一種山楂葉黃酮的分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，所述分離純化方法為：提取過程：將山楂葉碾碎后轉(zhuǎn)移到燒瓶中，加入料液比為1:10?15g/ml的70?90%的乙醇溶液，置于60?90℃水浴鍋中回流1?3h，過濾并收集濾液。至少重復(fù)2次，合并濾液，揮干，得到粗提物；純化過程：用10?30%的乙醇溶液與乙醇溶液等量的乙酸乙酯對粗提物進行萃取，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物；將得到的純化中間產(chǎn)物溶于水并過濾后，將純化中間產(chǎn)物經(jīng)過AB?8或NKA?9規(guī)格的大孔樹脂進行吸附分離。所述山楂葉黃酮的分離純化方法操作簡單，提取量高、純度高，此外提取過程不需要特殊的儀器，成本低廉，使用安全，所述方法充分利用豐富的山楂葉資源提取藥用價值高的山楂葉黃酮，提高了山楂樹的經(jīng)濟價值。
【專利說明】
一種山楂葉黃酮的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及提取工藝技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種山楂葉黃酮的分離純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002 ]山楂為薔薇科山楂屬(Crataegus.L)植物，在我國具有悠久的保健與藥用歷史。山楂有重要的藥用價值，自古以來，就成為健脾開胃、消食化滯、活血化痰的良藥。山楂以果實作藥用，性微溫，味酸甘，入脾、胃、肝經(jīng)，有消食健胃、活血化淤、收斂止痢之功能。對肉積痰飲、痞滿吞酸、瀉痢腸風(fēng)、腰痛疝氣、產(chǎn)后兒枕痛、惡露不盡、小兒乳食停滯等，均有療效。自20世紀(jì)50年代，人們開始對山楂葉化學(xué)成分進行了研究，證實其含有大量的黃酮以及綠原酸、山楂酸、膽堿、揮發(fā)油等，而且其黃酮類物質(zhì)含量高達1.8%?2%，是果實含量的20倍?120倍。開發(fā)利用山楂葉、變廢為寶，既可充分利用我國豐富山楂葉資源，又可提高山楂樹的經(jīng)濟價值。
[0003]通過細(xì)胞藥理藥效實驗研究發(fā)現(xiàn)，植物黃酮類物質(zhì)已被證明對心血管疾病和糖尿病有療效。山楂葉嫩葉含有非常豐富的黃酮類物質(zhì)，而且這些山楂葉黃酮類具有很高的甜味，這些使得山楂葉嫩葉黃酮類提取物成為篩選糖尿病防治天然藥物的良好侯選對象。此夕卜，植物黃酮大多數(shù)具有顯著生理藥理活性，對一些常見病，多發(fā)病有重要的生理作用，如有抗氧化作用和清除自由基作用;抗癌、防癌作用;對心血管、心肌有益作用;對內(nèi)分泌系統(tǒng)作用。還對過敏、感染、高血壓和AIDS等疾病具有輔助治療的作用。目前，黃酮的提取和純化方法已有很大進展，但是常用的提純工藝無法從山楂葉中有效提取黃酮。
[0004]因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于進一步改進。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明在于提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，旨在解決目前無相應(yīng)技術(shù)能從山楂葉中有效分離純化黃酮。
[0006]—種山楂葉黃酮的分離純化方法，其中，所述方法為:
提取過程:將山楂葉碾碎后轉(zhuǎn)移到燒瓶中，加入料液比為I: 10-15g/ml的70-90%的乙醇溶液，置于60-90°C水浴鍋中回流l_3h，過濾并收集濾液。至少重復(fù)2次，合并濾液，揮干，得到粗提物；
純化過程:用10-30%的乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置，放置室溫，液體分層后分離乙酸乙酯層和乙醇層;再用乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物；
將得到的純化中間產(chǎn)物溶于水并過濾后，將純化中間產(chǎn)物經(jīng)過AB-8或NKA-9規(guī)格的大孔樹脂進行吸附分離。
[0007]所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其中，提取過程中加入料液比為1:12.5g/ml的乙醇溶液。
[0008]所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其中，所述提取過程中加入乙醇溶液的濃度為 80%。
[0009]所述的山楂葉黃酮的分離純化，其中，提取過程中，置于80°C水浴鍋中回流2h。
[0010]所述的山楂葉黃酮的分離純化，其中，所述純化過程中所用的乙醇溶液的濃度為20%。
[0011]所述的山楂葉黃酮的分離純化，其中，所述純化過程中加入料液比為1:8-12g/ml的乙醇溶液。
[0012]所述的山楂葉黃酮的分離純化，其中，所述用大孔吸附樹脂進行純化的方法具體為:按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:2-6的比例，向放置有處理好的樹脂燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖10s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。
[0013]所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其中，所述純化中間產(chǎn)物與大孔吸附樹脂的濕重比例為1: 4。
[0014]有益效果:本發(fā)明提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，所述山楂葉黃酮的提取和純化方法操作簡單，提取量高、純度高，此外提取過程不需要特殊的儀器，成本低廉，使用安全，所述方法充分利用豐富的山楂葉資源提取藥用價值高的山楂葉黃酮，提高了山楂樹的經(jīng)濟價值，拓寬了其應(yīng)用領(lǐng)域。
【具體實施方式】
[0015]本發(fā)明提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0016]本發(fā)明提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，所述提取方法為:
提取過程:
首先，將山楂葉碾碎后轉(zhuǎn)移到燒瓶中，加入料液比為1:1 O-15g/ml的70-90%的乙醇溶液，置于60-90°C水浴鍋中回流l_3h，過濾并收集濾液。至少重復(fù)2次，合并濾液，揮干，得到粗提物。
[0017]由于黃酮具易溶于乙醇，在乙醇溶液中溶解度高，萃取率也高。當(dāng)乙醇溶液的濃度為80%時，山楂葉黃酮的溶解度最強，提取效率最高。
[0018]在一定范圍內(nèi)，山楂葉黃酮的提取量隨乙醇溶液的量增加而提高，但是當(dāng)乙醇溶液的量過多時，山楂葉黃酮的提取量基本不再改變，此時過多的乙醇溶液會提高提取的成本，造成浪費，也加大了純化的難度。加入料液比為I: 10-15g/ml的乙醇溶液時，山楂葉黃酮的提取效率高，成本較低。優(yōu)選地，加入料液比為1: 12.5 g/ml的乙醇溶液時，山楂葉黃酮的提取效率最尚。
[0019]提取過程中，水浴溫度條件為60-90°C，水浴l_3h時，能成分提取山楂葉黃酮。水浴溫度條件為80 0C，水浴2h時，黃酮提取率最高，且黃酮活性受到影響小。
[0020]大孔樹脂預(yù)處理方法為:先用無水乙醇對大孔吸附樹脂進行浸泡0.5h，充分溶脹，傾倒掉上層乙醇，繼續(xù)用無水乙醇洗，期間不斷更換乙醇，洗至流出液不出現(xiàn)白色渾濁為止，再用蒸餾水洗，洗至無乙醇味。所述預(yù)處理方法可以高效除去樹脂中所含有的低聚物、填加劑等雜質(zhì)，避免這些雜質(zhì)影響大孔吸附樹脂對山楂葉黃酮的純化效率。
[0021]純化過程:用10%-30%乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置，放置室溫，液體分層后分離乙酸乙酯層和乙醇層;再用乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物。
[0022]優(yōu)選地，所述純化過程中所用的乙醇溶液的濃度為20%。黃酮在20%的乙醇溶液的溶解度最高，而黃酮不溶于乙酸乙酯。因此，用這種兩種溶液分離粗體無中黃酮與其他雜質(zhì)，純化效果好。
[0023]所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其中，所述純化過程中加入料液比為1:8_12g/ml的乙醇溶液。優(yōu)選的料液比為1:10g/ml，這種條件下，山楂葉黃酮的提取效率最高。
[0024]將得到的純化中間產(chǎn)物溶于水并過濾后，將純化中間產(chǎn)物經(jīng)過AB-8或NKA-9規(guī)格的大孔樹脂進行吸附分離。AB-8規(guī)格的樹脂對山楂葉黃酮的選擇吸附效果最好，能極大提高純化效率。
[0025]其中，所述用大孔吸附樹脂進行純化的方法具體為:按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約I: 2-6的比例，向放置有處理好的樹脂的燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖1s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。
[0026]較佳實施例中，純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:2-6時，大孔樹脂對山楂葉黃酮的吸附效果好，能最大程度的吸附溶液中的黃酮。優(yōu)選的，所述純化中間產(chǎn)物與大孔吸附樹脂的濕重比例為1: 4。
[0027]當(dāng)所述純化過程中采用20%乙醇溶液和蒸餾水對大孔樹脂進行洗脫，20%乙醇溶液和蒸餾水對樹脂上吸附的黃酮的系統(tǒng)效果最好，能最大程度的將黃酮洗脫。
[0028]用上述分離純化方法提取的山楂葉黃酮具有很強的α-葡萄糖苷酶抑制活性及自由基清除活性，具有很高的醫(yī)用價值，可用于制備糖尿病藥物、抗衰老藥物等。
[0029]現(xiàn)有的α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類以延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的口服降糖藥物。α-葡萄糖苷酶抑制劑是比較成熟的治療糖尿病藥物，已廣泛應(yīng)用于臨床。山楂葉黃酮提取物具有顯著抑制α-葡萄糖苷酶活性的功能，可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑，用于制備糖尿病藥物。其次，自由基是含有一個或多個未成對電子的原子、分子或離子，具有高度的化學(xué)反應(yīng)活性，自由基過多或清除過慢，會加速機體的衰老進程并誘發(fā)各種疾病。而黃酮類化合物具有清除自由基的功能，作用原理為:通過酚羥基可與自由基反應(yīng)，生成比較穩(wěn)定的半醌式自由基，從而終止了自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。因此，山楂葉黃酮提取物還可用于制備抗衰老藥物等。
[0030]實施例1
本發(fā)明提供的山楂葉黃酮的分離純化方法如下:
提取過程:稱取山楂葉原料，粉碎后移入圓底燒瓶，加入料液比為I: 12.5g/ml的80%乙醇溶液，置于75°C水浴鍋中回流2h，過濾并收集濾液。重復(fù)3次，合并濾液，揮干，得到粗提物。
[0031 ]純化過程:用料液比為1:10g/ml的20%乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置約lOmin，放置室溫，液體分層，用分液漏斗分離后分別得到乙酸乙酯層和乙醇層;再用1ml的乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物。
[0032]按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:4的比例，向放置有處理好的樹脂AB-8的燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖10s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用20%乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。
[0033]實驗結(jié)果:粗提物中山楂葉黃酮的提取率達19.49%，純度為67.23%。提取的山楂葉黃酮對于葡萄糖苷酶的抑制率為95.82%，DPPH自由基清除率為91.28%。
[0034]實施例2
本發(fā)明提供的山楂葉黃酮的分離純化方法如下:
提取過程:稱取山楂葉原料40g，粉碎后移入圓底燒瓶，加入料液比為1:10g/ml的70%乙醇溶液，置于60°C水浴鍋中回流lh，過濾并收集濾液。重復(fù)4次，合并濾液，揮干，得到粗提物。
[0035]純化過程:用料液比為1:8g/ml的20%乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置約lOmin，放置室溫，液體分層，用分液漏斗分離后分別得到乙酸乙酯層和乙醇層;再用1ml的乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物。
[0036]按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:2的比例，向放置有處理好的樹脂NKA-9的燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖1s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用20%乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。
[0037]實驗結(jié)果:粗提物中山楂葉黃酮的提取率達18.32%，純度為65.40%。提取的山楂葉黃酮對于葡萄糖苷酶的抑制率為94.91%，DPPH自由基清除率為91.05%。
[0038]實施例3
本發(fā)明提供的山楂葉黃酮的分離純化方法如下:
提取過程:稱取山楂葉原料，粉碎后移入圓底燒瓶，加入料液比為I: 15g/ml的90%乙醇溶液，置于90 V水浴鍋中回流3h，過濾并收集濾液。重復(fù)2次，合并濾液，揮干，得到粗提物。
[0039]純化過程:用料液比為1:12g/ml的20%乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置約lOmin，放置室溫，液體分層，用分液漏斗分離后分別得到乙酸乙酯層和乙醇層;再用1ml的乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物。
[0040]按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:6的比例，向放置有處理好的樹脂AB-8的燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖10s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用20%乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。[0041 ]實驗結(jié)果:粗提物中山楂葉黃酮的提取率達18.56%，純度為66.72%。提取的山楂葉黃酮對于葡萄糖苷酶的抑制率為94.56%，DPPH自由基清除率為90.75%。
[0042]本發(fā)明提供一種山楂葉黃酮的分離純化方法，所述山楂葉黃酮的提取和純化方法操作簡單，提取量高、純度高，此外提取過程不需要特殊的儀器，成本低廉，使用安全，所述方法充分利用豐富的山楂葉資源提取藥用價值高的山楂葉黃酮，提高了山楂樹的經(jīng)濟價值，拓寬了其應(yīng)用領(lǐng)域。
[0043]應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述方法為: 提取過程:將山楂葉碾碎后轉(zhuǎn)移到燒瓶中，加入料液比為I: 10-15g/ml的70-90%的乙醇溶液，置于60-90°C水浴鍋中回流l_3h，過濾并收集濾液;至少重復(fù)2次，合并濾液，揮干，得到粗提物； 純化過程:用10-30%的乙醇溶液將山楂葉黃酮粗提物溶解后，加入與乙醇溶液等量的乙酸乙酯后靜置，放置室溫，液體分層后分離乙酸乙酯層和乙醇層;再用乙酸乙酯萃取乙醇層，分離后將乙醇層揮干，得到干燥的純化中間產(chǎn)物； 將得到的純化中間產(chǎn)物溶于水并過濾后，將純化中間產(chǎn)物經(jīng)過AB-8或NKA-9規(guī)格的大孔樹脂進行吸附分離。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，提取過程中加入料液比為1: 12.5g/ml的乙醇溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述提取過程中加入乙醇溶液的濃度為80%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，提取過程中，置于80°C水浴鍋中回流2h。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述純化過程中所用的乙醇溶液的濃度為20%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述純化過程中加入料液比為1:8-12g/ml的乙醇溶液。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述用大孔吸附樹脂進行純化的方法具體為:按照純化中間產(chǎn)物:樹脂濕重約1:2-6的比例，向放置有處理好的樹脂燒杯中加入純化中間產(chǎn)物，每隔5min振搖10s，持續(xù)2h;然后靜置24h，使其達到飽和吸附，傾倒出洗脫液，再將大孔樹脂分別用乙醇和蒸餾水洗脫約3-4次，過濾得到水提物，進行干燥。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的山楂葉黃酮的分離純化方法，其特征在于，所述純化中間產(chǎn)物與大孔吸附樹脂的濕重比例為1:4。
【文檔編號】A61P3/10GK105853534SQ201610356829
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月26日
【發(fā)明人】董華強, 侯毅
【申請人】佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院