一種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥大黃為寥科植物掌葉大黃Rheum Palmatum L、唐古特大黃Rheumtanguticum MaximexBalf或藥用大黃Rheum Officinace Baill的干燥根及根莖，具有瀉下攻積，清熱瀉 火，涼血解毒，逐瘀通便，利濕退黃的功效。大黃是中醫(yī)臨床應(yīng)用最為廣泛的中藥之一?；瘜W(xué) 成分主要含有：（1)游離蒽醌類衍生物：大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酸；
[2] 結(jié)合型二蒽酮類衍生物：為大黃的主要瀉下成分，番瀉葉甙A、B ; (3)沒食子酸。其中游 離蒽醌類衍生物是主要的抗菌活性物質(zhì)；沒食子酸具有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等 多種生物活性，同時沒食子酸具有抗腫瘤作用。只有結(jié)合型二蒽酮類衍生物具有很強(qiáng)的瀉 下功效，因此增加游離蒽醌類衍生物和沒食子酸的含量，減少結(jié)合型二蒽酮類衍生物的含 量成為炮制大黃的重點(diǎn)。
[0003] 目前臨床應(yīng)用有：大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭。不同炮炙方法對蒽醌類成份的 影響是比較大的，酒炒與醋炒由于受熱程度較輕，一般為160-170°，酒大黃總蒽醌減少約 1/10,其中結(jié)合性蒽醌減少了 1/4。用蒸、燉、煮法炮炙大黃，受熱溫度在100°左右，但對 結(jié)合型與游離型蒽醌類衍生物均產(chǎn)生較大影響，含量全部明顯下降。熟大黃總蒽醌量減 少1/4以上，其中結(jié)合性大黃酸減少近1/2,鞣酸含量也減少1/3。炒炭受熱程度一般達(dá)到 250-300°，蒽醌類衍生物含量均劇烈下降，大黃炭總蒽醌只減少約1/10,而結(jié)合性蒽醌減 少約4/5,結(jié)合性大黃酸也減少2/3,鞣酸含量僅減少1/3。酒炒大黃與醋炒大黃總游離蒽醌 衍生物量下降1/7-1/5,游離大黃酸及結(jié)合型蒽醌類衍生物未受影響，大黃炭全部蒽醌類衍 生物量均劇烈下降，僅保留有1/3左右。僅游離蒽醌衍生物減量，結(jié)合型甙類受影響。，

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明主要針對常規(guī)的大黃炮制品存在總蒽醌減少，其中結(jié)合性蒽醌減少了 1/4， 游離蒽醌類衍生物和沒食子酸的含量少，結(jié)合型二蒽酮類衍生物的含量高的問題，提供一 種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。
[0005] 本發(fā)明的另一目的是提供exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉的制備方法。
[0006] 本發(fā)明為解決上述問題而采取的技術(shù)方案為：
[0007] 本發(fā)明exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉通過下述方法制成：
[0008] (1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，滅菌；
[0009] (2)、按照體積比為1:30~50的比例取exigua釀酒酵母菌和30~40°C的蒸餾水 混合均勾制成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500~3000mLexigua 釀酒酵母菌液的比例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28~32°C溫 度下發(fā)酵培養(yǎng)3~5天，然后將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50~80°C溫度下烘干，粉碎成 細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。
[0010] 所述的exigua釀酒酵母菌中含菌量為1. 5 X 106~1. 5 X 10 8個/mL。
[0011] 本發(fā)明exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉的制備方法，包括以下步驟：
[0012] (1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，滅菌；
[0013] (2)、按照體積比為1:30~50的比例取exigua釀酒酵母菌和30~40°C的蒸餾水 混合均勾制成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500~3000mLexigua 釀酒酵母菌液的比例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28~32°C溫 度下發(fā)酵培養(yǎng)3~5天，然后將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50~80°C溫度下烘干，粉碎成 細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。
[0014] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，利用微生物產(chǎn)生的酶系發(fā)酵中藥，使微生物作用于中 藥底物或微生物直接轉(zhuǎn)化中藥底物，以共同產(chǎn)生新的活性成份，提高中藥藥效，降低中藥不 良反應(yīng)，去除中藥中的大分子雜質(zhì)，使中藥化學(xué)成份進(jìn)行調(diào)整，改變藥物作用，應(yīng)用微生物 exigua釀酒酵母菌（Kazachstania exigua)發(fā)酵中藥大黃的生產(chǎn)工藝，使大黃中①游離 型蒽醌類衍生物：大黃酚增加了 20% -35%，大黃素增加了 50% -60%，大黃素甲醚增加了 30% -40 %，蘆薈大黃素增加了 70% -80 %，大黃酸增加了 40% -50% ;②結(jié)合型二蒽酮類 衍生物：番瀉葉甙A，減少了 50% -60%，番瀉葉甙B減少了 30% -45%;③沒食子酸增加了 200% -300%。沒食子酸是具有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等多種生物活性，同時沒食 子酸具有抗腫瘤作用，通過微生物發(fā)酵炮炙大黃，在藥材組織內(nèi)進(jìn)行成份的調(diào)整，比用傳統(tǒng) 炮炙方法和提取分離手段簡便而穩(wěn)定，且臨床運(yùn)用形式是發(fā)揮炮制品全成份的總體綜合作 用，有利于工業(yè)化大生產(chǎn)，增加了新的大黃炮炙品種，能使中醫(yī)傳統(tǒng)用藥的優(yōu)勢得以充分體 現(xiàn)，因此本發(fā)明exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉可有效增加大黃的逐瘀解毒作用，達(dá)到活血 逐瘀通便作用，緩解大黃的劇烈瀉下對胃腸道的不良反應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1
[0016] -種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉，通過下述方法制成：
[0017] (1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，鈷60照射滅菌；
[0018] (2)、按照體積比為1:30的比例取exigua釀酒酵母菌和30°C的蒸餾水混合均勻制 成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500mLexigua釀酒酵母菌液的比 例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28°C溫度下發(fā)酵培養(yǎng)3天，然后 將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50°C溫度下烘干，粉碎成細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大 黃粉，其中exigua釀酒酵母菌含菌量為1. 5 X 10s個/mL。
[0019] 利用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，其中用2010年版中華人民共和國藥典（一 部）大黃含量測定項：蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚高效液相色譜法測 定。再用《現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐》中《大黃酒炙前后8種成分的含量比較》中的含量測定測 定方法測定：沒食子酸、番瀉苷A、番瀉苷B。
[0020] 對發(fā)酵前和發(fā)酵后的大黃粉進(jìn)行檢測，其中生大黃粉的檢測結(jié)果見表1，制成的 exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉檢測結(jié)果見表2 :
[0021] 表1生大黃粉的檢測結(jié)果mg/g
[0023] 表2exigua釀酒酵母菌大黃粉的檢測結(jié)果mg/g
[0025] 實(shí)施例2
[0026] -種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉，通過下述方法制成：
[0027] (1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，鈷60照射滅菌；
[0028] (2)、按照體積比為1:40的比例取exigua釀酒酵母菌和35°C的蒸餾水混合均勾制 成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2800mLexigua釀酒酵母菌液的比 例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在30°C溫度下發(fā)酵培養(yǎng)4天，然后 將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在65°C溫度下烘干，粉碎成細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大 黃粉，其中exigua釀酒酵母菌含菌量為1. 5 X 107個/mL。
[0029] 利用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，其中用2010年版中華人民共和國藥典（一 部）大黃含量測定項：蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚高效液相色譜法測 定。再用《現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐》中《大黃酒炙前后8種成分的含量比較》中的含量測定測 定方法測定：沒食子酸、番瀉苷A、番瀉苷B。
[0030] 對發(fā)酵前和發(fā)酵后的大黃粉進(jìn)行檢測，其中生大黃粉的檢測結(jié)果見表3,制成的 exigua釀酒酵母菌大黃粉檢測結(jié)果見表4 :
[0031] 表3生大黃粉的檢測結(jié)果mg/g

[0033] 表4 exigua釀酒酵母菌大黃粉的檢測結(jié)果mg/g
[0035] 實(shí)施例3
[0036] -種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉，通過下述方法制成：
[0037] (1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，鈷60照射滅菌；
[0038] (2)、按照體積比為1:50的比例取exigua釀酒酵母菌和40°C的蒸餾水混合均勾制 成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入3000mLexigua釀酒酵母菌液的比 例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在32°C溫度下發(fā)酵培養(yǎng)5天，然后 將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在80°C溫度下烘干，粉碎成細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大 黃粉，其中exigua釀酒酵母菌含菌量為1. 5 X 106個/mL。
[0039] 利用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，其中用2010年版中華人民共和國藥典（一 部）大黃含量測定項：蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚高效液相色譜法測 定。再用《現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐》中《大黃酒炙前后8種成分的含量比較》中的含量測定測 定方法測定：沒食子酸、番瀉苷A、番瀉苷B。
[0040] 對發(fā)酵前和發(fā)酵后的大黃粉進(jìn)行檢測，其中生大黃粉的檢測結(jié)果見表5,制成的 exigua釀酒酵母菌大黃粉檢測結(jié)果見表6 :
[0041] 表5生大黃粉的檢測結(jié)果mg/g

[0043] 表6 exigua釀酒酵母菌大黃粉的檢測結(jié)果mg/g
【主權(quán)項】
1. 一種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉，其特征是通過下述方法制成： (1) 、將大黃粉碎成大黃粗粉，滅菌； (2) 、按照體積比為1:30~50的比例取exigua釀酒酵母菌和30~40°C的蒸餾水混合 均勾制成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500~3000mLexigua釀 酒酵母菌液的比例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28~32°C溫度 下發(fā)酵培養(yǎng)3~5天，然后將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50~80°C溫度下烘干，粉碎成細(xì) 粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉，其特征是所述的exigua釀酒 酵母菌中含菌量為1. 5X106~1. 5X10 8個/mL。3.權(quán)利要求1所述exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉的制備方法，其特征是包括以下步 驟： (1) 、將大黃粉碎成大黃粗粉，滅菌； (2) 、按照體積比為1:30~50的比例取exigua釀酒酵母菌和30~40°C的蒸餾水混 合均勾制成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500~3000mLexigua釀 酒酵母菌液的比例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28~32°C溫度 下發(fā)酵培養(yǎng)3~5天，然后將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50~80°C溫度下烘干，粉碎成細(xì) 粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉及其制備方法。本發(fā)明主要針對大黃炮制品存在總蒽醌減少，游離蒽醌類衍生物和沒食子酸含量少，結(jié)合型二蒽酮類衍生物含量高的問題，提供一種exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。本發(fā)明exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉通過下述方法制成：(1)、將大黃粉碎成大黃粗粉，滅菌；(2)、按照體積比為1:30～50的比例取exigua釀酒酵母菌和蒸餾水混合均勻制成exigua釀酒酵母菌液，再按照1千克大黃粗粉中加入2500～3000mLexigua釀酒酵母菌液的比例，取exigua釀酒酵母菌液加入大黃粗粉中，混合均勻，在28～32℃溫度下發(fā)酵培養(yǎng)3～5天，然后將發(fā)酵后的大黃發(fā)酵混合物在50～80℃溫度下烘干，粉碎成細(xì)粉，即exigua釀酒酵母菌發(fā)酵大黃粉。
【IPC分類】A61K9/14, A61K36/708
【公開號】CN105287756
【申請?zhí)枴緾N201510747489
【發(fā)明人】侯銳鋼, 張京平, 康建邦, 吳彥, 范麗霞, 趙培鴻, 邵云云
【申請人】山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月5日