的新用圖
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體涉及多陰金屬氧酸鹽化合物的新用途。
【背景技術】
[0002]蛇毒是毒蛇從毒腺中分泌出來的一種液體，主要成份是毒性蛋白質，約占干重的90%至95%。酶類和毒素約含二十多種。此外，還含有一些小分子肽、氨基酸、碳水化合物、脂類、核苷、生物胺類及金屬離子等。蛇毒成分十分復雜，不同蛇毒的毒性、藥理及毒理作用各具特點。
[0003]毒蛇咬傷具有發(fā)病急、變化快、并發(fā)癥多、治療復雜、致殘、致死率高等特點，處理不及時或處理方法不當，往往造成不良后果，輕者致殘，重者喪失生命，在世界很多地區(qū)都是公眾醫(yī)療的重要威脅。據不完全統(tǒng)計，全世界每年有250萬人被毒蛇咬傷，近12.5萬人因毒蛇咬傷致死，實際數(shù)字可能更為驚人。而且近些年由于人們對環(huán)境保護意識的增強所實行的退耕還林、動物保護及人工蛇類養(yǎng)殖的增加，蛇傷病人的人數(shù)也呈逐年上升趨勢。同時大多數(shù)受害者是居住在與偏遠村莊居民和兒童，他們的殘疾對自身家庭生活及當?shù)亟洕绊憳O大，在我國西南地區(qū)的此類情況尤為嚴重。
[0004]被毒蛇咬傷如果處理不及時會使傷情嚴重惡化并導致死亡率大大增加。雖然抗蛇毒血清可以有效的中和相應的蛇毒，但在實際應用中存在諸多問題:首先毒血清專一性強，用藥前必須鑒定蛇種，而且咬傷后立即用藥才能取得最佳療效，然而由于其價格昂貴且不易長時間保存，即使在發(fā)達地區(qū)及時的拿到可用的抗蛇毒血清也并非易事，在交通不便的山區(qū)就更為困難；此外抗毒血清易發(fā)生過敏，一些臨床家強調不要把抗毒血清作為蛇傷的常規(guī)用藥，要在出現(xiàn)明顯全身中毒癥狀時才用。因此開發(fā)價格低廉、性質穩(wěn)定的可作為血清輔助制劑的新型抗蛇毒藥物就顯得尤為重要。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3_的新用途。
[0006]本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3_在制備抗蛇毒出血毒藥物中的應用。
[0007]本發(fā)明所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24F可以很好的中和圓斑蝰蛇而且與非血清類抗蛇毒制劑相比具有副作用小、穩(wěn)定性高，應用范圍廣、易于進一步修飾等特點，不僅可以為多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3-的應用開辟全新的領域，更為抗蛇毒制劑的研發(fā)提供了新的思路，具有重要的科學意義和廣泛的應用前景。
【附圖說明】
[0008]圖1為本發(fā)明多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3_中和蛇毒出血毒結果比較示意圖；
其中:A為空白對照出為[Mo6O24]%C為[AlMo AO24]3-; 圖2為本發(fā)明多陰金屬氧酸鹽化合物[頂O6O2J5IP [AlMo 6H6024]3沖和蛇毒出血毒結果顯微鏡觀察不意圖；
其中:a 為[頂O6O24] %b 為[AlMo 6H6024]%
圖3為本發(fā)明Anderson陰離子對接至金屬蛋白酶2E3X活性口袋。
【具體實施方式】
[0009]下面結合實施例和附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0010]本發(fā)明所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24F的新用途為所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24] P在制備抗蛇毒出血毒藥物中的應用。
[0011]所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[Α1Μο6Η6024]3_在制備抑制蛇毒蛋白酶藥物中的應用。
[0012]所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O2JP在制備抗圓斑蝰蛇蛇毒出血毒藥物中的應用。
[0013]多陰金屬氧酸鹽(簡稱:多酸；英文名稱:polyoxometalates, POMs )是一類金屬氧化物具有多樣的結構和富氧親核的性質，可以作為優(yōu)秀的無機多齒配體配體通過配位和螯合等方式與金屬離子結合，更為重要是多酸作為一類獨特的無機化合物，其組成及其豐富，周期表中的絕大多數(shù)元素都可參與多酸化合物的合成，于此同時每一種影響多酸對生物靶物分子識別與作用的性質如:分子尺寸、極性、氧化還原性、表面電荷分布形狀、酸堿性等性質都可以根據具體應用的需要進一步的進行調控。
[0014]本發(fā)明在試驗中發(fā)現(xiàn)，多酸化合物不僅具有和EDTA相同的中和蛇毒抑制局部出血的作用，同時其應用范圍可能更廣，試驗中多酸對圓斑蝰蛇蛇毒表現(xiàn)出了較好的抑制效果；其次多酸化合物的副作用小在濃度下相同的情況下與EDTA相比，多酸組試驗小鼠疼痛抽搐現(xiàn)象減輕。
[0015]實施例1
一、抗蛇毒出血毒效果的研宄:
1、蛇毒
以滅菌注射用水配制蛇毒母液，蛇毒凍干品按100mg/ml稀釋，搖動易起泡沫，可聞腥味，符合蛇毒特征后小白鼠皮下注射給藥，確定不同批次和種類蛇毒的100%致死量，備用。
[0016]2、體外中和實驗
體外中和體內注射比較不同多酸化合物對蛇毒出血、組織壞死和致死率的抑制情況。按小鼠體重配制不同最小致死量倍數(shù)的蛇毒溶液，一般用5mM~20mM多酸化合物共同孵育30min，之后背部皮下或肌肉每組注射6只體重18~25g小鼠，3只一小時后斷頸處死解剖比較出血面積及組織壞死情況，剩余3只繼續(xù)觀察疼痛反應、呼吸、死亡率等。
[0017]3、體內中和實驗
相同部位先后注射比較不同多酸化合物對蛇毒出血、組織壞死和致死率的抑制情況。按小鼠體重配制不同最小致死量倍數(shù)的蛇毒溶液，每射6只體重18~25g小鼠背部皮下或肌肉組注，之后，相同部位再注射5mM~20mM多酸化合物，3只一小時后斷頸處死解剖比較出血面積及組織壞死情況，剩余3只繼續(xù)觀察疼痛反應、呼吸、死亡率等。
[0018]4、組織切片照片
小鼠處死后取下肌肉、皮膚組織，固定、切片并行HE染色后觀察肌肉組織細胞壞死情況。
[0019]5、總結多酸化合物各項中和抗蛇毒試驗數(shù)據，分析不同理化性質與抗蛇毒出血毒活性之間的關系、并結合量化計算，分子模擬等手段形成多酸抗出血毒的理論體系。
[0020]二、多陰金屬氧酸鹽化合物抗蛇毒的部分結果:
本發(fā)明對常見的Keggin，Dawson，Anderson多酸結構進行了篩選，包括[PW12O4J3'[PMo12O40]3' [SiW12O40]4' [CeMo12O40]4' [AsMo12O40]3' [SiW12O40]4' [BW12O40]5' [W12O40]6' [SiW11O39]8' [PW9O34]9' [SiW9O34]1' a-[P具8062]6—，-[P2W18O62]6' [Si2W18O62]8' [As2W18O62]6'[P2W15O56]' [Mo6O24]5' [AlMo6H6O24]3-, [FeMo6H6O24] 3^, [CoMo6H6O24]^, [NiMo6H6O24]3; [CrMO6H6O24] 3_等結果表明[AlMo 6H6024 ] 3_抗圓斑蜂蛇蛇毒效果最好。。
[0021]背部出血面積試驗表明(見附圖1)，濃度為5mM[AlMo6H6O24]3_卻可以有效的中和3個LD5tl圓斑蝰蛇蛇毒(1.8mg/kg，小鼠體重20~25g)，觀察不到明顯的出血點，小鼠保護率達到100% ;而濃度為相同的[Mo6O24]5_起不到保護作用，死亡率100% ;說明即使結構相同(同屬Anderson型POMs)，對蛇毒出血毒的中和作用也有很大區(qū)別。
[0022]顯微鏡下可見[Mo6O24] &中對圓斑蝰蛇蛇毒起不到保護作用，細胞溶解明顯溶解后存在大量細胞核殘留；而[Α1Μο6Η6024]3_中和圓斑蝰蛇蛇毒后在未見肌肉組織細胞壞死，說明[AlMo6H6O2J3I小鼠起到了很好的保護作用(見附圖2)。
[0023]同時我們從分子水平對其作用機制進行了初步探索，將Anderson多陰離子與具有凝血作用的SVMPs的的活性口袋進行對接，蛇毒金屬蛋白酶的三維結構I3DB ID:2E3X(P-1 ) SVMP (見附圖 3)。
[0024]結果表明Anderson型多陰離子可以與2E3X的活性口袋很好的匹配，并且通過強的H鍵作用與活性位點的殘基結合。同時Anderson型多陰離子可以通兩個端基氧和一個橋基氧原子與Zn離子螯合其中Zn-O距離分別為2.4、2.6和2.8A。Anderson多陰離子能與金屬蛋白酶的活性口袋很好的匹配，并且與氨基酸殘基Leu73、Vall72、Prol71、Asnl09、LeullUGlylll和Ilell3通過范德華力相互作用。其中，Leul73能與Anderson的氧原子形成雙重氫鍵作用。更為重要的是，Anderson分子中的3個氧原子與三個組氨酸殘基His 145、Hisl55和Hisl49將鋅離子通過強力螯合，使得化合物Anderson與金屬蛋白酶形成穩(wěn)定的復合物，從而導致金屬蛋白酶失活。
[0025]同時，本發(fā)明人同步做了如下試驗:
實驗過程
1.1蛇毒溶液的配制
準確稱取蝰蛇毒凍干品，溶于生理鹽水中，混合均勻后分裝在Iml的容器中密封后立即保存在冰塊中，以備在之后實驗中稀釋取用。
[0026]1.2多酸溶液的配制
分別準確稱取不同類型的多酸固體，分別溶于PBS，Tris和生理鹽水中溶液中，震蕩混勻，保存?zhèn)溆谩?br>[0027]1.3最佳多酸化合物溶液的篩選
將20mg/ml的多酸溶液分別與不同濃度的蝰蛇毒等體積混合，在37°C的條件下共孵育30分鐘。每4只小鼠為一個實驗組，給小鼠背部皮內注射藥物。
[0028]一小時后，將小鼠斷頸處死后進行解剖，觀察并測量小鼠的出血面積，與對照組進行對照。結果表明不同純無機多陰離子化合物分別溶解于PBS，Tris和生理鹽水的情況下，其中[AlMo6H6O2Jh溶解于PBS中對圓斑蝰蛇出血毒的抑制作用效果最佳。
【主權項】
1.一種多陰金屬氧酸鹽化合物[ΑΙΜΟ 6H6024]3-的新用途，其特征在于所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24] P在制備抗蛇毒出血毒藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3^新用途，其特征在于所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[Α1Μο6Η6024Γ在制備抑制蛇毒蛋白酶藥物中的應用。3.根據權利要求1所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6Η6024 ]3-的新用途，其特征在于所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[Α1Μο6Η6024]3_在制備抗圓斑蝰蛇蛇毒出血毒藥物中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3-的新用途，是所述的多陰金屬氧酸鹽化合物[AlMo6H6O24]3-在制備抗蛇毒出血毒藥物中的應用。本發(fā)明所述的多陰金屬氧酸鹽化合物 [AlMo6H6O24]3-可以很好的中和圓斑蝰蛇蛇毒而且與非血清類抗蛇毒制劑相比具有副作用小、穩(wěn)定性高，應用范圍廣、易于進一步修飾等特點，不僅可以為多陰金屬氧酸鹽化合物應用開辟全新的領域，更為抗蛇毒制劑的研發(fā)提供了新的思路，具有重要的科學意義和廣泛的應用前景。
【IPC分類】A61P7/04, A61P39/02, A61K33/24
【公開號】CN104922149
【申請?zhí)枴緾N201510343206
【發(fā)明人】吳瓊, 王海, 句紅萍, 王曉燕, 喬振芳, 李立成, 張偉
【申請人】昆明學院
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年6月19日