，5，79(bs，2H)，5.18(s，2H)，5.04(m，1H)，3.7(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸銨 25min，1ml/min)tr＝16.87min；MSMH+458.實施例179N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯a)4-[{[7-環(huán)戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基)(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基樹脂球狀(Rink)酰胺樹脂[負載0.66mmol/g的4-(2’，4’-二甲氧基苯基-Fmoc氨基甲基)苯氧基樹脂](6.55g，4.32mmol)通過用N，N-二甲基甲酰胺(2×2min)，哌啶的20％N，N-二甲基甲酰胺溶液(1×5min，1×15min)，N，N-二甲基甲酰胺(5×2min)，二氯甲烷(3×2min)，然后甲醇(3×2min)洗滌而脫保護。該樹脂在40℃減壓干燥。脫保護的樹脂，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.80g，5.19mmol)，二甲亞砜(100ml)，和N，N-二異丙基乙胺(4.5ml)在100℃加熱3天，冷卻至室溫，然后過濾收集樹脂，并用N，N-二甲基甲酰胺洗滌。然后將樹脂與乙酸(0.13g，2.16mmol)，四氟硼酸0-苯并噻唑-1-基-N，N，N’N’-四甲基脲(0.69g，2.16mmol)，N，N-二異丙基乙胺(0.56g，4.32mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30ml)一起攪拌30分鐘。過濾收集樹脂，并用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷和甲醇洗滌。將樹脂減壓干燥至恒重(6.25g)。將樹脂，二硼頻那醇酯(1.11g，4.37mmol)，醋酸鉀(0.822g，8.39mmol)和四(三苯膦)鈀(0.24g，0.21mmol)在二甲亞砜(125ml)中，在氮氣氛中于85℃加熱17小時。過濾收集樹脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，乙酸乙酯，然后乙醚洗滌。將樹脂減壓干燥至重5.49克。
b)N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯將4-[{[7-環(huán)戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基樹脂(0.5g，0.254mmol)，4-溴-2-氟苯胺(0.484g，2.54mmol)，四(三苯膦)鈀(0.044g，0.038mmol)，2M磷酸鉀水溶液(1.27ml，2.54mmol)和二甲亞砜(10ml)的混合物在85℃加熱18小時。將混合物冷卻，過濾收集樹脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗滌。然后使樹脂第二次處于上述偶合條件。將樹脂懸浮于二氯甲烷(2ml)和吡啶(2ml)，然后將混合物冷卻至0℃，并用氯甲酸芐基酯(0.44g，2.6mmol)處理。在0℃攪拌1小時后，使混合物溫?zé)嶂潦覝?8小時。過濾收集樹脂，并用5％三氟乙酸的二氯甲烷(10ml)溶液處理30分鐘。濾除樹脂，產(chǎn)生的濾液被減壓蒸發(fā)，給出的殘余物通過制備性C-18 RP-HPLC純化，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸芐基酯(約10mg)RP-HPLC(HypersilHS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min)tr＝11.47min；MSMH+446。實施例180N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于PH 454098所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝12.07min；MsMH+496實施例181N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氰基苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于PH454098所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝10.93min；MsMH+453實施例1825-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-{[(芐氧基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯以類似于PH 454098所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝13.28min；MsMH+486實施例183N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲基苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于PH454098所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝11.25min；MsMH+442實施例184N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]氨基甲酸芐基酯以類似于PH 454098所述的方式制備該化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸銨，10分鐘，1ml/min.)tr＝11.27min；MsMH+428實施例185N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(27mg，0.083mmol)溶于二氯甲烷(0.8ml)。加入吡啶(0.8ml)，接著加入苯基甲磺酰氯(19mg，0.105mmol)。攪拌過夜后，加入另外19mg苯磺酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺(9mg，0.0188mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.28(m，2H)，3.85(s，3H)，4.38(s，2H)，5.23(m，3H)，6.08(bs，1H)，6.99(m，2H)，7.27，(m，2H)，7.33(m，3H)，7.58(d，J＝8.17Hz，1H)，8.34(s，1H).LC/MS MH+＝478實施例186N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(28mg，0.086mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接著加入2-苯基乙酰氯(14μL，0.105mmol)。攪拌過夜后，加入另外14μL苯基乙酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺(7mg，0.0158mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.77(s，3H)，3.79(s，2H)，5.21(m，1H)，5.56(bs，2H)，6.89(s，1H)，6.99(s，1H)，7.05(d，J＝8.22，1H)，7.36(m，5H)，7.81(s，1H)，8.27(s，1H)，8.43(d，J＝8.23Hz，1H).LC/MS MH+＝442.實施例187N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺將5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(31mg，0.096mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接著加入2-(2-噻吩基)乙酰氯(14μL，0.113mmol)。攪拌過夜后，加入另外14μL 2-(2-噻吩基)乙酰氯，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。除去溶劑，殘余物通過制備性薄層色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫，給出N1-[4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H- 實施例182 實施例183 實施例184 實施例185 實施例186實施例187
制備吡咯并嘧啶芳基磺酰胺的一般工藝往0.225M 5-(4-氨基-3-氟苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-氨基(pyrimidin-4-amino)的吡啶溶液中加入1當(dāng)量取代的芳基磺酰氯。此混合物在45℃加熱混合24小時。產(chǎn)物從反應(yīng)混合物中通過制備性RP-HPLC(Hypersil BDS C18，(5μm包裝；100×21.2mm)用梯度的0.05M，pH4.5醋酸銨水溶液/乙腈(0-100％，25分鐘，流速25ml/分鐘)純化。
實施例188-249的化合物通過上述一般方法制備。各實施例化合物的通過質(zhì)譜(MH+)測定的分子量，和以分鐘表示的HPLC保留時間(RT)在下面列出。 實施例188 實施例189MH+469.9MH+469.92RT 3.03 RT 2.99 實施例190實施例191MH+485.89 MH+465.9RT 3.12RT 3.11 實施例192 實施例193MH+501.97 MH+519.88RT 3.22 RT 3.15 實施例194 實施例195MH+519.84MH+561.73RT 3.19 RT 3.2 實施例196 實施例197MH+555.77 MH+476.89RT 3.45 RT 2.85 實施例198 實施例199MH+469.9 MH+496.93RT 2.92 RT 3.65 實施例200 實施例201MH+496.94 MH+485.87RT 3.66 RT 3.79 實施例202實施例203MH+496.9 MH+487.9RT 3.65 RT 3.55 實施例204 實施例205MH+535.9 MH+530.92RT 3.82RT 3.43 實施例206 實施例207MH+541.95 MH+465.89RT 3.35RT 3.45 實施例208 實施例209MH+602.99 MH+503.85RT 3.56 RT 3.48 實施例210 實施例211MH+503.88 MH+483.9RT 3.53 RT 3.47 實施例212 實施例213MH+567.74 MH+577.88RT 3.53 RT 3.65 實施例214 實施例215MH+603.05 MH+501.93RT 3.4RT 3.16 實施例216 實施例217MH+564.96 MH+577.88RT 3.34RT 3.5 實施例218 實施例219MH+545.01 MH+545.04RT 3.5 RT 3.58 實施例220 實施例221MH+487.9 MH+499.92RT 3.43 RT 3.46 實施例222 實施例223MH+510.88 MH+505.93RT 3.41 RT 3.46 實施例224 實施例225MH+553.96 MH+587.97RT 3.55 RT 3.6 實施例226 實施例227MH+553.9MH+487.9RT 3.88 RT 3.6 實施例228 實施例229MH+587.9 MH+545.8RT 3.9 RT 3.93 實施例230 實施例231MH+615.8 MH+487.9RT 4.02RT 3.6 實施例232 實施例233MH+549.8 MH+533.8RT 3.82 RT 3.89 實施例234實施例235MH+519.9 MH+555.8RT 3.74 RT 3.93 實施例236 實施例237MH+496 MH+514RT 3.49RT 3.92 實施例238 實施例239MH+519.9 MH+528RT 3.78RT 3.84 實施例240實施例241MH+502 MH+532RT 3.66 RT 3.85 實施例242實施例243MH+4.16 MH+3.97RT 4.16 RT 3.97 實施例244 實施例245MH+547.9 MH+503RT 2.72RT 3.64 實施例246 實施例247 實施例248 實施例249實施例250-269的一般合成往5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(或5-(4-氨基-3-氟苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺或5-(4-氨基-3-氯苯基)-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺)的0.225M吡啶溶液中加入1當(dāng)量取代的芳基磺酰氯。此混合物在45℃加熱混合24小時。產(chǎn)物從反應(yīng)混合物中通過制備性C18RP-HPLC純化。在Hypersil HyPurity Elite C18柱，((5μm，200A)，250×4.6mm)；用線性梯度的25％-100％乙腈/0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.上得到在表中列出的分析性RP-HPLC RT。
注意，當(dāng)引入反應(yīng)活性取代基時，需要適當(dāng)?shù)谋Ｗo基操作。
實施例250-269的化合物通過上述一般方法制備。各實施例化合物的通過質(zhì)譜(MH+)測定的分子量，以分鐘表示的HPLC保留時間(RT)在下面列出。 實施例250 實施例251MH+478.1 MH+494.1RT 13.9 RT 15.68 實施例252 實施例253MH+498.0 MH+514.0RT 15.12 RT 17.7 實施例254實施例255MH+464.1 MH+480.1RT 10.4 RT 11.2通過用在二氯甲烷中的BBr3處理從實施例251制備 實施例256 實施例257MH+482.1MH+542.1，544.0RT 15.65RT 17.45 實施例258 實施例259MH+509.2 MH+557.2RT 15.8 RT 19.55 實施例260 實施例261MH+477.1MH+512.0RT 11.6 RT 17.62通過實施例258的Pd-C加氫制備 實施例262 實施例263MH+506.0 MH+502.0RT 9.93 RT 18.23 實施例264 實施例265MH+502.0 MH+502.0RT 18.02 RT 17.6 實施例266 實施例267MH+507.1 MH+486.1RT 12.2 RT 15.68通過用DMF中的EDC，HOAt，ME2NH處理實施例262制備 實施例268實施例269MH+486.1 MH+486.1RT 16.35 RT 16.7化合物270-282用下列方法合成。途徑1a)適當(dāng)?shù)匿宕蓟酋０?0.735mmol)，二頻那醇合乙硼烷(bispinacolatodiborane)(0.225g，0.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)配合物(與二氯甲烷(1∶1))(2mg，0.002mmol)和乙酸鉀(0.216g，2.205mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的混合物在100℃于氮氣氛中加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。將二氯甲烷(20ml)加入殘余物中，在硅膠墊上濾除產(chǎn)生的固體。將濾液濃縮給出黃色油狀物，將其通過快速硅膠柱層析純化，給出磺酰氨基芳基硼酸酯。
b)將4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，磺酰氨基芳基硼酸酯(1.5mmol；從上面步驟a)所得)，四(三苯膦)鈀(O)(0.07g，0.06mmo)，碳酸鈉(0.265g，2.5mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮氣氛中加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。殘余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有機萃取液用水(3×20ml)洗滌，然后硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮為油狀物，將其用快速硅膠柱層析純化給出相應(yīng)的磺酰氨基芳基4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶。
c)4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶(典型地10-20mmol；從上面1(b)得到的)與二噁烷(100ml)和濃氫氧化銨(100ml)在壓力器中混合?；旌衔镌?20℃加熱過夜。除去溶劑，殘余物通過RP-HPLC純化，給出所需的最終4-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶產(chǎn)物。途徑2a)適當(dāng)?shù)匿宕桨?2.4mmol)，二頻那醇合乙硼烷(0.735g，2.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)配合物(與二氯甲烷(1∶1))(59mg，0.072mmol)和乙酸鉀(0.707g，7.205mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的混合物在100℃于氮氣氛中加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，然后減壓除去溶劑。將甲苯(20ml)加入殘余物中，混合物用水(25ml)洗滌。有機相用硫酸鎂干燥，真空濃縮，通過快速硅膠柱層析純化，給出苯胺基硼酸酯。
b)將苯胺基硼酸酯(1.01mmol；從上面2(a)得到的)，4-氯-7-環(huán)戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.24g，0.67mmol)，四(三苯膦)鈀(O)(0.04g，0.033mmo)和碳酸鈉(0.215g，2.03mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮氣氛中加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，減壓除去溶劑。殘余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之間。分出有機層，水層再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有機萃取液用水(3×20ml)洗滌，然后硫酸鎂干燥，過濾。將濾液減壓濃縮為油狀物，將其用快速硅膠柱層析純化給出相應(yīng)的4-氯-7-環(huán)戊基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。
c)4-氯-7-環(huán)戊基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.201mmol；從上面2(b)得到的)，芳基磺酰氯(0.402mmol)和吡啶(1.005mmol)在二氯甲烷中的混合物在室溫攪拌16小時。除去溶劑，磺酰氨基4-氯-吡咯并嘧啶產(chǎn)物通過RP-HPLC純化。
d)磺酰氨基4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶(典型地10-20mmol；從上面2(c)得到的)與二噁烷(100ml)和濃氫氧化銨(100ml)在壓力器中混合?；旌衔镌?20℃加熱過夜。除去溶劑，殘余物通過RP-HPLC純化，給出所需的最終磺酰氨基4-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶產(chǎn)物。
在Hypersil HyPurity Elite C18柱((5μm，200A)，250×4.6mm)上；用線性梯度的25％-100％乙腈/0.1M醋酸銨，25分鐘，1ml/min.得到在表中列出的分析性RP-HPLC RT。注意，當(dāng)引入反應(yīng)活性取代基時，需要適當(dāng)?shù)谋Ｗo基操作。 實施例270 實施例271MH+422.2 MH+452RT 14.03 RT 16.28 實施例272 實施例273MH+468.1 MH+448.2RT 17.12 RT 18.37 實施例274 實施例275MH+477.1MH+432.1RT 20.53RT 18.85 實施例276 實施例277MH+476 MH+488.2RT 13.26 RT1 7.7 實施例278 實施例279MH+477.1 MH+492.1RT 13.45 RT 17.52 實施例280實施例281MH+470.1 MH+464.2RT 15.08 RT 14.82 實施例282MH+464.2RT 14.15用如實施例188-249所述的一般方法也可制備下列化合物。 實施例283MH+645.8RT 3.66 實施例284MH+673.1RT 3.73 實施例285MH+524RT 3.52 實施例286MH+516.1RT 3.42 實施例287 實施例288 實施例289 實施例290 實施例291 實施例292 實施例293
權(quán)利要求
1.下列結(jié)構(gòu)式表示的化合物 和其藥用鹽。A環(huán)是六員芳香環(huán)或五或六員雜芳香環(huán)，其任選地被一個或多個下列取代基取代取代或未取代的脂族基，鹵素，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的雜芳香基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳烷基，氰基，硝基，-NR4R5，-C(O)2H，-OH，取代或未取代的烷氧羰基，-C(O)2-鹵代烷基，取代或未取代的烷硫基醚，取代或未取代的烷基亞砜，取代或未取代的烷基砜，取代或未取代的芳硫基醚，取代或未取代的芳基亞砜，取代或未取代的芳基砜，取代或未取代的烷基羰基，-C(O)-鹵代烷基，取代或未取代的脂族醚，取代或未取代的芳香醚，取代或未取代的甲酰氨，四唑基，三氟甲基磺酰氨基，三氟甲基羰基氨基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基酰氨基或烷基羧酰氨基，取代或未取代的芳基酰氨基或芳基羧酰氨基，取代或未取代的苯乙烯基和取代或未取代的芳烷基酰氨基或芳烷基羧酰氨基；L是-O-；-S-；-S(O)-；-S(O)2-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)--CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-；-CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-；-N(R)C(O)-；-N(R)S(O)-；-N(R)S(O)2-；-OC(O)N(R)-；-N(R)C(O)N(R)-；-NRC(O)O-；-S(O)N(R)-；-S(O)2N(R)-；N(C(O)R)S(O)-；N(C(O)R)S(O)2-；-N(R)S(O)N(R)-；-N(R)S(O)2N(R)-；-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)N(R)C(O)-；-S(O)2N(R)C(O)-；-OS(O)N(R)-；-OS(O)2N(R)-；-N(R)S(O)O-；-N(R)S(O)2O-；-N(R)S(O)C(O)-；-N(R)S(O)2C(O)-；-SON(C(O)R)-；-SO2N(C(O)R)-；-N(R)SON(R)-；-N(R)SO2N(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(OR’)O-；-N(R)P(OR’)-；-N(R)P(O)(OR’)O-；-N(R)P(O)(OR’)-；-N(C(O)R)P(OR’)O-；-N(C(O)R)P(OR’)-；-N(C(O)R)P(O)(OR’)O-或-N(C(O)R)P(OR’)-，其中R和R’各自獨立地是-H，?；?，取代或未取代的脂族基，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的雜芳香基，或取代或未取代的環(huán)烷基；或L是-RbN(R)S(O)2-，-RbN(R)P(O)-，或-RbN(R)P(O)0-，其中Rb是亞烷基，當(dāng)其與所連接的磺酰胺，次膦酰胺，或膦酰胺基一起時形成與A環(huán)稠合的五或六員環(huán)；或者L表示下列結(jié)構(gòu)式之一 其中R85與次膦酰胺，或膦酰胺一起是5-，6-，或7-員芳香，雜芳香或雜環(huán)烷基環(huán)系；R1是-H，2-苯基-1，3-二氧六環(huán)-5-基，C1-C6烷基，C3-C8環(huán)烷基，C5-C7環(huán)烯基或任選地取代的phen(C1-C6烷基)，其中烷基，環(huán)烷基和環(huán)烯基任選地被一個或多個式-ORa的基團取代，條件是-ORa不在與氮連接的碳原子上；Ra是-H，C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基；R2是-H，取代或未取代的脂族基團，取代或未取代的環(huán)烷基，鹵素，-OH，氰基，取代或未取代的芳香基團，取代或未取代的雜芳香基團，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳烷基，-NR4R5，或-C(O)NR4R5；R3是取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的芳香基團，取代或未取代的雜芳香基團，取代或未取代的雜環(huán)烷基；或者L是NRSO2-，NRC(O)-，-NRC(O)O-，-SO2NR-，-C(O)NR-或-OC(O)NR-，而R3是取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基或取代或未取代的芳烷基；條件是當(dāng)L是-CH2NR-，-C(O)NR-或-NRC(O)-和R3是氮雜環(huán)烷基或氮雜雜芳基時，j是O；和條件是當(dāng)L是-O-，而R3是苯基時，j是O；R4，R5和氮原子一起形成3，4，5，6或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代或未取代的雜芳香基；或R4和R5各自獨立地是-H，氮雜雙環(huán)烷基，取代或未取代的烷基或Y-Z；Y是選自如下的基團-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)pO-，-(CH2)pNH-，-(CH2)pS-，-(CH2)pS(O)-，和-(CH2)pS(O)2-；p是0至6的整數(shù)；Z是取代或未取代的烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基或取代或未取代的雜環(huán)烷基；而j是0至6的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R3選自取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的苯并三唑基，取代或未取代的四氫吡喃基，取代或未取代的四氫呋喃基，取代或未取代的二氧六環(huán)，取代或未取代的二氧戊環(huán)，取代或未取代的喹啉，取代或未取代的噻唑，取代或未取代的異噁唑，取代或未取代的環(huán)戊基，取代或未取代的苯并呋喃，取代或未取代的苯并噻吩，取代或未取代的苯并異噁唑基，取代或未取代的苯并異噻唑，取代或未取代的苯并噻唑，取代的或未取代的bezoxazole，取代或未取代的苯并噁唑，取代或未取代的苯并咪唑，取代或未取代的苯并噁二唑，取代或未取代的苯并噻二唑，取代或未取代的異喹啉，取代或未取代的喹喔啉，取代或未取代的吲哚或取代或未取代的吡唑。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R3被一個或多個選自如下的取代基取代F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的芐基，取代的或未取代的苯磺?；〈蛭慈〈谋窖趸?，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的雜芳基)，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc；Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代或未取代的雜芳基；Rf和Rg各自獨立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基；和Rc是氫，或取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH；t是0至約6的整數(shù)；W是鍵或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-；Rk是-H或烷基；和Rd，Re和與其連接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基或取代或未取代的雜雙環(huán)基；或Rd和Re各自獨立地是-H，烷基，烷?；?K-D；K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接鍵；D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳香基，取代或未取代的雜芳烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基環(huán)烷基，COORi，或取代或未取代的烷基；和Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
3.權(quán)利要求3的化合物，其中R3是取代或未取代的苯基，threnyl，苯并噁二唑基，或苯并噻二唑基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中A環(huán)選自取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或取代或未取代的吲哚。
5.權(quán)利要求5的化合物，其中A環(huán)被一個或多個選自如下的取代基取代F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的芐基，取代或未取代的苯磺?；〈蛭慈〈谋窖趸?，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的雜芳基)，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc；Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代或未取代的雜芳基；或Rf和Rg各自獨立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基；和Rc是氫，取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH；t是0至約6的整數(shù)；W是鍵或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-；Rk是-H或烷基；和Rd，Re和與其連接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-員取代或未取代的雜環(huán)烷基或取代或未取代的雜雙環(huán)烷基或取代的或未取代的雜芳香基；或Rd和Re各自獨立地是-H，烷基，烷酰基或-K-D；K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接鍵；D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的雜芳香基，取代或未取代的雜芳烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基環(huán)烷基，COORi，或取代或未取代的烷基；和Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
6.權(quán)利要求6的化合物，其中A環(huán)是取代或未取代的苯基。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是環(huán)戊基，羥基環(huán)戊基或異丙基。
9.選自如下的一組化合物N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-硝基苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-4-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氰基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-硝基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3，4-三氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3，4-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-溴-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4，6-三氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-碘-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2，5-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氰基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-6-甲基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-氯-2-甲基-1-苯磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4，5-二溴-2-噻吩磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-溴-2-噻吩磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-溴-5-氯-2-噻吩磺酰胺；N3-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氯-3-噻吩磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-氯-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-氯-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-(2-硝基苯基)甲磺酰胺；和N1-(4-(4-氨基-7-環(huán)戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二溴-3，6-二氟-1-苯磺酰胺；和其藥用鹽。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R2是-H。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中L是-O-，-NHSO2R-，-NHC(O)O-，或-NHC(O)R-。
12.抑制蛋白激酶活性的方法，包括施用權(quán)利要求1的化合物或其生理上可接受的鹽，前藥或生物活性代謝物。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶選自KDR，F(xiàn)GFR-1，PDGFRβ，PDGFRα，IGF-1R，c-Met，F(xiàn)lt-1，TIE-2，Lck，Src，fyn，Lyn，Blk，和yes。
14.權(quán)利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶活性影響過度增殖疾病。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶活性影響血管生成，血管滲透性過高，免疫應(yīng)答或炎癥。
16.治療具有由蛋白激酶活性介導(dǎo)疾病的患者的方法，所述的方法包括對患者施用治療有效量的如權(quán)利要求1定義的化合物或其生理上可接受的鹽，前藥或生物活性代謝物的步驟。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶選自KDR，F(xiàn)GFR-1，PDGFRβ，PDGFRα，IGF-1R，c-Met，F(xiàn)lt-1，TIE-2，Lck，Src，fyn，Lyn，Blk，和yes。
18.權(quán)利要求16的方法，其中的由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是過度增殖性疾病。
19.權(quán)利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶活性影響血管生成，血管滲透性過高，免疫應(yīng)答或炎癥。
20.權(quán)利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶活性影響血管生成，血管滲透性過高。
21.權(quán)利要求16的方法，其中蛋白激酶是蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。
22.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是一種或多種潰瘍。
23.權(quán)利要求21的方法，其中潰瘍是由細菌或真菌感染引起的；或者潰瘍是Mooren潰瘍；或者潰瘍是潰瘍性結(jié)腸病的癥狀。
24.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是Lyme病，膿毒病，或被單純性皰疹，帶狀皰疹，人免疫缺損病毒，副痘病毒，原生動物，弓形體病感染。
25.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是VonHippel Lindau病，類天皰瘡，牛皮癬，Paget’s病或多囊腎病。
26.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是纖維變性，肉瘤，硬變，甲狀腺炎，高粘度綜合癥，Osler-Weber-Rendu病，慢性閉塞性肺病，哮喘，滲出，腹水，胸膜滲漏，心包滲漏，肺水腫，腦水腫或燒傷后的水腫，創(chuàng)傷，放射，中風(fēng)，缺氧或局部缺血。
27.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是卵巢過度刺激綜合癥，子癇前期，月經(jīng)頻多，或子宮內(nèi)膜異位。
28.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是慢性炎癥，系統(tǒng)性狼瘡，腎小球性腎炎，滑膜炎，炎性腸病，Crohn’s病，腎小球腎炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和移植排異。
29.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是鐮狀細胞貧血。
30.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是眼病。
31.權(quán)利要求29的方法，其中的眼病是眼和黃斑水腫，眼新血管病，鞏膜炎，放射狀角膜切開術(shù)，眼色素層炎，vitritis，近視，眼窩，慢性視網(wǎng)膜脫離，后-激光并發(fā)癥，結(jié)膜炎，Stargardt’s病和Eales病，以及視網(wǎng)膜病和黃斑變性。
32.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是心血管病。
33.權(quán)利要求31的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是動脈粥樣硬化，再狹窄，局部缺血/再灌注損傷，血管閉塞，靜脈變形，和頸動脈阻塞病。
34.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是癌癥。
35.權(quán)利要求33的方法，癌癥是實體腫瘤，肉瘤，纖維肉瘤，骨瘤，黑素瘤，成視網(wǎng)膜細胞瘤，橫紋肌肉瘤，成膠質(zhì)細胞瘤，成神經(jīng)細胞瘤，畸胎瘤，造血性癌，和惡性腹水。
36.權(quán)利要求34的方法，其中癌癥是Kaposi’s肉瘤，Hodgkin’s病，淋巴瘤，骨髓瘤或白血病。
37.權(quán)利要求16的方法，其中由蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是Crow-Fukase(POEMS)綜合癥和糖尿病。
38.權(quán)利要求36的方法，其中糖尿病癥是胰島素-依賴性糖尿病青光眼，糖尿病性視網(wǎng)膜病和微血管病。
39.降低患者生育力的方法，所述的方法包括對患者施用治療有效量的如權(quán)利要求1定義的式I化合物或其生理上可接受的鹽，前藥或生物活性代謝物的步驟。
40.權(quán)利要求16的方法，其中式I化合物或其生理上可接受的鹽，前藥或生物活性代謝物以有效促進血管生成或血管發(fā)生的量給藥。
41.權(quán)利要求39的方法，其中蛋白激酶是Tie-2。
42.權(quán)利要求39的方法，其中式I化合物或其生理上可接受的鹽，前藥或生物活性代謝物與促血管生成生長因子聯(lián)合給藥。
43.權(quán)利要求41的方法，其中促血管生成生長因子選自VEGF，VEGF-B，VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E，HGF，F(xiàn)GF-1，F(xiàn)GF-2，其衍生物和抗獨特型抗體。
44.權(quán)利要求39的方法，其中蛋白激酶介導(dǎo)的病癥是貧血，局部缺血，心肌梗塞，移植排斥，創(chuàng)傷，壞疽或壞死。
44.權(quán)利要求16的方法，其中蛋白激酶活性與T細胞活化，B細胞活化，肥大細胞脫粒，單核細胞活化，炎性反應(yīng)增強或其組合有關(guān)。
全文摘要
具有結(jié)構(gòu)式式(Ⅰ)的化合物和其生理上可接受的鹽是絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸激酶活性抑制劑。其活性被這些化合物抑制的幾種激酶與免疫學(xué),過度增殖或血管生成過程有關(guān)。因此,這些化合物可以緩解其中血管生成或內(nèi)皮細胞過度增殖是病因的病癥。這些化合物可以用于治療癌癥,過度增殖疾病,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,免疫系統(tǒng)疾病,移植排異,和炎癥。
文檔編號A61P9/00GK1326457SQ99813218
公開日2001年12月12日 申請日期1999年9月17日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月18日
發(fā)明者D·克萊德伍德, L·D·阿諾德, H·邁茲迪亞斯尼, G·赫斯特, B·B·鄧 申請人:巴斯福股份公司