一種組合物及其在升高白細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 白細(xì)胞減少癥是由于原因不明和繼發(fā)于其他疾病之后而引起的疾病，分為原發(fā)性 和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性者原因不明；繼發(fā)性者認(rèn)為其病因可由急性感染，物理、化學(xué)因素， 血液系統(tǒng)疾病，伴脾腫大的疾病，結(jié)締組織疾病，過敏性疾病，遺傳性疾病等，獲得性或原因 不明性粒細(xì)胞減少等。
[0003]白細(xì)胞減少的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有 重要價(jià)值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（Ayumi Ohsaki et al.，2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾， 獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合 物并對(duì)該組合物升高白細(xì)胞活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有升高白細(xì)胞活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為5%和95%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 本發(fā)明的目的是提供組合物在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明組合物可以 顯著升高失血和化學(xué)物品引起的白細(xì)胞降低。
[0009] 以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Salviskinone A的制備
[0011] 化合物Salviskinone A(I)的制備方法參照Ayumi Ohsaki等人發(fā)表的文獻(xiàn) (Ayumi Ohsaki et al. , 2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0013] 實(shí)施例2Salviskinone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I (312mg，1. OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5 攝氏度攪拌12h。12h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌4次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮 =100:1.5, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0015] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s, 1H), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s, 1H), 2. 04 (s, 1H) ,1-91 (s, 1H), 1. 65 (s, 1H), 1. 39 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0016] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 1 (s), 136. 40 (s), 134. 71 (s), 131. 25 (s), 128. 40 (s), 118. 83 (s), 72. 12 (s), 45. 49 (s), 37. 5 4 (s), 33. 58 (s), 31. 78 (s), 26. 17 (s), 25. 12 (s), 24. 66 (s), 23. 51 (s), 23. 17 (s), 22. 65 (s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C22H28Br03:4 1 9. 12 2 2 ；found 419. 1220.
[0018]
[0019] 實(shí)施例3Salviskinone A的0-(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II (209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (34511^，2.5_31)，碘化鉀（8411^，0.5_31)和吡略燒（142〇11^，20_31)，混合物加熱回流 8h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和 飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗 品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:1. 0, v/V)，收集棕色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末（131. 6mg，65% )。
[0021] NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 6. 57 (s, 1Η), 6. 29 (s, 1H), 5. 82 (s, 1H), 4. 25 (s, 2H), 3. 86 (s, 1H), 3. 10 (s, 2H), 2. 55 (s, 4H), 2. 16 (s, 1H), 2. 07 (s, 1H), 1. 893 (s, 1H), 1. 73 (s, 4H), 1 .70 (s, 1H), 1. 38 (s, 3H), 1. 09 (s, 6H), 1. 02 (s, 6H).
[0022] 13CMMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.10(s)，183.71(s)，154.37(s)，147.57(s)，140· 19 (s), 136. 41 (s), 134. 73 (s), 131. 25 (s), 128. 38 (s), 118. 82(s), 69. 23(s), 54. 54 (d, J = 16. 6Hz), 45. 51 (s), 37. 54 (s), 33. 56 (s), 26. 16 (s), 25. 19 (d, J = 10. 3Hz), 24. 73 (s), 23. 5 8(s), 23. 24(s), 22. 69 (s).
[0023] HRMS (ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H36N03:4 1 0 . 26 9 5 ;found:410. 2693。
[0024]
[0025] 實(shí)施例4Salviskinone A的0-(哌啶基）乙基衍生物（IV)的合成
[0026] 將化合物II (209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和哌啶（852mg，lOmmol)，混合物加熱回流 10h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集黃色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的黃色粉末（116. 3mg，55% )。
[0027] NMR (500MHz, Chloroform-dl) δ6. 44(d, J = 95. 3Hz, 1H),6. 31(s, 1H), 5. 73 (s, 1H), 4. 20 (s, 2H), 3. 74 (s, 1H), 3. 01 (s, 2H), 2. 39 (s, 4H), 2. 07 (s, 1H), L 96 (s, 1H), 1. 86 (s, 1H), 1. 60 (s, 1H), 1. 44 (s, 4H), 1. 33 (d, J = 15. 0Hz, 5H), 1. 00 (s, 6H), 0. 91 (s, 6H).
[0028] 13C 匪R(125MHz, DMS0-d6) δ 188. 16(s), 183. 79(s), 154. 48(s), 147. 63(s), 140. 27 (s), 136. 51 (s), 134. 79 (s), 131. 33 (s), 128. 47 (s), 118. 88(s), 69. 31 (s), 54. 6 9(d,J = 16.2Hz) ,45.56 (s), 37.61 (s), 33.62 (s), 26.21 (s), 25.21 (s), 24.65 (d,J = 19. 1Hz), 23. 50 (d, J = 17. 2Hz), 23. 23 (s), 22. 68 (s).
[0029] HRMS (ESI) :m/z[M+H]+calcd for C27H3SN03:424. 28 5 2 ;found:424. 2856。
[0030]
[0031 ] 實(shí)施例5組合物升高白細(xì)胞活性
[0032] 一、組合物對(duì)失血小鼠的治療作用
[0033] 對(duì)失血小鼠的影響ICR小鼠50只，早?各半，均分成5組（η = 10)。除生理鹽水 組外，其它組每只小鼠從眼眶靜脈放血0. 5ml，24h后再取血測全部各組白細(xì)胞指標(biāo)，然后 連續(xù)灌胃給藥1周，末次給藥lh后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀測白細(xì)胞 指標(biāo)。
[0034] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的5mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的95mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合 物，使用時(shí)用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0035] 表1組合物對(duì)因失血所致白細(xì)胞減少的治療作用（109/L)
[0037] 與模型組比較：*ρ〈0· 05
[0038] 結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，組合物給藥組與模型組比較，白細(xì) 胞顯著高于模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
[0039] 二、組合物對(duì)環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少的治療作用
[0040] 對(duì)小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，早?兼用，均分成5組（η =10)，即生理鹽水組、造模組、組合物1. 2mg/kg組、化合物III 1. 2mg/kg組和化合物IV 1. 2mg/kg組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注 射環(huán)磷酸胺80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測白細(xì)胞。
[0041] 表2組合物對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少的治療作用（109/L)
[0043] 與模型組比較：*ρ〈0· 05
[0044] 結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細(xì)胞下 降，組合物組與模型組比較，均可明顯對(duì)抗環(huán)磷酸胺所致小鼠白細(xì)胞下降。而化合物III和 化合物IV不具有此活性。
[0045] 三、組合物對(duì)苯所致白細(xì)胞減少的治療作用
[0046] 對(duì)再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，早?兼用，均分成5組（η = 10)，除生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0. 5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當(dāng)日，同時(shí)口服 給藥，每天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測白細(xì)胞。
[0047] 表3組合物對(duì)苯所致血細(xì)胞減少的治療作用（109/L)
[0049] 與模型組比較：*ρ〈0· 05
[0050] 結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對(duì)抗苯所致再生障礙性貧血小鼠白細(xì) 胞的下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
[0051] 結(jié)論：組合物能夠顯著升高白細(xì)胞，可以用來制備抗白細(xì)胞降低藥物。而化合物 III和化合物IV不具有顯著升高白細(xì)胞的活性，不可以用來制備抗白細(xì)胞降低藥物。
[0052] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0053] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0054] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0055] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為5%和95%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為5%和95%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述組合物升 高失血所致白細(xì)胞的降低。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述組合物升 高化學(xué)品所致白細(xì)胞的降低。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述化學(xué)品為 環(huán)磷酰胺。7.如權(quán)利要求5所述的組合物在升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述化學(xué)品為 苯D
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備升高白細(xì)胞藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有升高白細(xì)胞的作用，具有開發(fā)升高白細(xì)胞藥物的價(jià)值。
【IPC分類】A61P7/00, A61K31/40, A61K31/4453
【公開號(hào)】CN105287556
【申請?zhí)枴緾N201510742199
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月4日