一種治療燒燙傷的新型大黃素明膠微球與納米銀復合凝膠制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于治療燒燙傷的新型復合凝膠及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 燒燙傷是人們在日常生活中經常會遇到的創(chuàng)傷，如不及時處理，傷口處會形成淤 血、引起炎癥產生疼痛，傷口會被細菌感染加重傷情，甚至會危及生命。目前，抗生素治療是 西醫(yī)常用的方法，雖有一定的療效，但是創(chuàng)面收縮慢，長期用藥會產生耐藥性，使藥物失去 作用，甚至會使損傷肝腎等進而導致機體免疫功能降低。而中醫(yī)采用的外用膏藥在治療外 傷方面卻有著獨特的療效。市場上比較盛行的治療燒燙傷的膏藥有京萬紅軟膏、普濟燒傷 膏、冰王燒燙傷膏等，這些膏藥各有優(yōu)缺點。京萬紅價格便宜，治療燒燙傷效果較好，但是主 要用于治療輕度燒燙傷，對深度燒燙傷效果不佳；普濟燒傷膏治療燒傷效果良好，且能治療 深度大面積燒燙傷，但是價格昂貴；冰王燒燙傷膏價格便宜，主要用于輕度燒燙傷，且療效 較慢。
[0003] 大黃素具有抑菌抗炎、活血化瘀、去腐生肌等藥理作用。納米銀是新一代天然抗菌 材料，具有廣譜抗菌、滲透性強、修復再生、安全無毒、無耐藥性等藥理特點，且銀的效價高， 極少的納米銀即可產生強大的藥效，成本低。膠原蛋白是一種生物高分子蛋白質，具有良好 的纖維再成形性，易被人體吸收，能促進血小板凝結，促進細胞成活與生長，促進傷口愈合。 分子量在1000道爾頓以下的膠原蛋白無需分解可被人體直接吸收，是一種很好的醫(yī)學材 料。水性凝膠劑是近年來發(fā)展較快的劑型，具有美觀、使用舒適、生物利用高、穩(wěn)定性好、不 良反應少、不污染衣物等優(yōu)點。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明旨在開發(fā)一種療效好，生產成本低，且能治療各種燒燙傷的水性凝膠制劑。
[0005] 本發(fā)明為一種治療燒燙傷的新型復合凝膠，它是由下列重量比的成分制成的新型 復合凝膠：
[0006] 大黃素明膠微球43. 1份納米銀0. 2份 [0007]魚鱗膠原蛋白3. 4份卡波姆基底953. 3份
[0008] 所述治療燒燙傷的新型復合凝膠的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 第一步：從魚鱗中提取膠原蛋白，備用；
[0010] 第二步：制備大黃素明膠微球，備用；
[0011] 第三步：制備卡波姆基底，備用；
[0012] 第四步：取納米銀加蒸餾水超聲20min的納米銀混懸液，備用；
[0013] 第五步：將上述第一步的魚鱗膠原蛋白、第二步的大黃素明膠微球、第三步的卡波 姆基底和第四步的納米銀混懸液混合，攪拌均勻，制成新型復合凝膠。
[0014] 所述的方法中，大黃素、納米銀和魚鱗膠原蛋白三者之間不發(fā)生反應，將三者結合 制成新型復合凝膠，涂抹于常見的燒燙傷上，不僅能消腫抗炎，活血化瘀，修復再生，還能對 微生物引起的傷口感染起到良好的殺菌作用。 圖1是各組小鼠I. 5d時傷口組織的病理切片圖； 圖2是實驗組小鼠3d時傷口組織的病理切片圖； 圖3是對照組小鼠3d時傷口組織的病理切片圖； 圖4是空白組小鼠3d時傷口組織的病理切片圖； 圖5是實驗組小鼠9d時傷口組織的病理切片圖； 圖6是對照組小鼠9d時傷口組織的病理切片圖； 圖7是空白組小鼠9d時傷口組織的病理切片圖； 圖8是實驗組小鼠21d時傷口組織的病理切片圖； 圖9是對照組小鼠21d時傷口組織的病理切片圖； 圖10是空白組小鼠21d時傷口組織的病理切片圖； 圖11是各組小鼠傷口完全愈合后創(chuàng)傷部位的病理切片圖。 具體實施方案
[0015] 以下結合具體實施例，對本發(fā)明進行詳細說明。
[0016] 實施例1:治療燒燙傷的新型復合凝膠的制備方法包括以下步驟：
[0017] 第一步：從魚鱗中提取膠原蛋白：稱量魚鱗20g，加蒸餾水用磁力攪拌器攪拌 0. 5h，除去雜質，再用蒸餾水清洗干凈；晾干后加200mL 0. 6mol/L鹽酸溶液浸泡，用磁力攪 拌器攪拌5h ;用蒸餾水洗至無懸浮雜質，瞭干后加200mL 0. lmol/L鹽酸溶液、0. 8g胃蛋白 酶，置于冰箱保鮮室（溫度為4°C)放置酶解24h;將酶解后的魚鱗用紗布過濾，向濾液中 加入IOg氯化鈉，靜置6h ;將TGL-16高速離心機的轉速調至5000r/min，將上述濾液離心 20min，傾出上清液，取出離心管中類白色沉淀，即得魚鱗膠原蛋白。
[0018] 第二步：制備大黃素明膠微球：在50ml液體石蠟中加入0. 8g司盤80,預熱至 60°C，將磁力攪拌器的轉速調至400rpm，攪拌均勾；取20% (w/v)明膠溶液5ml，預熱至 60°C，加入上述液體石賭中，攪拌15min ;取0.1 g大黃素溶于5ml乙醇中，預熱至60°C，加入 上述混合液體中，攪拌15min，并迅速冷卻至5°C，離心制得大黃素明膠微球。
[0019] 第三步：制備卡波姆基底：取卡波姆0.5g、甘油40ml、三乙醇胺0.45ml、1 %苯甲酸 鈉水溶液2ml混合均勻，制得基底。
[0020] 第四步：取納米銀0. 06g，加蒸餾水12ml，水浴超聲20min，即得納米銀混懸液。
[0021] 第五步：將上述第一步中得到的魚鱗膠原蛋白lg、第二步中制得的大黃素明膠微 球12. 6g、第三步中制得的卡波姆基底278. 6g和第四步制得的納米銀混懸液混合，攪拌均 勻，再用磁力攪拌器攪拌lh，即制成新型復合凝膠。
[0022] 實施例2 :用制成的新型復合凝膠，進行小鼠實驗，考察其療效。具體實驗方法如 下：
[0023] 取24只昆明種小鼠，雄性，25g左右，均分為3組，編號為一、二、三組，每組8只。 采用持續(xù)麻醉的方法，用乙醚麻醉小鼠后，用專用剃毛器剃干凈小鼠背部的毛，使其皮膚裸 露。將小鼠置于俯臥位，四肢伸展，用夾子將其四肢固定在操作板上，使背部皮膚呈平坦狀， 以小鼠脊柱為中線，用從室溫加熱3min的小鐵塊（面積為IcmX Icm)燙傷小鼠肩胛骨后 方，左右對稱位置各燙一個傷口，用力適中，時間為5s。
[0024] 燙傷模型制成后，第一組小鼠左邊部分涂抹0.9%生理鹽水，右邊傷口涂抹新型復 合凝膠；第二組小鼠左邊涂抹新型復合凝膠，右邊涂抹京萬紅藥膏（藥店購買）；第三組小 鼠左邊涂抹京萬紅藥膏，右邊涂抹0.9%生理鹽水。每天一次，認真觀察小鼠。具體觀察指 標如下：
[0025] 1、大體觀察：觀察小鼠精神狀況、進食、睡眠以及活動情況。
[0026] 2、對各組小鼠皮膚感染創(chuàng)面進行仔細觀察，記錄創(chuàng)面顏色變化，有無膿性分泌物 滲出，是否出現(xiàn)潰瘍、流血、結痂等現(xiàn)象。
[0027] 3、將小鼠用乙醚迷暈后，用0.IcmXO. Icm標準透明計算方格紙覆蓋于傷口上，進 行創(chuàng)面愈合百分率的測定。
[0028] 愈合率=[(An_「An) /An_J X 100 %
[0029] 式中Alri=燙傷后第n-1天創(chuàng)面面積，An=術后第n天創(chuàng)面面積（開放創(chuàng)面）。
[0030] 計算結果見表一：
[0031] 表一
[0032]
[0033] 由表一結果可得新型復合凝膠的愈合率優(yōu)于京萬紅和生理鹽水。
[0034] 實施例3:分別于1. 5(1、3(1、9(1、21(1、完全愈合后各組取小鼠一只，取傷口組織，用 4%多聚甲醛固定，交由重慶醫(yī)科大學做成病理切片，進行觀察，觀察結果如下：
[0035] I. 5d:三組并無太大差別，炎細胞數(shù)量相差無幾。如圖1。
[0036] 3d:實驗組小鼠傷口組織炎細胞數(shù)量相對空白組和對照組較少，且有成纖維細胞 生成，如圖2;對照組小鼠傷口組織炎細胞數(shù)量最多，如圖3;空白組小鼠傷口組織炎細胞數(shù) 量非常多，如圖4。
[0037] 9d:實驗組炎細胞數(shù)量相對于空白組和對照組較少，成纖維細胞數(shù)量增多，且有毛 細血管生成，如圖5;對照組炎細胞數(shù)量非常多，有成纖維細胞生成，如圖6;空白組炎細胞 數(shù)量非常多，未見成纖維細胞生成，如圖7。
[0038] 21d:實驗組已長出肉芽組織，數(shù)量較多，如圖8 ;對照組肉芽組織數(shù)量較少，如圖 9 ;空白組肉芽組織數(shù)量較多，如圖10。
[0039] 完全愈合后：三組情況類似，皮膚組織層次鮮明，內部都仍可見少量炎細胞，如圖 Ilo
[0040] 實施例4 :在新型復合凝膠制成后5d、65d、130d后，對新型復合凝膠中的中藥成分 進行穩(wěn)定性考察，鑒定其是否變質。取新型復合凝膠5g，加入甲醇20ml，水浴超聲20min，過 濾，濃縮，用薄層色譜法鑒定（展開劑：石油醚60-90 :乙酸乙酯：甲酸=15 : 5 : 1)。 在254nm波長的紫外燈下觀察，計算Rf值，結果見表二。
[0041] 表二
[0042]
[0043] 本發(fā)明治療燒燙傷過程中，小鼠實驗結果顯示其對傷口的愈合率高于京萬紅軟膏 和生理鹽水。
[0044] 應當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據(jù)上訴說明加以改進或變換， 而所有這些改進和變換都應屬于本發(fā)明所附權利要求的保護范圍。
【主權項】
1. 一種治療燒燙傷的新型復合凝膠，其特征在于，它是由下列重量比的成分制成的新 型復合凝膠： 大黃素明膠微球43. 1份納米銀 0. 2份 魚鱗膠原蛋白 3. 4份卡波姆基底953. 3份。2. -種如權利要求1所述的大黃素明膠微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 第一步：在液體石蠟中加入司盤80,預熱至60°C，攪拌均勻，備用； 第二步：20% (w/v)明膠溶液，預熱至60°C，加入上述液體石蠟中，攪拌均勻，備用； 第三步：取大黃素溶于乙醇中，預熱，加入上述混合溶液中，攪拌均勻并迅速冷卻至 5°C，離心即得大黃素明膠微球。3. 如權利要求2所述的大黃素明膠微球，其特征在于，所述第一步、第二步中液體石 蠟：司盤80 : 20% (w/v)明膠溶液=10 : 0. 1565 : Uv/w/v)，所述第三步中大黃素： 乙醇=1 : 50 (w/v)。4. 一種如權利要求1所述的魚鱗膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟： 第一步：取魚鱗除雜，加0. 6mol/L鹽酸溶液攪拌5h，清洗干凈，晾干備用； 第二步：將上述魚鱗加〇. lmol/L鹽酸溶液、胃蛋白酶，置于冰箱保鮮室放置酶解24h ; 第三步：將上述酶解后的魚鱗過濾，濾液中加入氯化鈉，靜置6h后，離心20min，傾出上 清液，取出離心管中類白色沉淀即得魚鱗膠原蛋白。5. 如權利要求4所述的魚鱗膠原蛋白，其特征在于，所述第一步、第二步和第三步中 原料試劑比例為魚鱗：〇.6mol/L鹽酸溶液：0? lmol/L鹽酸溶液：胃蛋白酶：氯化鈉= 4. 65 ： 46. 42 ： 46. 42 ： 0. 19 ： 2. 33 (w/v/v/w/w) 〇6. -種如權利要求1所述的卡波姆基底的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 按照一定比例取卡波姆、甘油、三乙醇胺、1%苯甲酸鈉水溶液混合制得基底。7. 如權利要求6所述的卡波姆基底，其特征在于，它的比例為卡波姆：甘油：三乙醇 胺：1%苯甲酸鈉水溶液= 1.17 : 93.14 : 1.04 : 4.66 (w/v/v/v)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療燒燙傷的新型大黃素明膠微球與納米銀復合凝膠制劑及其制備方法，它是由下列重量比的成分制成的新型復合凝膠：大黃素明膠微球，43.1份，納米銀，0.2份，魚鱗膠原蛋白，3.4份，卡波姆基底，953.3份。本發(fā)明是一種水性凝膠制劑，具有美觀、使用舒適、生物兼容性好、生物利用高、穩(wěn)定性好、不良反應少和不污染衣物等優(yōu)點。
【IPC分類】A61K33/28, A61P31/02, A61K9/06, A61K38/39, A61P17/02, A61K31/122
【公開號】CN104971345
【申請?zhí)枴緾N201510368421
【發(fā)明人】張起輝, 王丹, 古今, 張昭, 孫宗良, 張育珍, 郭圓圓
【申請人】重慶大學
【公開日】2015年10月14日
【申請日】2015年6月26日