較小，但載藥量大大增加了，所W后續(xù)試驗(yàn)中我們采取硫酸鏈霉素濃度 0.1 mg/ml來進(jìn)行。MPLA具有親水端和疏水端，在本實(shí)驗(yàn)方案下制備的微球其疏水端向內(nèi)，親 水端向外，因此所制備的MPLA微球比MPLA有更好的親水性，使其具有更好的生物相容性，在 人體植入材料方面能有更廣泛的應(yīng)用前景。
[0024] 具體實(shí)施例二 鐵表面SS-MPLA/PEI多層膜的構(gòu)建 綜上所述，本實(shí)驗(yàn)W鐵合金作為基材，通過表面接枝改性使得鐵合金表面氨基化，通過 表面接枝改性所得到的氨基層與鐵合金結(jié)合牢固不易脫落，經(jīng)過氨基化后使得材料表面帶 有較多的正電荷基團(tuán)，更利于后期的層層自組裝步驟。通過層層自組裝技術(shù)，在氨基化鐵表 面構(gòu)建多層膜，建立抗菌藥物硫酸鏈霉素緩釋系統(tǒng)，WMPLA微球和PEI分別作為聚陰、陽離 子，利用靜電吸附作用，SS-MPLA微球/PEI多層薄膜，通過接觸角間接判斷多層膜的形成。圖 2為鐵表面氨基化及進(jìn)一步層層自組裝過程示意圖。
[00巧]1、實(shí)驗(yàn)材料 去離子水;氨氧化鋼(分析純重慶川東化工有限公司）：丙酬(分析純重慶川東化工 有限公司）；異下醇（分析純成都市科龍化工試劑廠）；3-氨丙基S乙氧基硅烷（APTES Adamas Reagent CO ,ltd.);無水乙醇(分析純重慶川東化工有限公司）;硫酸鏈霉素(華北 制藥股份有限公司）：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽化DC Adamas Reagent CO, ltd.) ;N-^基班巧酷亞胺（NHS美國PIERCE公司）；聚乙締亞胺（PEI Mw=SOO美國 Sigma-Al化ich公司）；氯化鋼(分析純重慶川東化工有限公司）： 2、鐵表面SS-MPLA/PEI多層膜的構(gòu)建 (1) 鐵合金表面氨基化 將鐵材砂紙打磨拋光后，于丙酬溶液中超聲清洗;再置于lOmol/L化0田容液中浸泡6小 時(shí)，去離子水沖洗干燥;然后置于含有5wt%APTES的異下醇溶液中回流加熱化，溶液中冷卻 1化后;依次用甲苯，無水乙醇，去離子水各洗3次，烘干待用； (2) 多層SS-PPLA納米微球的組裝 A. 準(zhǔn)確稱取10.0 mg硫酸鏈霉素，溶于IOOmL去離子水中，將MPLA從真空干燥器中取出， 準(zhǔn)確稱量1 SmgMPLA，溶解于2.5mL丙酬中；將MPLA溶液于55化pm磁力攬拌下，逐滴加入到 1 OOmL硫酸鏈霉素溶液中，并在55化pm磁力攬拌下?lián)]發(fā)12h，得到SS-PPLA微球溶液備用； B. 在SS-MPLA溶液中按摩爾比N-徑基班巧酷亞胺(NHS) :1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基 碳二亞胺鹽酸鹽化DC):簇基=1:1:1的比例加入NHS和抓C活化SS-MPLA微球上的簇基，簇基 活化后的溶液為溶液A;PDLLA與MA的投料量比為10:1，所得MPLA上的MA接枝率為2.36%，所 W ISmgMPLA中MA含量為0.0036mmol簇基含量為0.0072mmol (-個(gè)MPLA上含有兩個(gè)簇基）， 所 W 加入邸 C(191.70)1.38mg、NHS(115.09)0.83mg; C. 稱取一定量聚乙締亞胺，溶于摩爾濃度為150 mM/L的化Cl溶液中，配制成5mg/mL 聚乙締亞胺溶液，為溶液B; D. 將氨基化后的鐵片固定在甩膠機(jī)上，在其表面滴加10化L溶液A，在60RMP條件下旋轉(zhuǎn) 80s后，再在3000RMP條件下旋轉(zhuǎn)40s，滴加旋轉(zhuǎn)重復(fù)S次，一共滴加30化L溶液A，取下鐵片 標(biāo)記為（SS-MPLA/PEI )0.5; E. 另取一塊鐵片重復(fù)步驟D后，再取10化L溶液B，滴加到鐵表面，在60RMP條件下旋轉(zhuǎn) 80s后，再在3000RMP條件下旋轉(zhuǎn)40s，取下鐵片標(biāo)記為(SS-MPLA/PEI)1 ; F. 重復(fù)步驟E后再滴加I(K)化溶液A，在60RMP條件下旋轉(zhuǎn)80s后，再在3000RMP條件下 旋轉(zhuǎn)40s，重復(fù)S次滴加溶液A且旋轉(zhuǎn);取下鐵片標(biāo)記為(SS-MPLA/PEI)i.5，W此方法不斷重 復(fù)直到制備(SS-MPLA/PEI) 0.日到（SS-MPLA/PEI) 9.0; G. 用接觸角測(cè)量?jī)x，測(cè)得不同膜層數(shù)的鐵表面接觸角，每個(gè)表面上取兩處測(cè)定接觸角， 得六個(gè)數(shù)據(jù)。
[00%] 3、接觸角檢測(cè) 接觸角是物體表面濕潤(rùn)程度的度量，若9<90°，則固體表面是親水的，即液體較易潤(rùn)濕 固體，其角越小，表示濕潤(rùn)性越好;若9〉90°，則固體表面是疏水性的，即液體不容易潤(rùn)濕固 體，容易在表面上移動(dòng)。
[0027]本實(shí)驗(yàn)測(cè)量了磨光的鐵表面，鐵表面氨基化后，W及用層層自組裝方式加載了SS-MPLA/PEI膜，從(SS-MPLA/PEI)0.5到（SS-MPLA/PEI)9.o共20個(gè)表面的接觸角，每個(gè)表面上取 兩處測(cè)定接觸角，得六個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值，偏差不大于百分之五。平均接觸角大小如表1所 /J、- O
[002引表1接觸角測(cè)量平均值
[0029] 由圖3鐵表面接觸角變化圖所示，與疏水性的鐵表面相比，鐵表面氨基化后使得其 表面富含-N此所W其親水性有了較大的提高，接觸角減小了近45%隨著膜層數(shù)的增加，鐵 合金表面的接觸角有改變。在N出/(SS-MPLA/PEI)i.5之前，接觸角逐漸減小。從第五層N此/ (SS-MPLA/PEI )2.〇開始接觸角在26°到15°之間呈現(xiàn)有規(guī)律的變化，當(dāng)最外層為SS-MPLA層 時(shí)，接觸角較小，膜表面呈現(xiàn)的親水性較小，當(dāng)最外層為PEI時(shí)接觸角相對(duì)較大，親水性較 弱。接觸角的交替變化證明了從NH2/(SS-MPLA/PEI)2.o開始，鐵合金表面已經(jīng)形成了全覆蓋 的、單層的SS-MPLA微球或PEI膜。
[0030] 綜上所述，通過接觸角測(cè)定能夠判定本實(shí)驗(yàn)成功的通過層層自組裝技術(shù)，W抓C活 化的SS-MPLA微球和PEI分別作為聚陰、陽離子，利用靜電吸附作用和抓C與PEI上的氨基反 應(yīng)形成的共價(jià)鍵，在氨基化鐵表面構(gòu)建起N出/(SS-MPLA/PEI )n多層膜。其中SS-MPLA微球，形 成第一層緩釋保護(hù);層層自組裝方式，將藥球夾在層中，既能增加載藥量，又能形成緩釋。在 本實(shí)驗(yàn)方案下制備的NH2/(SS-MPLA/PEI)n多層膜具有較好的親水性使其具有更好的生物相 容性，在人體植入材料方面能有更廣泛的應(yīng)用前景。
[0031] 具體實(shí)施例= 鐵合金表面抗菌膜的緩釋效果驗(yàn)證 1、實(shí)驗(yàn)材料 按照上述具體實(shí)施例二方法制備得到的鐵片表面畑2/ (SS-MPLA/陽I) 5; N出/(SS-MPLA/ 陽 1)10多層膜;憐酸鹽緩沖液(PBS，0.1M，pH=7.4):硫酸鐵錠（（NH4)2S04 ? Fe2(S〇4)3 ? 24出0 分析純重慶川東化工有限公司）；氨氧化鋼(分析純重慶川東化工有限公司）；濃硫酸酸 (分析純重慶川東化工有限公司）;去離子水。
[0032] 2、實(shí)驗(yàn)方法 將按上述具體實(shí)施例二方法制備的5個(gè)N此/(SS-MPLA/PEI)5鐵片，5個(gè)N此/(SS-MPLA/ PEI)5鐵片分別放入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，在10個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)皿中分別加入3ml，0.1 M的憐酸緩沖 液(pH=7.4)，蓋封，置于室溫下；在1，3，6，12，24，36，48，84，12化時(shí)間段內(nèi)，用移液管取出 3ml浸出液，同時(shí)加入3mL O.IM的憐酸緩沖液(pH=7.4);將取出液分別置于IOmL刻度的試 管中，各加入2mol/L化0田容液1. OmL，并于60°C水浴中加熱20min，冷卻至室溫，再分別加入 含有Iwt%硫酸鐵錠的硫酸溶液3. OmL，用去離子水定容IOmL，搖勻，測(cè)其在519. OOnm初的吸 收值。 3、結(jié)果分析 每組OD值除去一個(gè)最高值和一個(gè)最