中藥組合物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥組合物的新用途，尤其涉及中藥組合物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種革蘭氏陰性螺旋狀細(xì)菌。研宄顯示，幽門螺桿菌是急、慢性胃炎以及胃、十二指腸潰瘍的主要致病原因，并可能與胃癌和胃粘膜相關(guān)性淋巴樣組織(MALT)惡性淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。最近，世界衛(wèi)生組織將Hp歸為I類致癌物，它在胃癌發(fā)展中起主導(dǎo)作用。目前流行的治療Hp感染的方案是同時(shí)服用質(zhì)子泵抑制劑(PPI)加兩種抗生素(克拉霉素，阿莫西林、四環(huán)素、甲硝唑等選二種)的三聯(lián)療法。影響三聯(lián)療法的最主要因素被認(rèn)為是Hp對(duì)抗菌劑的耐藥性；另一嚴(yán)重問(wèn)題是質(zhì)子泵抑制劑會(huì)誘發(fā)消化不良，大量抗菌劑則導(dǎo)致消化道內(nèi)菌群的嚴(yán)重毀滅。因此，尋找高效、安全的抗Hp活性一類新藥物成為一個(gè)重要和迫切的任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供了中藥組合物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
[0004]一種中藥組合物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，所述中藥組合物由如下重量份數(shù)的原料制備得到:姜味草18份、一箭球20份、阿里紅15份、幌傘楓12份、野棕18份、苦樹皮20份。
[0005]中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時(shí)，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
[0006]所述中藥組合物的制備方法中濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.30。噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)溫度為120°C，出風(fēng)溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為lOml/s。
[0007]姜味草為姜味草Micromeria biflora Benth.的全草。春夏采收，洗凈曬干。祛風(fēng)解表，溫中除濕。用于感冒咳嗽，胃痛，急性胃腸炎，消化不良，腹脹，腹痛，疝氣痛，預(yù)防痢疾。
[0008]一箭球?yàn)樯菘扑谙亴僦参飭嗡胨谙並yllinga monocephala Rottb.，以全草入藥，清熱化痰，發(fā)汗退熱，消腫解毒。用于感冒發(fā)熱，瘧疾、痢疾，百日咳，跌打損傷，皮膚瘙癢，蛇蟲咬傷等癥。
[0009]阿里紅，菌蓋馬蹄形，通常拳頭大或更大，白色至淡黃色，初期表面具光滑的薄皮，后漸開裂變粗糙，有時(shí)有同心環(huán)帶，邊緣鈍；菌肉軟，粉白色，疏松質(zhì)輕，老時(shí)易碎；菌管白色，多層。孢子無(wú)色，光滑，卵形，拉丁學(xué)名為Fomes officinalis (Vill.Et Fr.)Ames，具有溫肺化痰，降氣平喘，祛風(fēng)除濕，活血消腫，利尿，解蛇毒作用。用于咳嗽，哮喘，胃痛，胃酸過(guò)多，尿路結(jié)石，腎炎，慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，咽喉炎，牙周炎，毒蛇咬傷。
[0010]幌傘楓，為五加科，幌傘楓屬常綠喬木，拉丁學(xué)名Heteropanax fragrans (Roxb.)Seem.，以根入藥，能清熱解毒，活血消腫，止痛。用于感冒，中暑頭痛；外用治癰癤腫毒，淋巴結(jié)炎，骨折，燒燙傷，扭挫傷，蛇咬傷。
[0011]野棕為棕櫚科植物雙籽藤的根。止血，清熱，收斂。治月經(jīng)過(guò)多，血崩，子宮下垂，肺結(jié)核咯血。
[0012]苦樹皮為苦木科植物苦木Picrasma quass1ses (D.Don) Benn.的莖皮。全年可米，曬干，有清熱利濕，殺蟲等效用。
[0013]中藥組合物的體外實(shí)驗(yàn)表明，中藥組合物具有很強(qiáng)的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為16mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個(gè)隨機(jī)的臨床菌株(Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC43504)的生長(zhǎng)，最小抑菌濃度(MIC)均為0.32g生藥量/ml。用氨芐西林作陽(yáng)性對(duì)照，其對(duì)6株測(cè)試菌完全抑制的最小濃度(MIC)為3.5g生藥量/ml。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0015]實(shí)施例1:取姜味草18g、一箭球20g、阿里紅15g、幌傘楓12g、野棕18g、苦樹皮20g，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時(shí)，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒，濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.30。噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)溫度為120°C，出風(fēng)溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為10ml/S。
[0016]實(shí)施例2:中藥組合物的藥理實(shí)驗(yàn)
[0017]I)供試菌株
[0018]幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 43504購(gòu)于美國(guó)菌種保存中心(American Type Culture Collect1n，ATCC)。15 株 Hp 臨床菌株米自江蘇省人民醫(yī)院消化科、江蘇省中醫(yī)院檢驗(yàn)科和南京市兒童醫(yī)院胃鏡室接受胃鏡檢查的患者；在連續(xù)胃鏡檢查中對(duì)消化性潰瘍、十二指腸球炎或疣狀胃炎的患者，先經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)確定為Hp陽(yáng)性者，再取胃竇黏膜1-2塊，切碎后接種于含8 %馬血清、三甲氧節(jié)氨啼啶(trimethropin, TMP) 1.25g/L、多粘菌素(polymyxin) B2500U/L、萬(wàn)古霉素(vancomycin) 10mg/L的Columbia選擇性瓊脂培養(yǎng)基中，于37°C在微氧環(huán)境下(5%02，10% C02和85% N2)培養(yǎng)72小時(shí)。收集細(xì)菌，經(jīng)涂片革蘭氏染色，氧化酶、觸酶和尿素酶鑒定為陽(yáng)性后，傳代純培養(yǎng)，所得菌株作為實(shí)驗(yàn)菌株。
[0019]2)菌株培養(yǎng):我們采用微需氧袋(購(gòu)自上海醫(yī)科大學(xué))進(jìn)行HP的菌株培養(yǎng)，它可通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生Hp所需要的微需氧環(huán)境。
[0020]3)按照上述實(shí)施例1的方法制備試驗(yàn)藥品。
[0021]4)生物活性測(cè)定
[0022]采用紙片法(Microb1logical paper method)測(cè)定化合物對(duì)幽門螺桿菌的抑制作用，用瓊脂稀釋法來(lái)測(cè)定供試樣品的最低抑菌濃度(minimal inhibitoryconcentrat1n, MIC)。
[0023]1.紙片法實(shí)驗(yàn)
[0024](A)準(zhǔn)備培養(yǎng)基將配制好的Columbia培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，冷卻至50_60°C，加8%馬血清或綿羊血，混勻傾注于已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿7-10ml，培養(yǎng)基厚度為1.5mm(無(wú)菌操作)。
[0025](B)轉(zhuǎn)接實(shí)驗(yàn)菌(涂菌)用微量取樣器取稀釋好的108CFU/ml (10D660 = 108CFU/ml)
[0026]Hp的菌懸液0.1ml均勻地涂抹在適宜的培養(yǎng)皿表面。倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。
[0027](C)貼樣品紙片用微量取樣器取6 μ I待測(cè)樣品(質(zhì)量濃度2mg/ml)注入已經(jīng)滅菌的圓濾紙片上。用無(wú)菌鑷子鑷取含樣品的紙片和對(duì)照空白紙片，按無(wú)菌操作分別紙片緊貼于含菌瓊脂表面，每隔一定距離貼一張紙片。每種菌做3皿，所得結(jié)果求其平均值。
[0028](D)培養(yǎng)將各平皿置于微需氧袋中，封口，打開氣體發(fā)生器，再置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。
[0029](E)測(cè)抑菌圈直徑取出平板后，分別測(cè)量各紙片周圍抑菌圈直徑的大小。參照對(duì)照組的結(jié)果，可得出待測(cè)樣品敏感實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。重復(fù)三次。
[0030]I1.瓊脂稀釋法測(cè)定MIC
[0031](A)藥物平板的制備首先將測(cè)試的化合物用二甲基亞砜(DMSO)溶液配制成0.5mg/ml 的母液，再用無(wú)菌水稀釋，最終配成 10.0，8.0，6.0，4.5，4.0，3.5，3.0，2.5，2.0，1.5，1.0，0.5和0.25yg/ml的濃度系列，DMSO在介質(zhì)中的濃度小于1%。將Iml配制好的測(cè)試化合物溶液與保溫于50°C的9ml哥倫比亞培養(yǎng)基另加Iml保溫于50°C的馬血清充分混勻，澆制入培養(yǎng)皿中冷卻即成。
[0032](B)轉(zhuǎn)接實(shí)驗(yàn)菌(涂菌)用微量取樣器吸取稀釋好的I X 108CFU/ml Hp的菌懸液
[0033]0.1ml均勻地涂抹在培養(yǎng)皿表面，倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。
[0034](C)確定MIC將待測(cè)培養(yǎng)皿在微需氧袋(含:85% N2, 10%。02和5% O2)中，保溫37°C培養(yǎng)72小時(shí)，觀察Hp生長(zhǎng)情況，與空白組相對(duì)照，以完全沒有菌生長(zhǎng)的樣品最低濃度為最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentrat1n, MIC)值。陽(yáng)性對(duì)照為氨節(jié)西林(Ampicillin)。
[0035]3、中藥組合物的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0036]體外實(shí)驗(yàn)表明，中藥組合物具有很強(qiáng)的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為16mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個(gè)隨機(jī)的臨床菌株(HpOOl、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC43504)的生長(zhǎng)，最小抑菌濃度(MIC)均為0.32g生藥量/ml。用氨芐西林作陽(yáng)性對(duì)照，其對(duì)6株測(cè)試菌完全抑制的最小濃度(MIC)為3.5g生藥量/ml ο
[0037]結(jié)論:中藥組合物抑制幽門螺旋桿菌活性的能力比氨芐西林強(qiáng)，說(shuō)明對(duì)于與幽門螺旋桿菌密切相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來(lái)講，中藥組合物是一個(gè)極具開發(fā)潛力的藥物。它可直接用于相應(yīng)疾病的治療以及相關(guān)藥物的制備。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種中藥組合物在抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份數(shù)的原料制備得到:姜味草18份、一箭球20份、阿里紅15份、幌傘楓12份、野棕18份、苦樹皮20份。
2.如權(quán)利要求1所述中藥組合物在抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時(shí)，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
3.如權(quán)利要求1所述中藥組合物在抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物的制備方法中濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為.1.30。噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)溫度為120°C，出風(fēng)溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為lOml/s。
【專利摘要】體外活性實(shí)驗(yàn)表明中藥組合物具有很強(qiáng)的抗幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)活性，中藥組合物由姜味草18份、一箭球20份、阿里紅15份、幌傘楓12份、野棕18份、苦樹皮20份制備而成，可用于急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病的治療及在制備治療急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍藥物中得到應(yīng)用，具有顯著的進(jìn)步。
【IPC分類】A61P31-04, A61K36-89
【公開號(hào)】CN104784408
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510218647
【發(fā)明人】田麗華
【申請(qǐng)人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年5月2日