紫萼玉簪花總皂苷的制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域；具體涉及紫萼玉簪花總皂苷的制備新方法。
【背景技術】
[0002] 紫萼玉簪（Hosta ventricosa Stearn)為百合科玉簪屬多年生草本植物。《全國 中藥匯編》記載紫玉簪具有散瘀止痛、解毒功效，可治跌打損傷、胃痛、咽喉腫痛等疾病。化 學成分主要是留體皂苷、黃酮類（山萘酚苷）、苯丙素類（7-羥基香豆素）等。我們前期研 宄發(fā)現紫萼玉簪花具有抗腫瘤作用。經過MTT法跟蹤篩選發(fā)現，總留體皂苷是紫萼玉簪抗 腫瘤的活性部位，且增殖抑制作用顯著；同時發(fā)現其具有良好的抗氧化作用，是一種非常具 有開發(fā)前景的腫瘤預防和治療藥物，同時也可作為保健品開發(fā)應用。但目前紫萼玉簪總甾 體皂苷的制備方法皂苷得率和純度都很低，制約了其深度開發(fā)和應用。本發(fā)明主要是建立 了紫萼玉簪總留體皂苷的高效、高純度、低成本的制備工藝，為后續(xù)藥品和保健品的研發(fā)奠 定基礎。
[0003] 皂苷的提取方法有許多種，常用的有浸漬法、滲濾法、回流法、超聲提取法等。浸漬 法、滲濾法操作簡單，成本低廉，但耗時長。回流法提取過程中皂苷類成分長期受熱，容易破 壞皂苷結構。超聲法具有提取率高，加快細胞內有效成分的溶出，縮短提取時間，溫度低的 特點，但限于提取器的容積不適合工業(yè)化大生產。文獻報道采用超聲提取，硅膠柱色譜結合 DlOl大孔樹脂純化紫萼玉簪花總皂苷，提取方法僅限于實驗室研宄，純化過程繁瑣，總皂苷 純度不高。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明要解決現有提取紫萼玉簪總皂苷方法存在得率較少且皂苷的純度不高的 技術問題。
[0005] 本發(fā)明的提供了一種紫萼玉簪花總皂苷的制備方法。
[0006] 本發(fā)明還提供了紫萼玉簪花總皂苷的應用。
[0007] 本發(fā)明紫萼玉簪花總皂苷提取方法高效、省時、節(jié)能、經濟，采用AB8大孔樹脂進 行純化，獲得精制總皂苷。采用MTT法，選擇人乳腺癌細胞MCF-7,人肝癌細胞H印G2、人胃 癌細胞SGC-7901和人肺癌細胞A549四種腫瘤細胞進行體外活性篩選，從而進行藥效學評 價。采用紫外分光光度法，評價紫萼玉簪花總皂苷對羥基自由基體系、DPPH自由基體系的 體外抗氧化活性。
[0008] 本發(fā)明中紫萼玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟進行的：
[0009] 步驟一、取新鮮紫萼玉簪花，清洗后至于磨漿機中，按紫萼玉簪花與乙醇質量比為 1:10~15配比加入體積分數大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后 過濾或者離心，提取3次，合并乙醇提取液，濃縮得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后用 1~3倍的水飽和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0010] 步驟二、AB8大孔樹脂進行預處理，然后裝入樹脂柱，步驟一得到的正丁醇萃取物 用熱水分散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應呈陰性，再用體積分數為30% 乙醇洗脫除雜；然后用體積分數為70%的乙醇溶液作為洗脫液進行洗脫處理，洗脫液的用 量為6~8倍樹脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干，即得 到紫萼玉簪花總皂苷。
[0011] 本發(fā)明采用熱磨，工藝簡單，熱磨加快了纖維的斷裂，而且原料研磨的更加細小， 有利于有效成分的溶出。
[0012] 本發(fā)明方法獲得紫萼玉簪花總皂苷的得率在5. 0%以上。
[0013] 本發(fā)明方法獲得紫萼玉簪花的總皂苷純度高，在60%以上。
[0014] 采用MTT法實驗結果顯示紫萼玉簪花總皂苷進對以人乳腺癌細胞MCF-7,人肝癌 細胞H印G2、人胃癌細胞SGC-7901和人肺癌細胞A549有較強的增殖抑制作用，IC5tl分別為 26. 47、21. 94、20. 54和22. 95 μ g/L，紫萼玉簪花總皂苷具有抗腫瘤活性。
[0015] 采用紫外分光光度法，通過與Vc對比，評價紫萼玉簪花總皂苷對羥基自由基體系 和DPPH自由基體系的體外抗氧化活性。實驗結果表明，紫萼玉簪花總皂苷具有清除羥基自 由基和DPPH自由基的能力，且清除能力與樣液濃度呈量效關系，其IC5tl分別為4. 67mg/mL， 0. 09mg/mL?？寡趸饔门c紫萼玉簪花總皂苷含量呈正相關，紫萼玉簪花總皂苷具有抗氧化 活性。
[0016] 本發(fā)明的方法簡單，操作方便。
[0017] 本發(fā)明紫玉簪花的總皂苷可以制成片劑、沖劑、膠囊劑等口服制劑用于癌癥治療。 此外，作為天然來源的抗氧化劑也可用于保健食品和化妝品。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0018] 一：本實施方式中紫萼玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟進行 的：
[0019] 步驟一、取新鮮紫萼玉簪花，清洗后至于磨漿機中，按紫萼玉簪花與乙醇質量比為 1:10~15配比加入體積分數大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后 過濾或者離心，提取3次，合并乙醇提取液，濃縮得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后用 1~3倍的水飽和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0020] 步驟二、對AB8大孔樹脂進行預處理，然后裝入樹脂柱，步驟一得到的正丁醇萃取 物用熱水分散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應呈陰性，再用體積分數為 30 %乙醇洗脫除雜；然后用體積分數為70 %的乙醇溶液作為洗脫液進行洗脫處理，洗脫液 的用量為6~8倍樹脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干， 即得到紫萼玉簪花總皂苷。
[0021] 對AB8大孔樹脂進行預處理（取大孔樹脂適量，加入5倍量乙醇浸泡24h，充分溶 脹。裝柱后用蒸餾水沖洗至無白色渾濁現象為止。5%HCL沖至流出液PH為3,靜置2h，蒸 餾水洗至中性，再用5% NaOH沖至流出液PH為9,靜置2h，蒸餾水洗至中性，備用。）
[0022] 采用下述實驗驗證發(fā)明效果
[0023] 對比例1 :取30g新鮮紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C體積分 數等于80%的乙醇中浸提50min，過濾，濃縮乙醇，得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后 用1~3倍的水飽和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0024] 對比例2 :取30g新鮮紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C體積分 數等于80 %的乙醇超聲提取50min，過濾，濃縮乙醇，得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液 后用1~3倍的水飽和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0025] 表1不同提取方法對正丁醇萃取物得率和皂苷純度的影響
[0026]
【主權項】
1. 紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于紫玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟 進tx的： 步驟一、取新鮮紫玉簪花，清洗后至于磨漿機中，按紫玉簪花與乙醇質量比為1:5~10 配比加入體積分數大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后過濾或者離 心，提取3次，合并乙醇提取液，揮去乙醇，濃縮，得到浸膏； 步驟二、AB8大孔樹脂進行預處理，然后裝入樹脂柱，步驟一得到的乙醇浸膏用熱水分 散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應呈陰性，再用體積分數為20%乙醇洗脫 除雜；然后用體積分數為50%~70%的乙醇溶液作為洗脫液進行洗脫處理，洗脫液的用量 為6倍樹脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干，即得到紫玉 簪花總皂苷。
2. 根據權利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于步驟二中熱水的溫 度為（70~80) °C。
3. 根據權利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于用HPD826大孔樹脂 或NKA-9大孔樹脂替換步驟二所述的AB8大孔樹脂。
4. 根據權利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于步驟二中用體積分 數為70 %的乙醇溶液作為洗脫液。
5. 紫玉簪花總皂苷在制備抗腫瘤藥物及作為天然來源的抗氧化劑在保健食品和化妝 品中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了紫玉簪花總皂苷的制備方法和應用，本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域。本發(fā)明要解決現有提取紫玉簪總皂苷方法存在得量較少且皂苷的純度不高的技術問題。本發(fā)明的方法如下：一、取新鮮紫玉簪花，清洗后至于磨漿機中，加入乙醇，升溫至50℃研磨，再過濾或者離心，揮去乙醇，濃縮，得到浸膏；二、對AB8大孔樹脂預處理，裝入樹脂柱，上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應呈陰性，再用20％乙醇洗脫除雜，用50％～70％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干。本發(fā)明中紫玉簪花總皂苷在制備抗腫瘤藥物及作為天然來源的抗氧化劑在保健食品和化妝品中的應用。本發(fā)明紫玉簪花的總皂苷純度高，在60％以上。
【IPC分類】A61P35-00, A61K36-896, A61K8-97, A23L1-30, A61Q19-08, A61P39-06
【公開號】CN104857245
【申請?zhí)枴緾N201510296765
【發(fā)明人】鄒翔, 曲中原
【申請人】哈爾濱商業(yè)大學
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年6月3日