碳水化合物共軛物及其制備改進(jìn)工藝的制作方法
【專利說(shuō)明】碳水化合物共軛物及其制備改進(jìn)工藝
[0001] 本申請(qǐng)要求2012年8月6日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/680, 069和2013年3月 15日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/794, 114的權(quán)益，所述文獻(xiàn)各自通過(guò)引用以其全文結(jié)合。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種用于制備碳水化合物共軛物的改進(jìn)的工藝。本發(fā)明還涉及包括這 些碳水化合物共軛物的碳水化合物共軛的iRNA劑，這些碳水化合物共軛物具有改進(jìn)的純 度，并且有利于這些iRNA劑的體內(nèi)遞送。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 體內(nèi)向細(xì)胞的有效遞送需要特異靶向以及針對(duì)細(xì)胞外環(huán)境（特別是血清蛋白）的 實(shí)質(zhì)性保護(hù)。實(shí)現(xiàn)特異靶向的一個(gè)方法是將一個(gè)靶向部分共軛至一種iRNA劑。該靶向部 分幫助將該iRNA劑靶向所需要的靶位點(diǎn)。靶向部分可改善遞送的一個(gè)方式是通過(guò)受體介 導(dǎo)的胞吞活性。這種攝取的機(jī)制包括結(jié)合到膜受體的iRNA劑向一個(gè)區(qū)域的內(nèi)部運(yùn)動(dòng)，通過(guò) 該膜結(jié)構(gòu)的內(nèi)陷或通過(guò)該遞送系統(tǒng)與該細(xì)胞膜融合，該膜包圍該區(qū)域。這個(gè)過(guò)程是通過(guò)將 一種特異配體結(jié)合到該受體之后細(xì)胞表面或膜受體的活化來(lái)啟動(dòng)。許多受體介導(dǎo)的胞吞系 統(tǒng)是已知的并且已被研究過(guò)，包括識(shí)別糖例如半乳糖、甘露糖、甘露糖-6-磷酸酯，肽和蛋 白質(zhì)例如轉(zhuǎn)鐵蛋白、脫唾液酸糖蛋白、維生素 B12、胰島素和表皮生長(zhǎng)因子（EGF)的那些。該 脫唾液酸糖蛋白受體（ASGP-R)是一種高容量受體，其在肝細(xì)胞上非常豐富。該ASGP-R顯 示比D-Gal高50倍的N-乙?；?D-半乳糖基胺（GalNAc)親和力。
[0005] 近來(lái)，某些碳水化合物共軛物已顯示對(duì)于將SiRNA遞送至脂質(zhì)體是一種可替代地 有價(jià)值的遞送。
[0006] 發(fā)明概沭
[0007] 本發(fā)明涉及一種用于制備碳水化合物共軛物的改進(jìn)的工藝以及碳水化合物共軛 的iRNA劑。此處所述的工藝提供了一種碳水化合物共軛物產(chǎn)物，該產(chǎn)物包含較少雜質(zhì)（例 如較少金屬污染物）。本發(fā)明還消除了對(duì)使用催化劑例如鈀碳進(jìn)行的昂貴的氫化反應(yīng)的需 求，并減少了為了獲得藥學(xué)上可接受的產(chǎn)物進(jìn)行的純化步驟的數(shù)目。
[0008] 本發(fā)明的工藝、中間體和產(chǎn)物有用于制備碳水化合物-共軛的iRNA劑，例如具有 以下化學(xué)式的那些：
[0009]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有化學(xué)式（A)的化合物
其中 每次出現(xiàn)的X是氫或一種羥基保護(hù)基； 每次出現(xiàn)的Y是一種胺保護(hù)基，（例如乙?；?；n是 0_20 ; 每次出現(xiàn)的q、r和s獨(dú)立地是1-7 ; L是一個(gè)連接基團(tuán)；并且R1是一種iRNA劑； 其中該具有化學(xué)式（A)的化合物不含或基本不含以下各項(xiàng)中的一種或多種 (i) 金屬雜質(zhì)， (ii) 以下兩種脲副產(chǎn)物中的每種
(iii) 以下糖化合物中的每種
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不超過(guò)0. 5% 的任何個(gè)體脲副產(chǎn)物或糖化合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不 超過(guò)0. 2%的任何個(gè)體脲副產(chǎn)物或糖化合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不 超過(guò)1000 ppm的的任何個(gè)體金屬。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不 超過(guò)IOOppm的的任何個(gè)體金屬。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不 超過(guò)IOppm的的任何個(gè)體金屬。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中該具有化學(xué)式（A)的化合物包含不 超過(guò)Ippm的的任何個(gè)體金屬。
8. -種用于將一種具有化學(xué)式（VI)的化合物轉(zhuǎn)化為一種具有化學(xué)式（VII)的化合物 的工藝：
所述工藝包括： (i) 使該具有化學(xué)式（VI)的化合物與一種堿發(fā)生反應(yīng)； (ii) 還原步驟（i)的產(chǎn)物；并且 (iii) 使步驟（iii)的產(chǎn)物與一種酸發(fā)生反應(yīng)。
9. 如權(quán)利要求8所述的工藝，其中該堿是一種金屬醇鹽。
10. 如權(quán)利要求8-9中任一項(xiàng)所述的工藝，其中該堿是甲醇鈉，步驟（ii)包括使步驟 (i)的產(chǎn)物與硼氫化鈉發(fā)生反應(yīng)，并且該酸是鹽酸。
11. 如權(quán)利要求8-10中任一項(xiàng)所述的工藝，進(jìn)一步包括將該具有化學(xué)式（VII)的化合 物轉(zhuǎn)化為一種如在權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)中所定義的具有化學(xué)式（A)的化合物。
12. 用于制備一種具有化學(xué)式（VIII)的化合物的工藝： 其中
A是一個(gè)C6-C14烯烴連接體； 每個(gè)R獨(dú)立地是一個(gè)酸保護(hù)基；并且 Rx是一個(gè)酸保護(hù)基； 所述工藝包括使一種具有化學(xué)式（IX)的化合物：
發(fā)生反應(yīng)，以產(chǎn)生一種具有化學(xué)式（VIII)的化合物，其中Hal是鹵素。
13. 如權(quán)利要求12所述的工藝，其中R是叔-丁基，Hal是C1，并且A是一個(gè)C1(|烯烴 連接體。
14. 如權(quán)利要求12-13中任一項(xiàng)所述的工藝，其中該反應(yīng)是在N，N-二異丙基乙胺的存 在下進(jìn)行。
15. 如權(quán)利要求12-14中任一項(xiàng)所述的工藝，進(jìn)一步包括將該具有化學(xué)式（VIII)的化 合物轉(zhuǎn)化為一種如在權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)中所定義的具有化學(xué)式（I)的化合物。
16. 用于制備一種具有以下化學(xué)式的化合物的工藝：
其中Z是一種酸保護(hù)基，n是0-20,并且每次出現(xiàn)的q、r和s獨(dú)立地是1-7 ; 所述工藝包括使一種具有化學(xué)式（XII)的化合物：
其中P是一種氨基保護(hù)基，與一種磺酸發(fā)生反應(yīng)。
17. 如權(quán)利要求16所述的工藝，其中該磺酸是對(duì)-甲苯磺酸或甲磺酸。
18. 如權(quán)利要求16-17中任一項(xiàng)所述的工藝，進(jìn)一步包括將該具有化學(xué)式（II)的化合 物轉(zhuǎn)化為一種如在權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)中所定義的具有化學(xué)式（A)的化合物。
19. 用于制備一種具有化學(xué)式（XIII)的化合物的工藝：
其中 X是一個(gè)羧基保護(hù)基； Y是一個(gè)胺保護(hù)基； Prt是一個(gè)羥基保護(hù)基； n是0-15 ;并且 q、r和s各自獨(dú)立地是1_7 ; 所述工藝包括使一種具有化學(xué)式（XIV)的化合物
在一種叔胺的存在下與二氫呋喃-2, 5-二酮發(fā)生反應(yīng)。
20. 如權(quán)利要求19所述的工藝，其中該叔胺是三乙胺或吡啶。
21. 如權(quán)利要求19-20中任一項(xiàng)所述的工藝，進(jìn)一步包括將該具有化學(xué)式（XIII)的化 合物轉(zhuǎn)化為一種如在權(quán)利要求1中所定義的具有化學(xué)式（A)的化合物。
22. 用于制備一種具有化學(xué)式（I)的化合物的工藝：
其中 X是一個(gè)羧基保護(hù)基； Y是一個(gè)胺保護(hù)基； Prt是一個(gè)羥基保護(hù)基；n是 0_15 ; q、r和s各自獨(dú)立地是1-7;并且
在一種堿的存在下進(jìn)行處理，以獲得一種具有化學(xué)式（IV)的化合物：
其中Z是一個(gè)酸保護(hù)基； (2) 將具有化學(xué)式（IV)的化合物中的Z去保護(hù)，接著與具有化學(xué)式（V)的羥基脯氨酸 進(jìn)行偶聯(lián)：
(3) 將步驟（2)的產(chǎn)物與琥珀酐進(jìn)行偶聯(lián)；并且 (4) 將步驟（3)的產(chǎn)物偶聯(lián)至一個(gè)固相支持體上，以獲得一種具有化學(xué)式（I)的化合 物。
23. 如權(quán)利要求22所述的工藝，其中X是Bz或Ac。
24. 如權(quán)利要求22-23中任一項(xiàng)所述的工藝，其中Y是Ac。
25. 如權(quán)利要求22-24中任一項(xiàng)所述的工藝，其中n是7 ;并且q、r、以及s各自是1。
26. 如權(quán)利要求22-25中任一項(xiàng)所述的工藝，其中Prt是一個(gè)4, 4'-二甲氧基三苯甲基 保護(hù)基。
【專利摘要】本披露涉及一種用于制備碳水化合物共軛物的改進(jìn)的工藝。本披露還涉及包括這些碳水化合物共軛物的碳水化合物共軛的iRNA劑，這些碳水化合物共軛物具有改進(jìn)的純度并且有利于這些iRNA劑的體內(nèi)遞送。
【IPC分類】A61K31-7088, A61K47-48
【公開(kāi)號(hào)】CN104717982
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380052382
【發(fā)明人】納拉亞南奈爾·K·賈亞普拉卡什, 亞歷山大·V·克林, 帕查穆圖·坎德薩米, 拉杰夫·G·卡蘭托塔緹爾, 莫提亞·馬諾哈蘭
【申請(qǐng)人】阿爾尼拉姆醫(yī)藥品有限公司
【公開(kāi)日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2013年8月6日
【公告號(hào)】CA2879693A1, EP2879718A1, US20150196655, WO2014025805A1