用。
[0011]本發(fā)明的另一目的是提供一種用于青光眼治療的生物膜的制備方法。
[0012]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:用于青光眼治療的生物膜，由羊膜浸泡于質(zhì)量百分比濃度為I?5%的高分子多糖水溶液進(jìn)行增厚后，然后在在-16?-4°c下輻照滅菌制成，其厚度為0.2?0.5mm。
[0013]本發(fā)明所述的用于青光眼治療的生物膜，保留了羊膜主要成分如膠原及各類活性因子，復(fù)合天然生物高分子材料如透明質(zhì)酸或羧甲基纖維素，厚度為0.2?0.5mm，具有防黏連，抑制瘢痕，降低炎癥的作用，應(yīng)用于青光眼小梁切除術(shù)鞏膜瓣下填充時(shí)具有合適的降解速率及支撐效果，有效穩(wěn)定控制房水流出速率，使眼壓可得到長時(shí)間穩(wěn)定控制。
[0014]一種用于青光眼治療的生物膜的制備方法，是以臍帶周圍較厚羊膜為原料，經(jīng)快速取材、沖壓裁剪、復(fù)合增厚、輻照滅菌步驟，最終得到生物膜產(chǎn)品；具體步驟包括:
[0015]⑴取材
[0016]在I?3分鐘內(nèi)將臍帶周圍附著于胎盤之上的羊膜快速取下，并迅速2?10°C冷藏，I小時(shí)內(nèi)運(yùn)輸至潔凈車間進(jìn)行后續(xù)處理。
[0017](2)沖壓裁剪
[0018]將羊膜上皮面向上迅速鋪展于硝酸纖維素濾膜上，在I?3分鐘內(nèi)將羊膜裁剪為長度為3?10mm，寬度為3?1mm的矩形或者正方形羊膜膜片，也可裁剪為類似大小的梯形、圓形、三角形羊膜膜片。
[0019]⑶復(fù)合增厚
[0020]將羊膜膜片浸泡于質(zhì)量百分比濃度為I?5%的醫(yī)藥級別高分子多糖水溶液I?3分鐘，使羊膜膜片厚度增厚至0.2?0.5_，然后迅速置于含有少量醫(yī)用級甘油的包裝袋中，封口密封，在-16?-4°C下冷藏并立即送輻照滅菌。
[0021](4)輻照滅菌
[0022]將增厚的羊膜膜片在-16?-4°C的低溫保護(hù)條件下，采用電離輻射滅菌處理。
[0023]所述⑴步驟中所取羊膜厚度在0.1?0.2mm。
[0024]所述(I)步驟中采用羊膜快速取材裝置進(jìn)行取材，所述羊膜快速取材裝置包括中空的漏斗狀殼體和粗端大切刀，所述漏斗狀殼體的粗端設(shè)置粗端大切刀；所述粗端大切刀上設(shè)置可拆卸的保護(hù)罩，保護(hù)套可將粗端大切刀完全嵌套覆蓋；可避免羊膜長時(shí)間暴露于常溫條件造成羊膜活性降低，保證羊膜植入后抑制瘢痕降低炎癥的功效；也可有效避免剝離時(shí)對羊膜造成的損傷及破壞。
[0025]所述(2)步驟中，羊膜裁剪采用沖壓裁剪裝置來進(jìn)行，所述沖壓裁剪裝置包括平板載體和裁刀，若干所述裁刀排列固定在所述平板載體一側(cè)表面上；可以在極短時(shí)間內(nèi)將所取羊膜迅速裁剪為所需大小形狀，進(jìn)一步有效避免羊膜長時(shí)間暴露于常溫條件造成羊膜活性降低，保證羊膜植入后抗瘢痕抗炎癥的能力。
[0026]所述醫(yī)藥級別高分子多糖為分子量100?150萬的醫(yī)用級透明質(zhì)酸或高粘度醫(yī)用級羧甲基纖維素鈉中一種。采用天然高分子材料增加羊膜厚度，既能使制備得到的生物膜在鞏膜瓣下植入初期起到良好的引流作用及防黏連作用，也能同時(shí)在一定程度上保護(hù)羊膜的生物活性，進(jìn)一步保證羊膜在鞏膜瓣下發(fā)揮其天然的抗瘢痕抗炎癥功能。
[0027]所述電離輻射滅菌可以用伽馬射線輻照或是高能電子束輻照，劑量為20?30kGy ;輻照后立即將生物膜產(chǎn)品置于-90?-10°C下冷藏保存。采用低溫保護(hù)進(jìn)行輻照滅菌，既能達(dá)到無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品的無菌水平要求，又能同時(shí)滅活各種病毒，也能最大程度保護(hù)生物羊膜活性，盡可能維持其天然的抗炎癥抗瘢痕能力，使其最終得以有效應(yīng)用于青光眼濾過道手術(shù)。
[0028]本發(fā)明制備的用于青光眼治療的生物膜，在確保生物膜的生物安全性的同時(shí)，有效保留及發(fā)揮羊膜的天然活性功能，應(yīng)用于青光眼濾過手術(shù)鞏膜瓣下植入具有前期防黏連，后期抑制瘢痕形成的能力，可有效長期維持術(shù)眼眼壓的穩(wěn)定，具有極好的臨床應(yīng)用前景。
[0029]本發(fā)明實(shí)用羊膜快速取材裝置，通過粗端及細(xì)端先后裁切分離，可使胎盤之上羊膜迅速從胎盤剝離，減少羊膜取材所需操作時(shí)間。經(jīng)本發(fā)明人驗(yàn)證，在操作人員經(jīng)過較長時(shí)間培訓(xùn)及實(shí)際操作的條件下，僅用手工操作將胎盤之上羊膜從胎盤完整剝離，至少需要20?30分鐘。本發(fā)明之羊膜裁切裝置，通過多個(gè)均勻排列的微型裁刀沖壓裁切羊膜，可迅速將羊膜裁切為所需規(guī)格及大小，大大減少羊膜裁切所需操作時(shí)間。經(jīng)本發(fā)明人驗(yàn)證，在操作人員經(jīng)過較長時(shí)間培訓(xùn)及實(shí)際操作的條件下，采用手工操作利用普通刀具對所取得的一張羊膜進(jìn)行裁切，至少需要I?2小時(shí)才能裁切完成，而且較難保證所裁切羊膜的大小均一滿足要求。
[0030]與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:
[0031](I)整體工藝最小化處理，可有效保留羊膜各種天然活性成分，包括膠原、生長因子、抗炎因子等；對本發(fā)明制備的生物膜進(jìn)行上述成分檢測，結(jié)果表明本發(fā)明制備的生物膜產(chǎn)品與新鮮羊膜的各種天然活性成分含量相差較小，說明本發(fā)明制備方法能夠有效保留羊膜的各種天然成分；
[0032](2)采用羊膜快速取材裝置可在最短的時(shí)間內(nèi)完成羊膜從取材到滅菌的整個(gè)過程處理(滅菌前操作時(shí)間最短可為I?2小時(shí))，并采用天然高分子材料及低溫保護(hù)輻照滅菌有效保留羊膜各種天然活性成分的抗炎癥抗瘢痕的天然功效。對本發(fā)明制備的生物膜進(jìn)行相關(guān)體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測，結(jié)果表明本發(fā)明制備的生物膜產(chǎn)品具有與新鮮羊膜同等的生物活性；
[0033](3)在保留羊膜天然活性成分及這些成分活性功效的同時(shí)，還能保證最終制備得到的生物膜的無菌水平及病毒滅活效果，保證了生物膜作為醫(yī)療器械使用的基本要求得以滿足，確保了生物膜的生物安全性。本發(fā)明中的低溫保護(hù)輻照滅菌方法經(jīng)輻照滅菌病毒滅活工藝驗(yàn)證，可完全保證各類病毒(如HIV、HBV, HCV、梅毒等)滅活，極大地提高了臨床使用的安全性；
[0034](4)厚度及降解性能可完全滿足青光眼治療鞏膜瓣下填充的材料需求，生物膜可有效發(fā)揮術(shù)后早期預(yù)防黏連，后期預(yù)防瘢痕形成的治療功效。
【【附圖說明】】
[0035]圖1為羊膜快速取材裝置的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0036]圖2羊膜沖壓裁剪裝置的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0037]圖3是本發(fā)明制備得到的生物膜與新鮮羊膜主要成分定量檢測對比結(jié)果圖；
[0038]圖4是本發(fā)明制備得到的生物膜體外細(xì)胞毒性檢測結(jié)果圖；
[0039]圖5是本發(fā)明制備得到的生物膜體外淋巴細(xì)胞增殖檢測結(jié)果圖；
[0040]圖6是本發(fā)明制備得到的生物膜應(yīng)用于犬青光眼治療的眼壓監(jiān)測結(jié)果圖。
【【具體實(shí)施方式】】
[0041]以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述說明。
[0042]實(shí)施例1
[0043]用于青光眼治療的生物膜的制備方法，其步驟如下:
[0044](I)快速取材
[0045]采用羊膜快速取材裝置，在I分鐘內(nèi)將臍帶周圍附著于胎盤之上的羊膜快速取下，并迅速2°C冷藏，I小時(shí)內(nèi)運(yùn)輸至潔凈車間進(jìn)行后續(xù)處理；
[0046](2)沖壓裁剪
[0047]將(I)步驟取得的羊膜上皮面向上迅速鋪展于硝酸纖維素濾膜上，采用沖壓羊膜裁剪裝置在I分鐘內(nèi)將步驟一所取的羊膜材料裁剪為長度為3mm，寬度為3mm的正方形羊膜膜片；
[0048](3)復(fù)合增厚
[0049]將(2)步驟制備得到的羊膜膜片浸泡于質(zhì)量百分比濃度為1%的分子量100萬醫(yī)藥級透明質(zhì)酸水溶液I分鐘，使羊膜膜片厚度增厚至0.25_，然后迅速置于含有少量醫(yī)用級甘油的包裝袋中，封口密封，-4°C下冷藏并立即送輻照滅菌；
[0050](4)輻照滅菌
[0051]將(3)步驟處理后的羊膜，在_4°C下的低溫保護(hù)條件下，采用伽馬射線20kGy輻照滅菌處理。輻照后立即將生物膜產(chǎn)品置于_90°C下冷藏保存。
[0052]通過上述方法制備得到的生物膜具有良好的生物相容性，體外細(xì)胞毒性及體外淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示如圖4和圖5所示，生物膜無體外細(xì)胞毒性，無刺激或抑制淋巴細(xì)胞的免疫原性，作為青光眼治療的引流支架具有良好的安全性保證。
[0053]實(shí)施例2
[0054]用于青光眼治療的生物膜的制備方法，其步驟如下:
[0055](I)快速取材
[0056]采用羊膜快速取材裝置，在3分鐘內(nèi)將臍帶周圍附著于胎盤之上的