一種重樓甾體皂苷復方藥物及其制備方法和應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種復方藥物及其制備方法和應用，更具體地說，本發(fā)明設(shè)及一種重 樓醬體皂巧復方藥物及其制備方法和應用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗腫瘤藥物研究多年來一直是世界藥學研究的熱點和重點。抗腫瘤化學藥物因毒 副作用大，治療的依從性差，而使其臨床應用受到很大限制，開發(fā)新的天然口服抗瘤藥是抗 腫瘤研究領(lǐng)域較重要的方向。
[0003] 經(jīng)檢索，中國專利CN200710038680. 6公開了一種醬體皂巧類化合物及其在提取 抗腫瘤藥物中的用途，從百合科天口冬屬植物小百部（AsparagusfilicinusBuch.-Ham) 中總皂巧部位提取活性物質(zhì)醬體皂巧類化合物并通過體外抗腫瘤活性篩選試驗證實其有 顯著抗腫瘤活性。中國專利CN200810059047.X公開了一種抗腫瘤作用的烏骨藤碳-21醬 體皂巧混合物。從中藥烏骨藤（Marsdeniatenacissima)中提取分離得到的具有抗腫瘤作 用的碳-21醬體巧類混合物，運種混合物主要包含有5種碳-21醬體巧類化合物，運5種化 合物分別為：通光藤巧A，通光藤巧B，通光藤巧C，通光藤巧D，MarsdenosideK。
[0004] 重樓，又名屯葉一支花。藥理實驗發(fā)現(xiàn)重樓皂巧具有止血、抑菌、抗微生物，調(diào)節(jié)免 疫及鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜等多種生理活性，曾有報道用于治療喉癌，迄今為止鮮見對重樓醬體皂巧 類化學活性成分抗腫瘤的報道。由于重樓所含成分復雜，部分成分含肝腎毒性。故提取純 化重樓中有效安全的抗瘤化合物成分對于臨床治療意義非凡。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]本發(fā)明旨在解決抗腫瘤研究領(lǐng)域常規(guī)化療藥物副作用較大，治療的依從性差的問 題，提供了一種重樓醬體皂巧復方藥物，它的制備方法化及在抗腫瘤上的應用。達到了高效 低毒，能特異性治療各種來源的腫瘤的目的。
[0006] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下： 一種重樓醬體皂巧復方藥物，其特征在于：包括活性成分PSI、PSII和PSV，其結(jié)構(gòu)為：PSI: Diosgenin-3-O-a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 2) - [a-L-ar曰binofuranosyl- (1 一 4)]-0 -D-邑Iucopyranoside; PSV： Dios邑enin-3-0-口一L-rhamnopyranosyl(I一2)-0 -D-邑Iucopyranoside ; PS II：Dios邑enin-S-O-曰-L-rhamnopyr曰nosyl- (I一4)-曰-L-rhamnopvr曰nosyl- (I一4)-[a -L-rhamnopyranosyl-(l一2)]-0-D-glucopyranosideD
[0007] 本發(fā)明提供的重樓醬體皂巧復方藥物的活性成分PSI、PSII和PSV的摩爾比例為： 1~8 :1~8:1~8。將PSI、PSII和PSV按摩爾比例混合，加入聚乙二醇400、明膠、甘油、單糖 漿、水，將其分劑量制備成軟膠囊。
[0008] 本發(fā)明提供的重樓醬體皂巧復方藥物的制備方法為：用50°/c^l00%的乙醇經(jīng)滲漉 提取重樓，得到提取液，經(jīng)石油酸脫脂、乙酸乙醋萃取、硅膠柱層析(氯仿-甲醇梯度洗脫)并 結(jié)合重結(jié)晶得到晶體A和晶體B。晶體A在固相介質(zhì)為十八烷基鍵合的反相硅膠色譜柱進 行高效液相色譜分離，55%~75%乙醇等度洗脫得到PSI和PSII，晶體B在固相介質(zhì)為十八燒 基鍵合的反相硅膠色譜柱進行高效液相色譜分離，55%~75%乙醇等度洗脫得到PSV;將PSI、 PSII和PSV按摩爾比例混合，將其分劑量制備成軟膠囊，得到重樓醬體皂巧復方藥物。
[0009] 本發(fā)明提供的重樓醬體皂巧復方藥物對來源于人宮頸癌細胞化Ski、人宮頸癌細 胞Si化、人宮頸癌細胞化La、人卵巢癌細胞SK0V3、人卵巢癌細胞肥Y、人卵巢癌細胞冊C-7、 人慢性髓系白血病細胞K-562、人急性骨髓細胞白血病細胞kasumi-1、人子宮內(nèi)膜癌細胞 肥C-1A、人膠質(zhì)瘤細胞U-87MG、人肝臟腫瘤細胞化pGz、人肺癌細胞A549、人腎臟腫瘤細胞 A498、人前列腺癌細胞DU-145、人乳腺癌細胞T-47D有生長抑制作用。
[0010] 本發(fā)明來源天然、屬于中成藥、有明確的抗瘤活性，毒副作用小，對于來源于內(nèi)胚 層，中胚層和外胚層的正常細胞的生長抑制很小、能特異性治療各種來源的腫瘤，適合工業(yè) 化生產(chǎn)，是潛在的抗瘤藥物資源。 W11] 如無特殊說明，本文所指PSI、PSII、PSV的比例均為摩爾比例。
【附圖說明】
[0012] 圖1是重樓皂巧復方藥物的活性成分PSI、PSII和PSV的提取分離流程圖。
【具體實施方式】 陽〇1引實施例1 提取PSI、PSII和PSV 重樓干燥根莖約15kg，粉碎，用50%乙醇室溫滲漉提取(共20倍藥材量），提取液 合并，減壓濃縮至無醇味，加水分散。水液用石油酸脫脂后，乙酸乙醋萃取。乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，并結(jié)合重結(jié)晶得晶體A和晶體B，晶體A和晶 體B分別進行高效液相色譜分離（55%乙醇等度洗脫)，晶體A分得化合物PSI和PSII，晶 體B分得化合物PSV。
[0014] 實施例2 提取PSI、PSII和PSV 重樓干燥根莖約15kg，粉碎，用70%乙醇室溫滲漉提取(共20倍藥材量），提取液 合并，減壓濃縮至無醇味，加水分散。水液用石油酸脫脂后，乙酸乙醋萃取。乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，并結(jié)合重結(jié)晶得晶體A和晶體B，晶體A和晶 體B分別進行高效液相色譜分離（60%乙醇等度洗脫)，晶體A分得化合物PSI(IlOmg)和 PSII(272mg)，晶體B分得化合物PSV(210mg)。 陽〇1引實施例3 提取PSI、PSII和PSV 重樓干燥根莖約15kg，粉碎，用90%乙醇室溫滲漉提取(共20倍藥材量），提取液 合并，減壓濃縮至無醇味，加水分散。水液用石油酸脫脂后，乙酸乙醋萃取。乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，并結(jié)合重結(jié)晶得晶體A和晶體B，晶體A和晶 體B分別進行高效液相色譜分離（75%乙醇等度洗脫)，晶體A分得化合物PSI和PSII，晶 體B分得化合物PSV。
[0016] 實施例4 取實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?提取的PSI、PSII和PSV，W2:2:1的摩爾比例混勻， 加入聚乙二醇400、明膠、甘油、單糖漿、7心將其分劑量制備成軟膠囊。
[0017] 實施例5 取實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?提取的PSI、PSII和PSV，W1:2:2的摩爾比例混勻， 加入聚乙二醇400、明膠、甘油、單糖漿、水，將其分劑量制備成軟膠囊。 陽〇1引實施例6 取實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?提取的PSI、PSII和PSV，W2:1:2的摩爾比例混勻， 加入聚乙二醇400、明膠、甘油、單糖漿、7心將其分劑量制備成軟膠囊。
[0019]實施例7 在抗腫瘤藥物的體外細胞毒性實驗中，W半數(shù)抑制率（I巧0)來表示醬體皂巧復方藥物 對不同組織來源的細胞的抗腫瘤作用。
實施例8 在抗腫瘤藥物的體外細胞毒性實驗中，W半數(shù)抑制率（I巧0)來表示醬體皂巧復方藥物 對不同組織來源的細胞的抗腫瘤作用。
陽OW實施例9 在抗腫瘤藥物的體外細胞毒性實驗中，W半數(shù)抑制率（I巧0)來表示醬體皂巧復方藥物 對不同組織來源的細胞的抗腫瘤作用。
【主權(quán)項】
1. 一種重樓留體皂苷復方藥物，其特征在于：包括活性成分PSI、PSII和PSV，其結(jié)構(gòu) 為： PSI： Diosgenin- 3 - 0 -α-L-rhamnopyranosy1 - (1一2) [α- L-arabinofuranosyl- (1一4)] -β-D-glucopyranoside; PSII:Diosgenin_3-〇-a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) -a-L-rhamnopvranosyl- (1 一 4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1 2)]-β-D-glucopyranoside； PS V : Diosgenin_3-〇-a-L-rhamnopyranosyl- (1 - 2 ) -β-D-glucopyranoside〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的重樓留體皂苷復方藥物，其特征在于：所述的PSI、PSII和 PSV的摩爾比例為：1~8 :1~8:1~8。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的重樓留體皂苷復方藥物的制備方法，其特征在于：用提取劑 經(jīng)滲漉提取重樓，得到提取液，經(jīng)脫脂、萃取、層析并結(jié)合重結(jié)晶得到晶體A和晶體B，晶體A 進行高效液相色譜分離得到PSI和PSII，晶體B進行高效液相色譜分離得到PSV;將PSI、 PSII和PSV按摩爾比例加入輔料制成制劑，得到重樓留體皂苷復方藥物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的重樓留體皂苷復方藥物的制備方法，其特征在于：所述的提 取劑為50°/『100%乙醇，脫脂劑為石油醚，萃取劑為乙酸乙酯，萃取部位經(jīng)硅膠柱層析，氯 仿-甲醇梯度洗脫，并結(jié)合重結(jié)晶得晶體A和晶體B。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的重樓留體皂苷復方藥物的制備方法，其特征在于：所述高效 液相色譜分離中所用的固相介質(zhì)為十八烷基鍵合的反相硅膠色譜柱；并用55%~75%乙醇等 度洗脫。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的重樓留體皂苷復方藥物在抗腫瘤中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種重樓甾體皂苷復方藥物及其制備方法和應用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了從天然活性藥物重樓（Paris？polyphylla)提取的甾體皂苷類化學活性成分PSI、PSII和PSV為有效成分的重樓甾體皂苷復方藥物。本發(fā)明還涉及該重樓甾體皂苷復方藥物的有效成分PSI、PSII和PSV的制備方法以及該重樓甾體皂苷復方藥物的應用。從重樓里提取出PSI、PSII和PSV，將其按摩爾比例混勻，加入植物油等輔料混合均勻后，將其分劑量制備成軟膠囊。該復方藥物毒副作用小，能特異性治療各種來源的腫瘤，適合工業(yè)化生產(chǎn)，是潛在的抗腫瘤藥物資源。
【IPC分類】A61P35/00, A61K36/896, A61K31/7048
【公開號】CN105343115
【申請?zhí)枴緾N201510829202
【發(fā)明人】肖雪, 白鵬, 王和, 肖超
【申請人】四川大學華西第二醫(yī)院
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月25日