一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法
【專利摘要】一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。本發(fā)明是為了解決診療試劑不能夠在時(shí)間、空間和劑量上的可控制釋放的問(wèn)題。方法：一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核；二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子；三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅；四、核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾氨基；五、去除表面活性劑形成介孔；六、在核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾客體分子；七、負(fù)載鹽酸阿霉素及孔道封堵。本發(fā)明用于癌癥治療中，實(shí)現(xiàn)抗癌藥物在腫瘤組織定時(shí)和定量的可控釋放。
【專利說(shuō)明】
一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著納米醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，設(shè)計(jì)與構(gòu)建智能響應(yīng)型納米分子閥癌癥治療平臺(tái)，將抗癌藥物無(wú)泄漏地輸送到癌組織，在病灶部位富集并可控釋放，已成為納米醫(yī)藥科學(xué)重要發(fā)展方向。目前，用來(lái)打開(kāi)分子閥的外界刺激智能響應(yīng)方式主要有:PH、氧化還原、酶、光、熱等幾種。其中pH、氧化還原、酶響應(yīng)為體內(nèi)控釋，響應(yīng)靈敏度差，難以精確調(diào)控。光響應(yīng)體系因具有體外控釋、響應(yīng)靈敏性高、并可通過(guò)光波長(zhǎng)、功率及光照時(shí)間精確調(diào)控等特點(diǎn)而備受青睞。但可見(jiàn)光和紫外光因其穿透力弱及對(duì)細(xì)胞組織可能造成損傷等因素，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。
[0003]近紅外光(波長(zhǎng)700?900nm)因?yàn)榫哂休^深的生物組織穿透能力及極低的的生物光照損傷，特別適合構(gòu)建光響應(yīng)型藥物控釋體系。稀土摻雜上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米粒子，能在近紅外光的激發(fā)下，產(chǎn)生多波段紫外/可見(jiàn)/近紅外區(qū)域的發(fā)射，(其中某一波段光用于成像，其它波段光用于治療)，因此在納米醫(yī)藥科學(xué)光化學(xué)反應(yīng)中發(fā)揮了重要角色。目前基于上轉(zhuǎn)換納米材料/介孔二氧化娃核-殼結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)藥物控釋平臺(tái)是癌癥納米治療技術(shù)的一個(gè)新研究熱點(diǎn)，它以上轉(zhuǎn)換納米粒子為核，外層包覆介孔二氧化硅為殼的核殼結(jié)構(gòu)，介孔內(nèi)部用于裝載藥物。在近紅外光的照射下，被細(xì)胞吞噬的上轉(zhuǎn)換納米粒子吸收生物穿透力強(qiáng)能量低的近紅外光并上轉(zhuǎn)換為能量高的紫外光誘導(dǎo)激發(fā)各種光化學(xué)反應(yīng)，從而達(dá)到癌癥治療的目的?；谏限D(zhuǎn)換納米材料/介孔二氧化娃核-殼結(jié)構(gòu)近紅外光響應(yīng)的藥物控釋優(yōu)點(diǎn)在于:實(shí)現(xiàn)了光的深層組織穿透光控激發(fā)，避免了紫外光直接照射穿透深度淺，對(duì)生物組織傷害大的缺點(diǎn)。
[0004]智能響應(yīng)型納米分子閥癌癥診療平臺(tái)的核心關(guān)鍵技術(shù)在于藥物控釋閥門開(kāi)關(guān)的設(shè)計(jì)。大環(huán)分子主體由于可以與某些客體分子組裝成具有更大體積的超分子“主體-客體”絡(luò)合物，封堵介孔二氧化硅孔道(直徑2?4nm)，因此可作為智能響應(yīng)型藥物控釋體系的超分子閥門。這些閥門在介孔二氧化硅載藥平臺(tái)實(shí)施藥物控釋的機(jī)制主要有兩種:1、利用PH、酶、谷胱甘肽等作用導(dǎo)致連接主體或客體與硅球之間的化學(xué)鍵斷裂，堵口絡(luò)合物離去，閥門打開(kāi);2、利用熱，pH和競(jìng)爭(zhēng)試劑或光響應(yīng)分離主客體，絡(luò)合物解離，納米閥門打開(kāi)。
[0005]其中光響應(yīng)的絡(luò)合物解離分子閥門由于是外部刺激響應(yīng)，適應(yīng)各種環(huán)境，具有較大優(yōu)勢(shì)與潛能。但一方面目前對(duì)這種控釋方式的研究相對(duì)較少，另一方面少量文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)大多基于紫外或可見(jiàn)光誘導(dǎo)偶氮苯分子的異構(gòu)化來(lái)實(shí)現(xiàn)。紫外或可見(jiàn)光由于生物組織穿透性問(wèn)題應(yīng)用受到嚴(yán)重制約。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明是為了解決診療試劑不能夠在時(shí)間、空間和劑量上的可控制釋放的問(wèn)題，而提供了一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。
[0007]—種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進(jìn)行的:
[0008]一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核；
[0009]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化乾中加入油酸、十八稀和步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護(hù)和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為160°C的條件下攪拌1.5h，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，然后在氬氣保護(hù)和溫度為50°C的條件下攪拌0.5h，再將溫度從50 V升溫至80 V，并在氬氣保護(hù)和溫度為80 V的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從80°C升溫至300°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為300°C的條件下磁力攪拌1.5h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進(jìn)行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子，然后將包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img:(0.03?0.04)mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.09?0.1 )mL;所述六水合氯化乾與步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核中NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子的摩爾比為1: (I?3);所述混合液A是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (8?12)mL;所述六水合氯化釔與混合液A中氟化銨的摩爾比為1:4；
[0010]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與步驟二得到的核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌2h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為8?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動(dòng)栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整pH后的超聲溶液中加入濃度為20%的四乙氧基硅烷乙醇溶液后，在溫度為35°C的條件下反應(yīng)24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟三中所述的十六烷基三甲基溴化錢的質(zhì)量與水的體積比為Img: 0.04mL;步驟三中所述的十六燒基三甲基溴化錢的質(zhì)量與核殼結(jié)構(gòu)的氟化乾鈉納米粒子分散液的體積比為Img: (0.001?0.005)mL；
[0011]四、核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾氨基:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到無(wú)水甲苯中超聲分散后再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下加熱回流24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無(wú)水甲苯的體積比為Img: 0.1mL;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積比為Img:(0.0004?0.0008)mL；
[0012]五、去除表面活性劑形成介孔:將表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散在甲醇溶液中，然后加入濃鹽酸，在溫度為700C的條件下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與甲醇溶液的體積比為Img: 0.1mL;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與濃鹽酸的體積比為I m g:(0.0 O O O 5?0.0002)mL；
[0013]六、在核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾客體分子:將外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到二氯甲烷中超聲分散后，依次加入I，2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯和三乙胺，在室溫下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與二氯甲燒的體積比為I m g: 0.1 m L;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與1,2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯的質(zhì)量比為1: (0.5?0.7);步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與三乙胺的體積比為Img:(0.001?0.005)mL;
[0014]七、負(fù)載鹽酸阿霉素及孔道封堵:將修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到鹽酸阿霉素水溶液中超聲分散，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌60h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，固體物采用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與鹽酸阿霉素水溶液的體積比為Img: (0.12?0.15)mL;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1: (40?60)。
[0015]本發(fā)明制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的應(yīng)用是將近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體用于體外近紅外光控制藥物釋放研究中，具體使用方法如下:稱量2.0mg載藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體，放置到比色皿的底腳處，緩慢加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)，保證納米粒子在角落集中靜止，之后用激光對(duì)準(zhǔn)粒子照射60min，每隔1min利用紫外可見(jiàn)光譜儀監(jiān)測(cè)藥物鹽酸阿霉素的濃度。
[0016]稱量2.0mg載藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體，放置到比色皿的底腳處，緩慢加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)，保證納米粒子在角落集中靜止，之后用激光對(duì)準(zhǔn)粒子以1min為周期進(jìn)行間歇照射釋藥，紫外可見(jiàn)光譜儀監(jiān)測(cè)藥物鹽酸阿霉素的濃度。
[0017]工作原理:
[0018]本發(fā)明利用核殼結(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米粒子/介孔二氧化硅作為藥物控釋平臺(tái)，二氧化硅介孔孔道用于負(fù)載抗癌藥物，介孔口處修飾近紅外光響應(yīng)超分子閥門，利用生物穿透能力強(qiáng)的近紅外光操控分子閥門，實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物的光控釋。光控機(jī)理為:主體環(huán)糊精(大環(huán)分子)疏水內(nèi)腔與疏水客體分子(D N Q)通過(guò)疏水作用形成絡(luò)合物實(shí)現(xiàn)對(duì)介孔口的封堵；在980nm近紅外光作用下，上轉(zhuǎn)換納米材料核將近紅外光轉(zhuǎn)變?yōu)樽贤夤饧敖t外光，誘導(dǎo)超分子閥門中DNQ的光化學(xué)重排反應(yīng)，生成親水產(chǎn)物茚羧酸，導(dǎo)致客體疏水性變?yōu)橛H水性，主客體原來(lái)基于疏水的絡(luò)合作用被破壞，主體分子環(huán)糊精離去，開(kāi)關(guān)打開(kāi)，從而達(dá)到光控藥物釋放的目的。另外，近紅外光具有生物體穿透能力強(qiáng)、對(duì)細(xì)胞損傷小，可以體外實(shí)施精確控釋等優(yōu)點(diǎn)，利用近紅外光源結(jié)合上轉(zhuǎn)換材料實(shí)現(xiàn)智能響應(yīng)最佳方案之一。
[0019]本發(fā)明的有益效果:
[0020]1、本發(fā)明設(shè)計(jì)與構(gòu)建了基于上轉(zhuǎn)換納米粒子/介孔二氧化娃核-殼結(jié)構(gòu)的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥平臺(tái)。目前，近紅外光激發(fā)下，充分利用上轉(zhuǎn)換材料多發(fā)射熒光帶激發(fā)超分子閥門實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程控制藥物釋放的文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道。
[0021]2、超分子閥門的打開(kāi)首次基于近紅外光誘導(dǎo)客體的重排反應(yīng)，利用客體水溶性的突變破壞絡(luò)合作用使主體離去，這一過(guò)程避免了載藥平臺(tái)與刺激源的直接接觸。
[0022]3、利用近紅外光具有的穿透深、低毒性的特點(diǎn)，結(jié)合上轉(zhuǎn)換納米粒子搭建具有近紅外響應(yīng)的藥物控釋平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)定時(shí)、定位的光控藥物釋放，其精度高，操作簡(jiǎn)單。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)應(yīng)用于癌癥診療平臺(tái)的理想粒子直徑應(yīng)在10nm以下，以避免粒子隨血液體內(nèi)循環(huán)時(shí)堵塞毛細(xì)血管。本平臺(tái)設(shè)計(jì)制備的上轉(zhuǎn)換納米粒子/介孔二氧化娃核-殼納米粒子直徑約70nm。
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的透射電鏡圖；
[0024]圖2為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的氮?dú)馕摳角€；
[0025]圖3為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的介孔孔徑分布曲線；
[0026]圖4為980nm近紅外激光激發(fā)下實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的上轉(zhuǎn)換熒光發(fā)射光譜圖；
[0027]圖5為980nm近紅外光照射前后實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的紫外可見(jiàn)吸收光譜;其中I為光照前，2為光照后；
[0028]圖6為不同功率近紅外光照射時(shí)的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液PH值變化曲線，其中I為未光照的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液PH值變化曲線，2為近紅外光功率為lW/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線，3為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線，4為近紅外光功率為3W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線；
[0029]圖7為不同功率近紅外光照射時(shí)的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放效果圖，其中a為未光照的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，b為近紅外光功率為lW/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，c為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，d為近紅外光功率為3W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，I為光照停止位置；
[0030]圖8為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)對(duì)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體間歇性照射時(shí)的藥物模型釋放效果圖，其中I為近紅外光源關(guān)，2為近紅外光源開(kāi)。
【具體實(shí)施方式】
[0031 ]【具體實(shí)施方式】一:本實(shí)施方式的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進(jìn)行的:
[0032]一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核；
[0033]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化乾中加入油酸、十八稀和步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護(hù)和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為160°C的條件下攪拌1.5h，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，然后在氬氣保護(hù)和溫度為50°C的條件下攪拌0.5h，再將溫度從50 V升溫至80 V，并在氬氣保護(hù)和溫度為80 V的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從80°C升溫至300°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為300°C的條件下磁力攪拌1.5h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進(jìn)行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子，然后將包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img:(0.03?0.04)mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.09?0.1 )mL;所述六水合氯化乾與步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核中NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子的摩爾比為1: (I?3);所述混合液A是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (8?12)mL;所述六水合氯化釔與混合液A中氟化銨的摩爾比為1:4；
[0034]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與步驟二得到的核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌2h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為8?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動(dòng)栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整pH后的超聲溶液中加入濃度為20%的四乙氧基硅烷乙醇溶液后，在溫度為35°C的條件下反應(yīng)24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟三中所述的十六烷基三甲基溴化錢的質(zhì)量與水的體積比為Img: 0.04mL;步驟三中所述的十六燒基三甲基溴化錢的質(zhì)量與核殼結(jié)構(gòu)的氟化乾鈉納米粒子分散液的體積比為Img: (0.001?0.005)mL；
[0035]四、核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾氨基:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到無(wú)水甲苯中超聲分散后再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下加熱回流24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無(wú)水甲苯的體積比為Img: 0.1mL;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積比為Img:(0.0004?0.0008)mL；
[0036]五、去除表面活性劑形成介孔:將表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散在甲醇溶液中，然后加入濃鹽酸，在溫度為700C的條件下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與甲醇溶液的體積比為Img: 0.1mL;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與濃鹽酸的體積比為I m g: (0.0 O O O 5?
0.0002)mL；
[0037]六、在核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾客體分子:將外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到二氯甲烷中超聲分散后，依次加入I，2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯和三乙胺，在室溫下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與二氯甲燒的體積比為I m g: 0.1 m L;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與1,2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯的質(zhì)量比為1: (0.5?0.7);步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與三乙胺的體積比為Img:(0.001?0.005)mL;
[0038]七、負(fù)載鹽酸阿霉素及孔道封堵:將修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到鹽酸阿霉素水溶液中超聲分散，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌60h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，固體物采用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與鹽酸阿霉素水溶液的體積比為Img: (0.12?0.15)mL;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1: (40?60)。
[0039]本實(shí)施方式中步驟二中將溫度從50°C升溫至80°C，在溫度為80°C的條件下保持30min中的目的是將甲醇蒸出。
[0040]本實(shí)施方式中步驟三中在溫度為80°C的條件下加熱0.5h待超聲溶液透明的目的是將環(huán)己烷蒸出。
[0041 ]本實(shí)施方式步驟七中在室溫下攪拌24h的目的是保證藥物分子能充分進(jìn)入介孔孔道。
[0042]本實(shí)施方式步驟七中持續(xù)在室溫下攪拌60h的目的是保證主體分子與客體分子能夠通過(guò)疏水作用充分絡(luò)合。
[0043]本實(shí)施方式中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為10000r/min。
[0044]【具體實(shí)施方式】二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一不同的是:步驟二中所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img: 0.035mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一相同。
[0045]【具體實(shí)施方式】三:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一或二不同的是:步驟二中所述六水合氯化釔的質(zhì)量與十八烯的體積比為lmg:0.098mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一或二相同。
[0046]【具體實(shí)施方式】四:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至三之一不同的是:步驟二中所述六水合氯化釔與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的摩爾比為1: 2。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】
一至三之一相同。
[0047]【具體實(shí)施方式】五:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至四之一不同的是:步驟三中所述的十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液的體積比為Img: 0.003mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至四之一相同。
[0048]【具體實(shí)施方式】六:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至五之一不同的是:步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與3-氨丙基三乙氧基娃燒的體積比為Img: 0.0006mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至五之一相同。
[0049]【具體實(shí)施方式】七:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至六之一不同的是:步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與濃鹽酸的體積比為Img: 0.0OOlmL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至六之一相同。
[0050]【具體實(shí)施方式】八:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至七之一不同的是:步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與1,2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯的質(zhì)量比為1:
0.68。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至七之一相同。
[0051]【具體實(shí)施方式】九:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至八之一不同的是:步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與三乙胺的體積比為Img: 0.003mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至八之一相同。
[0052]【具體實(shí)施方式】十:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至九之一不同的是:步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1:50。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至九之一相同。
[0053 ]通過(guò)以下實(shí)施例驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果:
[0054]實(shí)施例一:本實(shí)施例的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進(jìn)行的:
[0055]一、將六水合氯化乾(210.8mg,0.695mmoL)、六水合氯化鐿(116.2mg,0.3mmoL)和六水合氯化鎊(1.9mg，0.005mmoL)加入到三口圓底燒瓶中，然后加入6mL油酸和5mL十八?。辉谕鍤獾那闆r下，將混合物攪拌并加熱到160°C保持30min，隨后再加入1mL十八烯，混合物在溫度為160°C的條件下攪拌1.5h后自然冷卻至50°C ;向混合物中加入1mL甲醇溶解的氟化錢(148.2mg，4mmoL)與氫氧化鈉(10mg，2.5mmoL)溶液，保持50 °C攪拌30min成核，之后在溫度為80°C的條件下將甲醇蒸去，將混合物在20min內(nèi)加熱至300°C并在磁力攪拌下保持Ih，反應(yīng)結(jié)束后，將混合物自然降至室溫，加入乙醇，產(chǎn)物用離心機(jī)在10000轉(zhuǎn)下離心，用乙醇清洗固體，此過(guò)程反復(fù)3次;最后得到的NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散到1mL環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子核；
[0056]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化乾(151.7mg,0.5mmoL)中加入6mL油酸、15mL十八烯和上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護(hù)和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為160°C的條件下攪拌1.5h，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，然后在氬氣保護(hù)和溫度為50°C的條件下攪拌0.5h，再將溫度從50°C升溫至80°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為80°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從80°C升溫至300°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為3000C的條件下磁力攪拌1.5h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進(jìn)行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子，然后將包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子分散于1mL環(huán)己烷中，得到核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液;所述混合液A是將氟化銨(74.1mg，2mmoI)和氫氧化鈉(50mg，1.25mmoI)溶解在5mL甲醇中；所述六水合氯化I乙與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核中NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子的摩爾比為1:(1?3);
[0057]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將200mg十六烷基三甲基溴化銨加入到SmL水中配成溶液，將溶液與600yL核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌2h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為8?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動(dòng)栗以
0.5mL/h的速度向調(diào)整pH后的超聲溶液中加入1.5mL濃度為20%的四乙氧基硅烷乙醇溶液后，在溫度為35°C的條件下反應(yīng)24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0058]四、核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾氨基:將10mg核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到1mL無(wú)水甲苯中超聲分散后再加入60yL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下加熱回流24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0059]五、去除表面活性劑形成介孔:將10mg表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散在1mL甲醇溶液中，然后加入10yL濃鹽酸，在溫度為70°C的條件下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0060]六、在核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾客體分子:將10mg外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到1mL二氯甲烷中超聲分散后，依次加入68mg I，2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯和0.3mL三乙胺，在室溫下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0061]七、負(fù)載鹽酸阿霉素及孔道封堵:將30mg修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入至lj4mL濃度為0.5mg/mL的鹽酸阿霉素水溶液中超聲分散，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入150mgi3-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌60h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，固體物采用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體。
[0062]圖1為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的透射電鏡圖；從圖1可以看出近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體具有尺寸均一的核-殼結(jié)構(gòu)，呈單分散狀態(tài)，介孔硅球包覆之后納米粒子的尺寸為70nm左右。
[0063]圖2為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的氮?dú)馕摳角€；圖3為實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的介孔孔徑分布曲線;從圖2和圖3可以看出氮?dú)馕矫摳礁邏簠^(qū)滯后環(huán)的存在表明合成材料為介孔，孔徑在2.3nm左右。介孔可用來(lái)裝載藥物，表面可進(jìn)一步修飾超分子閥門，用于近紅外光控制藥物釋放。
[0064]圖4為980nm近紅外激光激發(fā)下實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的上轉(zhuǎn)換熒光發(fā)射光譜圖；從圖中可以看出在980nm激光器的激發(fā)下，近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體產(chǎn)生三個(gè)波段的發(fā)光，分別為365nm紫外光，450nm可見(jiàn)光及800nm近紅外光，其中紫外光與近紅外光用于激發(fā)超分子閥門對(duì)藥物進(jìn)行控制釋放。
[0065]圖5為980nm近紅外光照射前后實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的紫外可見(jiàn)吸收光譜;其中I為光照前，2為光照后;從圖中可以看出在980nm近紅外光照射后，近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體在330nm和399nm處紫外可見(jiàn)吸收峰幾乎消失，證明上轉(zhuǎn)換納米核的紫外或近紅外發(fā)射熒光誘導(dǎo)核-殼納米粒子表面客體分子發(fā)生了光化學(xué)反應(yīng)。
[0066]圖6為不同功率近紅外光照射時(shí)的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液PH值變化曲線，其中I為未光照的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液PH值變化曲線，2為近紅外光功率為lW/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線，3為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線，4為近紅外光功率為3W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液pH值變化曲線;從圖中可以看出在980nm近紅外光照射后，近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體水溶液PH值明顯下降，證明上轉(zhuǎn)換納米核的紫外或近紅外發(fā)射熒光誘導(dǎo)其表面的DNQ分子發(fā)生了光化學(xué)反應(yīng)，生成了親水產(chǎn)物茚羧酸，客體的水溶性由疏水變?yōu)橛H水;相同時(shí)間內(nèi)，激光功率越大，PH值變化越大，表明DNQ分子光化學(xué)反應(yīng)速率隨激光功率增加而增大。
[0067]實(shí)施例二:3.0Wcnf2功率密度近紅外激光連續(xù)60min照射下的光控藥物釋放:
[0068 ]稱量2.0mg實(shí)施例一得到的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體，放置到比色皿的底腳處，緩慢加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)，保證納米粒子在角落集中靜止，之后用激光對(duì)準(zhǔn)粒子進(jìn)行連續(xù)照射60min，利用紫外可見(jiàn)光譜儀跟蹤測(cè)試藥物鹽酸阿霉素的濃度，得到累計(jì)釋放量隨時(shí)間的變化曲線，證明光控藥物釋放。同樣稱取2.0mg實(shí)施例一得到的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體在黑暗中進(jìn)行空白放藥實(shí)驗(yàn)，加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH = 7.4)，紫外可見(jiàn)光譜儀取相同的時(shí)間間隔測(cè)量藥物的濃度變化。
[0069]實(shí)施例三:2Wcm—2功率密度近紅外激光連續(xù)60min照射下的光控藥物釋放:操作過(guò)程與實(shí)施例二相同。
[0070]圖7為不同功率近紅外光照射時(shí)的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放效果圖，其中a為未光照的實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，b為近紅外光功率為lW/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，c為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，d為近紅外光功率為3W/cm2時(shí)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，I為光照停止位置;從圖中可以看出沒(méi)有光照的對(duì)照組(曲線a)，基本不放藥，說(shuō)明超分子閥門有效封堵孔道。當(dāng)用近紅外激光照射后，所有曲線顯示累計(jì)藥物釋放，增加明顯，說(shuō)明近紅外光照射下，客體光化學(xué)重排反應(yīng)發(fā)生導(dǎo)致β-環(huán)糊精離去，超分子閥門打開(kāi)，藥物釋放。隨著激光功率密度的增大，藥物的釋放量逐漸增加，表明該體系可通過(guò)調(diào)節(jié)激光功率大小，精確地調(diào)控藥物的釋放。當(dāng)光照停止后，藥物釋放也隨之停止(圖7中60min后)，表明該體系對(duì)光源的開(kāi)關(guān)有著敏感的響應(yīng)。[0071 ]實(shí)施例四:2.0Wcnf2功率密度近紅外激光1min周期間歇照射下的光控藥物釋放:
[0072]稱量2.0mg實(shí)施例一得到的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體，放置到比色皿的底腳處，緩慢加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)，保證納米粒子在角落集中靜止，之后用激光對(duì)準(zhǔn)粒子以1min為周期進(jìn)行間歇照射釋藥，紫外可見(jiàn)光譜儀監(jiān)測(cè)藥物鹽酸阿霉素的濃度。
[0073]圖8為近紅外光功率為2W/cm2時(shí)對(duì)實(shí)施例一制備的近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體間歇性照射時(shí)的藥物模型釋放效果圖，其中I為近紅外光源關(guān)，2為近紅外光源開(kāi);從圖中可以看出近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體能在激光功率大小及光源開(kāi)關(guān)的雙模式調(diào)控下實(shí)現(xiàn)藥物的精準(zhǔn)釋放。這對(duì)于應(yīng)對(duì)復(fù)雜的生物環(huán)境、提高治療效率以及減少毒副作用具有重要的意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進(jìn)tx的: 一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己燒中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核； 二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化乾中加入油酸、十八稀和步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護(hù)和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為160°C的條件下攪拌1.5h，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，然后在氬氣保護(hù)和溫度為50°C的條件下攪拌0.5h，再將溫度從50°C升溫至80°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為80°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從80°C升溫至300°C，并在氬氣保護(hù)和溫度為300°C的條件下磁力攪拌1.5h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進(jìn)行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子，然后將包覆外殼的氟化釔鈉納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img:(0.03?0.04)mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.09?0.1 )mL;所述六水合氯化乾與步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核中NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子的摩爾比為1: (I?3);所述混合液A是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (8?12)mL;所述六水合氯化釔與混合液A中氟化銨的摩爾比為1:4； 三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與步驟二得到的核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌2h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為8?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動(dòng)栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整pH后的超聲溶液中加入濃度為20%的四乙氧基硅烷乙醇溶液后，在溫度為35°C的條件下反應(yīng)24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟三中所述的十六烷基三甲基溴化錢的質(zhì)量與水的體積比為Img: 0.04mL;步驟三中所述的十六燒基三甲基溴化錢的質(zhì)量與核殼結(jié)構(gòu)的氟化乾鈉納米粒子分散液的體積比為Img: (0.001?0.005)mL； 四、核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾氨基:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到無(wú)水甲苯中超聲分散后再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下加熱回流24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無(wú)水甲苯的體積比為Img: 0.1mL;步驟四中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積比為Img:(0.0004?0.0008)mL； 五、去除表面活性劑形成介孔:將表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散在甲醇溶液中，然后加入濃鹽酸，在溫度為70°C的條件下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與甲醇溶液的體積比為Img: 0.1mL;步驟五中所述的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與濃鹽酸的體積比為I m g:(0.0 O O O 5?0.0002)mL； 六、在核殼結(jié)構(gòu)納米粒子外表面修飾客體分子:將外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到二氯甲烷中超聲分散后，依次加入I，2_萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯和三乙胺，在室溫下攪拌24h后，通過(guò)離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與二氯甲燒的體積比為Img: 0.1mL;步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與1,2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯的質(zhì)量比為1: (0.5?0.7);步驟六中所述的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與三乙胺的體積比為I m g:(0.001?0.005)mL; 七、負(fù)載鹽酸阿霉素及孔道封堵:將修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子加入到鹽酸阿霉素水溶液中超聲分散，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌60h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，固體物采用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與鹽酸阿霉素水溶液的體積比為Img: (0.12?0.15)mL;步驟七中所述的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1: (40?60)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為I m g:0.035mLo3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:0.098mLo4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化乾與步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的摩爾比為1:2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟三中所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與步驟二得到的核殼結(jié)構(gòu)的氟化釔鈉納米粒子分散液的體積比為Img: 0.003mLo6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟四中所述的步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積比為Img: 0.0006mLo7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟五中所述步驟四得到的表面氨基修飾的未除去表面活性劑的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與濃鹽酸的體積比為Img: 0.0OOlmLo8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟六中所述的所述步驟五得到的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與I，2-萘醌-2-二疊氮-5-磺酰氯的質(zhì)量比為1:0.68ο9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟六中所述的步驟五得到的外表面修飾氨基的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與三乙胺的體積比為Img:0.003mL。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)超分子閥門光控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟七中所述步驟六得到的修飾客體分子的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1:50。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105903016SQ201610421622
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年6月12日
【發(fā)明人】王鈾, 韓仁璐
【申請(qǐng)人】哈爾濱工業(yè)大學(xué)