一種地塞米松可控緩釋plga微球及制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物組織工程細胞支架材料，涉及涉及一種地塞米松(DEX)可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]已有許多研究組利用髓核細胞或間充質(zhì)干細胞復(fù)合細胞支架用于椎間盤組織工程的研究。在生物支架材料的評估中，主要使用固態(tài)和預(yù)成型的細胞支架包括網(wǎng)狀支架和纖維網(wǎng)格。但這些細胞支架，用于移植細胞的載體時，需要開放性切口植入到椎間盤內(nèi)，破壞了椎間盤天然密閉微環(huán)境，故缺陷明顯。同時此類細胞支架多采用瓊脂，透明質(zhì)酸等為原料，雖對生物無害，但因體積較大，已破壞椎間盤原有微生物環(huán)境，生物組織相容性不佳，且無法保證能在治療完成后被生物體降解。許多研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在細胞轉(zhuǎn)移時加入地塞米松(DEX)等抗炎因子可以最大限度降低移植伴隨的炎癥，并促進細胞分化。因此，局限環(huán)境下抗炎皮質(zhì)類固醇的緩釋給藥控制是必要的。而先前網(wǎng)狀支架和纖維網(wǎng)格細胞支架材料無法實現(xiàn)這一要求。故提供新型DEX可控緩釋PLGA微球的研制對于椎間盤微創(chuàng)組織工程研究及治療相當(dāng)有必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明的目的是提供一種地塞米松(DEX)可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球(DEX/PLGA微球),通過水-油-水(w/o/w)乳膠法制備,具體通過以下步驟實現(xiàn):
取PLGA和DEX溶于二氯甲烷，將混合溶液注入含有2% (w/v)聚乙烯醇(poly (vinylalcohol, PVA)的水溶液中，攪拌，脫去二氯甲烷，離心后收集微球，用蒸餾水洗滌后凍干即得。其中地塞米松(DEX)與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)質(zhì)量比是1: 0.01。二氯甲烷的用量是DEX的0.5倍。聚乙烯醇用量是二氯甲烷的10倍。
[0004]本發(fā)明的另一個目的是提供所述的微球在制備生物支架載體中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明制備方法基于以下原理設(shè)計(I)為了得到能被注射入生物體內(nèi)并能被細胞附著的載體；(2)為了得到生物組織相容性良好對機體無毒無害的支架模型；(3)實現(xiàn)細胞支架在一定時間后被生物體降解的可能；(4)為了解決荷載藥物的緩釋控制。
[0006]本發(fā)明利用二氯甲烷的優(yōu)良溶解能力，聚乙烯醇的乳化作用，將PLGA粉末及DEX溶液混合并制成制備成包埋DEX的PLGA微球。本發(fā)明是一種生物材料乳化轉(zhuǎn)型方法。本發(fā)明通過對該微球的表征觀察及粒徑測定得知該生物支架材料的直徑大小與表面征象，此PLGA空白微球直徑符合能被注射大小。通過DEX局部釋放檢測支架材料的緩釋效果。通過CCK-8測定和乳酸脫氫酶(LDH)測定得知，該微球?qū)Ω街拈g充質(zhì)干細胞沒有毒性且不影響生長活性。
【附圖說明】
[0007]圖1是DEX-PLGA微球在不同放大倍數(shù)下SEM照片。
[0008]圖2是DEX/PLGA微球的DEX釋放曲線圖。
[0009]圖3是通過CCK-8值測定:DEX/PLGA微球?qū)毎鲋车挠绊憽?br>[0010]圖4是通過LDH釋放測定DEX/PLGA微球?qū)毎蛲龅挠绊憽?br>【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作出進一步的具體說明，但本發(fā)明不局限于這些實施例。
[0012]實施例1以6gPLGA制作空白PLGA微球
取6g PLGA, 60mg地塞米松(DEX)溶于30ml 二氯甲烷，利用玻璃注射器(規(guī)格，20G)將混合溶液注入300ml含有2% (w/v)聚乙烯醇(poly (vinyl alcohol, PVA)的水溶液中，用磁力攪拌器以600rpm攪拌2_3小時(35°C ),脫去二氯甲燒，以1500rpm速度離心2min后收集微球，用蒸餾水洗滌6次后凍干即得。
[0013]實施例2 以12gPLGA制作空白PLGA微球
該空白PLGA微球制備步驟:取12g PLGA, 120mg DEX溶于60ml 二氯甲烷，利用玻璃注射器(規(guī)格，20G)將混合溶液注入600ml含有2% (w/v) PVA的水溶液中，用磁力攪拌器以600rpm攪拌2_3小時(35°C ),脫去二氯甲燒，以1500rpm速度離心2min后收集微球,用蒸餾水洗滌6次后凍干即得。
[0014]實施例3以24gPLGA制作空白PLGA微球。
[0015]該空白PLGA微球制備步驟:取24g PLGA, 240mg DEX溶于120ml 二氯甲烷，利用玻璃注射器(規(guī)格，20G)將混合溶液注入1200ml含有2% (w/v) PVA的水溶液中，用磁力攪拌器以600rpm攪拌2_3小時(35°C ),脫去二氯甲燒，以1500rpm速度離心2min后收集微球，用蒸餾水洗滌6次后凍干即得。
[0016]實施例4
目前此項研究發(fā)明已被成功用于椎間盤退變大鼠尾部以修復(fù)退變椎間盤，實驗通過構(gòu)建大鼠退變椎間盤模型，并將單獨間充質(zhì)干細胞，間充質(zhì)干細胞合并PLGA微球，以及間充質(zhì)干細胞合并DEX/PLGA微球注射入退變椎間盤，以研究搭載支架的干細胞對退變椎間盤的修復(fù)作用。實驗結(jié)果顯示DEX/PLGA微球在SEM各倍數(shù)下形狀規(guī)則，大小較為一致，具有良好的均一性(見圖1)。DEX/PLGA微球中DEX釋放在前3天迅速上升，3天之后基本上呈零點釋放曲線，提示DEX從DEX/PLGA微球體中持續(xù)釋放(見圖2)。注射DEX/PLGA微球后大鼠椎間盤內(nèi)間充質(zhì)干細胞增殖率上升，與正常對照組和空白PLGA組相比有顯著性差異(見圖3)。大鼠尾部注射DEX/PLGA微球后細胞LDH釋放與正常對照組和空白PLGA組無明顯差異，提示DEX/PLGA微球?qū)﹂g充質(zhì)干細胞無毒性作用(見圖4)。DEX/PLGA微球能降低局部炎癥反應(yīng)，實驗過程中未出現(xiàn)相關(guān)排斥反應(yīng)，無大鼠中毒征象，初步證實此項研究成果可靠性與有效性。
【主權(quán)項】
1.一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，其特征在于，通過以下制備步驟實現(xiàn):取聚乳酸-羥基乙酸共聚物和地塞米松溶于二氯甲烷，將混合溶液注入含有聚乙烯醇的水溶液中，攪拌脫去二氯甲烷，離心后收集微球，用蒸餾水洗滌后凍干即得，其中地塞米松與聚乳酸-羥基乙酸共聚物質(zhì)量比是1:0.0l。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，其特征在于，制備中二氯甲烷的用量是地塞米松的0.5倍，聚乙烯醇的用量是二氯甲烷的10倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，其特征在于，將混合溶液注入含有w/v為2%的聚乙烯醇的水溶液中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，其特征在于，35°C條件下，用磁力攪拌器以600rpm攪拌2_3小時，脫去二氯甲烷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，其特征在于，以1500rpm速度離心2min后收集微球。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球在制備生物支架載體中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種包埋地塞米松的可控緩釋聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球，通過將PLGA和地塞米松溶于二氯甲烷，將混合溶液加入到聚乙烯醇的水溶液中，攪拌，離心，用蒸餾水洗滌后凍干即得。本發(fā)明利用二氯甲烷的優(yōu)良溶解能力，聚乙烯醇的乳化作用，將PLGA粉末及DEX溶液混合并制成制備成包埋DEX的PLGA微球。本發(fā)明通過對該微球的表征觀察及粒徑測定得知該生物支架材料的直徑大小與表面征象，此PLGA空白微球直徑符合能被注射大小。通過DEX局部釋放檢測支架材料的緩釋效果。通過CCK-8測定和乳酸脫氫酶（LDH）測定得知，該微球?qū)Ω街拈g充質(zhì)干細胞沒有毒性且不影響生長活性，可作為生物支架載體。
【IPC分類】A61L27-18, A61L27-50, A61L27-54
【公開號】CN104548197
【申請?zhí)枴緾N201410762386
【發(fā)明人】梁成振, 周校澎, 李方財, 陳其昕
【申請人】浙江大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月13日