一種血栓的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種血栓的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的不斷提高，心腦血管病的發(fā)病率正在不斷提高，而造成心腦 血管病的重要原因是由于血栓的形成，因此攻克血栓是國(guó)家的一項(xiàng)重大攻關(guān)課題。而血栓 機(jī)制的研究、血栓性疾病的治療、溶栓性藥物的研制和開(kāi)發(fā)，都需要有一個(gè)可靠的動(dòng)物模型 的支持，因此，建立動(dòng)物血栓模型是必要的前提，而建立動(dòng)物血栓模型時(shí)，制備得到凝固效 果好、成型效果好、穩(wěn)定性好的血栓是前提。
[0003] 目前，制備血栓的方法有如下六種：
[0004] 一、用5支20mL注射器抽取新鮮動(dòng)脈血100mL，順導(dǎo)管推注生理鹽水150mL加 青霉素80萬(wàn)u，（每支注射器內(nèi)與1.2mL氨基己酸混勻）；室溫下靜置30min，待其自 凝后，放入70°C水浴箱內(nèi)水浴lOmin，然后放入冰箱冷藏。將冷藏的血栓切成大小約為 長(zhǎng)條狀，棄除血清后裝入IOmL注射器。注射器注射乳頭用剪刀修剪后，把 乳頭內(nèi)徑擴(kuò)大至3mm左右，經(jīng)修剪后的注射器注射出的血栓呈圓柱狀。此方法制備的血栓 無(wú)法有效成型，還需要人工切成長(zhǎng)條狀，再手工修剪注射器，繁瑣耗時(shí)。
[0005] 二、動(dòng)脈采血60~100mL，加入含凝血酶2000U的玻璃平皿中，靜置凝固2hr ;用刀 片將血栓縱橫切成小塊，大小約有10*10*5mm3 (長(zhǎng)*寬*厚）；棄血清后裝入50mL注射器 中備用。此方法的成型效果也不佳，手工切成的血栓大小不易控制，很難做到切成的血栓塊 形狀規(guī)則一致，且繁瑣耗時(shí)。
[0006] 三、動(dòng)物自體靜脈采血20mL ;注入3段長(zhǎng)7cm，內(nèi)徑約4. 5mm及2段長(zhǎng)約5cm，內(nèi)徑 約5. 5cm的無(wú)菌塑膠管中；室溫靜置8小時(shí)后，將管內(nèi)血栓柱沖出，生理鹽水沖洗3遍；將上 述3段或5段血栓柱吸入另一根長(zhǎng)約25cm，內(nèi)徑約5. 5mm的塑膠導(dǎo)管；將導(dǎo)管置于生理鹽 水中備用。此方法制備的血栓柱凝集不完全，成形較差，用生理鹽水沖洗過(guò)程中，血栓柱容 易被分散，血栓形狀不易維持。
[0007] 四、取自體動(dòng)脈血50mL ;常溫下置于試管中2小時(shí)；將血栓置于玻璃平皿中，切成 直徑為l-2mm大小的栓塊；用生理鹽水反復(fù)沖洗后，放入IOmL生理鹽水中備用。此方法的 凝固效果較差；手工切成的血栓大小不易控制，很難做到切成的血栓塊形狀規(guī)則一致；用 生理鹽水沖洗過(guò)程中，血栓柱容易被分散，血栓形狀不易維持。
[0008] 五、無(wú)菌條件下動(dòng)脈插管取血0.5mL，迅速推入細(xì)聚乙烯導(dǎo)管中；室溫靜置 25_30min凝固，推入生理鹽水，制成直徑約為0. 6-0. 8mm自體血栓；無(wú)菌手術(shù)刀切成長(zhǎng) 3-4mm栓塊，生理鹽水反復(fù)沖洗后備用。此方法的凝固效果較差；手工切成的血栓大小不易 控制，很難做到切成的血栓塊形狀規(guī)則一致；用生理鹽水沖洗過(guò)程中，血栓柱容易被分散， 血栓形狀不易維持，穩(wěn)定性差。
[0009] 六、自體靜脈采血lmL，注入無(wú)菌試管中；室溫靜置20-30min，凝固后，60-70°C水 浴10-15min，再靜置冰箱中冷藏；用手術(shù)刀將血凝塊切成直徑為l-2mm，長(zhǎng)為4-5mm的柱形 血栓塊備用。此方法的成型不好，手工切成的血栓大小不易控制，很難做到切成的血栓塊形 狀規(guī)則一致，且繁瑣耗時(shí)。
[0010] 因此，需要提供一種新的凝固效果好、成型效果好、穩(wěn)定性好的血栓制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的在于提供一種新的凝固效果好、成型效果好、穩(wěn)定性好的血栓的制 備方法。
[0012] 本發(fā)明血栓的制備方法，它包括如下步驟：
[0013] (1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量為血液的10~50/3倍U/mL，得混合液；
[0014] (2)將步驟（1)的混合液注入內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)塑料管中，封口，37°C放置30min， 再置于2~8°C放置12-16小時(shí)，即可。
[0015] 本發(fā)明還提供了前述方法制備的血栓。
[0016] 本發(fā)明還提供了前述血栓在制備動(dòng)物血栓模型中的用途。
[0017] 本發(fā)明還提供了一種肺動(dòng)脈栓塞模型的制備方法，它包括如下步驟：
[0018] 1)在動(dòng)物股靜脈穿刺，引入5F導(dǎo)管鞘后，插入5F導(dǎo)引導(dǎo)管，在導(dǎo)絲導(dǎo)引下超選入 左肺動(dòng)脈；
[0019] 2)選擇左肺動(dòng)脈主干，將權(quán)利要求2所述血栓經(jīng)5F導(dǎo)引導(dǎo)管注入，每次注入3mL 血栓，注射三次，造成肺動(dòng)脈栓塞。
[0020] 步驟1)中，所述穿刺的方法是Seldinger法。
[0021] 所述1)，所述導(dǎo)絲時(shí)超硬親水導(dǎo)絲。
[0022] 與現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明通過(guò)選擇特定直徑的毛細(xì)塑料管，在特定條件下制備血 栓的方法，具備以下優(yōu)勢(shì)：
[0023] 1、方便易行，可以形成柱狀規(guī)則的血栓條塊，成型效果好；
[0024] 2、通過(guò)37°C放置30min，再置于2~8°C放置12~16h的方式，使得血栓充分凝集 成形，凝固效果好。
[0025] 3、血栓栓塊注入動(dòng)物血管后，不易崩解，能較長(zhǎng)時(shí)間維持規(guī)則的血栓條塊，穩(wěn)定性 好。
[0026] 本發(fā)明方法制備的血栓凝固性好、成型佳、穩(wěn)定性好，用于肺動(dòng)脈造影時(shí)，可視化 程度高，更方便實(shí)時(shí)觀測(cè)及評(píng)判堵塞面積，應(yīng)用前景良好。
[0027] 下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但是并不是對(duì)本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【附圖說(shuō)明】
[0028] 圖1血栓形成DSA照影結(jié)果比較，A :本發(fā)明方法制備血栓肺動(dòng)脈血栓DSA照影 (犬）；B :文獻(xiàn)（陳永利等，"實(shí)驗(yàn)性急性血栓性肺栓塞動(dòng)物模型的建立"，天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2003第9卷第1期）報(bào)道的方法制備血栓肺動(dòng)脈血栓DSA照影（兔）；
[0029] 圖2犬肺動(dòng)脈照影結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
[0031] 實(shí)驗(yàn)材料和儀器：
[0033] 實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明血栓制備方法
[0034] 1)動(dòng)物自體靜脈采血30-50mL ;
[0035] 2)吸入含500U凝血酶的注射器中；
[0036] 3)用注射器注入無(wú)菌毛細(xì)塑料管（內(nèi)徑為1mm)中，制備長(zhǎng)度5cm，直徑Imm的血 栓；
[0037] 4)封 口后，37°C水浴放置 30min ;
[0038] 5)再置于2~8°C過(guò)夜（12-16小時(shí)）；
[0039] 6)吸入注射器（20mL)備用。
[0040] 實(shí)施例2犬肺動(dòng)脈栓塞模型的建立和評(píng)價(jià)
[0041] 1、犬肺動(dòng)脈栓塞模型的建立
[0042] 1)使用丙泊酚經(jīng)靜脈對(duì)犬進(jìn)行全身麻醉；
[0043] 2)麻醉后在犬右（或左）股動(dòng)脈通過(guò)留置針置入壓力傳感器導(dǎo)管，監(jiān)測(cè)循環(huán)動(dòng)脈 壓；
[0044] 3)在犬右（或左）股靜脈以Seldinger法穿刺，引入5F導(dǎo)管鞘后，插入5F導(dǎo)引導(dǎo) 管，在超硬親水導(dǎo)絲導(dǎo)引下超選入左肺動(dòng)脈。確定5F導(dǎo)引導(dǎo)管到達(dá)位置后，接入壓力傳感 器；
[0045] 4)選擇單側(cè)左肺動(dòng)脈主干，將實(shí)施例1制備的血栓經(jīng)5F導(dǎo)引導(dǎo)管注入，每次注入 3mL大小的血栓，共注射三次，總體積9mL，造成單側(cè)肺動(dòng)脈栓塞。
[0046] 2、犬肺動(dòng)脈栓塞模型的評(píng)價(jià)
[0047] 1)栓塞部位肺動(dòng)脈造影：注栓后1小時(shí)、給藥后2小時(shí)進(jìn)行肺動(dòng)脈造影，評(píng)價(jià)肺動(dòng) 脈堵塞面積百分比；
[0048] 2)肺動(dòng)脈收縮壓：注栓后1小時(shí)、給藥后2小時(shí)檢測(cè)肺動(dòng)脈收縮壓。
[0049] 3、評(píng)價(jià)結(jié)果
[0050] 3· 1血栓形成DSA照影結(jié)果比較
[0051] 圖1中A顯影結(jié)果顯示，本法發(fā)明方法制備的血栓注入犬肺主動(dòng)脈后，形成的血管 栓塞呈規(guī)則的圓柱柱狀，且堵塞部分界限清晰；
[0052] 圖1中B為文獻(xiàn)（_陳永利等，"實(shí)驗(yàn)性急性血栓性肺栓塞動(dòng)物模型的建立"，天津 醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2003第9卷第1期）報(bào)道兔肺動(dòng)脈注栓后顯影結(jié)果，右肺上葉和部分中葉有 堵塞出現(xiàn)，堵塞部分血管顯影輪廓不清晰，注入的血栓形狀不規(guī)則；
[0053] 對(duì)比可知，本發(fā)明法制備的血栓形狀更規(guī)則，栓塊很集中，未彌漫分散，說(shuō)明本發(fā) 明法制備的血栓凝固效果好、成型效果佳，穩(wěn)定性好。
[0054] 3. 2肺栓塞模型藥效評(píng)價(jià)結(jié)果
[0055] 表1.犬肺動(dòng)脈堵塞面積百分比
[0057] 注：數(shù)據(jù)以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤表示^與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p〈0. 05)。
[0058] 表2.肺動(dòng)脈收縮壓變化
[0060] 注：數(shù)據(jù)以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤表示；
[0061] #與假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p〈0. 05) ^與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p〈0. 05)。
[0062] 由圖2、表1和表2可以看出：
[0063] 本發(fā)明方法制備的自體血栓植入犬肺動(dòng)脈1小時(shí)后，能形成穩(wěn)定的肺動(dòng)脈栓塞；
[0064] 犬肺動(dòng)脈栓塞造模成功后，給予溶栓藥物2小時(shí)，與模型對(duì)照組比較，肺動(dòng)脈堵塞 面積明顯減少；
[0065] 犬肺動(dòng)脈栓塞造模成功后，肺動(dòng)脈收縮壓明顯高于假手術(shù)組，給予溶栓藥物后2 小時(shí)后，肺動(dòng)脈收縮壓恢復(fù)至假手術(shù)組水平。
[0066] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，本發(fā)明方法制備的血栓凝固性好、成型佳、穩(wěn)定性好，可建立穩(wěn)定 的肺動(dòng)脈栓塞動(dòng)物模型，應(yīng)用于溶血栓藥物的篩選和藥效評(píng)價(jià)，應(yīng)用前景良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種血栓的制備方法，其特征在于：它包括如下步驟： (1) 取血液，加入凝血酶，凝血酶的量為血液的10~50/3倍U/mL，得混合液； (2) 將步驟（1)的混合液注入內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)塑料管中，封口，37°C放置30min，再置 于2~8°C放置12-16小時(shí)，即可。2. 權(quán)利要求1的方法制備的血栓。3. 權(quán)利要求2所述血栓在制備動(dòng)物栓塞模型中的用途。4. 一種肺動(dòng)脈栓塞模型的制備方法，其特征在于：它包括如下步驟： 1) 在動(dòng)物股靜脈穿刺，引入5F導(dǎo)管鞘后，插入5F導(dǎo)引導(dǎo)管，在導(dǎo)絲導(dǎo)引下超選入左肺 動(dòng)脈； 2) 選擇左肺動(dòng)脈主干，將權(quán)利要求2所述血栓經(jīng)5F導(dǎo)引導(dǎo)管注入，每次注入3mL血栓， 注射三次，造成肺動(dòng)脈栓塞。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：步驟1)中，所述穿刺的方法是Seldinger 法。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述1)，所述導(dǎo)絲時(shí)超硬親水導(dǎo)絲。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種血栓的制備方法，它包括如下步驟：(1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量為血液的10～50/3倍U/mL，得混合液；(2)將步驟(1)的混合液注入內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)塑料管中，封口，37℃放置30min，再置于2～8℃放置12-16小時(shí)，即可。本發(fā)明方法制備的血栓凝固性好、成型佳、穩(wěn)定性好，用于肺動(dòng)脈造影時(shí)，可視化程度高，更方便實(shí)時(shí)觀測(cè)及評(píng)判堵塞面積，應(yīng)用前景良好。
【IPC分類(lèi)】A61D1/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105326577
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510603386
【發(fā)明人】鐘治暉, 王欣, 張印兵, 葉雪飛
【申請(qǐng)人】四川康城生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年9月21日