重組人鈣調(diào)磷酸酶b亞基的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及蛋白領(lǐng)域，特別涉及重組人鈣調(diào)磷酸酶B亞基的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鈣調(diào)磷酸酶(Calcineurin，CN)是目前所知唯--種依賴Ca2VCaM(鈣調(diào)素）的蛋白 磷酸酶，由A，B亞基以1:1的比例組成。A亞基(CNA)是催化亞基，B亞基(CNB)是調(diào)節(jié)亞基。CN 在免疫激活通路中發(fā)揮重要作用，示T細胞活化的關(guān)鍵沒。CN作為大分子酶蛋白，易失活，不 穩(wěn)定，而CNB作為該酶的調(diào)節(jié)亞基，能促進CNA的活性，且相對分子質(zhì)量小，性質(zhì)穩(wěn)定。由研究 表明CNB能刺激T細胞和NK細胞增殖以及增強NK細胞的殺傷活性，增強巨噬細胞吞噬能力等 免疫功能，且重組人1丐調(diào)磷酸酶B亞基（Recombinant human Calcineurin B subunit, rhCNB)是開發(fā)中的基因工程創(chuàng)新腫瘤藥物。
[0003] 但目前未見rhCNB對肝癌細胞Bel-7402殺傷或抑制作用的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明提供重組人鈣調(diào)磷酸酶B亞基的應(yīng)用。本發(fā)明采用IVI S Kinetics小動物活體成像系統(tǒng)，研究注射用rhCNB對BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞Bel-7402 原位癌的治療作用，進一步考察受試物注射用rhCNB對特定類型腫瘤細胞的殺傷和(或)抑 制作用，探索受試物產(chǎn)生藥效作用的時效和量效關(guān)系，為藥物的有效性和其它毒理學相關(guān) 試驗提供依據(jù)。
[0005] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明提供了rhCNB在制備殺傷和/或抑制肝癌細胞Bel-7402的藥物中的應(yīng)用。 [0007]在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制肝癌細胞Bel-7402 的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥劑量為不少于I Omg/kg。
[0008] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制肝癌細胞Bel-7402 的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥劑量為I Omg/kg~160mg/kg。
[0009] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制肝癌細胞Bel-7402 的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥濃度為0.5mg/mL~2mg/mL。
[0010]在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制肝癌細胞Bel-7402 的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥方式為靜脈注射給藥;每日給藥1次，連續(xù)給藥15日或 者首次給藥劑量為l〇mg/kg，每3日提高1倍劑量遞增給藥，依次為I Omg/kg、20mg/kg、40mg/ kg、80mg/kg、160mg/kg。
[0011] 本發(fā)明還提供了rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞Bel-7402原位癌移 植瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞 Bel-7402原位癌移植瘤的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥劑量為不少于10mg/kg。
[0013] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞 Bel-7402原位癌移植瘤的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥劑量為lOmg/kg~160mg/kg。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞 Bel-7402原位癌移植瘤的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥濃度為0.5mg/mL~2mg/mL。
[0015] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞 Bel-7402原位癌移植瘤的藥物中的應(yīng)用中所述rhCNB的給藥方式為靜脈注射給藥;每日給 藥1次，連續(xù)給藥15日或者首次給藥劑量為10mg/kg，每3日提高1倍劑量遞增給藥，依次為 IOmg/kg、20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg。
[0016] 在實驗期間，除陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組動物以外，其余動物的一般癥 狀觀察和體重與溶媒對照組比較無明顯差異。連續(xù)給藥6~15次過程中，注射用rhCNB各劑 量給藥對腫瘤細胞增殖的控制與溶媒對照組比較均具有不同程度的統(tǒng)計學意義。
[0017]停止給藥后第7日檢測結(jié)果顯示：與溶媒對照組比較，G給藥組對腫瘤細胞增殖的 控制均具有顯著統(tǒng)計學意義，？〈〇.〇1，〇24給藥組具有統(tǒng)計學意義，？〈0.05。
[0018] 連續(xù)給藥6次后，注射用rhCNB 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg劑量給藥組對人肝癌細 胞Bel-7402實體瘤的生長均具有較好的抑制作用。在此后的給藥過程中檢測結(jié)果顯示，高、 中和遞增劑量組效果優(yōu)于低劑量給藥組，治療效果與注射用重組人白介素-2、羥喜樹堿陽 性對照相當。末次給藥后d7檢測結(jié)果表明，高劑量組對腫瘤細胞增殖的控制效果最佳(p 〈0.01)，優(yōu)于其它劑量組和陽性對照組，羥喜樹堿給藥組和遞增劑量組對腫瘤細胞增殖的 控制效果相當(P〈 0.05)。
【附圖說明】
[0019] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0020] 圖1示實驗各組腫瘤生物發(fā)光檢測數(shù)據(jù)(f);其中橫坐標"1~7"分別表示"給藥 前、首次給藥后(13、(16、(19、(112、(115和末次給藥后恢復(fù)期(17"；"6-注射用^^_高劑量組 (40mg/kg)" "Z-注射用rhCNB中劑量組（20mg/kg)"、"D-注射用rhCNB低劑量組（IOmg/ kg)"、DZ-注射用rhCNB劑量遞增組（10mg/kg420mg/kg440mg/kg480mg/kg4l60mg/kg， 10mg/kg為初始劑量，連續(xù)給藥3d提高一個劑量，以此類推)"；縱坐標為生物發(fā)光檢測強度； [0021 ]圖2示活體成像圖；
[0022]圖3示實驗組剖檢圖；
[0023]圖4示陽性對照組剖檢圖。
【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明公開了重組人鈣調(diào)磷酸酶B亞基的應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi) 容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員 來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施 例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和 應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0025]本發(fā)明依據(jù)"細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則"和"抗腫瘤藥物藥效 學指導(dǎo)原則"，采用IVIS Kinetics小動物活體成像系統(tǒng)，動態(tài)分析注射用rhCNB對BALB/c裸 小鼠荷人肝癌細胞Bel-7402原位癌的治療作用。首先建立BALB/c裸小鼠荷人肝癌細胞Bel-7402 皮下移植瘤模型 ，然后建立 BALB/c 裸小鼠 荷人肝癌細胞 Bel-7402 原位移植瘤模型 。取 建模成功的裸小鼠90只，按生物發(fā)光數(shù)值平均分為9個給藥組，包括:注射用rhCNB高劑量組 (給藥劑量為40mg/kg，給藥濃度為2mg/mL)、注射用rhCNB中劑量組(給藥劑量為20mg/kg，給 藥濃度為lmg/mL)、注射用rhCNB低劑量組(給藥劑量為10mg/kg，給藥濃度為0.5mg/mL)、注 射用rhCNB劑量遞增組（首次給藥劑量為10mg/kg，每3日提高1倍劑量，依次為10mg/kg、 20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg)、陽性對照注射用重組人白介素-2給藥組(給藥劑量 為16.4萬IU/kg，給藥濃度為8200IU/mL)、陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組(5mg/kg，給藥 濃度為〇. 25mg/mL)、陽性對照注射用順鉑低劑量給藥組（lmg/kg，給藥濃度為0.05mg/mL)、 陽性對照注射用羥喜樹堿給藥組(2mg/kg，給藥濃度為0.1mg/mL)和溶媒對照組。實驗各組 每日給藥1次，除陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組連續(xù)給藥5日外，其余各組連續(xù)給藥15 日。每次給藥前和給藥后對動物進行一般癥狀觀察。首次給藥前（當日）、首次給藥后每隔3 日和末次給藥后第7日分別用Caliper IVIS Kinetics小動物活體成像系統(tǒng)檢測1次，每次 檢測前對動物體重進行稱量。末次檢測結(jié)束后處死動物，大體剖檢，取出腫瘤接種器官(包 括腫瘤組織），進行病理檢查和細胞凋亡的免疫組化檢測。
[0026]結(jié)果在實驗期間，除陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組動物以外