專利名稱：用于治療由肉孢子蟲、新孢子蟲和弓形蟲引起的疾病的三嗪酮化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療感染了引起流產(chǎn)遺傳學(xué)(abortigenic)或神經(jīng)病學(xué)疾病的寄生蟲的動物的三嗪酮化合物。尤其是，本發(fā)明涉及用于治療引起流產(chǎn)遺傳學(xué)或神經(jīng)病學(xué)疾病的寄生原生動物如球蟲目的三嗪酮化合物。
先有技術(shù)的簡要說明三嗪酮化合物如三嗪二酮，例如地克珠利(diclazuril)化合物，和三嗪三酮，例如托曲珠利(Toltrazuril)化合物被用于防治各種動物、昆蟲和魚類由廣范圍的原生動物引起的疾病。見美國專利4933341；4935423；5114938；5141938；5188832；5196562，5256631和5464837。對這些化合物敏感的原生動物感染鳥類、哺乳動物和昆蟲并表現(xiàn)為腹瀉、消瘦、惡心和嘔吐。通常三嗪酮的作用模式是攻擊發(fā)現(xiàn)于內(nèi)臟和腸壁細(xì)胞中的中期寄生階段，引起寄生蟲的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核周空間和線粒體增大。這針對性地干擾了核的分裂，使得shizonts和小配子母體保持很小而且只分別形成了少數(shù)的裂殖子和小配子。報道的最終結(jié)果是這些后期的寄生蟲喪失了穿透新哺乳動物細(xì)胞的能力，有效地終止了寄生蟲在宿主中的復(fù)制。
這里尤其涉及自20世紀(jì)70年代以來被懷疑引起動物的神經(jīng)病學(xué)和/或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的某一原生動物。成功分離和體外培養(yǎng)這些原生動物被證明是困難的。例如直到20世紀(jì)80年代才成功地完成了從腦或腦脊液中的分離。一旦確定了神經(jīng)病學(xué)疾病是由某些感染腦部的寄生蟲引起和流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病是由某些感染胚胎的寄生蟲引起，對于能夠穿過血-腦和胎盤屏障而不引起有害副作用的抗-寄生蟲藥物的需要變得勢在必行。許多本領(lǐng)域已知的能穿過血-腦屏障和/或胎盤屏障來有效治療腦部寄生蟲感染的藥物具有有害的副作用以致于使用它們需要冒很大風(fēng)險。因此，迄今為止還沒有許可對這種神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病提供有效治療的有效藥物。下文是寄生蟲病的主要描述。
馬原蟲腦脊髓炎(Equine Protozal Myeloencephalitis)(EPM)是一種馬患的神經(jīng)病學(xué)疾病，由于對于供不應(yīng)求的小馬的偏好(例如良種賽馬和純種表演馬)，因此疾病對于馬業(yè)具有重要的貨幣效應(yīng)。在20世紀(jì)70年代首次被確認(rèn)為疾病的EPM是從患有EPM的馬身上培養(yǎng)出來的并且直到1991年才被命名為神經(jīng)元肉孢子蟲(Sarcocystisneurona)。1997年，從患有EPM的馬腦中分離出了新孢子蟲屬(Neospora spp.)，現(xiàn)被命名為巨新孢子蟲(Neospora hugesi)。于是，現(xiàn)在就提出EPM可能是由這種新識別的生物體單獨引起的，由神經(jīng)元肉孢子蟲單獨引起的或兩者的結(jié)合引起的。EPM常常導(dǎo)致平衡失調(diào)(運動失調(diào))、虛弱和強(qiáng)直。該疾病能模擬幾乎任何神經(jīng)病學(xué)狀況。它能以急性的或慢性的形式發(fā)生。慢性的形式一開始經(jīng)常是隱伏的，在疾病到達(dá)晚期之前很難診斷，并且能導(dǎo)致死亡。在最輕的狀態(tài)下，唯一的臨床癥狀可能是不明確的下肢跛瘸或較輕的呼吸噪音。在最嚴(yán)重的狀態(tài)下，馬不能吞咽或站立。目前已知在最嚴(yán)重的狀態(tài)下，寄生蟲，例如神經(jīng)元肉孢子蟲感染腦部并對其產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷。與由炎癥細(xì)胞的浸潤導(dǎo)致的腦損傷、水腫和與神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的裂殖子和子粘變體有關(guān)的神經(jīng)原死亡一樣，EPM的臨床癥狀是由寄生蟲造成的直接神經(jīng)原(腦部和脊髓)損傷引起的。目前，沒有批準(zhǔn)用于控制EPM的有效治療和預(yù)防。人類藥物三甲氧芐二氨嘧啶-氨磺酰結(jié)合物已被采用。然而，治療是昂貴的并且需要多次給藥。
另一種球蟲類寄生蟲，鼠弓形蟲已被認(rèn)識一段時間了并且是從貓的腸和肌肉組織中首次分離到的。這種寄生蟲的終局宿主是能長期定居生物體并將卵囊傳播給包括牛、綿羊、豬和人類在內(nèi)的其它動物的貓。已知羊、牛和人類的感染與流產(chǎn)和先天獲得性機(jī)能紊亂有關(guān)，其最初感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)。最近得知它還與流產(chǎn)和小貓畸形有關(guān)，該小貓為在懷孕期間感染前血清反應(yīng)陰性的受感染的母貓所生。非貓科宿主如牛、綿羊、豬和人類不產(chǎn)生卵囊但發(fā)育過程中肌肉和腦可能遭受速殖子和慢殖子的侵襲，所產(chǎn)生的疾病臨床癥狀是神經(jīng)病學(xué)癥狀和胎兒缺損流產(chǎn)。據(jù)報道，60％的貓對鼠弓形蟲是血清學(xué)反應(yīng)陽性的。再重復(fù)一次，還沒有批準(zhǔn)對弓形體病的治療和預(yù)防。
還有另一種球蟲類寄生蟲，犬齒新孢子蟲(Neospora caninum)既導(dǎo)致動物的神經(jīng)學(xué)疾病也導(dǎo)致動物的流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病。它于1988年首次從狗的體內(nèi)分離到并且預(yù)先與鼠弓形蟲融合。由這種寄生蟲引起的疾病最嚴(yán)重的是發(fā)生于經(jīng)胎盤感染的小狗身上并且特征是小狗身上不斷增強(qiáng)的麻痹癥狀，尤其是后肢；也可能引起多肌炎和肝炎。這種疾病近來更多的被認(rèn)為是與流產(chǎn)和神經(jīng)病學(xué)有關(guān)的新生小牛肢體缺陷的主要誘因。非化膿性腦炎和流產(chǎn)胎兒的心肌炎的微觀損傷可在腦、脊髓和心臟中看到。犬齒新孢子蟲的終局宿主最近被證實是狗。在這期間既沒有批準(zhǔn)狗或牛的犬齒新孢子蟲的治療和預(yù)防，也沒有批準(zhǔn)馬的巨新孢子蟲(Neospora hugesi)的治療和預(yù)防。
本技術(shù)領(lǐng)域的參考文獻(xiàn)，包括上面提到的參考文獻(xiàn)都沒有建議或教導(dǎo)三嗪酮化合物如托曲珠利(Toltrazuil)或托曲珠利砜(最近被重新命名為“泊那珠利(Ponazuril)”)在治療感染了引起流產(chǎn)遺傳學(xué)或神經(jīng)病學(xué)疾病的球蟲或，尤其是肉孢子蟲(Sacocystidae)的動物且不引起耐受性副作用方面的用途。因此需要一種改進(jìn)的并且安全的治療患有寄生蟲病的動物的方法，所述寄生蟲病表現(xiàn)為神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病。
發(fā)明概述根據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明包括一種治療患有寄生蟲神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的患病動物的方法，所述疾病可采用三嗪酮化合物進(jìn)行治療，附加條件是如果疾病是神經(jīng)元肉孢子蟲引起的，不能采用化合物地克珠利或托曲珠利(Toltrazuril)。該方法包括對動物施用藥學(xué)上有效劑量的化合物。本文中使用的術(shù)語“藥學(xué)上有效劑量”意味著所施用的三嗪酮的劑量高到足夠在體內(nèi)或體外抑制寄生原生動物的生長，典型的是抑制導(dǎo)致神經(jīng)病學(xué)疾病和/或流產(chǎn)的球蟲。藥學(xué)上有效劑量控制感染組織中的寄生蟲因而改善動物的健康。
而且，本發(fā)明包括一種預(yù)防性(metaphylactically)治療感染了引起神經(jīng)學(xué)疾病或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的寄生蟲的動物，該疾病可采用三嗪酮化合物進(jìn)行治療。預(yù)防治療包括通過預(yù)防-有效治療方案給動物施用三嗪酮化合物。術(shù)語“預(yù)防-有效治療方案”指的是延長周期進(jìn)行預(yù)定間歇服用三嗪酮化合物直到所述動物戰(zhàn)勝了侵襲的寄生蟲，就是說建立了免疫保護(hù)應(yīng)答反應(yīng)或清除了寄生蟲。典型地是，治療方案是這樣的以致于能有效地控制寄生蟲并預(yù)防疾病的臨床病癥。預(yù)防有效劑量還能延長施用到五年或動物的有生之年，尤其是在寄生蟲難以控制的情況下。對于預(yù)防治療，優(yōu)選的三嗪酮化合物是三嗪三酮，其包括但不局限于托曲珠利和泊那珠利(Ponazruil)。
本發(fā)明還包括一種單一高劑量的動物治療方法。該方法包括給動物施用一種單一高劑量的藥學(xué)有效劑量的三嗪酮化合物，所述患病動物患有可用三嗪酮治療的神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)寄生蟲疾病。術(shù)語“單一高劑量”指的是只一次用藥的劑量。該劑量明顯高于治療或預(yù)防治療過程中的使用劑量；在控制導(dǎo)致疾病的寄生蟲方面是有效的，并且不會產(chǎn)生有害作用如毒性。三嗪酮單一高劑量通常大于10mg/Kg。本發(fā)明的這方面和其它方面將在下文中進(jìn)行更加充分的描述。
發(fā)明的詳細(xì)說明如上所述，本發(fā)明涉及治療被感染的或患病的動物的方法，所述患病動物患有可用三嗪酮治療的神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)寄生蟲疾病，所述方法包括給患病動物施用有藥學(xué)效劑量的所述化合物。作為例證但并不局限于此的動物實例是馬、牛、貓、犬、豬、鳥、昆蟲和人類。導(dǎo)致疾病的寄生蟲是表現(xiàn)為神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的肉孢子蟲(Sarcocystidae)屬的球蟲。作為例證但并不局限于此的寄生蟲實例可選自下列一組寄生蟲肉孢子蟲(Sarcocystis)屬、新孢子蟲(Neospora)屬和弓形蟲屬。肉孢子蟲(Sarcocystidae)典型地選自下列一組寄生蟲神經(jīng)元肉孢子蟲(S.neurona)、巨新孢子蟲(N.hugesi)、犬齒新孢子蟲(N.caninum)和鼠弓形蟲。原生動物傳染病或疾病包括但不局限于EPM、新孢子蟲(Neosporosis)和弓形蟲。
在本發(fā)明的實踐中，由本文描述的由原生動物引起的寄生蟲傳染病或疾病的治療使得神經(jīng)病學(xué)和流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的臨床癥狀減輕。通常，臨床癥狀包括跛瘸、運動失調(diào)、癱瘓、流產(chǎn)、虛弱的幼仔和其它有關(guān)的病癥。在治療處理方面，根據(jù)以下因素如疾病的嚴(yán)重程度和導(dǎo)致疾病的寄生蟲種類，治療方案可以是一日一次，一日兩次或多次，每隔一天一次或甚至是每星期一次。然而某些情況下，治療方案可能無限期地持續(xù)，有時持續(xù)動物的整個有生之年。例如，在動物感染了更強(qiáng)的寄生蟲抗性株的情況下，治療可以延長更長的時間直到病癥消除。典型的治療期限是從大約28天到90天并且優(yōu)選地是從大約28天到60天。最優(yōu)選的治療是一日一次持續(xù)大約28天。
關(guān)于預(yù)防治療，感染動物被治療到本身不表現(xiàn)臨床病狀。這種治療最終使得動物獲得控制寄生蟲的能力，就是說，通過建立有效的免疫應(yīng)答而賦予了將來抗感染的能力，而不需要再進(jìn)行三嗪酮化合物的給藥。根據(jù)本發(fā)明，預(yù)防活性涉及按照預(yù)定的間歇治療方案(預(yù)防-有效治療方案)使用三嗪酮化合物來控制原生動物。因此，預(yù)防-有效治療方案是通過給藥來降低寄生蟲的致病能力，就是說，殺死它們或減少它們的數(shù)量。實質(zhì)上，預(yù)防-有效治療方案可以給藥兩次或更多次，典型地是從每月大約一次到動物的整個有生之年或直到在動物體內(nèi)建立了遺傳清除機(jī)制例如有效免疫應(yīng)答來抵抗將來的感染。后者可以存在5年或少于5年。就所認(rèn)知的，預(yù)防治療是基于識別這樣情況，即當(dāng)動物感染了本文所描述的原生動物后，直到經(jīng)過了相當(dāng)長的時間(例如，感染后2-6個月)，它們才表現(xiàn)出。臨床癥狀如神經(jīng)病學(xué)癥狀或流產(chǎn)。相反，腸原生動物感染在感染后馬上就表現(xiàn)出它們自己的癥狀。根據(jù)本發(fā)明，預(yù)防治療防治寄生蟲的生長和導(dǎo)致的臨床疾病。治療方案是一種間歇式的方案即每月大約一次，每兩個月一次或每兩個星期一次。
在治療和預(yù)防治療中，可以采用相當(dāng)于大約1.0到100mg/Kg的劑量，優(yōu)選地是大約1.0到25mg/Kg和更優(yōu)選地是大約2.5到10mg/Kg的劑量。對于特定的抗性病例(例如，當(dāng)動物感染了抗性株)，需要高的范圍。所需劑量水平和療程是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所能預(yù)料的。對于患有EPM的馬或患有新孢子蟲(Neosporosis)的牛的優(yōu)選治療方案是服用大約1.0到25mg/Kg和更優(yōu)選的范圍是每28天大約2.5到10mg/Kg的三嗪三酮。
在單一高劑量治療中，三嗪酮以大于10mg/Kg和高達(dá)大約100mg/Kg的藥學(xué)有效劑量進(jìn)行給藥。這是本發(fā)明的一個顯著特性，本發(fā)明的化合物可以是無毒的，因此它們可以以高劑量水平給藥。高劑量給藥的優(yōu)點在于事實上不需要反復(fù)給藥。在單一高劑量治療時，發(fā)現(xiàn)泊那珠利在高度100mg/kg體重的劑量下既安全又有效。與現(xiàn)有有關(guān)化合物不同的是，優(yōu)選與泊那珠利等效的三嗪酮類化合物，其中它們?nèi)绻苑浅８邉┝克浇o藥時也不會引起毒副作用。
不受本發(fā)明任何具體理論的約束，可以相信本發(fā)明所述治療的意外成功是由于所述三嗪酮類化合物透過血腦屏障或胎盤屏障的能力所引起的。本發(fā)明的化合物一定能夠很容易地透過血腦屏障，并且也能夠滲透過胎盤并且就地殺死腦和腦脊液/脊髓中的原生動物。已經(jīng)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)此類化合物即使在本發(fā)明所述單一高劑量治療方案所必需的高劑量下也呈無毒并且無誘變性。
因此，不昂貴的、易于給藥的藥物適于在動物中有效治療和防護(hù)上述疾病，而且不產(chǎn)生不可接受的副作用如毒性和誘變性。下文特別描述了三嗪酮類化合物但不限于托曲珠利類化合物。公開的內(nèi)容和本發(fā)明也包括其他以托曲珠利的方式應(yīng)用的三嗪酮類化合物。本申請所用的托曲珠利具有下式(1) 其中R1表述鹵代烷硫基、鹵代烷基-亞磺酰基或鹵代烷基磺?；?，R2代表氫、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基巰基、鹵素、鹵代烷基或選擇性取代的氨磺?；?，如二烷基氨磺酰基，R3和R4可以相同或不同地代表氫、烷基、鏈烯基或炔基和X是O或S，和它們的生理可接受鹽。
此外，尤其已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明可以采用下列式Ia的化合物及其可藥用鹽 其中RI代表鹵代(C1-C4)-烷硫基、鹵代(C1-C4)-烷基亞磺?；螓u代(C1-C4)-烷基磺酰基，RII代表氫、烷基(C1-C4)、烷氧基(C1-C4)、鹵素、烷氧基(C1-C4)烷基(C1-C4)、烷基(C1-C4)-巰基、二烷基(C1-C4)氨基磺?；螓u代烷基(C1-C4)和RIII和RIV可以相同或不同和代表氫、烷基(C1-C4)或鏈烯基(C2-C4)和X是O或S。最后，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)(a)1-(4-苯氧基-苯基)-1，3，5-三嗪類化合物可按照如下方法獲得，當(dāng)式II的化合物 其中R1、R2、R3和X具有上述含義；與式III的取代羰基異氰酸酯反應(yīng) 其中R5代表鹵素原子、烷氧基或芳氧基，并且將此過程中形成的式IV的取代1，3，5-三嗪類衍生物選擇性地分離 其中R1、R2、R3和X具有上述含義，并且選擇性地與式V的化合物反應(yīng)A---Z(V)其中A代表烷基、鏈烯基或炔基和Z代表鹵素；或(b)通式I的1-(4-苯氧基-苯基)-1，3，5-三嗪類衍生物可通過以下方法獲得，其中R1、R2、R3和X具有上述含義的式II化合物選擇性地在酸性受體存在下與式VI的雙(氯羰基)-胺反應(yīng) 其中R6代表烷基，或(c)為了制得其中取代基R2、R3和R4以及X具有上述含義并且R1代表鹵代烷基亞磺?；螓u代烷基磺酰基的式I化合物，式(VII)的化合物與適量的適當(dāng)氧化劑反應(yīng) 其中R2、R3和R4具有上述含義，和R1’代表鹵代烷硫基。
若在方法(a)中使用N-[3-氯-4-(4’-三氟甲硫基-苯氧基)-苯基]-N’-甲基-脲和氯羰基異氰酸酯，反應(yīng)的過程可以用以下反應(yīng)式表示 若在方法(b)中用N-[3-乙氧基-4-(4’-三氟甲硫基-苯氧基)-苯基]-硫脲和N-甲基-雙(氯羰基)胺作為起始原料，反應(yīng)的過程可以用以下反應(yīng)式表示 按照方法(a)或(b)獲得的其中R1＝鹵代烷硫基和X＝O的通式I的化合物可以按照方法(c)氧化成為相應(yīng)的鹵代烷基亞磺?；螓u代烷基磺?；愌苌?。如果用過氧化氫作為氧化劑，反應(yīng)的過程可以用以下反應(yīng)式表示 在式I、II、IV、V、VI和VII中，R2、R3、R4、R6或A中定義的烷基是具有1-6個，優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基?？商峒暗膶嵗沁x擇性取代的甲基，乙基，正-和異-丙基和正-、異-和叔-丁基。
在式I、II、IV、V和VII中，R3、R4或A中定義的鏈烯基是具有優(yōu)選2-6個，特別是2-4個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基?？商峒暗膶嵗沁x擇性取代的乙烯基、丙烯-1-基、丙烯-2-基和丁烯-3-基。
在式I、II、IV、V和VII中，R3、R4或A中定義的炔基是具有優(yōu)選2-6個，特別是2-4個碳原子的直鏈或支鏈炔基?？商峒暗膶嵗沁x擇性取代的乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基和丁炔-3-基。
在式I、II、III、IV和VII中，R2或R5中定義的烷氧基是具有優(yōu)選1-6個，特別是1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基。可提及的實例是選擇性取代的甲氧基，乙氧基，正-和異-丙氧基和正-和異-丁氧基。
在式I、II、III、IV、V和VII中，R2、R5或Z中定義的鹵素優(yōu)選是氟、氯、溴和碘，尤其是氯和溴。
在式I、II、IV和VII中，R1定義的鹵代烷硫基是具有優(yōu)選1-4、特別是1或2個碳原子和優(yōu)選1-5、特別是1-3個相同或不同鹵素原子的鹵代烷硫基，鹵素原子優(yōu)選是氟、氯和溴，尤其是氟和氯?？商峒暗膶嵗侨琢蚧?、氯-二氟甲硫基、溴甲硫基、2，2，2-三氟乙硫基和全氟乙硫基。
在式I、II和IV中，R1中定義的鹵代烷基亞磺?；蔷哂袃?yōu)選1-4、特別是1或2個碳原子和優(yōu)選1-5、特別是1-3個相同或不同的鹵素原子的鹵代烷基亞磺?；?，鹵素原子優(yōu)選是氟、氯和溴，尤其是氟和氯?？商峒暗膶嵗侨谆鶃喕酋；?、氯-二氟甲基亞磺酰基、溴甲基亞磺酰基、2，2，2-三氟乙基亞磺?；腿一鶃喕酋；?。
在式I、II和IV的中，R1中定義的鹵代烷基磺?；蔷哂袃?yōu)選1-4、特別是1或2個碳原子和優(yōu)選1-5、特別是1-3個相同或不同的鹵素原子的鹵代烷基磺?；?，鹵素原子優(yōu)選是氟、氯和溴，尤其是氟和氯。可提及的實例是三氟甲基亞磺酰基、氯-二氟甲基亞磺?；?、溴甲基-磺酰基、2，2，2-三氟乙基磺?；腿一酋；?。
在式I、II和IV中，R2中定義的選擇性取代氨磺?；鶅?yōu)選是下列基團(tuán)之一SO2NH2，SO2NH-CH3，SO2N(CH3)2，SO2NH-C2H5，SO2-N(C2H5)2， 和
在式III中，R5中定義的芳氧基優(yōu)選是單環(huán)碳環(huán)芳氧基或雙環(huán)碳環(huán)芳氧基，特別是苯氧基。
在式III中，芳氧基R5優(yōu)選是苯氧基。
多數(shù)用作起始原料的式II的取代脲或硫脲類化合物迄今為止是未知的，但它們可以很容易地通過已知方法制得，或通過(a)取代4-氨基二苯基醚與相應(yīng)的取代異氰酸酯或異硫氰酸酯在惰性溶劑中于0℃至100℃的溫度下反應(yīng)，或?qū)⒃擁樞蝾嵉梗?b)氨或取代胺與相應(yīng)的取代異氰酸酯或4-異硫氰基二苯基醚彼此在相同條件下反應(yīng)，或通過(c)在堿(如氫化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀等)存在下于20℃至150℃的溫度下令4-羥苯基-脲或-硫脲類化合物與活性鹵代芳族化合物在非質(zhì)子溶劑(如二甲基亞砜、二甲基聚酰胺或六甲基磷酸三酰胺)中進(jìn)行縮合反應(yīng)。
當(dāng)適當(dāng)選擇溶劑的用量時，反應(yīng)產(chǎn)物一般在冷卻溶液時結(jié)晶。有關(guān)由胺和異氰酸酯類化合物制備脲類化合物的其他文獻(xiàn)是《有機(jī)化學(xué)的方法》(Methoden der Org.Chemie)(Houben-Weyl)，第IV版，第VIII卷，157-158頁。
一些可在本發(fā)明方法(b)中采用的式VI的雙(氯羰基)胺類化合物已經(jīng)為人所知(參見(合成)1970，542-543)，如果它們是未知化合物，可以按照類似方法由環(huán)狀二?；蚧镏苽洳⑶以诙栊杂袡C(jī)溶劑、優(yōu)選四氯化碳中氯化。
對于式II的脲或硫脲與式III的羰基異氰酸酯(方法a)以及與式VI的雙(氯羰基)胺的反應(yīng)(方法b)和式IV的1，3，5-三嗪衍生物與式A-Z的化合物的反應(yīng)可能的稀釋劑是在這些反應(yīng)中為惰性的全部有機(jī)溶劑。
除了吡啶以外，這些包括芳烴，例如苯、甲苯和二甲苯；鹵代芳烴，如氯苯和二氯苯；和醚，如四氫呋喃和二噁烷。
在反應(yīng)中可能形成的鹽酸或者作為氣體放出，或可以通過有機(jī)或無機(jī)酸受體結(jié)合。優(yōu)選的酸受體包括叔有機(jī)堿，如三烷基胺類化合物，如三乙胺；氮雜單-或雙-環(huán)狀芳胺類化合物，如吡啶；單-或雙環(huán)的氮雜環(huán)狀烷基胺類化合物，如二氮雜雙環(huán)壬烯、二氮雜雙環(huán)十一烯和多種其他化合物；或無機(jī)堿，如堿金屬的碳酸鹽、氧化物或氫氧化物，或堿土金屬的碳酸鹽、氧化物或氫氧化物。
上述反應(yīng)過程中的反應(yīng)溫度可以在寬范圍內(nèi)變化。通常，該反應(yīng)是在約0℃至約150℃之間，優(yōu)選約20℃至約100℃之間進(jìn)行。
在上述反應(yīng)過程中，反應(yīng)可以在常壓下或高壓下進(jìn)行。通常，該反應(yīng)在常壓下進(jìn)行。
適合在方法(c)中將其中Y代表氧的通式1的三氟甲硫基化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)亞磺?；蚧酋；衔锏目尚醒趸瘎┦荋2O2/冰醋酸；H2O2/醋酸酐；H2O2/甲醇；過酸類化合物，如間-氯過苯甲酸，和鉻酸；高錳酸鉀；高碘酸鈉，櫻桃色硝酸銨；和硝酸。
所得化合物可以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的加成鹽，例如與無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)。
在本發(fā)明的實踐中，所述三嗪酮化合物可以按照任何常規(guī)方式配制成為組合物或制劑用于對動物給藥。在此優(yōu)選的適合口服給藥的制劑，其可以是混懸液、片劑、膠囊、凝膠、糊劑、大丸劑，或粉末、顆?；蛐⊥栊问降闹苿?。優(yōu)選的口服給藥制劑是糊劑形式或食品添加劑。其他可采用的給藥方式包括非腸道、局部、肌肉內(nèi)和粘膜內(nèi)或通過所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它途徑給藥。也優(yōu)選以傾倒式形式局部給藥。
通常，制劑中使用藥物可接受載體和輔劑。其實例可以是增稠劑，選自聚羧乙烯(Carbopol)，無機(jī)增稠劑如硅酸鹽、膨潤土或膠體二氧化硅，和有機(jī)增稠劑如脂肪醇或脂肪酸酯；濕潤劑，選自聚乙二醇和十二烷基硫酸鈉；對于聚羧乙烯類物質(zhì)，聚羧乙烯974P對于本發(fā)明所優(yōu)選的糊劑而言是最優(yōu)選的增稠劑。本發(fā)明也可以采用選自對羥基苯甲酸酯、醇類和醛類化合物的防腐劑。這些可以是液體、固體或氣體原料，它們或者惰性或者醫(yī)用可接受并且與活性成分相容。
令人驚奇地是，本發(fā)明的糊劑可有效傳遞三嗪酮類化合物，特別是托曲珠利，和泊那珠利透過血腦或胎盤屏障，并且攻擊已經(jīng)侵入腦部或感染妊娠動物胎盤的寄生物。出于方便的考慮，本發(fā)明提供了有關(guān)優(yōu)選糊劑的特定實施方式和如何制備的描述。按照本發(fā)明，一種優(yōu)選的糊劑含有三嗪三酮(如泊那珠利)、丙二醇、增稠劑(如聚羧乙烯)、防腐劑(如對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯)和水的微粉化混懸液。它可以在這種溫度下通過將水、通常為純水和丙二醇混合，并且加入防腐劑來制備。將所得混合物冷卻至室溫，此后加入聚羧乙烯，優(yōu)選加入聚羧乙烯974P的形式。最終加入三嗪三酮。完全混合后，用氫氧化鈉將pH調(diào)至約6.0。首選糊劑包括15％w/w托曲珠利、20％w/w丙二醇、0.5％聚羧乙烯974P、0.14％w/w對羥基苯甲酸甲酯、0.02％w/w對羥基苯甲酸丙酯、0.1％w/w氫氧化鈉和余量的純水?？梢约尤氚ㄆ咸烟?、蔗糖、乳糖、果糖、山梨糖醇、木糖醇、人工甜味劑和糖蜜在內(nèi)的甜味劑來改善口感。另外，出于相同的目的可以加入酵母或肝類矯味劑。
本發(fā)明進(jìn)一步通過下列舉例但非限定實施例來說明。
實施例1單一劑量給藥托曲珠利后，在不同時間比較馬血液中托曲珠利、泊那珠利和托曲珠利亞砜的濃度來進(jìn)行藥動學(xué)研究。所有馬接受單一劑量的10mg/Kg，其以懸浮液的形式口服給藥。治療后在治療時間(O)和在0.25、0.5、1、2、4、6、12、24、48和72小時抽取血樣。樣品的結(jié)果列于表1。令人驚奇的是接受了托曲珠利的馬在其血清中顯示了較高濃度的泊那珠利。因此，血液中發(fā)現(xiàn)了很高濃度的托曲珠利亞砜。這表明泊那珠利能夠單獨產(chǎn)生預(yù)計通過血-腦屏障的可接受的血液濃度，一個治療神經(jīng)病學(xué)疾病如由神經(jīng)元肉孢子蟲、鼠弓形蟲、犬齒新孢子蟲(Neospora caninum)和巨新孢子蟲(Neosporahugesi)引起的疾病所需的特性。
表1馬服用單一劑量的托曲珠利的藥動力學(xué)


實施例2泊那珠利，1-甲基-3-[4-對-[三氟甲基)磺酰基苯氧基]-間-甲苯基]-s-三嗪-2，4，6(1H，3H，5H)-三酮，一種具代表性的三嗪三酮，被配成適合于給馬服用的糊劑。列于表2中的組分被用于制備下列配方。
表2泊那珠利馬用糊劑的組成

采用下列方法(A)和(B)制備藥劑。第一種方法(A)包括1)將一部分水與丙二醇混合；2)加入防腐劑(羥苯甲酸甲酯和對羥苯甲酸丙酯)；3)緩慢加入聚羥乙烯974P直到制成均勻的懸浮液；4)加入微粒形式的泊那珠利；5)加入氫氧化鈉使得懸浮液的PH達(dá)到大約6.0；和6)加入剩余的水到QS體積。最終的懸浮液是糊狀，其能以口服的形式給馬施用。
第二種方法(B)包括1)將一部分水與丙二醇混合；2)加熱到70℃；3)在溶液溫度保持在70℃時，加入防腐劑(羥苯甲酸甲酯和對羥苯甲酸丙酯)；4)將溶液冷卻至室溫；5)緩慢加入聚羥乙烯974P直到制成均勻的懸浮液；6)加入微粒形式的泊那珠利；7)加入氫氧化鈉使得懸浮液的PH達(dá)到大約6.0；和8)加入剩余的水到QS體積。最終的懸浮液也是糊狀，其能以口服的形式給馬施用。
產(chǎn)生的糊劑給馬服用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可口而易接受。
實施例3測定泊那珠利，1-甲基-3-[4-對-[三氟甲基)磺酰基苯氧基]-間-甲苯基]-s-三嗪-2，4，6(1H，3H，5H)-三酮，一種具代表性的三嗪三酮治療已表現(xiàn)出馬原蟲腦脊髓炎(Equine ProtozoalMyeloencephalitis)(EPM)癥狀的馬的能力。用實施例1中描述的泊那珠利作為15％的活性成分(a.i.)將化合物配制成糊劑。按照2.5mg/Kg至10mg/Kg的劑量比例、每天一次持續(xù)28天將其給已被診斷患有EPM的馬服用。
自然發(fā)生的EPM的臨床癥狀通過特殊標(biāo)記和實驗室診斷分析能很好地被定性。用于對EPM-陽性的馬進(jìn)行這種試驗的診斷方法如下所述證實由一種標(biāo)準(zhǔn)化的神經(jīng)病學(xué)檢測方法測定的偏位神經(jīng)病學(xué)缺陷包括放射照相術(shù)，EPM陽性；適于神經(jīng)元肉孢子蟲IgG的陽性蛋白印跡；紅血細(xì)胞計數(shù)低于500細(xì)胞/Ml；CSF指數(shù)-總蛋白＜90，IgG指數(shù)＞0.3.AQ系數(shù)＜2.2。
附加條件是馬沒有患除EPM以外的疾病。因此，它們需要滿足下列條件相對RHV-1的負(fù)CSF(＜1∶4)；相對維生素E的標(biāo)準(zhǔn)血清值(2.0ug/mL)；無癲癇病癥；無行為失調(diào)病癥。將被診斷的馬隨意分成幾組。組1的馬每日按5mg/Kg劑量比值服用糊劑藥劑，而組2的馬每日按10mg/Kg劑量比值服用糊劑藥劑。治療劑量基于體重。為了確定治療確實有效，對馬進(jìn)行了90天的評價(終止治療后大約60天)。采用下列系統(tǒng)對治療效果進(jìn)行評價1)0＝完全成功-具有負(fù)CSF的臨床標(biāo)準(zhǔn)；2)1＝以正常步態(tài)檢測的缺陷；3)2＝容易檢測的和通過后退、旋轉(zhuǎn)、搖擺頜腰壓迫和頸伸長而夸大的缺陷，；4)3＝行走、面部轉(zhuǎn)動、腰壓迫或頸伸長時非常突出的缺陷；5)4＝蹣跚、絆倒和自然地摔倒；6)5＝躺著，不能起來。在評價過程中一(1)單元的好轉(zhuǎn)被認(rèn)為是明顯的好轉(zhuǎn)。
表3顯示了這一研究結(jié)果。治療了28天的10mg/Kg組中的所有馬匹(100％)從開始采用泊那珠利(0天)治療后的第90天的臨床評價表現(xiàn)出明顯的好轉(zhuǎn)。采用5mg/Kg劑量治療的九分之八(88.9％)的馬表現(xiàn)出能被認(rèn)可的好轉(zhuǎn)。如果將治療每一天的每一組的所有評價得分加起來，就得到了總得分。組1和組2顯示的總得分的改進(jìn)幾乎相同。因此得出結(jié)論5mg/Kg或10mg/Kg劑量的泊那珠利對于治療馬的EPM是有效的。
表3用托曲珠利砜治療感染了EPM的馬的應(yīng)答反應(yīng)

實施例4為了測定由泊那珠利提供的保護(hù)范圍，進(jìn)行了體外試驗。對下列寄生蟲株對于該化合物的敏感性進(jìn)行了評價神經(jīng)元肉孢子蟲的SN3株；鐮刀狀肉孢子蟲(Sarcocystis falcatula)的SF1株；鼠共性弓形蟲的RH株；和犬齒新孢子蟲(Neospora caninum)的NC-1株。在兩個濃度(1μg/ml和10g/ml)下測定了泊那珠利。
牛的陀螺狀(BT)細(xì)胞被用于體外研究。細(xì)胞在25cm2的燒瓶中的RMPI1640培養(yǎng)基中生長聚合，所述RMPI1640培養(yǎng)基中添加了10％V/V的小牛血清(FBS)，100單位的青霉素(G/mL)，100mg的鏈霉素/mL和5×10-2mM的2-巰基乙醇。細(xì)胞得到聚合后，細(xì)胞維持在小牛血清FBS減少(2％V/V)了的同一培養(yǎng)基中。在37℃和含有5％的二氧化碳及95％的空氣的潮濕空氣中培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物。
由于寄生蟲的生長，BT細(xì)胞單層感染了寄生蟲并且用反轉(zhuǎn)式顯微鏡檢測到了損傷的發(fā)生(細(xì)胞病變效應(yīng)，“CPE”)或許多胞外裂殖子的出現(xiàn)。一旦觀察到損傷，或許多胞外寄生蟲的出現(xiàn)，就用5mL移液管的頂端敲碎單層并且將1到3滴含有裂殖子的液體轉(zhuǎn)移到兩個裝有新鮮BT細(xì)胞的燒瓶中。神經(jīng)元肉孢子蟲和鐮刀狀肉孢子蟲的裂殖子每5到10天就以這樣的方式進(jìn)行傳代而鼠弓形蟲和犬齒新孢子蟲(N.caninum)的速殖子是每3到4天進(jìn)行傳代。
用于測定泊那珠利有效性的分析試驗是微量滴定單層裂解試驗(Microtiter Monolayer Disruption Assay)(MMDA)。這個試驗備用來測定寄生蟲或化合物對BT細(xì)胞是否具有毒性。96孔的平底微量滴定板上接種了BT細(xì)胞并將產(chǎn)生的單層用來測定托曲珠利和泊那珠利對由CPE(空斑的形成)測得的裂殖子產(chǎn)生的作用。單層接種了寄生蟲(神經(jīng)元肉孢子蟲(S.neurona)或鐮刀狀肉孢子蟲(S.falcatula)以50000/孔的計數(shù)接種，鼠弓形蟲以10000/孔的水平接種，和犬齒新孢子蟲(N.caninum)以20000/孔的水平接種。感染后2小時所有的孔加入了試驗化合物。未處理和未感染的單層孔作為寄生蟲對照，而未感染的試劑處理的BT細(xì)胞作為毒性對照。以6個平行試驗對每一種處理進(jìn)行測定。每天目測監(jiān)視每一個孔并且當(dāng)90-100％的未處理裂殖子感染細(xì)胞裂解(90-100％CPE)時則終止試驗。板上的所有孔用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行清洗并用100％的乙醇固定5分鐘，然后在結(jié)晶紫溶液中進(jìn)行染色。裂殖子誘導(dǎo)的破壞或由于毒性導(dǎo)致的BT細(xì)胞死亡面積不吸收結(jié)晶紫。一種ELISA平板讀出器被用來定量結(jié)晶紫的摻入以及這些數(shù)據(jù)被用來測定抑制50％破壞的泊那珠利的濃度(抑制濃度50或IC50)。顯示抑制的數(shù)據(jù)列于表4。值得注意的是1μg/mL這樣少的泊那珠利對由犬齒新孢子蟲、鼠弓形蟲和鐮刀狀肉孢子蟲(S.falcatula)引起的細(xì)胞破壞提供了100％的抑制，而需要10μg/mL的泊那珠利對由神經(jīng)元肉孢子蟲(S.neurona)引起的細(xì)胞破壞產(chǎn)生100％的抑制。這表明三嗪酮如托曲珠利和泊那珠利能有效治療由球蟲引起的已知與神經(jīng)病學(xué)和流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病綜合癥有關(guān)的疾病，所述綜合癥包括由神經(jīng)元肉孢子蟲(S.neurona)、犬齒新孢子蟲、巨新孢子蟲和鼠弓形蟲引起的疾病。另外，泊那珠利對BT細(xì)胞沒有毒性。
表4泊那珠利的體外數(shù)據(jù)

實施例5為了確定三嗪酮如托曲珠利是否能通過血一腦屏障而進(jìn)行這個試驗。將正常馬分成三組，每組三匹馬。組1的馬按照2.5mg/Kg的劑量水平口服5％懸浮液形式的托曲珠利。組2的馬按照5.0mg/Kg的劑量水平口服5％懸浮液形式的托曲珠利。組3的馬按照7.5mg/Kg的劑量水平口服5％懸浮液形式的托曲珠利。每天重復(fù)這樣的服用量持續(xù)10天。在48、96和240小時抽取血樣并測定血清中的托曲珠利、托曲珠利亞砜和泊那珠利。開始治療后的第10天(天10)，從每一匹馬取一份腦脊液樣品并且再次測定這些樣品中的托曲珠利、托曲珠利亞砜和泊那珠利。血清和腦脊液中的托曲珠利、托曲珠利砜和泊那珠利的濃度列于表5a和5b。采用托曲珠利處理馬匹后的血清和腦脊液中的泊那珠利濃度很高，以致于采用托曲珠利處理馬匹后的腦脊液中的泊那珠利濃度與托曲珠利本身的濃度相當(dāng)。這證明托曲珠利和泊那珠利都能有效通過血-腦屏障并且泊那珠利比托曲珠利能更有效地通過這個屏障。對于本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，該數(shù)據(jù)說明托曲珠利也能有效地通過胎盤屏障。
表5a重復(fù)服用托曲珠利后的馬體內(nèi)的藥物濃度

表5b重復(fù)服用托曲珠利后馬體內(nèi)的藥物濃度

盡管為了闡明本發(fā)明的目的，上文已詳細(xì)地對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)該明白這樣的詳盡只是為了所述目的并且除了權(quán)利要求所限定的范圍外，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所能作的任何改動都離不開本發(fā)明的實質(zhì)和范圍。
權(quán)利要求
1.一種治療性治療有病動物的方法，所述有病動物患有由寄生蟲引起的神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病，所述疾病對用三嗪酮化合物的處理敏感，該方法包括給該動物服用藥學(xué)有效量的化合物，條件是當(dāng)疾病是神經(jīng)元肉孢子蟲病時，該化合物不是地克珠利或托曲珠利。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中寄生蟲引起的疾病是由球蟲引起的。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中球蟲是家族肉孢子蟲(FamilySarcocystidae)的成員。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中家族肉孢子蟲的成員選自由肉孢子蟲，新孢子蟲和弓形蟲組成的一組寄生蟲。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中肉孢子蟲選自由肉孢子蟲屬組成的一組寄生蟲，新孢子蟲選自由新孢子蟲屬組成的一組寄生蟲，和弓形蟲選自由弓形蟲屬組成的一組寄生蟲。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中肉孢子蟲屬是神經(jīng)元肉孢子蟲，新孢子蟲屬是犬齒新孢子蟲或巨新孢子蟲和弓形蟲屬是鼠弓形蟲。
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其中肉孢子蟲是引起馬原蟲腦脊髓炎的神經(jīng)元肉孢子蟲。
8.如權(quán)利要求4所述的方法，其中新孢子蟲(Neospora)是引起牛或犬的新孢子蟲病(Neosporosis)的犬齒新孢子蟲。
9.如權(quán)利要求4所述的方法，其中弓形蟲是鼠弓形蟲。
10.一種預(yù)防性治療動物的方法，所述動物被引起神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的寄生蟲感染，所述疾病對用三嗪酮化合物的處理敏感，該方法包括按照預(yù)防-有效治療方案服用所述的三嗪酮。
11.如權(quán)利要求1或10所述的方法，其中三嗪酮化合物選自托曲珠利、泊那珠利和地克珠利。
12.如權(quán)利要求1或10所述的方法，其中三嗪酮化合物是泊那珠利。
13.如權(quán)利要求1或10所述的方法，其中三嗪酮化合物被兩次或多次重復(fù)給藥。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中重復(fù)給藥按照1.0至100mg/Kg的量進(jìn)行。
15.如權(quán)利要求10所述的方法，其中進(jìn)行三嗪酮化合物的給藥直到所述動物建立起保護(hù)性免疫。
16.如權(quán)利要求1或10所述的方法，其中三嗪酮按照2.5至10mg/Kg的量進(jìn)行給藥。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中三嗪酮是托曲珠利或泊那珠利。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中三嗪酮化合物是以高于10mg/Kg的單次高劑量進(jìn)行給藥的。
19.如權(quán)利要求8所述的方法，其中三嗪酮化合物按照重復(fù)定期給藥方案進(jìn)行給藥直到建立起免疫保護(hù)。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中三嗪酮化合物是按照每天2.5至10mg/Kg持續(xù)28天的給藥方案進(jìn)行給藥。
21.一種治療組合物，含有(a)治療對三嗪酮化合物敏感的患病動物的藥學(xué)有效量的三嗪酮化合物(b)一種載體，和(c)可任選地，一種輔劑。
22.如權(quán)利要求18所述的組合物，其為糊劑形式。
23.一種治療馬原蟲腦脊髓炎(EPM)的方法，包括給患有EPM的馬類動物服用治療有效量的一種或多種三嗪酮。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中三嗪酮是地克珠利。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中馬類動物是馬。
全文摘要
本發(fā)明公開了治療性或預(yù)防性治療敏感感染動物或感染動物中由肉孢子蟲、新孢子蟲或弓形蟲引起的寄生蟲性神經(jīng)病學(xué)或流產(chǎn)遺傳學(xué)疾病的方法,這些疾病可以用三嗪酮類化合物通過施用藥學(xué)有效量的化合物來治療,包括單一高劑量治療。
文檔編號A61P33/00GK1331594SQ99814968
公開日2002年1月16日 申請日期1999年12月18日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月22日
發(fā)明者T·J·肯尼迪 申請人:美國拜爾公司