一種預防金鯧魚無乳鏈球菌病的疫苗的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種魚用疫苗，特別涉及一種預防金鯧魚無乳鏈球菌病的疫苗。
【背景技術】
[0002] 金鯧魚學名卵形鯧鰺，地方名稱黃蠟鯧，金鯧，屬硬骨魚綱，鱸形目，鰺科，鯧鰺屬。 其具有肉質鮮美，營養(yǎng)豐富等特點，深受消費者歡迎。因此，金鯧魚作為一個主要的海水養(yǎng) 殖品種，在我國沿海地區(qū)尤其在廣東、海南得到了迅速發(fā)展，其養(yǎng)殖規(guī)模與養(yǎng)殖產量都逐年 增加。
[0003] 但隨著養(yǎng)殖量和養(yǎng)殖規(guī)模的增加，金鯧魚的疾病爆發(fā)也逐漸增多，尤其是近兩年 在海南金鯧魚養(yǎng)殖區(qū)發(fā)生了 一種新的疾病，該病主要有病魚水中打轉，鰭條充出血、肛門 紅腫的疾病，解剖后觀察發(fā)現(xiàn)部分肝臟呈白色、部分肝臟充出血嚴重，腸道內有大量白色粘 液，腸內壁充血癥狀明顯等典型癥狀，具有傳染性強、發(fā)病死亡快、死亡率高的特點，給養(yǎng)殖 戶帶來了較大的經濟損失。
[0004] 由于該病的發(fā)病原因尚不清楚，目前只能采用通用的魚病防治藥物進行預防治 療，但防治效果不明顯，同時還存在抗生素殘留的潛在風險，且相應加大了養(yǎng)殖藥用成本、 養(yǎng)殖周期，隨之必然帶來的是養(yǎng)殖成本的增加。
[0005] 因此，確認該疾病的發(fā)病原因，并制備一種特異性預防或治療該疾病的藥物是一 個亟待解決的問題。

【發(fā)明內容】

[0006] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種特異性預防該疾病的疫苗。
[0007] 申請人通過大量研宄發(fā)現(xiàn)，前述金鯧魚病是由無乳鏈球菌引起的，可稱為金鯧魚 無乳鏈球菌病。在本發(fā)明之前，未見無乳鏈球菌引起金鯧魚疾病的報道。
[0008] 根據(jù)前述研宄結果，本發(fā)明提供了無乳鏈球菌（streptococcusagalactiae)在制 備預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物中的用途。
[0009] 本發(fā)明還提供了一種疫苗，它是由無乳鏈球菌（streptococcusagalactiae)和藥 學上可接受的輔料或者載體制備而成。
[0010] 其中，所述疫苗包含致免疫有效量的滅活的無乳鏈球菌以及藥學上可接受的輔料 或者載體。
[0011] 優(yōu)選地，所述的無乳鏈球菌是保藏號為ATCC51487的無乳鏈球菌。
[0012] 優(yōu)選地，所述的無乳鏈球菌是保藏號為CGMCCNO. 9974的無乳鏈球菌 streptococcusagalactiae14-48〇
[0013] 其中，所述的致免疫有效量為不低于2X105CFU/ml。優(yōu)選地，所述的致免疫有效量 為 2X105-2XIO8CFUM0
[0014] 其中，所述的輔料或者載體為水或吸附劑。所述的水為生理鹽水或蒸餾水，所述的 吸附劑是沸石或硅藻土。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種聯(lián)合用藥物，它包含前述的疫苗以及透皮吸收促進劑。
[0016] 所述透皮吸收劑為氮酮或莨菪堿。
[0017] 本發(fā)明還提供了前述疫苗在制備預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物中的用途。所述 預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物的制劑是粉劑或水劑。
[0018] 本發(fā)明還提供了一種無乳鏈球菌，它是由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中心保藏的保藏號：CGMCCNO. 9974的無乳鏈球菌streptococcusagalactiae14-48。
[0019]本發(fā)明無乳鏈球菌streptococcusagalactiae14-48,于 2014 年 11 月 15 日保藏 在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西 路1號院3號，保藏號為CGMCCNO. 9974。
[0020] 本發(fā)明提供的疫苗可刺激金鯧魚產生免疫力，能有效的預防金鯧魚無乳鏈球菌 病，可避免農藥的過度施用，是大規(guī)模水產養(yǎng)殖實現(xiàn)安全、生態(tài)的一種有效方法，可以提高 金鯧魚的品質，實現(xiàn)良好的經濟效益。
[0021] 本發(fā)明無乳鏈球菌streptococcusagalactiae14-48,用其制備的疫苗，保護效 果優(yōu)于無乳鏈球菌標準菌株（ATCC51487)，應用前景良好。
[0022] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0023] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內容 所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
【具體實施方式】
[0024] 實施例1菌株的分離鑒定
[0025] 1、實驗材料與方法
[0026] I. 1實驗材料
[0027] 待鑒定的細菌分離自海南臨高某養(yǎng)殖場患病金鯧魚，分離培養(yǎng)基為BHI，培養(yǎng)溫度 為 37°C，編號為TW2014-48。
[0028] 試劑耗材16SrDNA通用擴增試劑盒（TAKARA)、BHI培養(yǎng)基、細菌生化微量鑒定管 (杭州天和生物試劑有限公司）、TaqDNA聚合酶（TAKARA)、瓊脂糖（TianGen)、100bpDNA maker(Tiangen)〇
[0029] 1.2實驗方法
[0030] I.2. 1革蘭氏染色劑觀察
[0031] 取過夜培養(yǎng)的新鮮斜面一支，用接種環(huán)挑取少量菌體，涂在滴有少量無菌生理鹽 水的載玻片上，進行革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察染色結果。
[0032]L2. 2 16SrDNA的擴增與分析
[0033] 以提取的細菌基因組DNA作為模板，使用16SrDNA通用擴增引物擴增細菌的16S rDNA全長（PCR體系及擴增程序如下），PCR產物經DNA純化系統(tǒng)純化后送生工生物工程 (上海）有限公司進行序列測定。使用NCBIBlast數(shù)據(jù)庫進行16SrDNA序列比對分析，得 到細菌的種屬。
[0034]PCR體系：
【主權項】
1. 無乳鏈球菌（streptococcus agalactiae)在制備預防金娼魚無乳鏈球菌病的藥物 中的用途。
2. 一種疫苗，其特征在于：它是由無乳鏈球菌（streptococcus agalactiae)和藥學上 可接受的輔料或者載體制備而成。
3. 根據(jù)權利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗包含致免疫有效量的滅活的無 乳鏈球菌以及藥學上可接受的輔料或者載體。
4. 根據(jù)權利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的無乳鏈球菌是保藏號為ATCC 51487的無乳鏈球菌。
5. 根據(jù)權利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的無乳鏈球菌是保藏號為CGMCC NO. 9974 的無乳鏈球菌 streptococcus agalactiae 14-48。
6. 根據(jù)權利要求5所述的疫苗，其特征在于：所述的致免疫有效量為不低于 2X105CFU/ml〇
7. 根據(jù)權利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述的致免疫有效量為 2X 105-2X 108CFU/ml〇
8. 根據(jù)權利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的輔料或者載體為水或吸附劑。
9. 根據(jù)權利要求8所述的疫苗，其特征在于：所述的水為生理鹽水或蒸餾水，所述的吸 附劑是沸石或硅藻土。
10. -種聯(lián)合用藥物，其特征在于：它包含權利要求2-9任意一項所述的疫苗以及透皮 吸收促進劑。
11. 根據(jù)權利要求10所述的聯(lián)合用藥物，其特征在于：所述透皮吸收劑為氮酮或莨菪 喊。
12. 權利要求2-9任意一項所述的疫苗在制備預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物中的用 途。
13. 根據(jù)權利要求12所述的用途，其特征在于：所述預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物 的制劑是粉劑或水劑。
14. 一種無乳鏈球菌，其特征在于：它是由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心保藏的保藏號：CGMCC NO. 9974的無乳鏈球菌streptococcus agalactiae 14-48。
【專利摘要】本發(fā)明提供了無乳鏈球菌(streptococcus agalactiae)在制備預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種疫苗，它是由無乳鏈球菌(streptococcus agalactiae)和藥學上可接受的輔料或者載體制備而成，還提供了該疫苗在制備預防金鯧魚無乳鏈球菌病的藥物中的用途。本發(fā)明提供的疫苗可刺激金鯧魚產生抗金鯧魚無乳鏈球菌病的免疫力，能有效的預防金鯧魚無乳鏈球菌病。CGMCC NO.997420141115
【IPC分類】C12N1-20, A61K39-09, A61K47-18, A61P31-04, C12R1-46
【公開號】CN104623649
【申請?zhí)枴緾N201510091866
【發(fā)明人】陽濤, 劉天強, 王浩丞, 敬小兵, 黃冠軍, 黃凌遠
【申請人】通威股份有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月28日