一種從老熟期蓮子殼中提取多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于從植物中提取功能成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種從老熟期蓮子殼中提取多酚的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蓮子殼即蓮的果皮，其硬度隨著成熟度的增加而逐漸加強(qiáng)。老熟期蓮子殼為已完全成熟的蓮子殼，其顏色為黑褐色，質(zhì)地堅(jiān)硬，已有研究發(fā)現(xiàn)老熟期蓮子殼中含有活性較高的多酚物質(zhì)。多酚具有清除多種活性氧自由基的能力，因此具有較強(qiáng)的抗氧化活性，除此之夕卜，大量還研究表明多酚具有顯著的抑菌、抗癌、抗炎癥、抗輻射、解毒等作用，并廣泛的應(yīng)用于食品、制藥、生物化學(xué)、日用化工等領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景，其中茶多酚已被我國正式列為食品添加劑，在食品抗氧化、抑菌等方面發(fā)揮著重要作用。
[0003]老熟期蓮子殼產(chǎn)量大，來源廣泛，但目前對(duì)其應(yīng)用較少，主要用于食用菌栽培或燃燒后用作肥料，其利用用途不廣、利用價(jià)值不高。目前關(guān)于蓮子殼多酚的研究主要集中在新鮮蓮子殼上，研究對(duì)象多為黃酮類物質(zhì)。何合高等(何合高等.生化法提取蓮子殼中單寧和黃酮類物質(zhì)的制備工藝，中國發(fā)明專利公開號(hào)CN103585278A文獻(xiàn))將蓮子殼粉與生化反應(yīng)劑在30°C下反應(yīng)后用超聲波裝置萃取處理、加熱浸取一定時(shí)間后趁熱過濾，收集濾液，再采用膜化分離裝置收集單寧濾液和黃酮類物質(zhì)濾液，最后通過減壓蒸餾濃縮、噴霧干燥或冷凍干燥得到蓮子殼單寧、黃酮類物質(zhì)產(chǎn)品。目前尚未有以老熟期蓮子殼為原料提取多酚的文章或?qū)＠l(fā)表。研究老熟期蓮子殼多酚的產(chǎn)生工藝，不僅可以避免大量蓮子殼的浪費(fèi)，做到變廢為寶，還可以給多酚生產(chǎn)提供一種新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的旨在提供一種以老熟期蓮子殼為原料生產(chǎn)多酚的生產(chǎn)工藝，利用乙醇-水溶劑體系對(duì)老熟期蓮子殼進(jìn)行熱浸提，再經(jīng)AB-8大孔樹脂分離純化得到多酚純化物。本發(fā)明的目的還在于提高老熟期蓮子殼的利用率和利用價(jià)值，減少資源浪費(fèi)。
[0005]本發(fā)明提供的技術(shù)方案是:將干燥老熟期蓮子殼進(jìn)行機(jī)械粉碎后過篩得到蓮子殼粉，取一定量蓮子殼粉加入乙醇-水溶劑進(jìn)行水浴加熱提取，將多酚溶液進(jìn)行旋蒸蒸發(fā)濃縮，再經(jīng)真空冷凍干燥得到多酚粗提物。取一定量粗提物用水溶解后置于AB-8大孔樹脂柱中進(jìn)行進(jìn)一步純化，經(jīng)濃縮、冷凍干燥后得到多酚純化物。
[0006]具體步驟是:1.利用高速粉碎機(jī)將干燥的老熟期蓮子殼進(jìn)行粉碎，過100目篩，得到粒徑均勻的蓮子殼粉。
[0007]2.所述的乙醇-水熱浸提方法中，乙醇-水溶劑中乙醇體積分?jǐn)?shù)為40 %，水浴提取溫度為50°C，水浴提取時(shí)間為60min，蓮子殼與乙醇-水溶劑的質(zhì)量體積比為1: 30，同一原料提取次數(shù)為2次。
[0008]3.采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮的方法將多酚溶液進(jìn)行濃縮得到1mL左右的濃縮液。
[0009]4.多酚樣品干燥方式為:真空冷凍干燥。
[0010]5.AB-8樹脂分離純化條件為:上樣濃度5.0mg/mL,上樣速度0.6mL/min, 55%乙醇為洗脫劑，洗脫流速為1.5mL/min，洗脫劑體積為5BV。
[0011]采用上述方法制備的多酚樣品具有良好的還原力、清除DPPH及ABTS+自由基的能力。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0012](I)老熟期蓮子殼來源廣泛，價(jià)格便宜，成本低，是一種很好的多酚提取原料。
[0013](2)所述方法提取多酚方法簡單、快速、產(chǎn)量高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0014](3)活性評(píng)價(jià)證明該方法生產(chǎn)的多酚純化物具有良好的還原力、清除DPPH自由基及ABTS+自由基的能力。
【附圖說明】
[0015]圖1:熟期蓮子殼多酚與Vc的還原力對(duì)比。
[0016]圖2:老熟期蓮子殼多酚與Vc清除DPPH自由基的能力對(duì)比。
[0017]圖3:老熟期蓮子殼多酚與Vc清除ABTS+自由基的能力對(duì)比。
具體實(shí)施方案
[0018]實(shí)施案例一:
[0019]老熟期蓮子殼多酚的提取
[0020]將干燥蓮子殼置于高速粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過100目篩得到粒徑均一的蓮子殼粉。稱取20g蓮子殼粉置于100mL圓底燒瓶中，以1: 30的比例加入600mL乙醇-水溶液(乙醇體積分?jǐn)?shù)為20% )，混合均勻后，在水浴溫度為50°C的條件下加熱60min，得到多酚溶液。將所得的多酚溶液進(jìn)行真空抽濾，再將該蓮子殼粉在相同條件下重復(fù)提取I次。
[0021]實(shí)施案例二:
[0022]多酚的分離純化
[0023]1.AB-8大孔樹脂的活化
[0024]AB-8大孔樹脂先用95%的乙醇在室溫下浸泡12h，蒸餾水多次沖洗至無醇味并無白色渾濁，然后加入5% NaOH溶液浸泡3h，蒸餾水洗至中性，再用2% HCl溶液浸泡3h，蒸餾水洗至中性，共進(jìn)行三次酸堿處理，最后將處理好的AB-8樹脂進(jìn)行濕法裝柱。
[0025]2.多酚樣品過柱分離純化
[0026]以水為溶劑配制濃度為5.0mg/mL多酚粗提物溶液，用滴管沿壁緩緩滴入柱中，上樣速度為0.6mL/min，待多酚樣液與柱材料平齊后吸附45min，再用蒸餾水進(jìn)行沖洗，直至糖分檢測不到。然后用55%乙醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為1.5mL/min，洗脫劑體積為5BV，得到純化后的多酚溶液。
[0027]實(shí)施案例三:
[0028]多酚提取物的干燥方式
[0029]將多酚溶液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，蒸發(fā)溫度為35°C，濃縮至1mL左右后，經(jīng)真空冷凍干燥得到多酚樣品。
[0030]實(shí)施案例四:
[0031]多酚純化物的純度測定及抗氧化活性鑒定
[0032]1.Folin-C1calteus法測定多酹純化物的純度
[0033]準(zhǔn)確稱取多酚純化物樣品0.0200g，用水溶解定容至250mL容量瓶中。取取ImL多酚溶液于比色管中，加入5mL蒸餾水，3mL7.5%的碳酸鈉溶液，ImL FC顯色劑(FC顯色劑在使用時(shí)用蒸餾水進(jìn)行1:1稀釋)，每組設(shè)置兩個(gè)平行，避光放置2小時(shí)，于765nm處測定吸光值，將A765代入方程y=0.0144x-0.0025 (R2=0.9990)得到多酚濃度，計(jì)算多酚純度。
[0034]多酚純度(％) =CX250X 1(Γ6/0.0200X 100%
[0035]多酚純化物得率(％ )=m/MX100%
[0036]式中，C為樣液中多酚濃度(μ g/mL)，m為冷凍干燥后所得多酚純化物樣品質(zhì)量(mg)，M為蓮子殼粉末質(zhì)量(mg)。
[0037]經(jīng)計(jì)算得到，多酚純化物的純度達(dá)60%，得率達(dá)1.2%。
[0038]2.多酚純化物還原力的測定
[0039]準(zhǔn)確稱取0.0lOOg多酚純化物粉末，蒸餾水溶解后定容至10mL,分別配制濃度為10 μ g/mL>20 μ g/mL>50 μ g/mL>80 μ g/mL、100 μ g/mL的多酹樣液,取不同濃度的樣液各ImL,依次加入 2.5mL0.2mol/L 的 PBS 緩沖液(ρΗ6.6)，2.5mLl % K3 [Fe (CN) 6]溶液于試管中，充分混勻后，50°C水浴鍋中反應(yīng)20min，流水速冷，加入2.5mL10% TCA，吸取2.5mL上清液，加入0.5mL0.1 % FeCl3和2.5mL蒸餾水，搖勻，測定A7(l(lnm。用蒸餾水調(diào)零，VC做陽性對(duì)照。
[0040]結(jié)果如圖1所示，結(jié)果顯示老熟期蓮子殼多酚的吸光值略低于陽性對(duì)照Vc，即還原力略低于Vc，但仍具有較好的還原力。
[0041]3.清除DPPH自由基能力的測定
[0042]用無水乙醇配制濃度分別為5 μ g/mL、10 μ g/mL>20 μ g/mL>50 μ g/mL、100 μ g/mL的蓮子殼多酚樣液，各取2mL于具塞比色管中，加入2mL0.2mmol/L DPPH.溶液，搖勻，室溫下避光反應(yīng)30min，測定反應(yīng)樣液在517nm處吸光值。
[0043]清除率(%) = [A0- (A1-Aj) ] /A0X 100%
[0044]式中，Atl (對(duì)照管):2mL DPPH.溶液+2mL無水乙醇A1 (測定管):2mL樣液+2mLDPPH.溶液；Α」(標(biāo)準(zhǔn)管):2mL樣液+2mL無水乙醇
[0045]結(jié)果如圖2所示，結(jié)果顯示老熟期蓮子殼多酚具有比Vc更強(qiáng)的清除DPPH自由基的能力。
[0046]4.清除ABTS+自由基能力的測定
[0047]用無水乙醇配制濃度分別為5 μ g/mL、10 μ g/mL>20 μ g/mL>50 μ g/mL、100 μ g/mL的蓮子殼多酚樣液，各取200 μ L于試管中，加入4mLABTS+.溶液，充分振搖30s，室溫下避光反應(yīng)6min,于734nm處測定反應(yīng)后樣液的吸光值。
[0048]清除率(%) = [A0- (A1-Aj) ] /A0X 100%
[0049]式中，Atl (對(duì)照管):200 μ L無水乙醇+4mLABTS+.溶液夂(測定管):200 μ L樣液+4mLABTS+.溶液；A」(標(biāo)準(zhǔn)管):200 μ L樣液+4mL無水乙醇
[0050]結(jié)果如圖3所示，結(jié)果表明老熟期蓮子殼多酚清除ABTS+自由基的能力強(qiáng)于Vc，因此，老熟期蓮子殼多酚均具有提供氫質(zhì)子和終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的能力。
[0051]綜上所述，本發(fā)明所得的多酚抗氧化性略優(yōu)于Vc。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從老熟期蓮子殼中提取多酚的方法，其特征在于:先將干燥的老熟期蓮子殼進(jìn)行粉碎并過篩，得到粒徑均勻的蓮子殼粉。采用乙醇-水熱浸提得到多酚粗提物，再經(jīng)進(jìn)一步分離純化得到多酚純化物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于:所述的老熟期蓮子殼粉碎后過100目篩，得到粒度均勻的蓮子殼粉，干燥保存?zhèn)溆谩?.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于:乙醇-水溶劑中乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%，水浴提取溫度為50°C，水浴提取時(shí)間為60min、蓮子殼與乙醇-水溶劑的質(zhì)量體積比為1: 30，同一原料提取次數(shù)為2次。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于:進(jìn)一步分離純化所用樹脂為AB-8大孔樹脂。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于:AB-8大孔樹脂分離純化條件為:上樣濃度5.0mg/mL,上樣速度0.6mL/min, 55%乙醇為洗脫劑,洗脫流速為1.5mL/min,洗脫劑體積為5BV。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于:多酚樣品干燥方式為將多酚溶液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，蒸發(fā)溫度為35°C，濃縮至1mL左右后，經(jīng)真空冷凍干燥得到多酚樣品O
【專利摘要】本發(fā)明屬于從植物中提取功能成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種從老熟期蓮子殼中提取多酚的生產(chǎn)方法。利用乙醇-水溶劑體系對(duì)老熟期蓮子殼進(jìn)行熱浸提，得到最優(yōu)提取條件，再經(jīng)AB-8大孔樹脂分離純化得到多酚純化物。本發(fā)明的目的在于提高老熟期蓮子殼的利用率和利用價(jià)值，減少資源浪費(fèi)。所述方法提取多酚方法簡單、快速、產(chǎn)量高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。用此方法所得多酚純化物的純度達(dá)60％，得率達(dá)1.2％，且具有良好的還原力、清除DPPH及ABTS+自由基的能力。
【IPC分類】A61K36/62, A61K131/00, A61P39/06
【公開號(hào)】CN104971097
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410130982
【發(fā)明人】黃文 , 陳中惠, 劉瑩, 王益
【申請(qǐng)人】華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2014年4月1日