一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，將大鼠隨機分為空白對照組，陽性對照15mg/kg萬艾可組和趕黃草三個劑量組0.5g生藥/kg、1.0g生藥/kg、2.0g生藥/kg，連續(xù)灌胃14d，進行試驗，測定趕黃草對大鼠交配能力、性器官重量、陰莖勃起功能、正常雄性大鼠精子的影響。本發(fā)明研究結(jié)果提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力，但三個劑量趕黃草連續(xù)灌胃28天，動物行為活動如常，一般情況良好。實驗各組動物交配能力、性器官指數(shù)、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯促進或抑制作用，與空白對照組比較未見明顯差異。因此，趕黃草對雄性大鼠正常性功能無明顯影響，長期應(yīng)用安全。
【專利說明】
一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于動物實驗領(lǐng)域，尤其涉及一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實 驗方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 趕黃草(Penthorum chinense Pursh)學(xué)名扯根菜，又名水楊柳、水澤蘭，為虎耳草 科(saxifraganceae)扯根菜屬扯根菜的地上部分，是四川於州古藺出產(chǎn)的一種苗家藥材。 始載于明代《救荒本草》，現(xiàn)載于《中藥大辭典》、《全國中草藥匯編》、《四川中藥志》、《湖南藥 物志》、《內(nèi)蒙古植物藥志》等。民間以全草入藥，性溫，味甘，無毒，具有清熱解毒、活血散瘀、 利水消腫、退黃、平肝的功效，可治經(jīng)閉、水腫、血崩、帶下、跌打損傷。現(xiàn)代研究表明趕黃草 內(nèi)含多種有效成份均對肝損傷具保護作用，并對甲肝、乙肝、慢性活動性肝炎具有一定的治 療作用，但民間流傳趕黃草有減弱男性性功能的副作用。本研究探討趕黃草對雄性大鼠正 常性功能的影響，為趕黃草在新食品原料的開發(fā)應(yīng)用，以及民間流言的科學(xué)與否提供實驗 依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，旨在 研究趕黃草對雄性大鼠正常性功能的影響。
[0004] 本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法將大鼠 隨機分為空白對照組，陽性對照15mg/kg萬艾可組和趕黃草三個劑量組0.5g生藥/kg、l .0g 生藥/kg、2.0g生藥/kg，連續(xù)灌胃14d，進行試驗，測定趕黃草對大鼠交配能力、性器官重量、 陰莖勃起功能、正常雄性大鼠精子的影響。
[0005] 進一步，趕黃草水提濃縮液的制備方法為：
[0006] 按《中國藥典》2015版有關(guān)最細粉的規(guī)范要求將趕黃草粉碎為125μπι〈粒徑<150μπι 的中藥最細粉；實驗時稱取lkg趕黃草粉，加蒸餾水10L，加熱至80~90°C，浸泡提取30~ 60min，過濾，收集浸泡提取液，殘渣加蒸餾水10L，加熱至80~90 °C浸泡提取30~60min，過 濾，合并浸泡提取液，將浸泡提取液在60~70°C減壓濃縮至0.5L得水提濃縮液，該水提濃縮 液濃度為:趕黃草粉2. Og/mL。
[0007] 進一步，趕黃草對正常雄性大鼠交配能力的影響的實驗方法為：
[0008] 步驟一、SD大鼠30只，雄性，體重180 ± 20g，按體質(zhì)量序隨機分為4組:空白對照組、 萬艾可對照組及趕黃草低、中、高三個劑量組，每日灌胃1次，連續(xù)給藥28d;
[0009] 步驟二、取30只雌性大鼠，體質(zhì)量180 ±20g，腹腔注射3 %戊巴比妥鈉溶液， 0.14mL/100g麻醉，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后連續(xù)3d肌肉注射青霉素2萬U/kg，術(shù)后2W分組實 驗，實驗前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黃體酮500ug/只；
[0010]步驟三、將雄性大鼠單獨放人籠中使其適應(yīng)環(huán)境5min，然后放人1只雌鼠，開始記 錄下列數(shù)據(jù)：自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間；20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背的動 作次數(shù);雄鼠自爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的時間；20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)舔 陰莖的次數(shù)；
[0011] 步驟四、對性器官重量的影響實驗結(jié)束后，用T-100型電子天平稱取小鼠體重，處 死動物，剖腹取睪丸和附睪，去盡筋膜，濾紙吸干臟器表面血污，用賽多利斯BS200S-WE1型 電子天平稱睪丸和附睪重量，計睪丸或附睪指數(shù)：
[0012]睪丸指數(shù)=睪丸重量(mg)/體重(g)
[0013] 附睪指數(shù)=附睪重量(mg)/體重(g)。
[0014] 進一步，對大鼠陰莖勃起功能的影響的實驗方法為：
[0015] 灌胃第28d，末次灌胃后lh，將4mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部，記錄刺激開始至陰 莖勃起時間和陰莖勃起持續(xù)時間。
[0016] 進一步，對正常雄性大鼠精子的影響的實驗方法為：
[0017] 灌胃第28d，取大鼠左側(cè)附睪，在附睪尾縱向劃一個小口，置于含10%動物血清的 3mL RPMI-1640培養(yǎng)基內(nèi)孵育15min，制備精子懸液，取少量精子懸液用培養(yǎng)基稀釋50倍，加 到血球計數(shù)板上，在2730 °C條件下用高倍鏡隨機觀察200個精子的活動狀態(tài)，并統(tǒng)計精子存 活率。
[0018] 進一步，給藥方法為：
[0019] 低劑量組:取趕黃草水提濃縮液100mL，加入1900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0020] 中劑量組：取趕黃草水提濃縮液100mL，加入900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0021] 高劑量組：取趕黃草水提濃縮液100mL，加入400mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0022] 萬艾可組：萬艾可壓成粉末并用生理鹽水配成濃度為1.5mg/mL的溶液，按lmL/ 100g體重灌胃。
[0023] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)陽性對照萬艾可明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期和射精潛伏期，增加捕 捉次數(shù)和射精次數(shù)，與空白對照比較，P<〇.05,提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力，說 明本研究方法可靠。但趕黃草連續(xù)灌胃28天，三個劑量組分別相當(dāng)于臨應(yīng)用量(O.lg生藥/ kg)的5倍、10倍和20倍，動物行為活動如常，一般情況良好。實驗各組動物交配能力、性器官 指數(shù)、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯促進或抑制作用，與空白對照組比較未見明顯差 異(P>0.05)。因此，趕黃草對雄性大鼠正常性功能無明顯影響，長期應(yīng)用安全。
【附圖說明】
[0024] 圖1是本發(fā)明實施例提供的趕黃草對正常雄性大鼠交配能力的影響的實驗方法流 程圖。
【具體實施方式】
[0025]為能進一步了解本發(fā)明的
【發(fā)明內(nèi)容】
、特點及功效，茲例舉以下實施例，并配合附圖 詳細說明如下。
[0026] 請參閱圖1:
[0027] 實驗動物，SD大鼠，體重180 ± 20g，雌雄各半，購自西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，生 產(chǎn)許可證號：SCXK(川）2013-17，使用許可證號：SCXK(川）2013-065。
[0028] 實驗環(huán)境，實驗在西南醫(yī)科大學(xué)SPF級實驗中心進行，動物為籠養(yǎng)（籠具容積為 20cmX39cmX 54cm)，每籠飼養(yǎng)同性別動物5只。基礎(chǔ)飼料為實驗鼠全價顆粒飼料，各組動物 常規(guī)喂飼，自由飲水?；\底墊料為刨花木肩，使用前經(jīng)消毒烘干;籠具經(jīng)消毒后使用。平均每 隔2日更換一次墊料。溫度:空調(diào)恒溫，約22-25°C。
[0029] 一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，將大鼠隨機分為空白對照 組，陽性對照15mg/kg萬艾可組和趕黃草三個劑量組0.5g生藥/kg、1.0g生藥/kg、2.0g生藥/ kg，連續(xù)灌胃14d，進行試驗，測定趕黃草對大鼠交配能力、性器官重量、陰莖勃起功能、正常 雄性大鼠精子的影響。
[0030] 進一步，趕黃草水提濃縮液的制備方法為：
[0031] 按《中國藥典》2015版有關(guān)最細粉的規(guī)范要求將趕黃草粉碎為125μπι〈粒徑<150μπι 的中藥最細粉；實驗時稱取lkg趕黃草粉，加蒸餾水10L，加熱至80~90°C，浸泡提取30~ 60min，過濾，收集浸泡提取液，殘渣加蒸餾水10L，加熱至80~90 °C浸泡提取30~60min，過 濾，合并浸泡提取液，將浸泡提取液在60~70°C減壓濃縮至0.5L得水提濃縮液，該水提濃縮 液濃度為:趕黃草粉2. Og/mL。
[0032] 進一步，趕黃草對正常雄性大鼠交配能力的影響的實驗方法為：
[0033] S101、SD大鼠30只，雄性，體重180 ± 20g，按體質(zhì)量序隨機分為4組：空白生理鹽水 對照組、15mg/kg萬艾可對照組及趕黃草低、中、高三個劑量組，每日灌胃1次，連續(xù)給藥28d; [0034] S102、取30只雌性大鼠，體質(zhì)量180±20g，腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液，0.14mL/ l〇〇g麻醉，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后連續(xù)3d肌肉注射青霉素2萬U/kg，術(shù)后2W分組實驗，實驗 前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黃體酮500ug/只；
[0035] S103、將雄性大鼠單獨放人籠中使其適應(yīng)環(huán)境5min，然后放人1只雌鼠，開始記錄 下列數(shù)據(jù)：自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間即捕捉潛伏期；20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠 或爬背的動作次數(shù)即捕捉次數(shù);雄鼠自爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的時間即射精潛伏期;20min 內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的次數(shù)即射精次數(shù)；
[0036] S104、對性器官重量的影響實驗結(jié)束后，用T-100型電子天平稱取小鼠體重，處死 動物，剖腹取睪丸和附睪，去盡筋膜，濾紙吸干臟器表面血污，用賽多利斯BS200S-WE1型電 子天平稱睪丸和附睪重量，計睪丸或附睪指數(shù)。
[0037]睪丸指數(shù)=睪丸重量(mg)/體重(g)
[0038]附睪指數(shù)=附睪重量(mg)/體重(g)。
[0039 ]進一步，對大鼠陰莖勃起功能的影響的實驗方法為：
[0040]灌胃第28d，末次灌胃后lh，將4mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部，記錄刺激開始至陰 莖勃起時間和陰莖勃起持續(xù)時間。
[0041 ]進一步，對正常雄性大鼠精子的影響的實驗方法為：
[0042]灌胃第28d，取大鼠左側(cè)附睪，在附睪尾縱向劃一個小口，置于含10%動物血清的 3mL RPMI-1640培養(yǎng)基內(nèi)孵育15min，制備精子懸液，取少量精子懸液用培養(yǎng)基稀釋50倍，加 到血球計數(shù)板上，在2730 °C條件下用高倍鏡隨機觀察200個精子的活動狀態(tài)，并統(tǒng)計精子存 活率。
[0043]進一步，給藥方法為：
[0044] 低劑量組:取趕黃草水提濃縮液100mL，加入1900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0045]中劑量組：取趕黃草水提濃縮液100mL，加入900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0046] 高劑量組：取趕黃草水提濃縮液100mL，加入400mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌 田 冃；
[0047] 萬艾可組：萬艾可壓成粉末并用生理鹽水配成濃度為1.5mg/mL的溶液，按lmL/ 100g體重灌胃。萬艾可，100mg/片，美國輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號20140708。
[0048]實驗結(jié)果
[0049] (1)-般情況試驗周期內(nèi)，空白對照組動物行為活動如常，一般情況良好。實驗組 動物灌胃趕黃草后，一般情況良好，除個別時間點某個動物體重、食量有所減少之外，在灌 胃后大鼠活動無明顯異常改變。與空白對照組比較，趕黃草低、中、高劑量組和陽性對照組 雄性大鼠灌胃給藥前后體重差異無顯著性(P>〇.05)，見表1。
[0050] 表1大鼠體重的變化盧土S)
[0051]
[0052] (2)對正常雄性大鼠交配能力的影響陽性對照組雄性大鼠捕捉潛伏期和射精潛伏 期明顯縮短，捕捉次數(shù)和射精次數(shù)明顯增加，與空白對照比較，P<〇.05,提示萬艾可能提高 雄性大鼠的交配能力。實驗組動物灌胃趕黃草后，交配能力正常，與空白對照組比較，差異 無著性(P>〇.〇5)，見表2。
[0053] 表2對大鼠交配能力的影響(夂±S)
[0054]
[0055] 注：與空白對照組比較，*P<0.05
[0056] (3)對雄性大鼠性器官的影響陽性對照組和趕黃草低、中、高劑量組睪丸指數(shù)和附 睪指數(shù)正常，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>〇.05)，見表3。
[0057] 表3對性器官重量的影響p±S)
[0058]
[0059] (4)對大鼠陰莖勃起功能的影響將4mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部，陽性對照組陰 莖勃起潛伏期縮短，勃起時間延長，與空白對照比較，P<〇.05,提示萬艾可能增強大鼠的勃 起功能。實驗組動物灌胃趕黃草后，陰莖勃起功能正常，與空白對照組比較，差異統(tǒng)計學(xué)意 義(Ρ>0·05)，見表 4。
[0060] 表4對陰莖勃起功能的影響(《±S):
[0061]
[0062] 注：與空白對照組比較，*P < 0 · 05
[0063] (5)對正常雄性大鼠精子的影響陽性對照組和趕黃草低、中、高劑量組大鼠精子存 活率正常，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>〇.05)，見表5。
[0064] 表5各組大鼠的精子存活率(《±S)
[0065]
[0066] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)陽性對照萬艾可明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期和射精潛伏期，增加捕 捉次數(shù)和射精次數(shù)，與空白對照比較，P<〇.05,提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力，說 明本研究方法可靠。但趕黃草連續(xù)灌胃28天，三個劑量組分別相當(dāng)于臨應(yīng)用量(O.lg生藥/ kg)的5倍、10倍和20倍，動物行為活動如常，一般情況良好。實驗各組動物交配能力、性器官 指數(shù)、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯促進或抑制作用，與空白對照組比較未見明顯差 異(P>0.05)。因此，趕黃草對雄性大鼠正常性功能無明顯影響，長期應(yīng)用安全。
[0067] 以上所述僅是對本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制， 凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所做的任何簡單修改，等同變化與修飾，均屬于 本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，所述趕黃草對雄 性大鼠正常性功能影響的實驗方法將大鼠隨機分為空白對照組，陽性對照15mg/kg萬艾可 組和趕黃草三個劑量組0.5g生藥/kg、1. Og生藥/kg、2. Og生藥/kg，連續(xù)灌胃14d，進行試驗， 測定趕黃草對大鼠交配能力、性器官重量、陰莖勃起功能、正常雄性大鼠精子的影響。2. 如權(quán)利要求1所述趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，趕黃 草水提濃縮液的制備方法為： 按《中國藥典》2015版有關(guān)最細粉的規(guī)范要求將趕黃草粉碎為125μπι〈粒徑<150μπι的中 藥最細粉;實驗時稱取lkg趕黃草粉，加蒸餾水10L，加熱至80~90°C，浸泡提取30~60min， 過濾，收集浸泡提取液，殘渣加蒸餾水10L，加熱至80~90 °C浸泡提取30~60min，過濾，合并 浸泡提取液，將浸泡提取液在60~70°C減壓濃縮至0.5L得水提濃縮液，該水提濃縮液濃度 為:趕黃草粉2. Og/mL。3. 如權(quán)利要求1所述趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，趕黃 草對正常雄性大鼠交配能力的影響的實驗方法為： 步驟一、SD大鼠30只，雄性，體重180 ± 20g，按體質(zhì)量序隨機分為4組:空白對照組、萬艾 可對照組及趕黃草低、中、高三個劑量組，每日灌胃1次，連續(xù)給藥28d; 步驟二、取30只雌性大鼠，體質(zhì)量180 ± 20g，腹腔注射3 %戊巴比妥鈉溶液，0.14mL/ l〇〇g麻醉，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后連續(xù)3d肌肉注射青霉素2萬U/kg，術(shù)后2W分組實驗，實驗 前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黃體酮500ug/只； 步驟三、將雄性大鼠單獨放人籠中使其適應(yīng)環(huán)境5min，然后放人1只雌鼠，開始記錄下 列數(shù)據(jù)：自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間；20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背的動作次 數(shù);雄鼠自爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的時間；20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖 的次數(shù)； 步驟四、對性器官重量的影響實驗結(jié)束后，用T-100型電子天平稱取小鼠體重，處死動 物，剖腹取睪丸和附睪，去盡筋膜，濾紙吸干臟器表面血污，用賽多利斯BS200S-WE1型電子 天平稱睪丸和附睪重量，計睪丸或附睪指數(shù)： 睪丸指數(shù)=睪丸重量(mg)/體重(g) 附睪指數(shù)=附睪重量(mg)/體重(g)。4. 如權(quán)利要求1所述趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，對大 鼠陰莖勃起功能的影響的實驗方法為： 灌胃第28d，末次灌胃后lh，將4mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部，記錄刺激開始至陰莖勃 起時間和陰莖勃起持續(xù)時間。5. 如權(quán)利要求1所述趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，對正 常雄性大鼠精子的影響的實驗方法為： 灌胃第28d，取大鼠左側(cè)附睪，在附睪尾縱向劃一個小口，置于含10%動物血清的3mL RPMI-1640培養(yǎng)基內(nèi)孵育15min，制備精子懸液，取少量精子懸液用培養(yǎng)基稀釋50倍，加到血 球計數(shù)板上，在2730°C條件下用高倍鏡隨機觀察200個精子的活動狀態(tài)，并統(tǒng)計精子存活 率。6. 如權(quán)利要求1所述趕黃草對雄性大鼠正常性功能影響的實驗方法，其特征在于，給藥 方法為： 低劑量組:取趕黃草水提濃縮液lOOmL，加入1900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌胃； 中劑量組:取趕黃草水提濃縮液l〇〇mL，加入900mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌胃； 高劑量組:取趕黃草水提濃縮液lOOmL，加入400mL雙蒸水，按0.5mL/100g體重灌胃； 萬艾可組：萬艾可壓成粉末并用生理鹽水配成濃度為1.5mg/mL的溶液，按lmL/100g體 重灌胃。
【文檔編號】A61K49/00GK105833297SQ201610353480
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年5月25日
【發(fā)明人】稅丕先, 劉明華, 李婷, 劉中飛, 孫琴, 朱燁
【申請人】西南醫(yī)科大學(xué)