一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，冰片和載藥納米粒的重量比為1~5：5~100，冰片和載藥納米粒組合物被制成口服制劑、注射劑或滴鼻劑。冰片可促進(jìn)載藥納米?？邕^血腦屏障進(jìn)入細(xì)胞，從而增加載藥納米粒在腦內(nèi)細(xì)胞的攝取作用，增強(qiáng)藥物治療作用。
【專利說明】
一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，特別是腦部腫瘤和神經(jīng)退行性疾病，發(fā)病率及死亡率持續(xù)上升。藥物轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要受微血管或脈絡(luò)叢構(gòu)成的特有解剖學(xué)屏障的限制。其中血-腦屏障(BBB)導(dǎo)致100%的大分子藥物和98%的小分子藥物都難以進(jìn)入腦部發(fā)揮療效，嚴(yán)重影響腦部疾病的藥物治療，因此讓藥物跨過BBB傳遞入腦是治療腦部疾病的關(guān)鍵。
[0003]納米制劑因其具有緩釋性、靶向性等優(yōu)點(diǎn)，成為近年來藥物制劑領(lǐng)域中研究的熱點(diǎn)，而中藥納米制劑也得到了國內(nèi)外科研工作者的廣泛關(guān)注。藥物成分經(jīng)納米系統(tǒng)包載或表面靶向修飾，可通過提高藥物的穩(wěn)定性和長循環(huán)特性，或利用腦靶向技術(shù)，如穿膜肽、主動靶向分子、吸附以及磁靶向介導(dǎo)等策略，以及通過電磁脈沖、超聲波等手段暫時破壞BBB結(jié)構(gòu)完整性等，可加強(qiáng)納米粒的腦靶向性和穿BBB功能，使納米遞藥系統(tǒng)有效跨越BBB，從而提高藥物在腦內(nèi)濃度和多種腦部疾病的治療效果。目前，聚合物納米粒、固體脂質(zhì)納米粒、脂質(zhì)體、膠束、納米混懸劑等多種納米劑型均被用于腦膠質(zhì)瘤、腦缺血再灌注損傷和阿爾茨海默癥等腦部疾病治療方面，但如何提高載藥納米粒的入腦效率依然是腦部疾病治療亟需解決的重要問題。
[0004]芳香類中藥可開竅醒神，用于治療閉證神昏。冰片是中藥“芳香開竅”藥的代表，最早見于《名醫(yī)別錄》，其性微寒，味辛苦，歸心、肺、脾經(jīng)，是龍腦香Dipterocarpus tubinatusGaertn.f.的樹脂和揮發(fā)油加工品提取獲得的小分子脂溶性單萜類物質(zhì)?！恫萁?jīng)疏》稱冰片“性善走竅，無往不達(dá)”，《本草衍義》指出冰片“獨(dú)行則勢弱，佐使則有功”。古代醫(yī)家常將冰片作為佐使藥配伍其他藥味使用，在安宮牛黃丸、紫雪丹等許多用于心血管中成藥中都作為“藥引”而廣泛使用，僅2015年版《中國藥典》收載的含有冰片的中成藥就多達(dá)20余種，尤其在心腦血管疾病治療中應(yīng)用廣泛，其有效性和安全性己得到了臨床驗(yàn)證。研究表明，冰片“芳香走竄”極易透過胃腸粘膜及BBB，還可促進(jìn)多種藥物的入腦量。
[0005]目前尚未見冰片與載藥納米粒制成的組合物用于治療腦部疾病的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對于現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，可有效解決藥物分子很難跨過血腦屏障被腦部吸收問題，從而提尚載藥納米粒的腦內(nèi)遞送效率。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用。
[0008]進(jìn)一步地，所述冰片和載藥納米粒的的重量比為I?5:5?100。
[0009]進(jìn)一步地，所述載藥納米粒包括納米載體和藥物；
進(jìn)一步地，所述納米載體為脂質(zhì)體、膠束、微乳液、凝膠、聚合物納米粒中的一種或幾種。
[0010]進(jìn)一步地，所述藥物為用于治療腦部疾病的藥物。
[0011]進(jìn)一步地，所述藥物為單一品種或多種品種等重量混合。
[0012]進(jìn)一步地，所述冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部腫瘤、阿爾茨海默癥或腦中風(fēng)中的應(yīng)用。
[0013]進(jìn)一步地，冰片和載藥納米粒的組合物被制成口服制劑、注射劑或滴鼻劑。
[0014]本發(fā)明提供的一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，具有以下幾種有益效果:
(I)冰片與載藥納米粒組合使用，其中冰片可促進(jìn)載藥納米粒進(jìn)入細(xì)胞，從而可增加載藥納米粒在細(xì)胞內(nèi)的攝取作用，進(jìn)而增強(qiáng)藥物的治療作用，為治療腦部疾病提供一種新的用藥方式。
[0015](2)冰片為白色結(jié)晶狀粉末或片狀結(jié)晶，氣清香，味辛、涼，具有開竅醒神、清熱止痛的功效，用于熱病神昏、驚厥、咽喉腫痛等，本發(fā)明將其與載藥納米粒組合，可充分發(fā)揮冰片自身藥效的同時，還對載藥納米粒中所負(fù)載的用于治療腦部疾病的藥物起到協(xié)同作用，對腦部疾病治療起到關(guān)鍵性作用。
[0016](3)該發(fā)明將冰片與載藥納米粒組合使用，無任何毒副作用，療效快，可減輕人們的痛苦。
【附圖說明】
[0017]圖1為人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒的體外藥物釋放圖。
[0018]圖2為冰片聯(lián)合人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒增強(qiáng)抗腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖作用結(jié)果圖。
[0019]圖3為冰片聯(lián)合人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒增強(qiáng)細(xì)胞攝取作用結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)施例1
將藥物5g、大豆卵磷脂5g、膽固醇5g和2g維生素E溶于350mL 二氯甲烷和甲醇以體積比為5:2的混合溶液中，在45°C、50 r/min下減壓旋轉(zhuǎn)蒸去溶劑，得到干膜，室溫下抽真空2h，再以氮?dú)獯蹈赡?0min后加入20mL pH=5.0的檸檬酸緩沖液水化干膜至水化完全，然后在冰水浴中用高剪切分散儀進(jìn)行處理(9000r/min)，每次剪切持續(xù)30 S，間隔I min，重復(fù)3次，最后冷凍干燥至干粉即得載藥納米粒。
[0021]取冰片5g、載藥納米粒50g混合，制成口服制劑，用于治療腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦中風(fēng)、阿爾茨海默癥。
[0022]病例:
患者，男，69歲，癥狀為面癱、右邊嘴角歪斜，語言溝通不流利，右邊手腳無力，長期服用藥物，無法根治。
[0023]治療:將治療腦部疾病的藥物(大黃、澤瀉、山藥、地龍、黨參分別粉碎，過100目，然后按等重量混合，乙醇提取后減壓干燥)與納米載體結(jié)合，按上述操作進(jìn)行制備載藥納米粒，然后再與冰片聯(lián)合，治療該患者，口服，每天3次，每次3~5g，2?3個月后，嘴角正常，面部也正常，語言溝通良好，手腳也恢復(fù)力氣。
[0024]實(shí)施例2
將藥物5g、兩親性聚合物材料50g混勻，共溶于5mL丙酮溶液中使其溶解，然后滴加至20mL蒸餾水中，攪拌揮發(fā)30min，倒入透析袋中，封口，置于500mL蒸餾水中，透析24h后，將形成的膠束溶液移出，并過0.22μπι微孔濾膜，以除去不溶性藥物，冷凍干燥至干粉；
其中兩親性聚合物材料由以下方法制備得到:將疏水性單體甲基丙烯酸甲酯和親水性單體甲基丙烯酸無規(guī)以摩爾比為3:2共聚制得。
[0025]取冰片5g、載藥納米粒25g混合，制成口服制劑，用于治療腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦中風(fēng)、阿爾茨海默癥。
[0026]病例:
患者，男，72歲，癥狀為表情淡漠、反應(yīng)遲鈍、言語障礙、思維障礙、生活無法自理、夜間吵鬧、隨地大小便。
[0027]治療:將治療腦部疾病的藥物(石菖蒲、三七、黨參、桂枝、茯苓、白芍分別粉碎，過100目，然后按等重量混合，乙醇提取后減壓干燥)與納米載體結(jié)合，按上述操作進(jìn)行制備載藥納米粒，然后再與冰片聯(lián)合，治療該患者，口服，每天3次，每次3~5g，連續(xù)使用6個月，以上癥狀均得到明顯改善。
[0028]實(shí)施例3
稱取PLGA聚合物25mg，混勻后溶于500mL乙酸乙酯中構(gòu)成油相，將5mg藥物溶于蒸餾水中，制得12mg/mL的藥物溶液，然后在冰水浴超聲震蕩條件下將藥物溶液分散到油相中制得初乳，其中藥物溶液與油相體積比為1:5;然后將初乳注入到濃度為10mg/mL的poloxameri88水溶液形成初級復(fù)乳，最后在40°C減壓旋蒸至乙酸乙酯揮發(fā)完全后，洗滌，冷凍干燥得干粉。
[0029]取冰片5g、載藥納米粒SOg混合，用于治療腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦中風(fēng)、阿爾茨海默癥。
[0030]患者，女，71歲，癥狀為右側(cè)肢體癱瘓，不能翻身，舌頭發(fā)硬，說話口齒不清。
[0031]治療:將治療腦部疾病的藥物(大黃、當(dāng)歸、獨(dú)活、甘草、黨參、葛根分別粉碎，過100目，然后按等重量混合后，乙醇提取并減壓干燥)與納米載體結(jié)合，按上述操作進(jìn)行制備載藥納米粒，然后再與冰片聯(lián)合，治療該患者，口服，每天3次，每次3~5g，連續(xù)治療3個月后，右側(cè)可以屈伸活動，能緩慢翻身，言語可以聽清，繼續(xù)治療6個月后，以上癥狀消失，恢復(fù)正常人的生活。
[0032]實(shí)施例4
1、人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒的制備
將7.5mg蛋黃卵磷脂與2.5mg PEG-DSPE混合，溶于2mL無水乙醇中，然后緩慢滴加入20mL 60°C水中，持續(xù)攪拌1min得到脂質(zhì)水溶液(水相)；另將15mg PLGA材料與5mg人參皂苷Rh2混合，溶于2mL乙腈中(油相)，超聲波處理Imin后緩慢滴入上述脂質(zhì)水溶液中，油相與水相的體積比為1:5，然后冰浴下超聲處理20min，再持續(xù)攪拌30min后采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓除去殘余有機(jī)溶劑，最后通過0.45μπι的濾膜除去未包載藥物，再過0.22μπι濾膜滅菌，得均勻的泛乳光納米溶液即人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒。
[0033]2、脂質(zhì)聚合物納米粒的表征
(I)形態(tài)觀察:取上述脂質(zhì)聚合物納米粒溶液(微孔膜過濾前后)，用蒸餾水稀釋至lg/L后滴于銅網(wǎng)上，靜置1min后用濾紙片吸干，再滴加質(zhì)量濃度為2.0%磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染5min，自然揮干，用透射電子顯微鏡觀察粒子形態(tài)。
[0034]微孔膜過濾前的液態(tài)體系帶淡藍(lán)色乳光，略渾濁，有肉眼可見的細(xì)小微粒懸于其中，靜置2h內(nèi)均析出細(xì)小沉淀，振搖后不能均勻分散，而經(jīng)0.22μπι微孔濾膜過濾后液態(tài)體系為泛淡藍(lán)色乳光的、均勻的半透明膠體溶液，無肉眼可見顆粒，靜置72h后無沉淀析出。
[0035]通過透射電鏡可觀察到載藥微粒成規(guī)則的球形，表面光滑，大小均勻，納米粒之間基本無黏連。
[0036](2)粒徑及分布:采用激光度粒度測定儀測定納米粒平均粒徑和Zeta電位，平均粒徑為(96.4±3.6)11111，？01為0.24±0.06，電位為(-8.6±0.6)11^0
[0037](3)包封率與載藥量測定:分別取0.45μπι濾過前后的脂質(zhì)聚合物納米粒溶液，加入3倍體積量甲醇，超聲破乳，并禍旋Imin，13000r/min的轉(zhuǎn)速下離心1min，取上清液，進(jìn)樣，HPLC法測定藥物含量，進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
[0038]包封率=過濾后納米藥物濃度/過濾前納米藥物濃度X100%；
載藥率=過濾后納米藥物濃度八過濾前納米藥物濃度+材料濃度)X100%。
[0039]測定結(jié)果:包封率為(77.3 ± 2.5)%，載藥率為(7.2 ± 0.2)%。
[0040](4)體外釋藥:用透析法測定脂質(zhì)聚合物納米粒中包載藥物的體外釋藥特性。將分子截留量3500的透析袋煮沸并置于蒸餾水中浸泡超過24h，取2mL脂質(zhì)聚合物納米粒溶液置于透析袋中，兩端扎緊，置于37°C 40mL含0.1%吐溫的PBS液中，并以300r/min磁力攪拌器不斷攪拌，分別于0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、48、72、9611吸取透析袋外部溶液11^，每次補(bǔ)充等量的接收液。HPLC法測定不同時間點(diǎn)接收液中藥物濃度，計(jì)算藥物的含量，推算得累積釋藥百分?jǐn)?shù)，結(jié)果見圖1。
[0041]由圖1可知，人參皂苷Rh2從游離溶液中快速釋放，在24h之內(nèi)即達(dá)到釋放平衡，總釋藥量達(dá)92%，而載藥脂質(zhì)聚合物納米粒中的釋放則更加緩慢，其釋放曲線可分為2個階段:突釋階段和穩(wěn)定釋放階段，在突釋階段中，微粒釋放藥量在24h內(nèi)達(dá)到39.64%，隨后在穩(wěn)定釋放階段持續(xù)時間最長，釋藥量保持穩(wěn)定增長，96h累計(jì)釋藥量達(dá)到52.42%，并呈逐漸上升趨勢。
[0042]3、冰片與人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒聯(lián)合的抗腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖作用
分別取生長狀態(tài)良好并處于對數(shù)生長期的人源膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，用0.25%胰蛋白酶Η)ΤΑ液消化，并反復(fù)吹打制備成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液的濃度調(diào)整為5 X 14個/mL接種于96孔板，每孔體積100 yL，然后將培養(yǎng)板移入培養(yǎng)箱中，37°C、5%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng)24 h至細(xì)胞貼壁后，吸去培養(yǎng)基。采用無血清培基分別稀釋人參皂苷Rh2、負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒、負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒與ΙΟμΜ冰片的組合物至不同藥物濃度，隨后按濃度梯度在各孔中分別加入稀釋后樣品各lOOyL，空白培養(yǎng)基作為對照，每組重復(fù)6孔，培養(yǎng)24h后吸去培養(yǎng)基，各孔加入10yL培養(yǎng)基稀釋的MTT溶液，孵育4h，再加入10yL DMSO溶解生成的甲瓚，通過酶標(biāo)儀(570nm)檢測細(xì)胞增殖活力，結(jié)果見圖2。
[0043]由圖2可知，人參皂苷Rh2經(jīng)脂質(zhì)聚合物納米粒包載后，其抗細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)，說明納米載藥體系有利于增加藥物抗腫瘤作用；而負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒與冰片合用后，其抗細(xì)胞增殖作用更強(qiáng)，說明冰片與載藥納米粒的組合物可增加藥物的抗腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用。
[0044]4、冰片與人參皂苷Rh2脂質(zhì)聚合物納米粒聯(lián)合促細(xì)胞攝取作用
將U251細(xì)胞以細(xì)胞數(shù)I X 16個/cm2接種于6孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h后棄培養(yǎng)液。取游離人參皂苷Rh2、負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒、負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒與IΟμΜ冰片的組合物，稀釋至1.5mL加入到實(shí)驗(yàn)孔中孵育，分別與1、2、4h后取出細(xì)胞，用PBS洗細(xì)胞3次，向孔中加入胰酶消化細(xì)胞，用PBS分散為單細(xì)胞懸液，采用超聲破碎細(xì)胞，提取細(xì)胞中人參皂苷Rh2并測定其含量，結(jié)果見圖3。
[0045]由圖3可知，人參皂苷Rh2經(jīng)脂質(zhì)聚合物納米粒包載后，可促使藥物的細(xì)胞攝取作用，而負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒與冰片合用后，其細(xì)胞攝取能力更強(qiáng)，說明冰片可促使納米藥物進(jìn)入細(xì)胞，負(fù)載人參皂苷Rh2的脂質(zhì)聚合物納米粒與冰片合用后可增加藥物腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述冰片和載藥納米粒的重量比為I?5: 5?100。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述載藥納米粒包括納米載體和藥物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述納米載體為脂質(zhì)體、膠束、微乳液、凝膠、聚合物納米粒中的一種或幾種。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為用于治療腦部疾病的藥物。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為單一品種或多種品種等重量混合。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，所述冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部腫瘤、阿爾茨海默癥或腦中風(fēng)中的應(yīng)用。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冰片和載藥納米粒的組合物在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于，冰片和載藥納米粒的組合物被制成口服制劑、注射劑或滴鼻劑。
【文檔編號】A61K45/06GK105879036SQ201610229623
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月14日
【發(fā)明人】鄒亮, 符佳, 李維, 牛蓓, 楊林, 章津銘, 譚茂玲, 白雪, 雨田, 郭曉恒
【申請人】成都大學(xué)