專利名稱：取代的2－苯基苯并咪唑類,其制備和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的2-苯基苯并咪唑類，用新中間體制備其的方法，及其作為酶聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP(EC 2.4.2.30)抑制劑用于生產(chǎn)藥物的用途。
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)或者，也被稱為聚(ADP-核糖)合成酶(PARS)，是在細胞核內發(fā)現(xiàn)的調節(jié)酶(K.Ikai等，組織化學與細胞化學雜志.1983，31，1261-1264)。假設PARP與DNA斷裂的修復有關(M.S.Satoh等，自然1992，356，356-358)。DNA鏈的損傷或斷裂會激活酶PARP，當該酶被激活時，會催化NAD中的ADP-核糖轉移(S.Shaw，Adv.Radiat.Biol.，1984，11，1-69)。在此期間，從NAD釋放煙酰胺。在消耗能量載體ATP的情況下，煙酰胺通過其它酶又轉回NAD。PARP的過度激活將會相應地導致ATP的非生理性大量消耗，并在極端情況下引起細胞損傷和細胞死亡。
已知自由基如超氧化物陰離子，NO和過氧化氫將導致細胞內的DNA損傷并因而激活PARP。大量自由基的形成在許多生理狀態(tài)下被觀察到，假設自由基的積聚會導致或引起被觀察的細胞或器官損傷。這包括，例如，在中風，心肌梗塞中器官的局部缺血狀態(tài)(C.Thiemermann等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1997，94，679-683)或腎的局部缺血，但也包括例如在心肌梗塞之后發(fā)生的再灌注損傷(參見上述C.Thiemermann等)。因此，酶PARP的抑制可能是至少部分地預防或調節(jié)此損傷的一種手段。PARP抑制劑可能代表一種用于治療許多疾病的新穎的治療原理。
酶PARP影響DNA損傷的修復，因而也可能在癌癥的治療中扮演角色，因為在與具有細胞抑制活性的物質聯(lián)合時在腫瘤組織上觀察到更大的效力(G.Chen等，Cancer Chemo.Pharmacol.1988，22，303)。
腫瘤的非限制性例子有白血病，成膠質細胞瘤，淋巴瘤，黑素瘤，乳腺癌和宮頸瘤。
另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，PARP抑制劑會顯示免疫抑制作用(D.Weltin等.國際免疫藥學雜志.1995，17，265-271)。
類似地已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，PARP與其中免疫系統(tǒng)扮演重要角色的免疫障礙或疾病，例如，風濕性關節(jié)炎和膿毒性休克有關，PARP抑制劑也會對疾病的過程顯示有利的作用(H.Krger等，炎癥1996，20，203-215；W.Ehrlich等.Rheumatol.Int.1995，15，171-172；C.Szabo等，Proc.Natl.Aca d.Sci.USA 1998，95，3867-3872；S.Cuzzocrea等.歐洲藥學雜志.1998，342，67-76)。
用于本發(fā)明目的的PARP被理解為包括上述PARP酶的同工酶。這類同工酶有，例如，PARP II和PARP III。
另外，PARP抑制劑3-氨基苯甲酰胺在循環(huán)衰竭模型中顯示保護作用(S.Cuzzocrea等，英國藥學雜志.1997，121，1065-1074)。
2-苯基苯并咪唑已經(jīng)被描述過許多次。DE 3830060公開了作為紅細胞聚集抑制劑的烷基化衍生物。DE 3522230提到了作為血小板聚集抑制劑的2-苯基苯并咪唑的酯衍生物。在苯環(huán)上具有取代的氨基的鹵代2-苯基苯并咪唑已經(jīng)在WO 98/06703中作為MCP-1-拮抗劑描述。
類似已知的有其中苯并咪唑基被酰胺基取代的2-苯基苯并咪唑。在苯環(huán)上具有烷氧基的2-苯基苯并咪唑的5-酰胺基衍生物已經(jīng)在WO94/12461中作為cAMP磷酸二酯酶抑制劑描述。在DE 3546575(例如實施例15)中發(fā)現(xiàn)類似的衍生物，這些化合物誘導增強收縮力的作用。在3位具有吡啶基的4-酰胺基衍生物類似地在WO 97/48697中作為cAMP磷酸二酯酶抑制劑提到。
2-苯基苯并咪唑基-4-酰胺的合成已經(jīng)在J.Chem.Soc.PerkinTrans 1，1979，2303-2307中描述。在酰胺殘基上還具有取代的烷基鏈，并且應具有細胞毒性作用的類似化合物在J.Med.Chem.1990，33，814-819中提到。WO 97/04771提到了抑制PARS的苯并咪唑-4-酰胺。特別是，這里作為活性成分描述的衍生物在2位具有苯環(huán)，而苯環(huán)又被諸如硝基，甲氧基和CF3之類的簡單取代基所取代。雖然這些物質中的有一些顯示良好的酶PARP抑制性，但這里所述的衍生物的缺點是它們在水溶液中溶解性很小或者沒有溶解性，因而不能以水溶液的形式給藥。
在許多治療中，例如在中風的治療中，活性物質作為灌注溶液被靜脈內給藥。為此，需要該物質，在此情況下是PARP抑制劑，在生理pH值或相近的pH值(例如5-8的pH值)具有足夠的水溶解性，從而使灌注溶液能夠制備。許多所述的PARP抑制劑，尤其是更有效的PARP抑制劑的缺點是在這些pH值僅有很低的水溶解性或者沒有溶解性，因而它們不適合于靜脈內給藥。這類活性物質只能與促進其水溶解性的輔助物質一起給藥(參見WO 97/04771)。這些輔助物質，例如聚乙二醇和二甲亞砜常常引起副作用或者不能耐受。在水中具有足夠溶解性的非常有效的PARP抑制劑至今未被描述過。
已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在苯環(huán)上被烷氧基取代，并且在烷氧基側鏈上有胺殘基的2-苯基苯并咪唑是非常有效的抑制劑，但是，由于摻有脂族胺殘基，它們可以與酸形成鹽，因而在水中顯示出明顯改善的溶解性。
本發(fā)明描述了與前述化合物相比具有優(yōu)點，并且是有效的PARP抑制劑，同時在水中顯示適當?shù)娜芙庑允蛊淠軌蛞怨嘧⑷芤航o藥的新穎的通式I的2-苯基苯并咪唑衍生物。
本發(fā)明涉及通式I或II的2-苯基苯并咪唑 其中R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NHCOR21，NR22R23OH，O-C1-C4-烷基，O-C1-C4-烷基苯基，NH2，苯基，其中苯環(huán)也可以被最多兩個基團R24取代，而R21和R22互相獨立地是氫，或C1-C4-烷基和R23是氫、C1-C4-烷基或苯基，而R24是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和x可以是0，1或2和R3是-D-(F1)p-(E)q-(F2)r-G，其中p，q和r不能同時為0，或者是-E-(D)u-(F2)s-(G)v，其中基團E可以被一個或兩個基團A取代，或R3是B，而R4是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，OH，硝基，CF3，CN，NR41R42，NH-CO-R43，O-C1-C4-烷基，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是氫，C1-C4-烷基，C1-C4-烷基苯基或苯基，和D是S或O，E是苯基，咪唑，吡咯，噻吩，吡啶，嘧啶，哌嗪，吡嗪，呋喃，噻唑，異惡唑，吡咯烷，哌啶，三氫吖庚因和F1是1至8個碳原子的鏈，該鏈的一個碳原子也可以帶有一個OH或O-C1-C4-烷基，和F2是1至8個碳原子的鏈，該鏈的一個碳原子也可以帶有一個OH或O-C1-C4-烷基，和p可以是0或1和q可以是0或1，和r可以是0或1和s可以是0或1和u可以是0或1和v可以是0或1G可以是NR51R52或 和R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，(CH2)t-K和R52是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，苯基， ，-SO2R53，-(C=N)-R53，-CO-NHR53，-(C=N)-NHR53，其中R53可以是支鏈或非支鏈的O-C1-C6-烷基，苯基，支鏈或非支鏈的C1-C4-烷基苯基，其中在R52和R53互相獨立的情況下，C1-C6-烷基的一個氫原子可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基，環(huán)己基，環(huán)戊基，四氫萘基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)庚基，萘基和苯基，其中基團R52和R53互相獨立地帶有一個或兩個下列基團支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，支鏈或非支鏈的O-C1-C4烷基，OH，F(xiàn)，Cl，Br，I，CF3，NO2，NH2，CN，COOH，COOC1-C4-烷基，C1-C4-烷基氨基，CCl3，C1-C4-二烷基氨基，SO2-C1-C4烷基，SO2苯基，CONH2，CONH-C1-C4烷基，CONH苯基，CONH-C1-C4-烷基苯基，NHSO2-C1-C4-烷基，NHSO2苯基，S-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C0-C4-烷基苯基，CHO，CH2-O-C1-C4-烷基，-CH2-O-C1-C4-烷基苯基，-CH2OH，-SO-C1-C4-烷基，-SO-C1-C4-烷基苯基，-SO2NH2，SO2NH-C1-C4-烷基和兩個基團形成橋-O-(CH2)1，2-O-，B可以是 和A可以是氫，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，OH，O-C1-C4-烷基，O-C1-C4-烷基苯基，NH2，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，CN，NH-CO-R33，其中R33是氫，C1-C4-烷基或苯基和R31是氫，C1-C6-烷基，(CH2)t-K和R32是氫，C1-C6-烷基，-CO-R8，SO2-R8，-(C＝N)-R8，-CO-OR8，-CO-NHR8和-(C＝N)-NHR8和R33是氫，C1-C4-烷基和t是0，1，2，3，4和K是可以帶有最多兩個基團R的苯基，是NRk1Rk2(其中Rk1和Rk2分別如R41和R42定義)，NH-C1-C4-烷基苯基，吡咯烷，哌啶，1，2，5，6-四氫吡啶，嗎啉，三氫吖庚因，哌嗪，它也可以被烷基基團C1-C6-烷基取代，和高哌嗪，它也可以被烷基基團C1-C6-烷基取代，和R5可以是氫，C1-C6-烷基，NR7R9和 和R7是氫，C1-C6-烷基，C1-C4-烷基苯基，苯基，其中環(huán)可以被最多兩個基團R71取代，和R71是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和R8是氫，C1-C6-烷基，苯基C1-C4-烷基苯基，其中環(huán)可以被最多兩個基團R81取代，和R81是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和R9是氫，COCH3，CO-O-C1-C4-烷基，COCF3，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個或兩個氫可以在各種情況下被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團碘，氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，CF3，SO2-C1-C4-烷基，和其互變異構形式，可能的對映異構和非對映異構形式，其前藥和其藥用鹽。
優(yōu)選的化合物中基團的定義如下R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，其中烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22互相獨立地是氫或C1-C4-烷基R23是氫，C1-C4-烷基或苯基，和R3是-O-(CH2)。-(CHR31)m-(CH2)n-R5，其中R31是氫，C1-C4-烷基，OH和O-C1-C4-烷基，m，o互相獨立地是0，1或2，和n是1，2，3或4，和R4是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，O-R41，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是C1-C4-烷基或苯基，和R5是NR51R52或下列基團之一 和R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，和R52是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，苯基，-C(O)R53，-SO2R53，其中R53是支鏈或非支鏈的O-C1-C6-烷基，苯基，支鏈或非支鏈的C1-C4-烷基苯基，其中在R52和R53互相獨立的情況下，C1-C6-烷基的一個氫原子可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基，環(huán)己基，環(huán)戊基，四氫萘基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)庚基，萘基和苯基，其中基團R52和R53的碳環(huán)互相獨立地帶有一個或兩個下列基團支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，支鏈或非支鏈的O-C1-C4-烷基，OH，F(xiàn)，Cl，Br，I，CF3，NO2，NH2，CN，COOH，COOC1-C4-烷基，C1-C4-烷基氨基，CCl3，C1-C4-二烷基氨基，SO2-C1-C4-烷基，SO2苯基，CONH2，CONH-C1-C4-烷基，CONH苯基，CONH-C1-C4-烷基苯基，NHSO2-C1-C4-烷基，NHSO2苯基，S-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C0-C4-烷基苯基，CHO，CH2-O-C1-C4-烷基，-CH2-O-C1-C4-烷基苯基，-CH2OH，-SO-C1-C4-烷基，-SO-C1-C4-烷基苯基，-SO2NH2，SO2NH-C1-C4-烷基和兩個基團形成橋-O-(CH2)1，2-O-。
在通式I或II中，R2基團特別優(yōu)選的位置是相對于苯并咪唑環(huán)的3位和4位。相對于苯并咪唑環(huán)的3位和4位對于R3基團同樣是優(yōu)選的。
R1特別優(yōu)選的意義是氫。
R2特別優(yōu)選的意義是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CN，NH2，O-C1-C4-烷基。
R3特別優(yōu)選的意義是-O-(CH2)p-R5，其中p等于2，3或4。
R5優(yōu)選地是6-元環(huán)，尤其是哌嗪，R52優(yōu)選地是取代或未取代的苯環(huán)，尤其是如果R5是6-元環(huán)。
R4特別優(yōu)選的意義是氫。
上述優(yōu)選意義的聯(lián)合是非常優(yōu)選的。
也優(yōu)選其中取代基如下定義的化合物R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，其中烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22互相獨立地是氫，C1-C4-烷基R23是氫，C1-C4-烷基或苯基，和R3是 和R31是氫，CHO和-O-(CH2)。-(CHR32)m-(CH2)n-R5，其中R32是氫，C1-C4-烷基，OH和O-C1-C4-烷基，m，o互相獨立地是0，1或2，和n是1，2，3或4，和R4是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，O-R41，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是C1-C4-烷基或苯基，和R5是NR51R52或下列基團之一 其中R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，和R52是氫，COCH3，CO-O-C1-C4-烷基，COCF3，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基。
在通式I或II中，R2基團特別優(yōu)選的位置是相對于苯并咪唑環(huán)的3位和4位。相對于苯并咪唑環(huán)的3位和4位對于R3基團同樣是優(yōu)選的。
R1特別優(yōu)選的意義是氫。
R2特別優(yōu)選的意義是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CN，NH2，O-C1-C4-烷基。R2特別優(yōu)選為氫。
如果R3是 則R31特別優(yōu)選的意義是氫或-(CH2)p-R5，其中p是1或2和R52可以是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基。如果R3是 則R31特別優(yōu)選的意義是氫或-(CH2)p-R5，其中p是1或2和R52可以是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基。如果R3是 則特別優(yōu)選的意義是R52可以是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基。
R4特別優(yōu)選的意義是氫。
非常優(yōu)選的是各個上述優(yōu)選意義的聯(lián)合。
式I化合物可以外消旋體，對映異構純的化合物或非對映體應用。如果需要對映異構純的化合物，這些可以例如通過用合適的光學活性的堿或酸進行式I化合物或其中間體的經(jīng)典外消旋體拆分而獲得。
本發(fā)明也涉及式I化合物的內消旋體或互變異構體。
本發(fā)明還涉及可以通過化合物I與合適的酸或堿反應所得的化合物I的生理耐受鹽。合適的酸和堿在例如Fortschritte derArzneimittelforschung，1966，Birkhauser Verlag，Vol.10，pp.224-285中列出。這些包括，例如，鹽酸，檸檬酸，酒石酸，乳酸，磷酸，甲磺酸，乙酸，甲酸，馬來酸，富馬酸等等，或氫氧化鈉，氫氧化鋰，氫氧化鉀和tris。
前藥指在體內代謝為通式I或II化合物的化合物。典型的前藥有磷酸酯，氨基酸的氨基甲酸酯，酯和其它。
根據(jù)本發(fā)明的式I或II的2-苯基苯并咪唑可以以在下列合成途徑中概括的各種途徑制備。合成途徑1
苯甲醛V與亞苯基二胺VI縮合產(chǎn)生苯并咪唑VII，其中優(yōu)選地用極性溶劑如乙醇或二甲基甲酰胺，并在升高的溫度下，通常為80至120℃加入諸如乙酸的酸。對于反應有利的是加入諸如銅(II)鹽的弱氧化劑，以水溶液形式加入。合成途徑2
當在亞苯基二胺VI中R＝NH2時，縮合直接產(chǎn)生本發(fā)明的化合物I。另外，如果R是O-烷基，也可以使該酯與氨在非強制性升高的溫度和升高的壓力下反應，給出酰胺I。另外，酯XII可以與肼在極性溶劑如丁醇和乙醇，或者二甲基甲酰胺中，在升高的溫度下，優(yōu)選80至130℃反應，產(chǎn)生酰肼XII(R＝NHNH2)，然后在還原條件下使其還原，如用Raney鎳在醇中回流，還原為酰胺I。
在I(R1＝H)的苯并咪唑殘基上引入R1基團在如J.Het.Chem.1995，32，707f和Tetrahedron 1994，50，5535中的常規(guī)烷基化條件進行，其中但需要應用反應物R1-L(L＝離去基Cl，Br和I)。合成途徑3
對于在途徑1中所示的苯甲醛V，也可以使用苯甲酸如XI(見途徑2)或芐腈如XIII(見途徑3)代替苯甲醛。這些衍生物的制備類似于取代的苯甲醛V的制備。從XI開始，以兩步縮合為VII。首先，苯甲酸XI與苯胺VI以肽類偶合反應給出酰胺XII。所用的一般條件在例如，Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie，4th edition，E5，Chapter V，或C.R..Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，p.972 et seq。閉環(huán)為苯并咪唑，然后在升高的溫度，例如60至180℃下，有或沒有諸如二甲基甲酰胺溶劑，加入酸如乙酸，或直接在乙酸中進行。
亞苯基二胺VI與芐腈XIII的反應同樣在普通條件下進行。可以在加入酸的情況下在升高的溫度如60至200℃，在諸如二甲基甲酰胺的溶劑中進行。但是，也可以使用從芐腈制備脒的普通方法，如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie，E5，p.1304 f.，J.Amer.Chem.Soc.1957，427和J.Org.Chem.1987，1017所述。
本發(fā)明也涉及式XX，XXI的2，3-二氨基苯甲酰胺，和其合成和作為中間體的用途。
在酰胺基上帶有取代的烷基鏈的二氨基苯甲酰胺在WO 9631462中公開用于治療神經(jīng)變性疾病。在酰胺基上帶有取代的芳基的二氨基苯甲酰胺在JP 09059236中公開用于治療炎癥和變態(tài)反應。苯基異羥肟酸在DNA合成方面的作用在Bull.Soc.Chim.Belg.1997，106，767中公開。
氨基二苯并二氮雜酮在P.V.Khadikar等，J.Heterocycl.Chem.1998，35，675中制備。2-苯基苯并咪唑基-4-酰胺的合成已經(jīng)在J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，1979，2302-2307中描述。在酰胺基上帶有取代的烷基鏈，并應具有細胞毒性作用的類似化合物在J.Med.Chem.1990，33，814-819中列出。WO 97/04771列出了抑制酶PARP的苯并咪唑-4-酰胺。具體地，在2-位帶有苯環(huán)的衍生物，其中苯環(huán)還可以被簡單的取代基，如硝基，甲氧基和三氟甲基取代，被作為活性劑描述。
為了證實WO 97/04771中的合成戰(zhàn)略，途徑4以舉例的方式顯示了2-苯基苯并咪唑-4-甲酰胺(NU 1070)的合成。途徑4 二氨基苯甲酸甲酯IV與苯甲酸V在多聚磷酸中反應，以20％的產(chǎn)率給出苯并咪唑-4-羧酸酯VI。酯VI隨后經(jīng)形成酰氯而轉化為酰胺VII。對于這一步，作者報道產(chǎn)率為62％。合成的結果是得到總產(chǎn)率為62％。所有在WO 97/04771中提到的其它實施例的合成總產(chǎn)率都在5至19％的范圍內。該合成戰(zhàn)略的一個大缺點是與VI類似的各化合物需要隨后轉化為酰胺，只有酰胺是活性的PARP抑制劑。
本發(fā)明提供式XX和XXI的2，3-二氨基苯甲酰胺 其中R4和R1如前定義，和其鹽。
化合物XX和XXI根據(jù)途徑5，通過用水合肼在醇如正丁醇在100℃肼解適當取代的酯VIII，并隨后用Raney鎳在極性溶劑，如二甲基甲酰胺中，于100℃還原酰肼而合成。途徑5 出人意料地，從化合物XX或XXI合成苯并咪唑-4-酰胺產(chǎn)生了比WO 97/04771中所述的合成更高的總產(chǎn)率。
從式XX和XXI的化合物合成苯并咪唑-4-酰胺分別在途徑6和途徑7中描述。途徑6 合適的醛OHC-B與化合物XX或XXI縮合給出苯并咪唑I，其中反應優(yōu)選地在極性溶劑，如乙醇或二甲基甲酰胺中，加入酸如乙酸，在升高的溫度，一般為80至120℃進行。加入弱氧化劑，如以水溶液的形式加入銅(II)鹽對反應有好處。途徑7 用合適的酸HOOC-B，與化合物XX或XXI最初進行類似于肽的偶合。使用例如在Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie，4th edition，E5，Chapter V，或C.R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，p.972f中列出的常用條件。然后在升高的溫度，例如60至180℃，在有或沒有溶劑如二甲基甲酰胺存在下，加入酸如乙酸，或直接在乙酸中進行閉環(huán)反應。
為了比較新合成戰(zhàn)略和WO 97/04771的總產(chǎn)率，2-苯基苯并咪唑-4-甲酰胺的合成示于途徑11中。酯XIV給出酰胺XV的反應以70％的產(chǎn)率進行。通過XV與苯甲醛XVI縮合，接著氧化，苯并咪唑VII的合成以85％的產(chǎn)率進行。其總產(chǎn)率60％比WO 97/04771中12％的相應總產(chǎn)率超出。途徑8 在本發(fā)明中包括的取代的2-苯基苯并咪唑I或II是酶聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP(EC 2.4.2.30)的抑制劑。
使用文獻中公開的酶檢測法測定取代的2-苯基苯并咪唑I或II的抑制作用，ki被測定為作用的范圍。通過此方法測定2-苯基苯并咪唑I對酶聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP(EC 2.4.2.30)的抑制作用。
PARP抑制劑必須具有強抑制能力(ki＜50nm)和良好的生物可利用性。鑒定此類化合物并使其最優(yōu)化的前提條件是快速而有效的檢測系統(tǒng)，所述系統(tǒng)能定量測定聚(ADP-核糖)聚合酶的活性。迄今為止，所有可以利用的檢測系統(tǒng)都基于使用放射性NAD作為PARP的底物，并定量測定摻入聚(ADP-核糖)聚合物中的放射性。因此，使用[14C]NAD的PARP檢測法描述于JBC 2549，3647-3651，1979；生化藥學，445，947-953，1992；分析生物化學195，227，1-13，1995；JBC 2673，1569-1575，或者，使用[α32p]NAD的PARP檢測法描述于分析生物化學，195，226-231，1991；JBC 2648，4312-4317，1989；抗癌藥物設計，10，507-514，1995，或者，使用[3H]NAD的PARP檢測法描述于JBC25318，6459，6466，1978；歐洲生物化學雜志，102，43-57，1979；臨床研究雜志，77，1312-1320，1986。
這些方法都很復雜，且流通量有限，由于使用了放射性，在環(huán)境和操作安全性方面也存在問題。因此，迫切需要快速，無放射性的檢測系統(tǒng)。
本發(fā)明進一步涉及PARP抑制劑的體外檢測方法，所述方法可以均相或非均相地進行，所述方法包括a)將未支持或支持的可以聚ADP-核糖化的靶與反應混合物保溫，所述混合物含有a1)PARP；a2)PARP激活劑；和a3)PARP抑制劑或懷疑含有至少一種PARP抑制劑的分析物；b)進行聚ADP-核糖化反應；和c)使用抗-聚(ADP-核糖)抗體定性或定量測定靶的聚ADP-核糖化。
優(yōu)選地，在進行聚ADP-核糖化反應之前，使PARP同系物與PARP激活劑，和PARP抑制劑或懷疑含有至少一種PARP抑制劑的分析物預保溫例如約1至30分鐘，以進行檢測方法。
被具有單鏈斷裂的DNA(本發(fā)明中稱之為“激活DNA”)激活之后，PARP在NAD的存在下，使大量核蛋白質聚ADP-核糖化。這些蛋白質一方面包括PARP自身，但也包括組蛋白等。
優(yōu)選用于檢測方法中的可以聚ADP-核糖化的靶是天然形式的組蛋白，或由其衍生的可以聚ADP-核糖化的等同物，例如，可以使用Sigma提供的組蛋白制品(SIGMA，目錄號為H-7755；II型組蛋白(如得自小牛胸腺)，Luck JM等，生物化學雜志，233，1407(1958)，Satake K等，生物化學雜志，235，2801(1960))。原則上可以使用能夠被PARP聚ADP-核糖化的所有類型的蛋白質或其部分。優(yōu)選使用核蛋白質，例如組蛋白，DNA-聚合酶，端粒酶或PARP自身。衍生自相應蛋白質的合成肽也可以用作靶。
在ELISA試驗中，可以使用劑量范圍為0.1μg/孔至100μg/孔的組蛋白，優(yōu)選劑量范圍為1μg/孔至10μg/孔。PARP酶的劑量范圍為0.2pmol/孔至2nmol/孔，優(yōu)選為2pmol/孔至200pmol/孔；每種情況下的反應混合物含有100μl/孔。較小的孔中的劑量可以相應減少，反應體積也可相應減少。在HTRF試驗中，使用相同量的PARP，組蛋白或經(jīng)修飾的組蛋白的劑量范圍為2ng/孔至25μg/孔，優(yōu)選為25ng/孔至2.5μg/孔，每種情況下的反應混合物含有50μl/孔。較小的孔中的劑量可以相應減少，反應體積也可相應減少。
本發(fā)明中使用的PARP激活劑優(yōu)選為激活的DNA。
多種類型的受損DNA可以作為激活劑起作用。通過用DNA酶或其它DNA-修飾酶(如限制性內切核酸酶)消化，通過照射或其它物理方法或化學處理DNA即可產(chǎn)生DNA損傷。通過使用合成的寡核苷酸可以以靶向的方式模擬DNA損傷的位置。在舉例說明的試驗中，使用了得自小牛胸腺的激活DNA(SIGMA，產(chǎn)品號D4522，CAS91080-16-9，通過Aposhian和Kornberg的方法，使用小牛胸腺DNA(SIGMA D-1501)和I型脫氧核糖核酸酶(D-4263)制備，Aposhian HV和Kornberg A.，生物化學雜志，237，519(1962))。反應步驟中所用激活DNA的濃度范圍為0.1-1000μg/ml，優(yōu)選為1至100μg/ml。
在本發(fā)明的方法中，通過加入NAD+開始聚ADP核糖化反應。
NAD的濃度范圍為0.1μM至10mM，優(yōu)選為10μM至1mM。
在上述方法可非均相進行的變體中，使用抗-聚(ADP-核糖)抗體測定支持靶的聚ADP核糖化。為此，將反應混合物與支持靶分開，洗滌并與抗體保溫。此抗體自身可被標記。然而，優(yōu)選使用經(jīng)標記的第二抗體或相應的經(jīng)標記的抗體片斷來檢測結合的抗-聚(ADP-核糖)抗體。適當?shù)臉擞浭抢绶派湫詷擞?，生色團-或熒光團-標記，生物素化，化學發(fā)光標記，用順磁金屬或尤其是酶標記，如用辣根過氧化物酶進行標記。適當?shù)臋z測技術通常是本領域技術人員已知的。
在上述方法可均相進行的變體中，用受體熒光團標記未支持的靶。在這種情況下，優(yōu)選使用的靶是生物素化的組蛋白，受體熒光團經(jīng)由親和素或鏈霉親和素與組蛋白的生物素基團偶聯(lián)。特別適于用作受體熒光團的是藻膽色素蛋白(如藻藍蛋白，藻紅蛋白)，如R-藻藍蛋白(R-PC)，別藻藍蛋白(APC)，R-藻紅蛋白(R-PE)，C-藻藍蛋白(C-PC)，B-藻紅蛋白(B-PE)或它們之間的組合，或其與諸如Cy5，Cy7或德克薩斯紅的熒光染料的組合(串聯(lián)系統(tǒng))。(Thammapalerd N等，東南亞熱帶醫(yī)學&公共健康雜志，27(2)297-303，1996；Kronick M.N等，臨床化學，29(9)1582-6，1983；Hicks J.M.，人類病理學，15(2)112-6，1984)。此處所用的染料XL665是交聯(lián)的別藻藍蛋白(Glazer AN，微生物學評論，36173-198(1982)；Kronick M.N.，免疫學方法雜志，921-13(1986)；MacColl R等，藻膽色素蛋白，CRC出版公司，Boca Raton，F(xiàn)lorida，(1987)；MacColl R等，Arch.Biochem.Biophys.208142-48(1981))。
另外，在均相方法中，還優(yōu)選使用被供體熒光團標記的抗-聚(ADP-核糖)抗體來測定未支持靶的聚ADP核糖化，其中，當供體和受體由于經(jīng)標記的抗體與聚ADP核糖化的組蛋白的結合而在空間上靠近時，所述供體熒光團能將能量轉移給受體熒光團。優(yōu)選將銪穴狀化合物用作抗-聚(ADP-核糖)抗體的供體熒光團。
除了可以使用銪穴狀化合物外，其它化合物也可以用作潛在的供體分子。這一方面需要修飾穴狀化合物的籠。也可以用其它稀土金屬(如忒)取代銪。關鍵是熒光的持續(xù)時間必須較長以保證時間的延遲(Lopez E等，臨床化學，39/2，196-201，1993；美國專利5,534,622)。
上述檢測方法的理論基礎是PARP活性與組蛋白上形成的ADP-核糖聚合物的量之間有關聯(lián)。本文所述的試驗使得在ELISA和HTRF(均一時間-分辨的熒光)試驗形式中，使用特異性抗體定量測定ADP-核糖聚合物成為可能。下文實施例中詳細描述了這兩種試驗的具體實施方案。
先進的HTRF(均一時間-分辨的熒光)試驗系統(tǒng)使用特異性抗體測定組蛋白上聚(ADP-核糖)的形成。與ELISA形成對照的是，該試驗在均相中進行，無需分離和洗滌步驟。這使得樣品流通量較高，出現(xiàn)錯誤的可能性較小。HTRF基于兩種熒光團之間的熒光共振能量轉移(FRET)。在FRET試驗中，當激發(fā)的供體熒光團與受體熒光團在空間上靠近時，前者可以將其能量轉移給后者。在HTRF技術中，供體熒光團是銪穴狀化合物[(Eu)K]，受體是XL665，穩(wěn)定化的別藻藍蛋白。銪穴狀化合物基于Jean Marie Lehn(Strasbourg)的研究(Lopez E等，臨床化學39/2，196-201，1993；美國專利5,534,622)。
在均相檢測法中，測量過程中也存在所有組分，而這對進行檢測有好處(快速性，復雜性)，必須排除由試驗組分所致的干擾(固有的熒光，被染料淬滅等)。HTRF通過在兩個波長(665nm，620nm)進行時間-延遲測定來排除上述干擾。HTRF熒光具有很長的衰變時間，因此可以進行時間-延遲測定。短期存活的背景熒光不再產(chǎn)生任何干擾(例如試驗組分或物質庫抑制劑所致的干擾)。另外，通常在兩個波長下進行測量以補償生色物質的淬滅效應。HTRF試驗可以在例如96孔或384孔微滴板中進行，可使用Discovery HTRF微滴板分析儀(PackardInstruments)評價該試驗。
本發(fā)明還提供了以下體外篩選PARP結合配對物的方法。
第一種變體方法按下述步驟進行a1)將PARP固定在支持物上；b1)使固定化的PARP同系物與懷疑含有至少一種結合配對物的分析物接觸；和c1)測定(適當時在保溫一段時間之后測定)與固定化PARP結合的分析物成分。
第二種變體方法必須a2)將含有至少一種可能是PARP的結合配對物的分析物固定在支持物上；b2)使固定化的分析物與結合配對物所對應的至少一種PARP接觸；和c2)檢查(適當時在保溫一段時間之后檢查)固定化分析物與PARP結合的情況。測定酶和PARP-樣酶的活性和效應物對PARP和PARP-樣酶的抑制作用的檢測系統(tǒng)a)產(chǎn)生抗聚(ADP-核糖)抗體可以使用聚(ADP-核糖)作為抗原來生產(chǎn)抗聚(ADP-核糖)抗體。文獻中描述了抗聚(ADP-核糖)抗體的產(chǎn)生(Kanai Y等，(1974)BiochemBiophys Res Comm 591，300-306；Kawamaitsu H等，(1984)生物化學23，3771-3777；Kanai Y等，(1978)，免疫學34，501-508)。
特別使用了下列抗體抗聚(ADP-核糖)抗體(多克隆抗血清，兔)，BIOMOL；序號SA-276?？咕?ADP-核糖)抗體(單克隆，小鼠；克隆10H；雜交瘤上清液，經(jīng)親和純化的)。
按本領域技術人員熟知的方法，通過蛋白A親和層析純化得自雜交瘤培養(yǎng)物上清液的抗血清或單克隆抗體。b)ELISA試驗材料ELISA生色試劑TMB混合物，SIGMA T-8540用組蛋白(SIGMA，H-7755)包被96孔微滴板(FALCON Micro-TestIIIanFlexible Assay P1ate，#3912)。為此，將組蛋白溶解于碳酸氫鈉緩沖液(0.05M Na2HCO3；pH9.4)，使?jié)舛葹?0μg/ml。室溫下，使微滴板的各個孔各與150μl上述組蛋白溶液保溫至少2小時，或4℃保溫過夜。然后于室溫下加入150μl含1％強度BSA溶液(SIGMA，A-7888)的碳酸氫鈉緩沖液以封閉孔2小時。接著，用洗滌緩沖液(含0.05％Tween 10的1×PBS；PBS(磷酸緩沖鹽水；Gibco，序號10010)0.21g/lKH2HPO4；9g/l NaCl，0.726g/l Na2HPO4.7H2O，pH7.4)進行3次洗滌步驟。洗滌步驟都在微滴板洗滌儀(“Columbus”’微滴板洗滌儀，SLT-Labinstruments，Austria)中進行。
酶反應需要酶反應溶液和底物溶液(在每種情況下都是預混合物)。這些溶液的絕對量取決于想要的試驗孔數(shù)目。
每孔中酶反應溶液的組成成分-4μl PARP反應混合物(1M Tris-HCl pH8.0，100mM MgCl2，10mM DTT)-20ng PARP(人或牛的)-4μl激活的DNA(1mg/ml；SIGMA，D-4522)-加水40μl每孔中底物溶液的組成成分-5μl PARP反應緩沖液(10×)-0.8μl NAD溶液(10mM；SIGMA，N-1511)-加水44μl
將抑制劑溶解于1×PARP反應緩沖液。DMSO偶爾可用于以較高濃度溶解抑制劑，DASO可以毫不困難地達到終濃度為2％。為了進行酶反應，將40μl酶反應溶液加至每孔中，與10μl抑制劑溶液保溫10分鐘。然后在每孔中加入50μl底物溶液以開始酶反應。反應在室溫下進行30分鐘，然后通過用洗滌緩沖液洗滌3次以終止反應。
所用的第一抗體是稀釋度為1∶5000的特異性抗聚(ADP-核糖)抗體。在抗體緩沖液(含1％BSA的PBS；0.05％吐溫20)中進行稀釋。第一抗體的保溫時間是室溫1小時。隨后，用洗滌緩沖液洗滌3次，室溫下與用抗體緩沖液以1∶10000稀釋的第二抗體(抗-小鼠IgG，F(xiàn)ab片斷，過氧化物酶-偶聯(lián)的，Boehringer Mannheim，序號1500.686；抗-兔IgG，過氧化物酶-偶聯(lián)的，SIGMA，序號A-6154)保溫1小時。用洗滌緩沖液洗滌3次，然后于室溫下，每孔使用100μl生色試劑(TMB混合物，SIGMA)進行生色反應約15分鐘。通過加入100μl 2M H2SO4終止生色反應。接著立即在ELISA微滴板讀數(shù)儀(EAR340AT‘EasyReader”，SLT-Labinstruments，Austria)中進行測定(450nm對620nm)。
使用多個濃度組建劑量-效果圖以測定抑制劑的ki。得到每個特定抑制劑濃度的三個值。使用MicrosoftExcel測定算術平均值。使用MicrocalOrigin Software(5.0版)(“S形符合”)測定IC50。使用“校準抑制劑”將以此方法計算出的IC50值轉變?yōu)閗i值。在每次分析中，也測定“校準抑制劑”。通過用本領域技術人員熟知的方法分析Dixon圖，在相同的檢測系統(tǒng)中測定“校準抑制劑”的ki值。b)HTRF(均一時間-分辨的熒光)試驗在本發(fā)明的HTRF PARP試驗中，間接地用XL665熒光團標記作為PARP修飾之靶蛋白質的組蛋白。直接用銪穴狀化合物標記抗體。如果XL665-熒光團就位于附近的空間內(通過與組蛋白上的聚(ADP-核糖)結合可以確保這一點)，那么能量就可以轉移。因此，665nm處的發(fā)射與結合抗體的量直接成比例，而結合抗體的量反過來相當于聚(ADP-核糖)的量。因此，測定的信號與PARP活性相對應。除非另有說明，所用材料與ELISA試驗(見上文)中所用的相同。
以3mg/ml的濃度將組蛋白溶解于Hepes緩沖液(50mM，pH＝7.5)。用硫代-NHS-LC-生物素(Pierce，#21335T)進行生物素化。所用摩爾比為4生物素1組蛋白。保溫時間為90分鐘(RT)。然后在浸于Hepes緩沖液(50mM，pH＝7.0)的G25 SF HRi0/10柱(Pharmacia，17-0591-01)上純化生物素化的組蛋白，以除去過量的生物素化試劑。使用雙功能偶聯(lián)試劑，用銪穴狀化合物標記抗-聚(ADP-核糖)抗體(Lopez E等，臨床化學，39/2，196-201，1993，US P 5，534，662)。在G25 SF HR10/30柱上進行純化。摩爾比為3.1穴狀化合物∶1抗體。得率為25％。將綴合物置于含0.1％BSA的磷酸鹽緩沖液(0.1M，pH＝7)，于-80℃保存。
為了進行酶反應，在每孔中滴入下列試劑-10μl含PARP溶液的PARP HTRF反應緩沖液(50mM Tris-HCl pH8.0，10mM MgCl2，1mM DTT)，其中含有20ng PARP(人或牛的)-10μl含激活的DNA的PARP HTRF反應緩沖液(50μg/ml)-10μl含生物素化組蛋白的PARP HTRF反應緩沖液(1.25μM)-10μl含抑制劑的PARP HTRF反應緩沖液將這些試劑預保溫2分鐘，然后通過加入下列試劑開始反應-10μl含NAD溶液的PARP HTRF反應緩沖液(41μM/ml)。反應時間為室溫30分鐘。
然后通過加入下列試劑終止反應-10μl含PARP抑制劑(25μM，ki＝10nM)的“展示”緩沖液(100mMTris-HCl，pH7.2，0.2M KF，0.05％BSA)。
然后，加入下列試劑-10μl EDTA-溶液(SIGMA，E-7889，0.5M水溶液)-100μl含Sa-XL665(Packard Instruments)的“展示”緩沖液(15-31.25nM)-50μl含抗-PARP穴狀化合物的展示”緩沖液(1.6-3.3nM)。
30分鐘(最高達4小時)之后可以進行測定。在“Discovery HTRF微滴板分析儀”(Packard Instruments)中進行測定。按ELISA試驗中所述計算ki值。測定在水中的溶解性將待檢測的化合物直接溶解于固定體積的水中，用醋酸鈉溶液將所得溶液的pH調節(jié)至5至6，以達到檢測所需的活性成分濃度。如果待測物質不是水溶性鹽的形式，可將其溶解于最少量的二甲基亞砜中，然后用水稀釋(最終的二甲基亞砜濃度≤1％)，然后再調節(jié)pH。強有力的PARP抑制劑NU 1076(WO97/04771)顯示出溶解性＜0.01％，而本發(fā)明實施例2的溶解性＞0.5％。
通式I的取代的2-苯基苯并咪唑是聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制劑，由于PARP也稱為聚(ADP-核糖)合成酶(PARS)，所以，2-苯基苯并咪唑也是PARS的抑制劑，因此，可用于治療和預防與這些酶活性的增加相關的疾病。
可使用式I化合物生產(chǎn)藥物以治療局部缺血后的損害，并預防多種器官中預期的局部缺血癥。
因此，本發(fā)明通式I的2-苯基苯并咪唑可用于治療和預防局部缺血，創(chuàng)傷(顱腦創(chuàng)傷)，大量出血，蛛網(wǎng)膜下出血和中風之后的神經(jīng)變性疾病，和諸如多梗塞性癡呆Alzheimer’s病，Huntington’s病的神經(jīng)變性疾病，和癲癇，尤其是全身性癲癇發(fā)作，如小發(fā)作和強直陣攣性癲癇和部分癲癇發(fā)作如暫時性lope，和復合部分癲癇發(fā)作，并進一步用于治療和預防心肌局部缺血后的心臟損傷和腎臟局部缺血后的腎臟損傷，例如急性腎機能不全，急性腎衰竭或腎移植期間和之后發(fā)生的損傷。通式I的化合物還可以用于治療急性心肌梗塞和其醫(yī)學松解術(例如用TPA，Reteplase，鏈激酶松解或用激光或Rotablator機械松解)期間和之后發(fā)生的損傷，和心閥置換，動脈瘤切除和心臟移植期間和之后的微梗塞。也可以使用本發(fā)明的2-苯基苯并咪唑I治療臨界狹窄冠狀動脈的再血管化，例如在PCTA和旁通管手術中，和臨界狹窄的外周動脈，例如腿動脈。另外，2-苯基苯并咪唑I可以用于腫瘤和其轉移的化療，并可用于治療炎癥和風濕病，例如風濕性關節(jié)炎。
新的PARP抑制劑在相關藥理模型中檢驗它的治療效果。一些合適模型的例子列于表1中。表1
本發(fā)明的藥物制劑包括治療有效量的化合物I和常規(guī)藥用輔助物質。
對于局部外用，例如粉劑，軟膏或噴霧劑，活性成分可以以常用濃度存在?；钚晕镔|一般以0.001至1％重量，優(yōu)選0.001至0.1％重量存在。
內用時，制劑以單劑量給藥。在單劑量中每kg體重0.1至100mg。根據(jù)病情，制劑可以以一個或多個劑量給藥。
根據(jù)所需的給藥模型，本發(fā)明藥物制劑除活性物質外還包括普通賦形劑和稀釋劑。對于局部外用，可以使用藥用輔助物質如乙醇，異丙醇，乙氧基化的蓖麻油，乙氧基化氫化的蓖麻油，聚丙烯酸，聚乙二醇，聚乙二醇硬脂酸酯，乙氧基化的脂肪醇，液體石蠟，礦脂和羊毛脂。適于外用的例子有乳糖，丙二醇，乙醇，淀粉，滑石和聚乙烯基吡咯烷酮。
也可以有抗氧化劑如生育酚和丁基化的羥基茴香醚，和丁基化的羥基甲苯，調味劑，穩(wěn)定劑，乳化劑和潤滑劑存在。
除活性物質外，存在于制劑中，并用于藥物制劑生產(chǎn)的物質是毒理學上可接受的，并與具體活性物質共容。該藥物制劑以常規(guī)方式生產(chǎn)，例如通過活性物質與常規(guī)賦形劑和稀釋劑混合制備。
藥物制劑可以以各種途徑給藥，例如口服，腸胃外如靜脈灌注，皮下，腹膜內和局部給藥。這樣，可以存在的有片劑，乳液，灌注和注射溶液，糊劑，軟膏，凝膠，乳劑，洗劑，粉劑和噴霧劑。
實施例12-(4-(2-N，N-二乙基氨基)乙-1-基氧基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺 a)4-(2-(N，N-二乙基氨基乙-1-基氧基)苯甲醛15g(122mmol)4-羥基苯甲醛，16.7g(122mmol)N-(2-氯乙基)-N，N-二乙胺和33.9g(246mmol)碳酸鉀與一刮勺尖的18-冠-6在300ML乙基甲基酮中一起回流6小時。過濾后，將濾液真空濃縮。殘余物分配在乙醚和2M氫氧化鈉溶液之間，分出醚相，干燥并真空濃縮。得到24.8g中間體。b)2-(4-(2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基氧基)苯基)苯并咪唑-4-羧酸乙酯將2g(11mmol)2，3-二氨基苯甲酸乙酯和1.4ML濃醋酸溶于25ML甲醇。然后在30分鐘內滴加溶于50ML甲醇中的3.2g(14.4mmol)中間體1a。隨后快速滴加溶于37.5ML溫水中的2.9g(14.4mmol)醋酸銅(II)，然后將混合物回流20分鐘。使反應溶液冷卻至50℃，加入4.5ML32％鹽酸。然后小心地滴加4.3g硫化鈉水合物在25ML水中的溶液，混合物被攪拌15分鐘。將反應溶液倒入冰水中，抽濾產(chǎn)生的沉淀。用碳酸氫鈉水溶液使濾液成堿性，并用乙酸乙酯萃取幾次。分出乙酸乙酯相，干燥并真空濃縮。得到4.4g中間體。c)2-(4-(2-N，N-二乙基氨基)乙-1-基氧基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰肼將2.7g(54mmol)水合肼加入4.1g(10.7mmol)中間體1b在30ML乙醇中的溶液，并將混合物回流10小時。真空除去有機溶劑，并將殘余物分配在水和乙酸乙酯之間。分出乙酸乙酯相，干燥并真空濃縮。然后將以此方式所得的殘余物用乙醚處理，再次抽濾，從而得到1.7g中間體。d)2-(4-(2-N，N-二乙基氨基)乙-1-基氧基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺將約1.6g Raney鎳加入1.6g(4.5mmol)中間體1c在45ML二甲基甲酰胺/水(2/1)的溶液中，混合物在100℃加熱6小時。然后過濾反應混合物，濾液用大量水稀釋，沉淀出產(chǎn)物。得到1.2g產(chǎn)物。1H-NMR(D6-DMSo).δ＝0，95(6H)，2，6(4H)，2，8(2H)，4，1(2H)，7，1(2H)，7，3(1H)，7，7(1H＋NH)，7，85(1H)，8，2(2H)和9，4(NH)ppm.
以類似于上述方法可以制備下列實施例化合物
權利要求
1.下式I或II的化合物 其中R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，其中烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NHCOR21，NR22R23OH，O-C1-C4-烷基，O-C1-C4-烷基苯基，NH2，苯基，其中苯環(huán)也可以被最多兩個基團R24取代，而R21和R22互相獨立地是氫或C1-C4烷基和R23是氫，C1-C4-烷基或苯基，而R24是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和x可以是0，1或2和R3是-D-(F1)p-(E)q-(F2)r-G，其中p，q和r不能同時為0，或者是-E-(D)u-(F2)s-(G)v，其中基團E可以被一個或兩個基團A取代，或R3是B，而R4是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，OH，硝基，CF3，CN，NR41R42，NH-CO-R43，O-C1-C4-烷基，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是氫，C1-C4-烷基，C1-C4-烷基苯基或苯基，和D是S或O，E是苯基，咪唑，吡咯，噻吩，吡啶，嘧啶，哌嗪，吡嗪，呋喃，噻唑，異惡唑，吡咯烷，哌啶，三氫吖庚因和F1是1至8個碳原子的鏈，該鏈的一個碳原子也可以帶有一個OH或O-C1-C4-烷基，和F2是1至8個碳原子的鏈，該鏈的一個碳原子也可以帶有一個OH或O-C1-C4-烷基，和p可以是0或1和q可以是0或1，和r可以是0或1和s可以是0或1和u可以是0或1和v可以是0或1G可以是NR51R52或 和R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，(CH2)t-K和R52是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，苯基， ，-SO2R53，-(C＝N)-R53，-CO-NHR53，-(C＝N)-NHR53，其中R53可以是支鏈或非支鏈的O-C1-C6-烷基，苯基，支鏈或非支鏈的C1-C4-烷基苯基，其中在R52和R53互相獨立的情況下，C1-C6烷基的一個氫原子可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基，環(huán)己基，環(huán)戊基，四氫萘基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)庚基，萘基和苯基，其中基團R52和R53的碳環(huán)互相獨立地帶有一個或兩個下列基團支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，支鏈或非支鏈的O-C1-C4烷基，OH，F(xiàn)，Cl，Br，I，CF3，NO2，NH2，CN，COOH，COOC1-C4-烷基，C1-C4-烷基氨基，CCl3，C1-C4-二烷基氨基，SO2-C1-C4烷基，SO2苯基，CONH2，CONH-C1-C4烷基，CONH苯基，CONH-C1-C4-烷基苯基，NHSO2-C1-C4-烷基，NHSO2苯基，S-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C0-C4-烷基苯基，CHO，CH2-O-C1-C4-烷基，-CH2-O-C1-C4-烷基苯基，-CH2OH，-SO-C1-C4-烷基，-SO-C1-C4-烷基苯基，-SO2NH2，SO2NH-C1-C4-烷基和兩個基團形成橋-O-(CH2)1，2-O-，B可以是 和A可以是氫，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，OH，O-C1-C4-烷基，O-C1-C4-烷基苯基，NH2，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，CN，NH-CO-R33，其中R33是氫，C1-C4-烷基或苯基和R31是氫，C1-C6-烷基，(CH2)t-K和R32是氫，C1-C6-烷基，-CO-R8，SO2-R8，-(C＝N)-R8，-CO-OR8，-CO-NHR8和-(C＝N)-NHR8和R33是氫，C1-C4-烷基和t是0，1，2，3，4和K是可以帶有最多兩個基團R的苯基，是NRk1Rk2(其中Rk1和Rk2分別如R41和422定義)，NH-C1-C4-烷基苯基，吡咯烷，哌啶，1，2，5，6-四氫吡啶，嗎啉，三氫吖庚因，哌嗪，它也可以被烷基基團C1-C6-烷基取代，和高哌嗪，它也可以被烷基基團C1-C6-烷基取代，和R5可以是氫，C1-C6-烷基，NR7R9和 和R7是氫，C1-C6-烷基，C1-C4-烷基苯基，苯基，其環(huán)可以被最多兩個基團R71取代，和R71是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和R8是氫，C1-C6-烷基，苯基，C1-C4-烷基苯基，其環(huán)可以被最多兩個基團R81取代，和R81是OH，C1-C6-烷基，O-C1-C4-烷基，氯，溴，碘，氟，CF3，硝基，NH2，和R9是氫，COCH3，CO-O-C1-C4-烷基，COCF3，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個或兩個氫可以在各種情況下被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團碘，氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，CF3，SO2-C1-C4-烷基，和其互變異構形式，可能的對映異構和非對映異構形式，其前藥和其藥用鹽。
2.如權利要求1中的式I或II的化合物，其中R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，其中烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22互相獨立地是氫，C1-C4-烷基R23是氫，C1-C4-烷基或苯基，和R3是-O-(CH2)。-(CHR31)m-(CH2)n-R5，其中R31是氫，C1-C4-烷基，OH和O-C1-C4-烷基，m，o互相獨立地是0，1或2，和n是1，2，3或4，和R4是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，O-R41，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是C1-C4-烷基或苯基，和R5是NR51R52或下列基團之一 和R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，和R52是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，苯基，-C(O)R53，-SO2R53，其中R53是支鏈或非支鏈的O-C1-C6-烷基，苯基，支鏈或非支鏈的C1-C4-烷基苯基，其中在R52和R53互相獨立的情況下，C1-C6-烷基的一個氫原子可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基，環(huán)己基，環(huán)戊基，四氫萘基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)庚基，萘基和苯基，其中基團R52和R53的碳環(huán)互相獨立地帶有一個或兩個下列基團支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，支鏈或非支鏈的O-C1-C4-烷基，OH，F(xiàn)，Cl，Br，I，CF3，NO2，NH2，CN，COOH，COOC1-C4-烷基，C1-C4-烷基氨基，CCl3，C1-C4-二烷基氨基，SO2-C1-C4-烷基，SO2苯基，CONH2，CONH-C1-C4-烷基，CONH苯基，CONH-C1-C4-烷基苯基，NHSO2-C1-C4-烷基，NHSO2苯基，S-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C1-C4-烷基，-O-C(O)-C0-C4-烷基苯基，CHO，CH2-O-C1-C4-烷基，-CH2-O-C1-C4-烷基苯基，-CH2OH，-SO-C1-C4-烷基，-SO-C1-C4-烷基苯基，-SO2NH2，SO2NH-C1-C4-烷基和兩個基團形成橋-O-(CH2)1，2-O-，其互變異構形式，可能的對映異構和非對映異構形式，其前藥和其藥用鹽。
3.如權利要求1中的式I或II的化合物，其中R1是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，其中烷基的一個C原子也可以帶有OR11或基團R5，其中R11是氫或C1-C4-烷基，和R2是氫，氯，氟，溴，碘，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22互相獨立地是氫，C1-C4-烷基R23是氫，C1-C4-烷基或苯基，和R3是 而R31是氫，CHO和-(CH2)o-(CHR32)m-(CH2)n-R5，其中R32是氫，C1-C4-烷基，OH和O-C1-C4-烷基，m，o互相獨立地是0，1或2，和n是1，2，3或4，和R4是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，O-R41，其中R41和R42互相獨立地是氫或C1-C4-烷基而R43是C1-C4-烷基或苯基，和R5是NR51R52或下列基團之一 和R51是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，和R52是氫，COCH3，CO-O-C1-C4-烷基，COCF3，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基，其互變異構形式，可能的對映異構體和非對映異構形式，其前藥和其藥用鹽。
4.如權利要求1至3任一項的化合物，其中R2的位置是相對于苯并咪唑環(huán)的3位和R3在4位，或R2處于相對于苯并咪唑環(huán)的4位和R3在3位。
5.如權利要求1至4任一項的化合物，其中R1和R4是氫。
6.如權利要求1至5任一項的化合物，其中R2是氫，支鏈或非支鏈的C1-C6-烷基，硝基，CN，NH2，O-C1-C4-烷基。
7.如權利要求1或3至6任一項的化合物，其中(i)R3是 R31是氫或-(CH2)p-R5，其中p是1或2和R52可以是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基；(ii)R3是 R31是氫或-(CH2)p-R5，其中p是1或2和R52可以是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基；和(iii)R3是 R52是氫，支鏈或非支鏈C1-C6-烷基，其中C1-C6-烷基的一個氫可以被下列基團之一取代OH，O-C1-C4-烷基和苯基，苯環(huán)也可以帶有一個或兩個下列基團氯，溴，氟，支鏈或非支鏈C1-C4-烷基，硝基，氨基，C1-C4-烷基氨基，C1-C4-二烷基氨基，OH，O-C1-C4-烷基，CN，SO2-C1-C4-烷基。
8.權利要求1，2或4至6任一項的化合物，其中R3是-O-(CH2)p-R5，其中p等于2，3或4。
9.如權利要求1，2或4至7任一項的化合物，其中R5是6-元環(huán)，而R52是取代或未取代的苯環(huán)。
10.藥物，所述藥物包含如權利要求1至9任一項的化合物以及常規(guī)載體和輔助物質。
11.如權利要求1至10任一項的式I化合物在生產(chǎn)用于治療發(fā)生病理性PARP活性升高的疾病的藥物中的用途。
12.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療神經(jīng)變性和神經(jīng)損傷的藥物。
13.如權利要求11的用途，用于治療由局部缺血，創(chuàng)傷或大量出血引起的神經(jīng)變性疾病和神經(jīng)損傷。
14.如權利要求11的用途，用于治療中風和腦創(chuàng)傷。
15.如權利要求11的用途，用于治療Alzheimer’s病、帕金森病和Huntington’s病。
16.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)用于治療或預防由局部缺血引起的損傷的藥物。
17.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療癲癇，尤其是全身性癲癇發(fā)作，如小發(fā)作和強直陣攣性癲癇和部分癲癇發(fā)作如暫時性lope，和復合部分癲癇發(fā)作的藥物。
18.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療腎臟局部缺血后的腎臟損傷，由藥物治療，例如環(huán)孢菌素治療期間引起的損傷，和腎移植期間和之后的治療的藥物。
19.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療心臟局部缺血后的心臟損傷的藥物。
20.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療微梗塞，例如心閥置換，動脈瘤切除和心臟移植期間和之后的微梗塞的藥物。
21.如權利要求11的式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療臨界狹窄冠狀動脈的再血管化，例如在PTCA和旁通管手術中，和臨界狹窄的外周動脈，尤其是腿動脈的藥物。
22.如權利要求11中式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療急性心肌梗塞和其醫(yī)學松解術期間和之后發(fā)生的損傷的藥物。
23.如權利要求11中式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療腫瘤和其轉移的藥物。
24.如權利要求11中式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療多-器官衰竭的膿毒癥，例如在膿毒性休克和“急性呼吸窘迫綜合征”期間和之后的膿毒癥的藥物。
25.如權利要求11中式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療免疫學疾病，如炎癥和風濕性疾病如風濕性關節(jié)炎的藥物。
26.如權利要求11中式I化合物的用途，用于生產(chǎn)治療糖尿病的藥物。
27.式XX或XXI的化合物和其鹽 其中R，R1和R2如前面權利要求中定義。
28.生產(chǎn)式XX或XXI化合物和其鹽的方法，該方法包括2-鹵-3-硝基苯甲酸酯與合適的二胺在極性溶劑中，在堿存在下反應，接著用氫氣在合適的催化劑存在下氫化。
29.式XX或XXI化合物在合成PARP抑制劑中的用途。
30.體外檢測PARP抑制劑的方法，該方法包括a)將未支持或支持的可以聚ADP-核糖化的靶與反應混合物保溫，所述混合物含有a1)PARP；a2)PARP激活劑；和a3)PARP抑制劑或懷疑含有至少一種PARP抑制劑的分析物；b)進行聚ADP-核糖化反應；和c)使用抗-聚(ADP-核糖)抗體定性或定量測定靶的聚ADP-核糖化。
31.如權利要求23的方法，其中在進行聚ADP-核糖化反應之前，使PARP與PARP激活劑，和PARP抑制劑或懷疑含有至少一種PARP抑制劑的分析物預保溫。
32.如權利要求23或24任一項的方法，其中聚ADP-可核糖化的靶是組蛋白。
33.如權利要求23至25任一項的方法，其中PARP激活劑是激活的DNA。
34.如權利要求23至26任一項的方法，其中通過加入NAD+而啟動聚ADP-核糖化反應。
35.如權利要求23至27任一項的方法，其中用受體熒光團標記未支持的靶。
36.如權利要求28的方法，其中使用被供體熒光團標記的抗-聚(ADP-核糖)抗體測定未支持的靶的聚ADP核糖化，所述供體熒光團能將能量轉移給受體熒光團。
37.如權利要求28和29任一項的方法，其中靶是生物素化的組蛋白，受體熒光團經(jīng)由親和素或鏈霉親和素與其結合。
38.如權利要求29和30任一項的方法，其中抗-聚(ADP-核糖)抗體攜有銪穴狀化合物作為供體熒光團。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的通式Ⅰ或Ⅱ的2－苯基苯并咪唑,其中基團如說明書中定義,和其互變異構形式,可能的對映體和非對映體形式,其前藥,和可能的生理耐受鹽,其制備和用途。
文檔編號A61P9/00GK1331682SQ99814796
公開日2002年1月16日 申請日期1999年10月28日 優(yōu)先權日1998年11月3日
發(fā)明者W·盧比什, M·考克, T·霍格 申請人:巴斯福股份公司