Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有預(yù)防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在預(yù)防或治 療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學(xué)特點(diǎn)，表現(xiàn)為大量成纖維細(xì)胞增生和富含連接組織的細(xì)胞外基質(zhì)。是多種原因?qū)е乱?腺損傷修復(fù)的結(jié)果，近期發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細(xì)胞和多種細(xì)胞因子與胰腺纖維化有關(guān)，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性進(jìn)行了 評價，其具有抗胰腺纖維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%。
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué) 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Virosaine A的制備
[0011] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法 D
[0013] 實(shí)施例2Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(235mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Shdh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0015] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0016] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0019] 實(shí)施例3Virosaine A的0_(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0mmol)，碘化鉀（168mg，1 .Ommol)和無水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物III的淡棕色固體(123.2mg，71 % )。
[0021] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.90(s，lH)，4.04(s，lH)，3.59(s，lH)，3.50(s，2H)， 3.40(d，J=65.9Hz，lH)，2.64(s，4H)，2.54(s，2H)，2.31(s，4H)，2.22(s，lH)，1.62(s，2H)， 1.56(s，lH)，1.43(s，2H)，0.97(s，lH).
[0022] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.84(s)，106.72(s)，79.94(s)，74.33(s)，66.72(d， J=9.2Hz),54.45(s),54.16(s),45.25(s),44.20(s),35.56(s),25.86(s),21.87(s).
[0023] HRMS(ESI):m/z[M+H].calcd for Ci8H26N3〇4:348.1923;found:348.1927。
[0026] 實(shí)施例4Virosaine A的0_(咪唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0027] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5 ? Ommo 1)，碘化鉀（2 5 2mg，1 ? 5mmo 1)和咪唑（8 7 Omg，1 Ommo 1)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束 后將反應(yīng)液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:0.3，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物IV的淡棕色固體(144. lmg，71 % )。
[0028] XH NMR(500MHz,DMS0-d6)87.86(s,lH),7.12(s,lH),6.71(s,lH),5.99(s,lH), 4.09(s,lH),3.89(d,J=16.4Hz,2H),3.80(s,2H),3.58(s,lH),3.35(s,lH),2.31(s,lH), 1.68(s,lH),1.58(s,2H),1.44(s,2H).
[0029] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)13C 匪R(125MHz，Common 匪R Solvents)Sl71.82(s), 139.64(s),128.67(s),119.31(s),106.70(s),79.92(s),74.31(s),67.61(s),66.66(s), 44.20(s),43.75(s),35.52(s),25.85(s),21.86(s).
[0030] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci7H2〇N3〇4:330.1454;found:330.1458。
[0032 ]實(shí)施例5組合物抗胰腺纖維化活性 [0033] 1 材料
[0034] 1 ? 1動物Wistar大鼠，雄性，體重180-200g。
[0035] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0036] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的80mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的20mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0037] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0038] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 胰臟腺細(xì)胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0039] 2.2分組及給藥方法
[0040]模型大鼠隨機(jī)分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設(shè)空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0041] 2.3檢測指標(biāo)
[0042] 2.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時取胰臟稱重。
[0043] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取10011^樣本在水中勻漿，110°(：1(^11(：1中水解20小 時。HC1用氮?dú)鈸]發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的1M過碘酸混合。加1.75ml提取緩沖 液(5份甲苯:5份2-甲基-卜丙醇:2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相(0.6ml)與Ehrlich, s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，含量 以ug/g組織表示。
[0044] 2.3.3組織學(xué)檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0045] 3 結(jié)果
[0046] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數(shù)的影響
[0047] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計算其與體重的比值(胰臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見表1。組合物對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物III和化合物IV對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0048]表 1
[0050] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0051] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0052] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，對各組大鼠進(jìn)行肺部羥脯氨酸含量測定，結(jié)果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異。化合物III和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0053] 表 2
[0055] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0056] 3.3組織學(xué)檢查
[0057]實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖;標(biāo)本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0058]結(jié)果:模型組第60天可見胰導(dǎo)管周圍嚴(yán)重炎癥反應(yīng);嗜中粒細(xì)胞核淋巴細(xì)胞浸潤， 間質(zhì)水腫，出血以及偶見胰泡細(xì)胞壞死;胰泡細(xì)胞消失位置及胰泡間出現(xiàn)纖維化。
[0059] 組合物可減少炎癥反應(yīng)和纖維化。評分結(jié)果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0060] 表 3
[0062] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0063] 結(jié)論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實(shí)了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0064] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0065] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0066] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0067] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的羥脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的炎癥細(xì)胞浸潤升高。
【文檔編號】A61P1/18GK105853427SQ201610278424
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】蔣登旭
【申請人】鎮(zhèn)江瑪珂蕘生物醫(yī)藥科技有限公司