甘草查爾酮a在制備防治肺纖維化藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及甘草查爾酮A的一種新用途，具體涉及甘草 查爾酮A在防治肺纖維化藥物中的應(yīng)用及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF)是以彌漫性的肺泡炎、肺間質(zhì)炎癥和間質(zhì) 纖維化為組織學(xué)特點(diǎn)的一組疾病群，涵蓋多種疾病，多數(shù)疾病缺乏有效的治療手段，預(yù)后極 差。因此，肺纖維化目前引起世界呼吸病學(xué)界的重視。目前，對(duì)肺纖維化的臨床研宄主要集 中在特發(fā)性間質(zhì)肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)方面，因其進(jìn)展快、死亡 率高被世界衛(wèi)生組織（WHO)列為疑難疾病，也是遍及全世界的疾病。
[0003] 肺纖維化的病理特點(diǎn)主要是長(zhǎng)期肺部炎癥肺泡持續(xù)性損傷，肺內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞增生及 細(xì)胞外基質(zhì)的大量沉積和廣泛的肺實(shí)質(zhì)重建。各種因素?fù)p傷肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞 后，均可引起肺泡巨噬細(xì)胞。中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥細(xì)胞及其釋放的 細(xì)胞因子介導(dǎo)了早期的肺損傷，損傷的存在和反復(fù)而改變肺組織微環(huán)境，特別是肺泡腔，從 而導(dǎo)致修復(fù)程序的失調(diào)，最終形成肺纖維化。
[0004] 甘草查爾酮A (licochalcone A)是從甘草屬植物（Glycyrrhiza)中分離純化的黃 酮類化合物。國(guó)內(nèi)外資料顯示，甘草查爾酮A有抗炎、抗癌、抗腫瘤、抑菌、體內(nèi)代謝和抗瘧 抗寄生蟲(chóng)等方面的作用，并未見(jiàn)抗肺纖維化相關(guān)的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是介紹甘草查爾酮A的一種新用途，具體涉及甘草查爾酮A在防治 肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
[0006] 甘草查爾酮A在制備防治肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
[0007] 進(jìn)一步的，所述藥物為預(yù)防和治療肺纖維化的藥物。
[0008] 進(jìn)一步的，所述藥物以甘草查爾酮A為活性成分，單獨(dú)或加入一種或多種藥用輔 料制備而成。
[0009] 進(jìn)一步的，所述藥物劑型為口服制劑、注射劑、氣霧劑或粉霧劑。
[0010] 進(jìn)一步的，所述口服制劑為膠囊劑、片劑或口服液劑型。
[0011] 進(jìn)一步的，所述氣霧劑是由甘草查爾酮A、助溶劑、表面活性劑和拋射劑組成。
[0012] 進(jìn)一步的，所述粉霧劑是由甘草查爾酮A、生物粘附劑、表面活性劑和稀釋劑組成。
[0013] 由于本發(fā)明首次公開(kāi)了甘草查爾酮A在抗肺纖維化方面的作用，以及在防治肺纖 維化方面的應(yīng)用，因此，將甘草查爾酮A單獨(dú)或與其他活性成分或藥用輔料制成的制劑，只 要該制劑用于防治肺纖維化，無(wú)論以任何給藥方式，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0014] 本發(fā)明的另一目的是公開(kāi)了甘草查爾酮A用于防治肺纖維化藥物劑型的制備方 法。
[0015] 甘草查爾酮A氣霧劑的制備是將甘草查爾酮A、助溶劑和/或表面活性劑溶解后， 經(jīng)兩步灌裝法或冷灌法制備而成。
[0016] 甘草查爾酮A粉霧劑的制備方法包括如下步驟：
[0017] 1)將甘草查爾酮A與各輔料分別粉碎后，過(guò)篩，備用。
[0018] 2)采用噴霧干燥技術(shù)、或冷凍干燥技術(shù)、或真空干燥技術(shù)，使甘草查爾酮A與具有 生物粘附性的材料形成附聚物，選取符合粒徑要求的附聚物，定量分裝于膠囊內(nèi)或泡囊內(nèi)， 即得本發(fā)明的制劑。
[0019] 甘草查爾酮A有很強(qiáng)的抗肺纖維化在作用，將甘草查爾酮A開(kāi)發(fā)為抗肺纖維化的 藥品具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益，藥效學(xué)試驗(yàn)證明甘草查爾酮A能明顯改善肺纖維化 動(dòng)物肺組織相關(guān)生化指標(biāo)及病理學(xué)的改變，從而為甘草查爾酮A防治肺纖維化提供實(shí)驗(yàn)依 據(jù)。本發(fā)明所述藥物可制成口服制劑、注射液、氣霧劑或粉霧劑。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為甘草查爾酮A 口服給藥對(duì)肺纖維化小鼠肺組織病理結(jié)構(gòu)改變的影響（HE， 100X)，control 為空白對(duì)照組，Model 為模型組，LA 10mg/kg 為口服 LA 10mg/kg 組。
[0021] 圖2為甘草查爾酮A 口服給藥對(duì)肺纖維化小鼠肺組織膠原沉積的影響（Masson， 100X)，control 為空白對(duì)照組，Model 為模型組，LA 10mg/kg 為口服 LA 10mg/kg 組。
[0022] 圖3為甘草查爾酮A氣霧劑對(duì)肺纖維化小鼠肺組織病理結(jié)構(gòu)改變的影響（HE， 100X)，control為空白對(duì)照組，Model為模型組，LA 5min為吸入LA 5min組。
[0023] 圖4為甘草查爾酮A氣霧劑對(duì)肺纖維化小鼠肺組織膠原沉積的影響（Masson， 100X)，control為空白對(duì)照組，Model為模型組，LA 5min為吸入LA 5min組。
[0024] 圖5為甘草查爾酮A粉霧劑對(duì)肺纖維化小鼠肺組織病理結(jié)構(gòu)改變的影響（HE， 100X)，control為空白對(duì)照組，Model為模型組，LA powder為吸入LA粉霧劑組。
[0025] 圖6為甘草查爾酮A粉霧劑對(duì)肺纖維化小鼠肺組織膠原沉積的影響（Masson， 100X)，control為空白對(duì)照組，Model為模型組，LA powder為吸入LA粉霧劑組。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 本發(fā)明結(jié)合【附圖說(shuō)明】和實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明，但并不限制本發(fā)明的范圍。
[0027] 下列實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。以下實(shí)施例中所需要的材 料或試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明均為市場(chǎng)購(gòu)得。
[0028] 實(shí)施例1甘草查爾酮A對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化的作用
[0029] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：
[0030] ICR小鼠，30只，雌性，購(gòu)于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證編號(hào)：0012209,許可 證號(hào)碼SCXK (浙）2014-0001。購(gòu)入后飼養(yǎng)于浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心IVC系統(tǒng)，溫度：20~ 26°C，濕度40~70% ;自由攝食飲水。
[0031] 2.主要實(shí)驗(yàn)儀器：
[0032] Mettler Toledo AG245 天平；FLUK0/F6 高速勻漿機(jī)；Bio-Rad 熒光定量 PCR 儀； Olympus BX51 顯微鏡；Eppendorf Centrifuge 5804R 離心機(jī)；Leica 切片機(jī)包埋機(jī)。
[0033] 3.主要試劑：
[0034] (1)注射用鹽酸博萊霉素：15mg/瓶，批號(hào)140372,日本化藥株式會(huì)社。
[0035] (2)SYBR Green、01igo d(T)、反轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑均購(gòu)于北京康為試劑生物有 限公司。
[0036] (3)引物：由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
[0037] 4.建立小鼠特發(fā)性肺纖維化模型：
[0038] 乙醚麻醉小鼠，仰臥位，切開(kāi)頸部皮膚，分離氣管，用微量進(jìn)樣器向氣管內(nèi)噴入 3mg/kg的博萊霉素（給藥體積為ΙΟμΙ/lOg體重）；縫合皮膚，消毒?？瞻捉M氣道內(nèi)噴入相 同容積的生理鹽水。
[0039] 5.分組給藥：
[0040] 小鼠分3組，每組10只，分別為：空白組、模型組和甘草查爾酮A (LA) 10mg/kg組。 各組小鼠于造模后第二天開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)21天，模型組和空白對(duì)照組給予生 理鹽水。
[0041] 6.檢測(cè)指標(biāo)：
[0042] 末次給藥后24小時(shí)，處死小鼠，分離氣管，行氣管插管，結(jié)扎左肺上葉，行肺泡灌 洗，收集灌洗液（BALF)做白細(xì)胞計(jì)數(shù)，1500rpm/min離心10min，沉淀用于涂片做分類計(jì)數(shù)。 左肺上葉上半部分液氮速凍后保存于-80度冰箱用于測(cè)定細(xì)胞因子，下半部分福爾馬林溶 液中固定，石賭包埋、切片，做H&E染色和Masson' s染色，采用Image Pro軟件分析膠原光 密度值，做半定量分析。
[0043] 7.結(jié)果
[0044] (1)甘草查爾酮A對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠肺泡灌洗液中炎癥的影響
[0045] 小鼠氣道滴入3mg/kg博萊霉素，21天后肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞。 淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞明顯上升（P〈〇.〇〇l) ;LA 10mg/kg組能明顯抑制肺泡灌洗液中的中性 粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P〈〇. 05~0. 001)。見(jiàn)表1。
[0046] 表1.甘草查爾酮A對(duì)肺纖維化小鼠 BALF中炎癥細(xì)胞的影響
[0047]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 甘草查爾酮A在制備防治肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)1所述應(yīng)用，其特征在于：所述藥物為預(yù)防和治療肺纖維化的藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)1所述應(yīng)用，其特征在于：所述藥物以甘草查爾酮A為活性成分，單 獨(dú)或加入一種或多種藥用輔料制備而成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)1或3所述應(yīng)用，其特征在于：所述藥物劑型為口服制劑、注射劑、 氣霧劑或粉霧劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)4所述應(yīng)用，其特征在于：所述口服制劑為膠囊劑、片劑或口服液劑 型。
6. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)4所述應(yīng)用，其特征在于：所述氣霧劑是由甘草查爾酮A、助溶劑、表 面活性劑和拋射劑組成。
7. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)6所述應(yīng)用，其特征在于：所述氣霧劑是通過(guò)將甘草查爾酮A、助溶 劑和/或表面活性劑溶解后，經(jīng)兩步灌裝法或冷灌法制備而成。
8. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)4所述甘草查爾酮A的應(yīng)用，其特征在于：所述粉霧劑是由甘草查 爾酮A、生物粘附劑、表面活性劑和稀釋劑組成。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述甘草查爾酮A的應(yīng)用，其特征在于：所述粉霧劑的組分及配比 如下： 組分 重量 甘草查爾酮A Ig 乳糖 24.8g 甘露糖 5g β-環(huán)糊精 3g 聚山梨酯80 O.lg 羥丙基纖維素 2g。
10. 根據(jù)權(quán)利要求書(shū)8所述應(yīng)用，其特征在于：所述粉霧劑的制備方法，包括如下步 驟： 1) 將甘草查爾酮A與各輔料分別粉碎后，過(guò)篩，備用。 2) 采用噴霧干燥技術(shù)、或冷凍干燥技術(shù)、或真空干燥技術(shù)，使甘草查爾酮A與具有生物 粘附性的材料形成附聚物，選取符合粒徑要求的附聚物，定量分裝于膠囊內(nèi)或泡囊內(nèi)，即得 本發(fā)明的復(fù)方制劑。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及甘草查爾酮A的一種新用途，具體涉及甘草查爾酮A在防治肺纖維化藥物中的應(yīng)用及其制備方法，藥效學(xué)試驗(yàn)證明甘草查爾酮A能明顯改善肺纖維化動(dòng)物肺組織相關(guān)生化指標(biāo)及病理學(xué)的改變，從而為甘草查爾酮A防治肺纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本發(fā)明所述藥物可制成口服制劑、注射液、氣霧劑或粉霧劑。甘草查爾酮A有很強(qiáng)的抗肺纖維化在作用，將甘草查爾酮A開(kāi)發(fā)為抗肺纖維化的藥品具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
【IPC分類】A61P11-00, A61K31-12, A61K9-72
【公開(kāi)號(hào)】CN104873481
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510268709
【發(fā)明人】謝詒誠(chéng), 李曙民
【申請(qǐng)人】杭州紫金醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日