玉屏風在制藥中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及玉屏風在制藥中的應(yīng)用，具體涉及在制備促進樹突狀細胞增殖與活化 的藥物中的應(yīng)用，同時涉及在制備減少炎性T細胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 樹突狀細胞（dendriticcell，DC)作為連接固有免疫與適應(yīng)性免疫的紐帶，是功 能最強的專職抗原遞呈細胞（antigen-presentingcell，APC)，廣泛分布于全身各組織器 官，它能通過模式識別受體（pattern-recognitionreceptors，PRR)識別各種病原微生物、 攝取抗原、加工成抗原肽、遞呈給相應(yīng)的T淋巴細胞，并分泌多種細胞因子，激活初始T細胞 (Na'iveTcells)，誘導其向效應(yīng)性Thl/Th2/Thl7/Treg等不同亞群分化，是獲得性免疫的 始動者，成為多種疾病細胞生物治療的重要細胞。DC的這一功能依賴于共同刺激信號分子 和主要組織相容性抗原復合物（majorhistocompatibilitycomplex，MHC)分子的表達、相 應(yīng)細胞因子的釋放等多個環(huán)節(jié)的信號調(diào)控。
[0003]DC功能的啟動主要通過多種PRR識別多種病原微生物共有的病原相關(guān)分子模式 (pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP)，快速啟動有效信號清除危險因素，維 持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。Toll樣受體（Toll-likerec印tors，TLRs)是其中一類重要的PRR，為 I型跨膜蛋白，其胞內(nèi)段含有一結(jié)構(gòu)保守的區(qū)域，負責活化信號的傳導；胞外段為富含亮氨 酸的重復序列，參與配體識別。TLRs及其信號途徑在調(diào)控DC成熟和免疫應(yīng)答中起重要作 用，在正常情況下，體內(nèi)絕大多數(shù)DC處于非成熟狀態(tài)，具有很強的抗原捕獲、處理能力，但 缺乏激活T細胞的能力。一旦TLRs被PAMPs刺激，未成熟DCQmmaturedendriticcell, iDC)歷經(jīng)一個快速的成熟過程，上調(diào)細胞粘附分子和趨化因子受體等介導迀移和募集的分 子的表達，迀移至次級淋巴器官，進一步分化為成熟DC(maturedendriticcell,mDC)，喪 失吞噬抗原能力，上調(diào)共刺激信號和MHC-II的表達，獲得激活初始T細胞活化和功能分化 的能力，擴大Thl/Th2/Thl7/Treg等亞群主導的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。
[0004] DC具有強大的抗原遞呈能力和強化獲得性免疫反應(yīng)的作用，使其成為細胞生物治 療的重要細胞。該細胞的體外誘導培養(yǎng)方法通常采用細胞因子與TLR配基、病毒載體負載 的flt3等方法，這些方法誘導的DC較易導致炎性細胞因子的過表達，在臨床應(yīng)用中往往存 在成本較高和難以控制的副作用等問題。中藥在增強免疫方面已有較多的文獻報道，但精 確用于DC體外培養(yǎng)的誘導劑尚無系列的研宄成果。根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代醫(yī)學研宄成果，結(jié) 合DC在細胞生物治療中的應(yīng)用價值，在經(jīng)典增強免疫的中藥中發(fā)掘新用途，減低DC體外培 養(yǎng)工程中生物制劑應(yīng)用成本、降低其副作用，為經(jīng)典中藥的新用途提供重要的科學技術(shù)手 段。
[0005] 玉屏風是中醫(yī)固表抗邪的經(jīng)典方藥，并在抗病毒、抗感染的治療實踐中反復驗證 了其有效性，但是，有關(guān)玉屏風在樹突狀細胞增殖和活化中的應(yīng)用尚無報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了玉屏風的新用途，即在制藥中的新用途。
[0007] 具體涉及在制備促進樹突狀細胞增殖及活化的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 同時還涉及在制備減少炎性T細胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 為了更好的理解本發(fā)明，結(jié)合藥理實驗來說明其在制藥中的新用途。
[0010] 1?實驗材料和方法 1.1實驗材料 1.1.1實驗動物 實驗采用SPF級近交系BALB/c小鼠，6~8周齡，體重（21±1. 2)g，雌性，購于山東大 學實驗動物中心，23~27°C，45~50%濕度無菌飼養(yǎng)，自由攝食飲水。
[0011]I. 1. 2中藥玉屏風散的配伍及提取玉屏風散方藥組成：君藥防風（Divaricate SaposhnikoviaRoot，黑龍江）、臣藥黃苗（MilkvetchRoot，內(nèi)蒙古）、佐藥白術(shù)（Largehead AtractylodesRh，浙江）按1:2:2比例配伍，先將3味藥漂洗后加入8倍水，充分浸泡1小 時后，煮沸45min，濾取藥液；再加入5倍水繼續(xù)煮沸l(wèi)h，濾取藥液；重復煎煮三次，合并濾 取藥液，水浴濃縮成膏狀，依次加入65%、75%、85%的乙醇，沉淀過夜，濾取上清，采用水浴減 壓法回收乙醇，獲取玉屏風散制劑(含生藥I. 2g/ml)。制劑分裝后，滅菌后4°C冰箱保存。
[0012] 1.1. 3實驗儀器 用于動物飼養(yǎng)、細胞培養(yǎng)、細胞檢測、基因檢測等相關(guān)實驗儀器見表1。
[0013] LL4實驗試劑及配置方法 熒光抗體：用于檢測DC膜表面分子的多種抗體：FITC標記的大鼠抗小鼠CD86單克隆 抗體、PE標記的大鼠抗小鼠⑶80和IA-d(MHC-II)單克隆抗體均購自BDPharmingen公 司。PE_Cy5標記的大鼠抗小鼠⑶Ilc單克隆抗體購自eBioscience公司。用于小鼠T淋巴 細胞胞內(nèi)外分子檢測的多種熒光抗體：FITC標記的大鼠抗小鼠CD4、PE-Cy5標記的大鼠抗 小鼠CD3、PE標記的大鼠抗小鼠IFN-y、TNFa、IL-10、IL-17、IL-4等熒光抗體均購于BD Pharmingen公司。
[0014] 表1實驗中常用儀器
【主權(quán)項】
1. 玉屏風在制備促進樹突狀細胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
2. 玉屏風在制備促進樹突狀細胞活化的藥物中的應(yīng)用。
3. 玉屏風在制備減少炎性T細胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及玉屏風在制藥中的新用途。玉屏風具有促進樹突狀細胞增殖與活化中的作用,玉屏風參與誘導的樹突狀細胞具有更好的增殖能力和更強的抗原遞呈能力，同時玉屏風還具有減少炎性T細胞亞群增殖的作用。
【IPC分類】A61P37-04, A61K36-481
【公開號】CN104758343
【申請?zhí)枴緾N201510182593
【發(fā)明人】姚成芳, 郭鈺琪, 王麗, 李霞, 周憲賓, 郝鈺, 張巧鳳
【申請人】山東省醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月17日