組合物及其在抗急性腎衰藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性腎功能衰竭（Acute Renal Failure，ARF)是由多種原因引起的臨床綜合征， 可見于臨床各科病人，發(fā)病率高且往往帶來嚴重后果，其特點為短期內(nèi)（數(shù)小時至數(shù)天）腎 功能急劇下降，臨床表現(xiàn)為急性少尿（尿量<400mLPd)或無尿（尿量〈lOOmLPd)，體內(nèi)氮質(zhì) 代謝產(chǎn)物排出產(chǎn)生障礙，迅速出現(xiàn)氮質(zhì)血癥，水及電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂，并引起全身各系 統(tǒng)相應(yīng)功能失調(diào)。引起急性腎衰的主要因素是腎血流量的急劇減少，以及由于腎組織缺血 引起的氧化應(yīng)激和細胞損傷，最終導致腎臟組織結(jié)構(gòu)的破壞和功能的惡化。目前臨床上尚 無公認的治療急性腎衰有效的藥物，僅能通過糾正水電解質(zhì)平衡，糾正酸中毒等對癥治療 措施改善癥狀，后期還需要通過血液透析維持機體機能。在改善腎臟血流灌注障礙和減輕 腎組織損傷方面有明顯療效的臨床藥物少見。
[0003] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Ayumi Ohsaki et al.，2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾， 獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合 物并對該組合物抗急性腎衰活性進行了評價，其具有抗急性腎衰活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為65%和35%。
[0006] CN 105125556 A I兄明書 2/7 頁
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0008] 本發(fā)明的目的是提供組合物用于治療急性腎衰的用途，即用于制備治療急性腎衰 藥物的用途。
[0009] 本發(fā)明的組合物對急性腎衰疾病有明顯的治療作用。
[0010] 通過我們的研究發(fā)現(xiàn)組合物能夠改善腎臟的功能。
[0011] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1化合物Salviskinone A的制備
[0013] 化合物Salviskinone A(I)的制備方法參照Ayumi Ohsaki等人發(fā)表的文獻 (Ayumi Ohsaki et al. , 2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0015] 實施例2 Salviskinone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0016] 將化合物I (312mg，1.0 Ommol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5 攝氏度攪拌12h。12h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相 溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌4次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮 =100:1.5, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0017] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s，1H)，3. 79 (s，2H)，2. 15 (s，1H)，2. 04 (s，1H)，L 91 (s，1H)，L 65 (s，1H)，L 39 (s，3H)，L 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0018] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 I (s)，136. 40 (s)，134. 71 (s)，131. 25 (s)，128. 40 (s)，118. 83 (s)，72. 12 (s)，45. 49 (s)，37. 5 4 (s)，33. 58 (s)，31. 78 (s)，26. 17 (s)，25. 12 (s)，24. 66 (s)，23. 51 (s)，23. 17 (s)，22. 65 (s) ·
[0019] HRMS (ESI)m/z[M+H]+calcd for C22H28BrO3:419. 1222 ；found 419. 1220.
[0020] CN 10blz：bbb6 A ^ ^ Ij 4/Y 貝
[0021] 實施例3 Salviskinone A的0_(二乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0022] 將化合物II(210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，碘化鉀（84mg，0. 5mmol)和二乙胺（1460mg，20mmol)，混合物加熱回流 8h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和 飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗 品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:1. 0, v/V)，收集棕色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末（137. 7mg，67% )。
[0023] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 6. 43 (d, J = 120. 3Hz, 2H), 5. 78 (s, 1H), 4. 23 (s, 2H), 3 ,98(s, 1H),3. 06 (s, 2H), 2. 89(s, 4H),2. 11 (s, 1H),2. 01(s, 1H), 1.89(s, 1H), 1.64(s, 1H), I .34 (s, 3H), I. 14 (s, 6H), I. 04 (s, 6H), 0. 96 (s, 6H).
[0024] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,52.96 (s) ,47.7 5 (s)，45. 55 (s)，37. 58 (s)，33. 65 (s)，26. 22 (s)，25. 20 (s)，24. 72 (s)，23. 55 (s)，23. 24 (s)， 22. 70 (s)，12. 35 (s) ·
[0025] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H38NO3:412. 2852 ;found:412. 2855。
[0026] LlN 丄UOIZOOOt) Λ 、" / JA
[0027] 實施例4 Salviskinone A的0-(嗎啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0028] 將化合物II(210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和嗎啉（1742mg，20mmol)，混合物加熱回流 12h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有機相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集黃色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的黃色粉末（121. lmg，57% )。
[0029] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 6. 41 (d, J = 108. 0Hz, 1H), 6. 29 (s, 1H), 5. 75 (s, 1H), 4 .21 (s, 2H), 3. 84 (s, 1H), 3. 52 (s, 4H), 3. 02 (s, 2H), 2. 47 (s, 4H), 2. 09 (s, 1H), 2. 00 (s, 1H), I .84 (s, 1H), I. 60 (s, 1H) ,1-31 (s, 3H), I. 02 (s, 6H), 0. 95 (s, 6H).
[0030] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,66.84 (s) ,54.7 6 (s)，52. 97 (s)，45. 54 (s)，37. 62 (s)，33. 64 (s)，26. 21 (s)，25. 19 (s)，24. 71 (s)，23. 59 (s)， 23. 23 (s)，22. 69 (s) ·
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H36NO4:426. 2644 ;found:426. 2641。
[0032]
[0033] 實施例5組合物對急性腎衰大鼠的治療作用
[0034] (一）實驗方法
[0035] 組合物的制備：將65mg化合物III的粉末和35mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小 管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物。
[0036] 采用肌肉注射甘油致急性腎功能衰竭大鼠動物模型。選用180~220g健康雄性 SD大鼠30只，隨機分為5組：假手術(shù)組（肌肉注射生理鹽水）；模型組（肌肉注射甘油）； 給藥干預組（組合物、化合物III或者化合物IV 0. 6mg/Kg，肌肉注射甘油），各組大鼠在甘 油造模后立即尾靜脈注射生理鹽水或待試藥物，12和24小時后再給藥一次。
[0037] (二）觀察指標
[0038] 大鼠末次給藥或生理鹽水后放入代謝籠收集24小時尿，留尿后6小時用4%水合 氯醛腹腔注射麻醉，采用激光多普勒血流儀測定造模后及治療后雙側(cè)腎臟血流量，取平均 值作為單只動物腎血流量；取血制備血清，測定血BUN和Cre (均按試劑盒說明書操作）。
[0039] (三）實驗結(jié)果
[0040] 1.組合物可增加急性腎衰小鼠腎血流量
[0041] 組合物可顯著增加急性腎衰小鼠腎血流量，而化合物III和化合物IV無此作用。
[0042] 表1組合物對急性腎衰小鼠腎血流量的影響
[0043]
[0044] *Ρ〈0· 05vs急性腎衰模型組
[0045] 2.組合物對急性腎衰小鼠腎功能具保護作用
[0046] 急性腎衰大鼠靜脈注射生理鹽水24小時后，血清BUN和Cre見表2。急性腎衰模 型組明顯高于假手術(shù)組，說明模型組動物腎功能損害嚴重。組合物能改善急性腎衰大鼠的 腎功能（P〈〇. 05)，而化合物III和化合物IV無此作用。見表2。
[0047] 表2各試驗組大鼠腎功能指標比較
[0049] *P〈0. 05vs急性腎衰模型組
[0050] 結(jié)論：組合物能夠保護腎臟的功能，可以用來制備抗急性腎衰藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠保護腎臟，不可用來制備抗急性腎衰藥物。
[0051] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0052] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0053] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0054] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為65%和35%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為65 %和35 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰所引起的腎臟血流量的降低。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰引起的血清BUN的升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰引起的血清Cre的升高。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗急性腎衰藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有抗急性腎衰的作用，具有開發(fā)抗急性腎衰藥物的價值。
【IPC分類】A61P13/12, A61K31/5375, A61K31/13
【公開號】CN105125556
【申請?zhí)枴緾N201510439977
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月23日