堿菀酯a及其衍生物的制備和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及抗腫瘤活性化合物堿斃醋A(tripolinolate A)和堿斃醋 A的衍生物的制備和醫(yī)藥用途。更具體說是從植物堿斃（Tripolium vulgare Nees)中提取 分離堿菀酯A和用化學(xué)合成方法制備堿菀酯A和堿菀酯A的衍生物以及它們在制備抗腫瘤 藥物方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 堿斃（Tripolium vulgare Nees)是菊科堿斃屬（Tripolium)唯一的一種植物，分 布于歐洲、亞洲、北美洲和非洲北部，我國吉林、山西、內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、新疆、山東、江蘇、 浙江等省區(qū)都有分布。堿菀是溫帶氣候區(qū)專性鹽生植物，多生長在低位鹽堿斑、鹽堿濕地的 海岸，湖濱和沼澤等地方。目前，文獻(xiàn)資料中還沒有堿菀的藥用記載，堿菀的化學(xué)成分也沒 有研宄報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個目的是提供一種堿菀酯A及其衍生物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng) 用。堿菀酯A和堿菀酯A的衍生物顯著抑制人腦膠質(zhì)瘤U87-MG和U251細(xì)胞以及腸癌HCT-15 和SW620細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，堿菀酯A和它的 衍生物對腫瘤細(xì)胞的作用并不僅局限于膠質(zhì)瘤和腸癌，還包括其他各種腫瘤和癌癥。
[0004] 所述堿菀酯A及其衍生物的結(jié)構(gòu)通式2為：
[0005]
【主權(quán)項】
1. 一種堿菀酯A及其衍生物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，具有式2結(jié)構(gòu) 通式：
其中：R 和札各自獨立地表示（-COCH3)、（-COCH2CH3)、[-COCH(CH 3) 2]、[-COCH2CH2CH3]、 [-C0CH (CH3) CH2CH3]、[-COCH2CH (CH3) 2]、[-COCH2 (CH2) 2CH3]、[-COCH2 (CH2) 3CH3]、 [-COCH2 (CH2) 4CH3]、[-COCH2 (CH2) 5CH3]、或其它的?；?br>2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿菀酯A及其衍生物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征 在于，所述腫瘤為膠質(zhì)瘤和腸癌。
3. -種堿菀酯A的提取分離方法，所述的堿菀酯A的化學(xué)結(jié)構(gòu)式1為：
其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)： (1) 堿菀酯A的提取分離純化： 將干燥的堿菀植物全草切成小段并用中藥粉碎機(jī)將其粉碎成粉末，用甲醇滲漉提取， 甲醇滲漉液合并后經(jīng)減壓濃縮得到濃縮的甲醇提取液，濃縮的甲醇提取液用環(huán)己烷萃取， 合并環(huán)己烷萃取液并經(jīng)減壓濃縮得到環(huán)己烷萃取物浸膏，環(huán)己烷萃取物浸膏經(jīng)硅膠柱層析 分離，分別用9:1和4:1，v/v的環(huán)己烷/乙酸乙酯依次洗脫，4:1的環(huán)己烷/乙酸乙酯的洗 脫液經(jīng)減壓濃縮得到的組分經(jīng)反相硅膠柱層析分離，用甲醇洗脫，分段收集甲醇洗脫液，每 100毫升1份，各收集組分別用HPLC檢測，將HPLC色譜保留時間t K 8. 9min的組分合并， 減壓濃縮得到式1的單一化合物； (2) 堿菀酯A的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)鑒定 取步驟（1)分離得到的單一化合物，根據(jù)1H譜、13C譜、HSQC譜、HMBC譜和高分辨質(zhì)譜 分析，鑒定為4-(2S_甲基丁?；?9_乙?；?松柏醇[4-(2S-methylbutyryl)-9_acetyl -coniferol]即堿菀酯A ;堿菀酯A為無色油狀物，分子式C17H22O5;溶于甲醇、乙醇、吡啶，乙 酸乙酯，不溶于水；[a] D25+l〇.6(c 0.10，Me0H) ;UV λΜχ 215,256,290nm;HPLC保留時間為 8. 9min〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種堿菀酯A的提取分離方法，其特征在于，步驟⑴滲漉提 取所用的溶媒為甲醇、或乙醇，溶媒和藥材用量的比例是5~7升：1公斤；所述硅膠柱層 析中硅膠用量與樣品量的比例是20~50克：1克；所述反相硅膠柱層析ODS的用量與樣品 量的比例是30~60克：1克。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種堿菀酯A的提取分離方法，其特征在于，步驟（1)中HPLC 檢測條件：Zorbax Bonus-RP ODS HPLC色譜柱，150X4. 6mm, 5 μπι ;流動相甲醇/水，65 :35 ; 流速lmL/min ;檢測波長256nm。
6.權(quán)利要求1所述的一種堿菀酯A及其衍生物的化學(xué)合成方法，其特征在于，通過以下 步驟實現(xiàn)： (1) 松柏酸⑶的制備：
將香草醛（3a)和丙二酸（3b)溶于二氧雜環(huán)己烷中，加入無水吡啶和苯胺，在90~ 95°C保溫反應(yīng)2~3小時，冷至室溫。反應(yīng)物加入20%碳酸鉀后攪拌，用濃鹽酸調(diào)至PH為 2~3,析出沉淀物，抽濾，用冷水洗滌固體，真空干燥后得到松柏酸（3)，所述的香草醛 (3a)、丙二酸（3b)、二氧雜環(huán)己烷、無水吡啶、苯胺的用量比例為0. 02~0. 05 (mol) :0. 03~ 0. 06 (mol) : 20 ~30 (ml) : 10 ~15 (ml) : I. 0 ~2. 0 (ml); (2) 松柏酸甲酯（4)的制備：
將松柏酸（3)溶于無水甲醇中，在零度條件下逐漸加入亞硫酰氯攪拌10~15分鐘后， 在室溫下放置7~8小時并不停攪拌，反應(yīng)物經(jīng)ODS柱層析分離得到松柏酸甲酯（4)，所述 的松柏酸（3)、亞硫酰氯、甲醇的用量比為0.1 (mol) :0. 12~0. 15 (mol) : 300~400 (mL); (3) 松柏醇⑶的語1|名·，
將松柏酸甲酯（4)溶于無水四氫呋喃中，逐步加入四氫鋁化鋰，室溫放置9~10小時 并不斷攪拌，反應(yīng)物經(jīng)ODS柱層析分離得到松柏醇（5)，其中松柏酸甲酯（4)、四氫鋁化鋰、 四氫呋喃的用量比為〇. I (mol) :0.2~0.3 (mol): 500~1000 (mL); (4) 堿菀酯A及其衍生物的制備：
其中：R和R1同權(quán)利要求1 ; 將松柏醇（5)溶于吡啶中，加入具有結(jié)構(gòu)式（6)的酸酐化合物，室溫放置10~24后加 水并攪拌均勻，反應(yīng)物用乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)ODS柱層析和制備型高效液相色譜分離 得到結(jié)構(gòu)式（2)的堿菀酯A及其衍生物，所述的松柏醇（5)、酸酐化合物、吡啶的用量比為 0· I (mol) : 0· 2 ~0· 3 (mol) : 100 ~200 (mL) 〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為堿菀酯A及其衍生物各自單獨 使用或合用或與其他藥物或有效成分一起，與藥學(xué)上可接受的賦形劑制成。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的制劑為液體制劑、固體制劑、 膠囊制劑或緩釋制劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供從堿菀植物的全草中提取分離堿菀酯A以及合成堿菀酯A及其衍生物的制備方法。堿菀酯A和堿菀酯A的衍生物顯著抑制人腦膠質(zhì)瘤U87-MG和U251細(xì)胞以及腸癌HCT-15和SW620細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，可在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。堿菀酯A和它的衍生物對腫瘤細(xì)胞的作用并不僅局限于膠質(zhì)瘤和腸癌，還包括其他各種腫瘤和癌癥。堿菀酯A及其衍生物的結(jié)構(gòu)通式為：。
【IPC分類】A61K31-222, C07C67-08, A61P35-00, C07C67-48, C07C69-28, C07C69-16
【公開號】CN104825437
【申請?zhí)枴緾N201510154546
【發(fā)明人】張治針, 陳璐, 梁英, 宋騰飛, 安佳庫瑪, 王文玲, 虞斯然, 黃豪彩, 連曉媛
【申請人】浙江大學(xué)
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月2日