一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術領域，具體涉及一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方 法。
【背景技術】
[0002] 刺頭復葉耳蕨（Arachniodes exilis Ching)為鱗毛蕨科復葉耳蕨屬植物，廣泛分 布于世界熱帶和亞熱帶濕潤區(qū)域，以亞洲東部和東南部種類最為豐富，我國主要分布于長 江流域以南地區(qū)及山東、河南等省，具有清熱利濕、抗菌消炎、鎮(zhèn)靜作用，民間用于治療急性 黃疸型肝炎、關節(jié)炎、腰腿疼、痢疾、燙火傷等，其主要化學成份為黃酮類化合物。有研宄表 明鱗毛蕨類植物有包括抗病毒、抗腫瘤等藥理作用，產(chǎn)生這些藥理作用的成分是黃酮類化 合物或總間苯三酚類化合物。目前植物總黃酮的提取工藝主要包括回流提取法、超聲波法、 微波法、超臨界流體萃取法、酶解法等，但上述方法只能得到都是粗提物，其總黃酮的含量 不超過10%，因此，建立一種得到高含量的刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，為進一 步研宄刺頭復葉耳蕨中黃酮成分的藥理活性提供基礎。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 基于上述原因，申請人通過多次創(chuàng)造性的試驗，得到一種新的高含量的刺頭復葉 總黃酮的制備方法，該方法將乙醇超聲提取、調(diào)PH值后上聚酰胺柱純化進行有機的結(jié)合， 得到刺頭復葉總黃酮提取物中總黃酮含量大于70%，該方法工藝簡單可行、適合工業(yè)化生 產(chǎn)。
[0004] 本發(fā)明通過下述方案獲得的。
[0005] 一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，該制備方法包括刺頭復葉耳蕨粗提 物提取方法和刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物純化方法。
[0006] 上述所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨粗提 物提取方法為：取刺頭復葉耳蕨加入乙醇，超聲提取，提取液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到 刺頭復葉耳蕨粗提物。
[0007] 上述所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨總黃 酮提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物加水溶解，調(diào)PH值，上聚酰胺柱，先用水洗， 水洗液棄去，再用濃度為50% -70%乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮，干燥，得到刺頭 復葉耳蕨總黃酮提取物。
[0008] 上述所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨粗提物的制 備方法為：取刺頭復葉耳蕨，加入濃度為50% -70%乙醇，加入乙醇重量是刺頭復葉耳蕨的 重量的18-22倍，采用超聲提取，提取功率為350W，提取2-4次，每次25-35分鐘，合并提取 液，回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物。
[0009] 上述所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨粗提物的制 備方法為：取刺頭復葉耳蕨，加入濃度為60%乙醇，加入乙醇重量是刺頭復葉耳蕨的重量 的20倍，采用超聲提取，提取功率為350W，提取3次，每次30分鐘，合并提取液，回收乙醇至 盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物。
[0010] 上述所述一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨總黃酮 提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物，加水溶解完全，加水的重量是刺頭復葉耳蕨粗 提物重量的〇. 4-0. 6倍，調(diào)pH值為4. 5-5. 5,上聚酰胺柱，先用水洗，MoliSh反應陰性，停止 收集水洗液，水洗液棄去；再用濃度為50% -70%乙醇洗脫，鹽酸-鎂粉反應陰性，停止收集 乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物。
[0011] 上述所述一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉耳蕨總黃酮 提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物，加水溶解完全，加水的重量是刺頭復葉耳蕨粗 提物重量的〇. 5倍，調(diào)pH值為5. 0,上聚酰胺柱，先用水洗，Molish反應陰性，停止收集水洗 液，水洗液棄去；再用濃度為60%乙醇洗脫，鹽酸-鎂粉反應陰性，停止收集乙醇洗脫液，洗 脫液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物。
[0012] 制備方法研宄試驗：
[0013] 一、提取試驗研宄
[0014] ( -）工藝參數(shù)的研宄
[0015] 申請人經(jīng)過多次研宄，發(fā)現(xiàn)在超聲提取中，乙醇濃度和超聲功率對于提取率影響 最大，因此申請人對于乙醇濃度、超聲功率進行深入的研宄：
[0016] 1、乙醇濃度對總黃酮得率的影響
[0017] 精確稱取刺頭復葉耳蕨60目干燥粉末l.Og，固定超聲時間為20min，固液比為 1 : 20,提取次數(shù)為1次、超聲功率為350W的條件下，不同乙醇濃度（20%、40%、60%、 80%、100% )對總黃酮得率的影響。
[0018] 2、超聲功率對總黃酮得率的影響
[0019] 精確稱取刺頭復葉耳蕨60目干燥粉末I. 0g，固定乙醇濃度為60%，提取次數(shù)為1 次，超聲時間為20min，固液比為1 : 20的條件下，不同超聲功率（200、250、300、350、400W) 對總黃酮得率的影響。
[0020] (二）試驗結(jié)果
[0021 ] 1、乙醇濃度對總黃酮得率的影響
[0022] 乙醇濃度對刺頭復葉耳蕨總黃酮得率的影響如表1所示，隨著乙醇濃度的增加， 提取率先增加后降低。但當乙醇濃度達到60%時，總黃酮提取率最大，所以選用濃度在 60 %的乙醇作為提取溶劑。
[0023] 注：總黃酮含量測定：利用紫外-可見分光光度法，以蘆丁為標準品，采用Al (NO3)3顯色法，在486. 4nm波長下測定標準曲線，得到線性回歸方程為Y = 0. 0121X-0. 0322, R2 = 0. 9998,線性關系在17. 20-68. 80 μ g/mL范圍內(nèi)。根據(jù)標準曲線法測定各樣品中總黃酮的 含量。
[0024] 表1乙醇濃度對提取率的影響
[0025]
【主權項】
1. 一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其特征在于：該制備方法包括刺頭復 葉耳蕨粗提物提取方法和刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物純化方法。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉 耳蕨粗提物提取方法為：取刺頭復葉耳蕨加入乙醇，超聲提取，提取液回收乙醇至盡，濃縮 干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物。
3. 根據(jù)權利要求1所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復葉 耳蕨總黃酮提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物加水溶解，調(diào)PH值，上聚酰胺柱，先 用水洗，水洗液棄去，再用濃度為50% -70 %乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮，干燥， 得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物。
4. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮的制備方法，其中刺頭復葉耳 蕨粗提物的制備方法為：取刺頭復葉耳蕨，加入濃度為50% -70%乙醇，加入乙醇重量是刺 頭復葉耳蕨的重量的18-22倍，采用超聲提取，提取功率為350W，提取2-4次，每次25-35分 鐘，合并提取液，回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物。
5. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種刺頭復葉耳蕨總黃酮的制備方法，其中刺頭復葉耳 蕨粗提物的制備方法為：取刺頭復葉耳蕨，加入濃度為60 %乙醇，加入乙醇重量是刺頭復 葉耳蕨的重量的20倍，采用超聲提取，提取功率為350W，提取3次，每次30分鐘，合并提取 液，回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物。
6. 根據(jù)權利要求1或3所述一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復 葉耳蕨總黃酮提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物，加水溶解完全，加水的重量是刺 頭復葉耳蕨粗提物重量的〇. 4-0. 6倍，調(diào)pH值為4. 5-5. 5,上聚酰胺柱，先用水洗，Molish 反應陰性，停止收集水洗液，水洗液棄去；再用濃度為50% -70%乙醇洗脫，鹽酸-鎂粉反應 陰性，停止收集乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提 取物。
7. 根據(jù)權利要求1或3所述一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，其中刺頭復 葉耳蕨總黃酮提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物，加水溶解完全，加水的重量是刺 頭復葉耳蕨粗提物重量的〇. 5倍，調(diào)pH值為5. 0,上聚酰胺柱，先用水洗，Molish反應陰性， 停止收集水洗液，水洗液棄去；再用濃度為60%乙醇洗脫，鹽酸-鎂粉反應陰性，停止收集 乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥技術領域，具體涉及一種刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物的制備方法，該方法包括刺頭復葉耳蕨粗提物提取方法和刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物純化方法，其中刺頭復葉耳蕨粗提物提取方法為：取刺頭復葉耳蕨加入乙醇，超聲提取，提取液回收乙醇至盡，濃縮干燥，得到刺頭復葉耳蕨粗提物；其中刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物純化方法為：取刺頭復葉耳蕨粗提物加水溶解，調(diào)pH值，上聚酰胺柱，先用水洗，水洗液棄去，再用濃度為50％-70％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡，濃縮，干燥，得到刺頭復葉耳蕨總黃酮提取物。該方法是一個有機的整體的，該方法具有提取率高、工藝簡單、適合工業(yè)化生產(chǎn)、提取物中刺頭復葉耳蕨總黃酮含量高等優(yōu)點。
【IPC分類】A61P35-00, A61P31-12, A61K36-11
【公開號】CN104857031
【申請?zhí)枴緾N201510209112
【發(fā)明人】李輝敏
【申請人】九江學院
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年4月29日