Cyanogramide在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物Cyanogramide的新用途，尤其涉及Cyanogramide在制備抗結(jié) 核菌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來全球結(jié)核病的發(fā)病呈增高趨勢，據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO)估計，目前全球受 結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染的人口占世界人口的三分之一，其 中5~10%的感染者成為結(jié)核病患者。我國每年出現(xiàn)活動性肺結(jié)核病人130萬例，其中傳 染性肺結(jié)核約60萬例，其中傳染性肺結(jié)核約60萬例，是全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一。
[0003]自抗結(jié)核藥物相繼問世，使結(jié)核病的治療起到劃時代的變化。然而由于結(jié)核病患 者的治療管理尚不十分規(guī)范，不規(guī)則化療，濫用抗結(jié)核藥物，使結(jié)核病耐藥情況日益嚴(yán)重， 且耐藥性的變化更趨向于多種藥物同時耐藥，這給結(jié)核病的防治工作造成極大困難。因此 尋找新的抗結(jié)核藥物，尤其是抗多藥耐藥性的抗結(jié)核藥物對保護(hù)人民身體健康，具有重要 意義。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物Cyanogramide是一個2014年發(fā)表（PengFu,et al.,CyanogramidewithaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]Skeletonfrom Actinoalloteichuscyanogriseus.OrganicLetters，2014, 16,3708-3711·)的新化合 物，該化合物擁有全新的骨架類型，涉及到抗腫瘤作用（PengFu,etal.,Cyanogramide withaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]SkeletonfromActinoalloteichus cyanogriseus.OrganicLetters, 2014, 16, 3708-3711.)，對于本發(fā)明涉及的Cyanogramide 在制備抗結(jié)核菌藥物中的用途屬于首次公開，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類型，而且其對于抗結(jié) 核菌活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特 點，同時用于抗結(jié)核菌顯然具有顯著的進(jìn)步。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Cyanogramide研究中未發(fā)現(xiàn)其具有抗結(jié)核菌活性的 報道的現(xiàn)狀，提供了Cyanogramide在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用。
[0006] 所述化合物Cyanogramide,結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0007]
[0008] 本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：
[0009] 發(fā)明人先用卡介苗做應(yīng)試菌株，采用紙片擴(kuò)散法對Cyanogramide的抗結(jié)核菌活 性進(jìn)行初步試驗，根據(jù)初步試驗的結(jié)果，本發(fā)明再用固體培養(yǎng)基稀釋法測定了該化合物對 卡介苗、結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv株和耐多藥結(jié)核分枝桿菌（MDRMTB)三種結(jié)核菌的最 小抑菌濃度，實驗結(jié)果證實Cyanogramide具有很強(qiáng)的抗結(jié)核菌和抗耐藥性結(jié)核菌活性，可 作為治療結(jié)核菌感染疾病的先導(dǎo)化合物，也可用于制備治療結(jié)核病藥物。
[0010] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0011] 1.本發(fā)明提供了一種可用于抗結(jié)核病治療的Cyanogramide，從而擴(kuò)大了抗結(jié)核 菌藥物的種類；
[0012] 2.針對目前結(jié)核病發(fā)病率高、結(jié)核桿菌多重耐藥菌株及人體免疫缺陷病毒雙重 感染的出現(xiàn)，使結(jié)核病發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢的現(xiàn)狀，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Cyanogramide具有 抗結(jié)核菌和耐藥性結(jié)核菌活性的特點，可用于抗結(jié)核藥物的制備，具有非常廣闊的應(yīng)用前 景；
[0013] 3.本發(fā)明涉及的Cyanogramide在制備治療抗結(jié)核菌藥物中的用途屬于首次公 開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于結(jié)核菌抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在 由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于結(jié)核菌感染的防治 顯然具有顯著的進(jìn)步。
【具體實施方式】
[0014] 本發(fā)明所涉及化合物Cyanogramide的制備方法參見文獻(xiàn)（PengFu,et al.,CyanogramidewithaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]Skeletonfrom Actinoalloteichuscyanogriseus.OrganicLetters, 2014, 16, 3708-3711.)
[0015] 以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0016] 實施例1 :本發(fā)明所涉及化合物Cyanogramide片劑的制備：
[0017] 取20克化合物Cyanogramide,加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片 機(jī)制成1000片。
[0018] 實施例2 :本發(fā)明所涉及化合物Cyanogramide膠囊劑的制備：
[0019] 取20克化合物Cyanogramide，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勾，裝 膠囊制成1〇〇〇粒。
[0020] 下面通過藥效學(xué)實驗來進(jìn)一步說明其藥物活性。
[0021] 實驗例1固體培養(yǎng)基稀釋法測定Cyanogramide抗卡介苗（BCG)絕對濃度
[0022] 從斜面上刮取卡介苗培養(yǎng)物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基中， 加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁?(MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的卡介苗（BCG)菌懸液。將Cyanogramide用DMS0 配成高濃度的原液，用含5 %的吐溫-80無菌超純水稀釋原液至所需濃度，將稀釋好的 Cyanogramide按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基已經(jīng)121°C 高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勾，制成含Cyanogramide，濃度分別為6.Oug/ ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等濃度的斜 面培養(yǎng)基。
[0023] 將濃度為lmg/ml的卡介苗（BCG)菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含 Cyanogramide系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察 實驗結(jié)果，結(jié)果如表1所示。
[0024] 本實施例中所用Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基和Middlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基為 本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)時的常用培養(yǎng)基，其配方采用常規(guī)配方即可。
[0025] 實驗例2固體培養(yǎng)基稀釋法測定Cyanogramide抗結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv株 絕對濃度
[0026] 從斜面上刮取結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv株培養(yǎng)物，加入到3mlMiddlebrook7H9 肉湯培養(yǎng)基中，加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)?比池管（MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的H37Rv株菌懸液。
[0027] 將Cyanogramide分別用DMS0配成高濃度的原液，用含5%的吐溫-80無菌超純水 稀釋原液至所需濃度，將稀釋好的Cyanogramide按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll 瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含 Cyanogramide，濃度分別為 6. 0ug/ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml， 0. 75ug/ml，0. 5ug/ml等濃度的斜面培養(yǎng)基。
[0028] 將濃度為lmg/ml的H37Rv株菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含 Cyanogramide系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察 實驗結(jié)果，結(jié)果如表1所示。
[0029] 實驗例3固體培養(yǎng)基稀釋法測定Cyanogramide抗結(jié)核分支桿菌臨床分離耐ISRE MTB株絕對濃度
[0030] 從斜面上刮取結(jié)核分枝桿菌臨床分離耐ISREMTB株（耐異煙肼、鏈霉素、利福 平、乙胺丁醇結(jié)核分枝桿菌臨床分離柱）培養(yǎng)物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉湯培養(yǎng) 基中，加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁?(MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的菌懸液。
[0031] 將Cyanogramide分別用DMS0配成高濃度的原液，用含5%的吐溫-80無菌超純水 稀釋原液至所需濃度，將稀釋好的Cyanogramide按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll 瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含 Cyanogramide，濃度分別為 6. 0ug/ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml， 0. 75ug/ml，0. 5ug/ml等濃度的斜面培養(yǎng)基。
[0032] 將濃度為lmg/ml的結(jié)核分枝桿菌臨床分離耐ISREMTB株菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù) 環(huán)，分別接種于含Cyanogramide系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培 養(yǎng)4~8周，觀察實驗結(jié)果，結(jié)果如表1所不。
[0033] 表1固體培養(yǎng)基稀釋法測定Cyanogramide抗結(jié)核菌絕對濃度結(jié)果
[0034]
[0035] 結(jié)論：Cyanogramide具有很強(qiáng)的抗結(jié)核菌和抗耐藥性結(jié)核菌活性，可作為治療結(jié) 核菌感染疾病的先導(dǎo)化合物，也可用于制備治療結(jié)核病藥物。
【主權(quán)項】
1.Cyanogramide在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用，所述化合物Cyanogramide結(jié)構(gòu)如式 (I)所示： 式:（I)。 1.Cyanogramide在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用，所述化合物Cyanogramide結(jié)構(gòu)如式(I)所示：
【專利摘要】本發(fā)明公開了Cyanogramide在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明針對當(dāng)前結(jié)核病發(fā)病率高、結(jié)核桿菌多重耐藥菌株的出現(xiàn)，使結(jié)核病發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢的現(xiàn)狀，發(fā)現(xiàn)Cyanogramide具有顯著抑制結(jié)核菌的活性，具有很好的應(yīng)用前景。本發(fā)明涉及的Cyanogramide在制備治療抗結(jié)核菌藥物中的用途屬于首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于結(jié)核菌抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于結(jié)核菌感染的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
【IPC分類】A61P31/06, A61K31/4188
【公開號】CN105250270
【申請?zhí)枴緾N201510761826
【發(fā)明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月11日