Dr5配體藥物偶聯(lián)物的制作方法
【專利說(shuō)明】DR5配體藥物偶聯(lián)物
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2012年4月24日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序號(hào)61/637, 808的優(yōu)先權(quán)；后 者的內(nèi)容為所有目的通過(guò)引用整體結(jié)合在此。
[0003] 在聯(lián)邦資助研發(fā)下做出的發(fā)明的聲明
[0004] 不適用
[0005] 對(duì)以ASCII文本文件提交的"序列表"、表格或計(jì)算機(jī)程序列表附錄的引用
[0006] 在文檔-75-lPC.TXT中列出的序列表，生成于2013年4月22日，20,480字節(jié)，機(jī) 器格式IBM-PC，MS-Windows操作系統(tǒng)，為所有目的通過(guò)引用整體結(jié)合在此。
[0007] 發(fā)明背景
[0008] 參與細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞表面受體，如含死亡結(jié)構(gòu)域的受體，因?yàn)榧?xì)胞內(nèi) 的配體結(jié)合和凋亡信號(hào)的生物觸發(fā)誘導(dǎo)而在細(xì)胞膜表面多聚化（CelI Death and Differentiation，10:66-75(2003))。此類細(xì)胞表面受體的例子包括腫瘤壞死因子（下文 稱為TNF)-相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（下文稱為TRAIL)受體家族。TRAIL是TNF蛋白家族的一 員，其包括 Fas 配體和 TNF-a (Wiley SR，等。Immunity 1995 年 12 月；3 (6): 673-82)。這 些蛋白是強(qiáng)有力的凋亡誘導(dǎo)劑。
[0009] TNF家族蛋白的受體的特征在于胞外域中半胱氨酸富集的重復(fù)序列。其中，作為 Fas配體受體的Fas和作為TNF- α受體的TNF受體I (下文稱為TNFRI)都是指含有死亡 域（death domain)的受體。這些受體具有對(duì)凋亡信號(hào)傳導(dǎo)必不可少的胞內(nèi)域，該胞內(nèi)域被 稱為死亡域并且和果幡自殺基因，reaper同源（Golstain，P，等，（1995)Cell. 81，185-186， White，K，等，（1994) Science 264,677-683) 〇
[0010] 現(xiàn)已鑒定了 5個(gè)TRAIL受體，其中兩個(gè)（DR4[TRAIL-R1]和DR5[TRAIL-R2])可以 誘導(dǎo)凋亡信號(hào)傳導(dǎo)，而其他三個(gè)（DcRl[TRAIL-R3]，DcR2[TRAIL-R4]，和骨保護(hù)素[0PG]) 不能誘導(dǎo)凋亡信號(hào)傳導(dǎo)。與Fas和TNFRI相似，DR4和DR5的胞內(nèi)區(qū)段都含有死亡域并 且經(jīng)由包括Fas結(jié)合死亡域蛋白（下文稱為FADD)和胱冬酶-8的通路誘導(dǎo)凋亡信號(hào) 傳導(dǎo)（Chaudhary PM，等· Immunity 1997Dec ;7 (6) :821-30 ;Schneider P 等· Immunity 1997Dec ;7 (6):821-30)。
[0011] 對(duì)于上述的Fas，TNFRl，DR4,和DRS，分別結(jié)合這些分子的激動(dòng)性抗體 對(duì)在其表面上有目標(biāo)分子的細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡的活性（Journal of Cellular Physiology,209:1021-1028(2006) ；Leukemia, Apl ；21 (4):805-812(2007) ；Blood, 99:1666-1675(2002) ;Cellular Immunology， Jan ;153(1):184-193(1994))。 這 些激動(dòng)性抗體的效能通過(guò)與二抗或效應(yīng)細(xì)胞的交聯(lián)而得到增強(qiáng)（Journal of Immunology,149:3166-3173(1992) ；European Journal of immunology, Oct ； 23(10):2676-2681(1993))。
[0012] 具有結(jié)合參與凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞表面受體能力的抗_DR5抗體目前正在臨床開發(fā)作 為治療劑，并有望表現(xiàn)出治療效果和殺傷以特異性和激動(dòng)性方式表達(dá)受體的細(xì)胞（癌癥細(xì) 胞和免疫疾病相關(guān)的細(xì)胞）。有人提出，該抗體的作用機(jī)制通過(guò)在抗體與受體結(jié)合之前或之 后，抗體分子交聯(lián)在一起形成多聚體來(lái)介導(dǎo)?？贵w的這種多聚化隨后導(dǎo)致抗原受體的多聚 化（即，凋亡誘導(dǎo)）。在體外實(shí)驗(yàn)中顯示通過(guò)加入針對(duì)該抗體的二抗進(jìn)行人工交聯(lián)是提高 抗體活性所需，以及在體內(nèi)，經(jīng)由免疫效應(yīng)細(xì)胞上Fc受體的交聯(lián)是產(chǎn)生該抗體活性所需的 作用機(jī)制。近來(lái)，已經(jīng)嘗試通過(guò)改變抗體的結(jié)構(gòu)以進(jìn)一步提高抗體的原始功能。例如，據(jù)報(bào) 道，去除抗體上特定的碳水化合物結(jié)構(gòu)提高了 Fc受體的親和力。此類作用機(jī)制提示，細(xì)胞 表面受體的非內(nèi)化抗體是優(yōu)選的。
[0013] 然而，本領(lǐng)域仍需要用于治療表達(dá)DR5的癌癥的方法。
[0014] 發(fā)明概述
[0015] 本發(fā)明提供了將藥物靶向遞送到表達(dá)DRS的細(xì)胞的配體藥物偶聯(lián)物，等等。發(fā)明 人進(jìn)行了廣泛的研宄并發(fā)現(xiàn)，含有能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的抗體的抗體-藥物偶聯(lián)物對(duì)癌癥的治 療比單用這樣的抗體效果更顯著。通過(guò)使用本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物，抗體本身表現(xiàn)出 凋亡誘導(dǎo)作用，而偶合到抗體的藥物也表現(xiàn)出治療效果。因?yàn)檫@些原因，抗體-藥物偶聯(lián)物 對(duì)那些單用抗體無(wú)法治療的患者具有有效的治療效果。本文描述的配體藥物偶聯(lián)物對(duì)表達(dá) DR5的細(xì)胞，例如表達(dá)DR5的癌癥細(xì)胞具有強(qiáng)效的細(xì)胞毒性和/或細(xì)胞抑制性活性。在一些 實(shí)施例中，配體藥物偶聯(lián)物具有如下式：
[0016] L- (LU-D) p (I)
[0017] 其中，L為配體單元，LU是連接體單元和D是藥物單元（或細(xì)胞毒性劑）。下標(biāo)p 是從1到20的整數(shù)。因此，配體藥物偶聯(lián)物包含共價(jià)連接于至少一個(gè)藥物單元的配體單元。 所述藥物單元可直接或通過(guò)連接單元（-LU-)共價(jià)連接。下文將更全面描述的配體單元是 DR5結(jié)合劑，如抗-DR5抗體。因此，本發(fā)明還提供治療，例如各種癌癥的方法。這些方法包 括使用配體藥物偶聯(lián)物，其中配體單元是特異性結(jié)合DR5的抗DR5結(jié)合劑。DR5結(jié)合劑可以 是，例如，抗DR5抗體，抗DR5抗原結(jié)合片段，或包含人源化抗體重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的氨 基酸序列的其他DR5結(jié)合劑，或其衍生物。
[0018] 在一些實(shí)施例中，配體藥物偶聯(lián)物包含共價(jià)連接于細(xì)胞毒性劑的DR5結(jié)合劑。在 一些實(shí)施例中，配體藥物偶聯(lián)物具有如下式：
[0019] L- (LU-D) p (I)
[0020] 或其藥學(xué)上可接受的鹽，偶聯(lián)物對(duì)表達(dá)DR5的靶細(xì)胞有特異性，其中：
[0021] L是作為DR5結(jié)合試劑的配體單元；和
[0022] (LU-D)是連接體單元-藥物單元部分，其中LU是連接體單元，D是對(duì)所述革巴細(xì)胞 具有細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性活性的藥物單元；和
[0023] 下標(biāo)p是從1到20的整數(shù)。
[0024] 在一些實(shí)施例中，具有式（I)的配體藥物偶聯(lián)物包含具有式叫或D F的藥物單元：
[0025]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有如下式的配體藥物偶聯(lián)物： L-(LU-D)P (I) 或其藥學(xué)上可接受的鹽，對(duì)表達(dá)DR5的靶細(xì)胞具有特異性，其中： L是配體單元，是抗DR5的抗體，包含（a)具有⑶R1XDR2和⑶R3的重鏈免疫球蛋白， 所述CDR1由SEQIDNO: 11的氨基殘基1-5組成，所述CDR2由SEQIDNO: 12的氨基殘基 1-17組成，CDR3由SEQIDNO: 13的氨基殘基1-13組成；和（b)具有CDR1、CDR2和CDR3的 輕鏈免疫球蛋白，所述⑶R1由SEQIDNO: 14的氨基殘基1-16組成，所述⑶R2由SEQID NO: 15的氨基殘基1-7組成，所述⑶R3由SEQIDNO: 16的氨基殘基1-9組成；和 (LU-D)是連接體單元-藥物單元部分，其中 LU是連接體單元，和 D是藥物單元，其中所述藥物單元是奧瑞他??；和 所述下標(biāo)P是1至20的整數(shù)。
2. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述奧瑞他汀是奧瑞他汀 E，AEB，AEVB，AFP，MMAF,或MMAE。
3. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，具有如下式：
或其藥學(xué)上可接受的鹽形式，其中； S是所述配體單元的硫原子； 每一個(gè)W獨(dú)立為氨基酸單元； 所述下標(biāo)w是0至12的整數(shù)； Y是間隔單元；以及 所述下標(biāo)y是〇, 1，或2。
4. 如權(quán)利要求3所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，Ww是纈氨酸-瓜氨酸。
5. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，具有如下式：
或其藥學(xué)上可接受的鹽形式，其中： mAb是所述抗DR5抗體； S是所述抗體的硫原子；和 P是1至8的整數(shù)。
6. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述的抗DR5抗體包含重鏈可變 區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸殘基1-122和所述輕鏈可變 區(qū)包含SEQIDNO: 10的氨基酸殘基1-114。
7. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述的抗DR5抗體包含SEQID NO:9的氨基酸殘基1-452組成的重鏈和SEQIDNO: 10的氨基酸殘基1-219組成的輕鏈。
8. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述的抗DR5抗體包含SEQID NO:9的氨基酸殘基1-451組成的重鏈和SEQIDNO: 10的氨基酸殘基1-219組成的輕鏈。
9. 如權(quán)利要求1所述的配體藥物偶聯(lián)物，其特征在于，p從1至8。
10. -種藥物組合物，其包含與藥學(xué)上可接受的賦形劑相混合的如權(quán)利要求1-9任一 所述的配體藥物偶聯(lián)物。
11. 一種包含如權(quán)利要求1-9任一所述的配體藥物偶聯(lián)物的混合物的組合物，其特征 在于，平均P值在1至20之間。
12. 如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于，平均p值從約3. 5至約4. 5。
13. -種包含如權(quán)利要求1-9任一所述的配體藥物偶聯(lián)物作為有效成分的抗腫瘤劑。
14. 一種治療癌癥的方法，所述癌癥表達(dá)DR5蛋白，所述方法包括給予有此需要的對(duì)象 有效量的如權(quán)利要求1-9任一所述的配體藥物偶聯(lián)物。
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)DR5蛋白的癌癥選自下組：黑色 素瘤，結(jié)腸直腸癌，非小細(xì)胞肺癌，子宮癌，胰腺癌，前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，和血液癌癥。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌癥是胰腺癌。
17. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌癥是黑色素瘤。
18. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌癥是乳腺癌。
19. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述DR5蛋白的癌癥是卵巢癌。
20. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)DR5蛋白的癌癥是結(jié)腸直腸癌。
21. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)DR5蛋白的癌癥是腎癌。
22. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)DR5蛋白的癌癥是膠質(zhì)母細(xì)胞 瘤。
【專利摘要】提供了具有通過(guò)連接基團(tuán)和/或間隔物連接到能有效地治療各種癌癥的治療劑的DRS結(jié)合部分的配體藥物偶聯(lián)物。在某些實(shí)施例中，配體-藥物偶聯(lián)具有下式：L-(LU-D)p，其中L為配體單元，LU是連接體單元和D是藥物單元(或細(xì)胞毒性劑)。下標(biāo)p是從1到20的整數(shù)。因此，配體藥物偶聯(lián)物包括共價(jià)連接至至少一個(gè)藥物單元的配體單元。藥物單元可以直接或經(jīng)由連接體單元(-LU-)共價(jià)連接。配體單元是DR5結(jié)合劑，如抗-DRS抗體。
【IPC分類】A61K39-395
【公開號(hào)】CN104619339
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380021880
【發(fā)明人】大塚敏明, 市川公久, 矢田亞由美
【申請(qǐng)人】西雅圖基因公司, 第一三共株式會(huì)社
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2013年4月23日
【公告號(hào)】CA2869846A1, EP2841103A1, US20130280282, US20150079114, WO2013163229A1