一種丹參葉提取物的制備方法及檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種丹參提取物的制備方法及檢測(cè)方法，特別涉及一種丹參葉提取物 的制備方法及檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，"一味丹參，功同四物"（地黃、當(dāng)歸、白芍、川 芎），傳統(tǒng)醫(yī)藥認(rèn)為：丹參集養(yǎng)血、活血、化瘀、止痛、生新血于一體，功效顯著且性味平和， 有補(bǔ)有散，無(wú)毒副作用，丹參具有活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神的功 效。不少中藥處方中均有丹參配伍使用，丹參中的主要有效成分丹酚酸B為三分子丹參素 與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對(duì)心、腦、肝、腎等器官均具有重 要藥理作用，丹酚酸B具有很強(qiáng)的抗氧化作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明，丹酚酸B能清除氧自由基、 抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，其作用強(qiáng)度高于維生素C、維生素E、甘露醇，是目前已知的抗氧化作 用最強(qiáng)的天然產(chǎn)物之一，對(duì)心腦血管疾病也有良好的療效，另外，其在保健品和化妝品中 也有很重要的作用，因其用途越來(lái)越多，所以其需求量也越來(lái)越大。
[0003] 丹參一般以其根入藥，其葉一般作為牛羊飼料或者直接作為廢棄物在田間燒掉， 造成巨大的浪費(fèi)甚至污染環(huán)境。但近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)丹參葉中也含有不少有效成分，其含有 的丹參素、丹酚酸A和丹酚酸B等都是藥品、保健品和化妝品行業(yè)很有用的物質(zhì)，所以丹參 葉中有效成分的提取越來(lái)越受到人們的關(guān)注。
[0004] 但是，丹參葉中的主要有效成分丹酚酸B的熱穩(wěn)定性不高，在高于60°C的溫度下 10分鐘左右即損失80%以上，所以普通的提取方法達(dá)不到提取丹參葉中的有效成分來(lái)加 以利用的目的。目前，丹參葉中有效成分丹酚酸B的提取方法還存在很大的難度，如提取過(guò) 程中有效成分損失很大、提取后無(wú)法制成高濃度干品、提取過(guò)程太繁瑣、提取過(guò)程有易燃易 爆危險(xiǎn)等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種丹參葉提取物的制備方法及檢測(cè)方法，該制備方法能有 效利用作為牛羊飼料或者廢棄物的丹參葉提取出價(jià)值極高的丹酚酸B，變廢為寶，避免了浪 費(fèi)，還可降低因大量的燃燒引起的環(huán)境污染，并且，該提取方法能夠有效的保持主要有效成 分丹酚酸B的活性，擴(kuò)大產(chǎn)量，也減少了成本，而檢測(cè)方法針對(duì)丹參莖葉的提取物進(jìn)行成分 檢測(cè)和含量檢測(cè)，以此有效的監(jiān)測(cè)丹參葉提取物的產(chǎn)量及活性。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007] 丹參葉提取物的制備方法：
[0008] 取丹參葉，粉碎成粗粉，置滲濾罐中，取粗粉重量4?6倍的30?70%乙醇，加入 滲濾罐至乙醇液面高出丹參葉粗粉1?10厘米，于10?30°C浸泡20?50小時(shí)，以每分 鐘40?100ml的速度放出滲濾液，同時(shí)將剩余乙醇從以同樣的速度向粗粉中加入，收集滲 濾液，濾過(guò)，濾液于45?55°C減壓回收乙醇，制成相對(duì)密度為1. 05?1. 15的丹參葉清膏， 用真空噴霧干燥器于80?90°C噴霧干燥，收集干膏粉，得丹參葉提取物。
[0009] 其中：所述的乙醇用量?jī)?yōu)選粗粉重量的5倍。
[0010] 所述乙醇的濃度優(yōu)選50%。
[0011] 所述浸泡的溫度優(yōu)選25 °C。
[0012] 所述浸泡時(shí)間優(yōu)選35小時(shí)。
[0013] 所述減壓回收溫度優(yōu)選50°C。
[0014] 所述真空噴霧干燥溫度優(yōu)選85°C。
[0015] 本發(fā)明所述的丹參葉提取物的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法含性狀、成分檢測(cè)、含量檢測(cè) 項(xiàng)目的部分或全部，其中：
[0016] 性狀：應(yīng)為黃棕色至棕褐色的顆粒；
[0017] 成分檢測(cè)：以丹參素對(duì)照品、丹酚酸A對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品制成對(duì)照品溶液，以 梯度洗脫的方法記錄色譜圖進(jìn)行高效液相色譜法鑒別；
[0018] 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以甲醇：水：甲酸的體積 比=23:57:1為流動(dòng)相B，按照下述方式進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B之比以體積百 分比計(jì)，流速為每分鐘lml，柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng) 不低于5000;
[0019] 0?20分鐘，流動(dòng)相A(%) :0?13,流動(dòng)相B(% ) :100?87
[0020] 20?35分鐘，流動(dòng)相A(%) :13?21，流動(dòng)相B(% ) :87?79
[0021] 35?60分鐘：流動(dòng)相A(% ) :21?32,流動(dòng)相B(% ) :79?68
[0022] 取本品0. 5g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱(chēng)定重量，在 功率為120W，頻率為59KHZ的條件下超聲處理15分鐘，放冷，密塞，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足 減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
[0023] 取丹參素對(duì)照品、丹酚酸A對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含丹參素 20Ug、丹酚酸A10iig、丹酚酸B100iig的溶液，即得對(duì)照品溶液；
[0024] 分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各10Ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60 分鐘色譜圖，即得；
[0025] 供試品色譜圖中，應(yīng)分別呈現(xiàn)與參照物色譜保留時(shí)間相應(yīng)的色譜峰；
[0026] 含量檢測(cè)：以丹酚酸B為對(duì)照品，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定；
[0027] 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：乙腈：甲酸：水的體積比= 30:10:1:59為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;
[0028] 取丹酚酸B對(duì)照品，加75%甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；
[0029] 取本品0. 4g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，稱(chēng)定重 量，在功率為120W，頻率為59KHZ的條件下超聲處理20分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用 75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液，；
[0030] 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0031] 本品含丹酚酸b(c36h3Qo16)不得少于10%。
[0032] 為了確保本發(fā)明的制備方法和檢測(cè)方法科學(xué)、合理、可行，本申請(qǐng)人對(duì)方法中成分 檢測(cè)、含量檢測(cè)進(jìn)行了研究，具體實(shí)驗(yàn)資料如下：
[0033]( -）提取工藝的研究：
[0034] 為了考察提取工藝的條件，申請(qǐng)人設(shè)計(jì)了正交試驗(yàn)，乙醇濃度分別為30%、50%、 70%，提取時(shí)間（浸泡、滲濾的時(shí)間）分別為20小時(shí)、35小時(shí)、50小時(shí)，提取溶劑量（乙醇） 分別為丹參莖葉粗粉的4倍、5倍、6倍，共進(jìn)行了 9次試驗(yàn)，分別考察收得的總干膏粉和含 丹酚酸B的總量。
[0035] 表1正交試驗(yàn)計(jì)劃表
[0036]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種丹參葉提取物的制備方法，其特征在于： 取丹參葉，粉碎成粗粉，置滲濾罐中，取粗粉重量4?6倍的30?70%乙醇，加入滲濾罐 至乙醇液面高出丹參葉粗粉1?10厘米，于10?30°C浸泡20?50小時(shí)，以每分鐘40? 100ml的速度放出滲濾液，同時(shí)將剩余乙醇從以同樣的速度向粗粉中加入，收集滲濾液，濾 過(guò)，濾液于45?55°C減壓回收乙醇，制成相對(duì)密度為1. 05?1. 15的丹參葉清膏，用真空噴 霧干燥器于80?90°C噴霧干燥，收集干膏粉，得丹參葉提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述的乙醇用量為 粗粉重量的5倍。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述乙醇的濃度為 50%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述浸泡的溫度為 25。。。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述浸泡時(shí)間為35 小時(shí)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述減壓回收溫度 為 50°C。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參葉提取物的制備方法，其特征在于：所述真空噴霧干燥 溫度為85°C。
8. -種權(quán)利要求1至7任意一項(xiàng)所述的丹參葉提取物的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括性 狀、檢查、成分檢測(cè)和含量檢測(cè)項(xiàng)目中的部分或全部，其特征在于： (1) 成分檢測(cè)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以甲醇：水：甲 酸的體積比=23:57:1為流動(dòng)相B，按照下述方式進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B之比以 體積百分比計(jì)，流速為每分鐘lml，柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論板數(shù)按丹酚酸B峰 計(jì)算應(yīng)不低于5000 ; 0?20分鐘，流動(dòng)相A (%) : 0?13,流動(dòng)相B (%) : 100?87 20?35分鐘，流動(dòng)相A (%) : 13?21，流動(dòng)相B (%) :87?79 35?60分鐘：流動(dòng)相A (%) :21?32,流動(dòng)相B (%) :79?68 取本品0. 5g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱(chēng)定重量，在功率 為120W，頻率為59KHZ的條件下超聲處理15分鐘，放冷，密塞，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失 重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； 取丹參素對(duì)照品、丹酚酸A對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品，加甲醇制成每lml含丹參素20呢、 丹酚酸AlOPg、丹酚酸BlOOPg的溶液，即得對(duì)照品溶液； 分別精密吸取供試品溶液與參照物溶液各1〇沿，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘 色譜圖，即得； 供試品色譜圖中，應(yīng)分別呈現(xiàn)與參照物色譜保留時(shí)間相應(yīng)的色譜峰； (2) 含量檢測(cè)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：乙腈：甲酸：水的體積比 =30:10:1:59為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ; 取丹酚酸B對(duì)照品，加75%甲醇制成每lml含0. 14mg的溶液，即得對(duì)照品溶液； 取本品0. 4g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，稱(chēng)定重量，在
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種丹參葉提取物的制備方法及檢測(cè)方法，該制備方法是以田間廢棄物丹參葉為原料，使用乙醇于10～30℃浸泡提取、噴霧干燥而得的產(chǎn)品，其方法簡(jiǎn)單，環(huán)保安全，有效成分保留完全，含量穩(wěn)定，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)；該檢測(cè)方法包括性狀、成分檢測(cè)和含量檢測(cè)項(xiàng)目中的部分或全部，成分檢測(cè)是以丹參素、丹酚酸A和丹酚酸B為對(duì)照品，采用高效液相色譜法以梯度洗脫的方法進(jìn)行鑒別，含量測(cè)定是用高效液相色譜法對(duì)丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定，所采用的成分檢測(cè)方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，含量測(cè)定準(zhǔn)確度高，保證了所得到的提取物所含有的成分穩(wěn)定可靠，其主要有效成分丹酚酸B的含量有具體的數(shù)據(jù)，使制得的丹參葉提取物更有質(zhì)量保證。
【IPC分類(lèi)】G01N30-88, A61K36-537, A61K127-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104523831
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410816415
【發(fā)明人】鐘茂團(tuán), 黎黎, 楊輝, 何德中, 鄒波, 常小平
【申請(qǐng)人】九寨溝天然藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月24日