含有羧酸的益生元口腔護(hù)理組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種包含具有下式(I)的羧酸的口腔護(hù)理組合物，其中：R1為H，或取代或未取代的烷基；并且R2為H、OH或NH2；所述口腔護(hù)理組合物用于以下方面中：(a)在口腔中進(jìn)行選擇性地促進(jìn)：相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植；(b)在口腔中相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成；或(c)維持和/或重新建立健康的口腔微生物群。
【專利說明】含有羧酸的益生元口腔護(hù)理組合物
[0001 ] 背景
[0002] 口腔含有許多不同種類的細(xì)菌。一些種類的口腔病原性細(xì)菌（例如牙齦卟啉單胞 菌(Porphyromonas gingivalis)、福賽斯坦納菌(Tannerella forsythia)和伴放線放線桿 菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans))已牽扯到牙周病(諸如牙周炎、牙銀炎、壞 死性牙周炎、壞死性齒銀炎和種植體周圍炎化61'；[-；[11^|]^111：；[1^8))的發(fā)展。某些種類的口腔 病原性細(xì)菌(例如變異鏈球菌(Streptococcus mutans))已牽涉到牙齒損壞。
[0003] 據(jù)信某些種類的口腔細(xì)菌有益于維持牙周組織的健康狀態(tài)。在不受任何理論限制 的情況下，據(jù)信這些有益口腔細(xì)菌可妨礙口腔上皮的病原性口腔細(xì)菌的定植 (colonization)。例如，研究已顯示血鏈球菌（Streptococcus sanguinis)、緩癥鏈球菌 (Streptococcusmitis)和唾液鏈球菌對體外上皮細(xì)胞的伴放線放線桿菌定植具有抑制效 應(yīng)(W.Teughels等，J Dent Res 86(7)，611-617,2007)。使用犬科動物模型也顯示，在根面 平整術(shù)之后將有益細(xì)菌施用至牙周袋延遲并減少了病原性細(xì)菌對牙周袋的定植 (W· Teughels等，J Dent Res，86(11 )，1078-1082，2007)。有益細(xì)菌血鏈球菌、緩癥鏈球菌和 唾液鏈球菌也已顯示出抑制伴放線放線桿菌誘導(dǎo)的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞系H0K-18A對炎癥 性細(xì)胞因子白介素-8(IL-8)的產(chǎn)生，所述炎癥性應(yīng)答牽涉到牙周炎相關(guān)的組織破壞 (I.Sliepen等，J Dent Res 88(11)，1026-1030,2009)〇
[0004] 據(jù)信有益口腔細(xì)菌的選擇性刺激可為口腔健康，例如在牙周炎的預(yù)防中提供有效 的預(yù)防性途徑。
[0005] 簡要概述
[0006] 在第一方面，本發(fā)明提供了一種包含具有下式的羧酸的口腔護(hù)理組合物：
[0008] 其中：
[0009] 辦為11，或取代或未取代的烷基;并且
[0010] R2 為Η、0Η 或順2;
[0011] 所述口腔護(hù)理組合物用于以下方面中：
[0012] (a)在口腔中進(jìn)行選擇性地促進(jìn):相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定 植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植；
[0013] (b)在口腔中相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成;或
[0014] (c)維持和/或重新建立健康的口腔微生物群。
[0015] 任選地，以口腔護(hù)理組合物的重量為基準(zhǔn)，所述組合物中的羧酸存在量為0.01重 量％至10重量％。
[0016] 任選地，以口腔護(hù)理組合物的體積為基準(zhǔn)，所述組合物中的羧酸存在量為5μπι〇1/ ml 至30ymol/ml。
[0017] 任選地，R2為Η。
[0018] 任選地，R2為0Η。
[0019] 任選地，R2為懸。
[0020] 任選地，羧酸為酸性氨基酸。此外任選地，酸性氨基酸為L-氨基酸。再此外任選地， 酸性氨基酸為天冬氨酸或谷氨酸。
[0021] 任選地，辦為!1。
[0022] 任選地，心為未取代的烷基。此外任選地，心為未取代的Q-C4烷基。再此外任選地， 羧酸為L-乳酸。
[0023] 任選地，Ri包含糖殘基。此外任選地，糖殘基為吡喃半乳糖殘基。再此外任選地，吡 喃半乳糖殘基為α-D-吡喃半乳糖殘基。又此外任選地，羧酸為蜜二糖酸。
[0024] 任選地包含至少一個C00R3基，其中R3為!1或&-4烷基。
[0025] 任選地包含至少一個C(0)C00H基。
[0026] 任選地，RA(CH2)nCOOR3,其中η為1至5。此外任選地，η為1。再此外任選地，羧酸為 琥珀酸或L-蘋果酸。
[0027]任選地，羧酸為琥珀酸單甲酯。
[0028] 任選地，辦為(012)"(：(0)0)0!1，其中m為1至4。此外任選地，羧酸為α-酮基戊二酸。
[0029] 任選地，辦包含兩個C00H基。此外任選地，羧酸為檸檬酸。
[0030] 任選地，組合物為潔齒劑、牙膏、凝膠、牙粉、漱口水、口腔清洗劑、錠劑、片劑、噴霧 劑、口香糖或膜劑。
[0031] 任選地，組合物還包含對口腔健康具有有益效應(yīng)的至少一種細(xì)菌物種。此外任選 地，對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌種類選自緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放 線菌（Actinomyces viscosus)、小韋榮球菌（Veillonella parvula)、格氏鏈球菌 (Streptococcus gordonii)、生痰二氧化碳嗜纖維菌（Capnocytophaga sputigena)、內(nèi)氏 放線菌(Actinomyces naeslundii)以及其組合。
[0032] 任選地，所述口腔護(hù)理組合物用于預(yù)防牙齦炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周 圍粘膜炎、壞死性牙齦炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種。
[0033] 在第二方面，本發(fā)明提供了一種在受試者口腔中進(jìn)行下述選擇性地促進(jìn)的方法：
[0034] (a)相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植;或
[0035] (b)相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成；
[0036]所述方法包括使受試者的口腔與根據(jù)本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0037]在第三方面，本發(fā)明提供了一種在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生 物群的方法，所述方法包括使受試者的口腔與根據(jù)本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0038]在第四方面，本發(fā)明提供了一種預(yù)防受試者的牙齦炎、牙周炎、種植體周圍炎、種 植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種的方法，所述方法 包括使受試者的口腔與根據(jù)本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0039]在第五方面，本發(fā)明提供了具有下式的羧酸在口腔護(hù)理組合物中的用途：
[0041 ]其中：
[0042]辦為11，或取代或未取代的烷基;并且
[0043] R2 為Η、0Η 或NH2;
[0044] 所述用途為：
[0045] (a)相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植；
[0046] (b)相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成；
[0047] (c)在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生物群;或
[0048] (d)預(yù)防受試者的牙齦炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦 炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種。
[0049] 任選地，羧酸在與對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌和病原性口腔細(xì)菌一起孵育24 小時后，相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有 益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。
[0050] 任選地，羧酸在與對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌和病原性口腔細(xì)菌一起孵育48 小時后，相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有 益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。
[0051] 本發(fā)明的其他適用范圍將從下文提供的詳述變得顯而易見。應(yīng)理解，詳述和具體 實施例雖然指示了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但是僅僅意圖用于說明目的而不是意圖限制本 發(fā)明的范圍。
[0052] 詳述
[0053] 以下優(yōu)選實施方案的說明實質(zhì)上只是示例性的并且決不意圖限制本發(fā)明、本發(fā)明 的應(yīng)用或用途。
[0054] 為了描述所述范圍之內(nèi)的各個和每個數(shù)值，貫穿全文使用的范圍是作為簡寫形式 使用的。在所述范圍之內(nèi)的任何數(shù)值都可以被選為所述范圍的邊界。此外，本文中引用的所 有參考文獻(xiàn)均在此以引用方式整體并入。如果本公開中的定義和引用的參考文獻(xiàn)的定義出 現(xiàn)沖突，以本公開為準(zhǔn)。
[0055] 除非另外規(guī)定，否則本文和在本說明書中其他地方表達(dá)的所有百分比和量應(yīng)理解 為是指重量百分比。給出的量是以材料的有效重量為基準(zhǔn)。
[0056] 如本文所用，措辭"口腔"不僅包括口腔本身，而且還包括唾液、牙齒、牙齦、牙周 袋、臉頰、舌、粘膜、扁桃體、任何植入物以及置入口腔中的任何設(shè)備或結(jié)構(gòu)體。扁桃體為可 產(chǎn)生口臭的厭氧細(xì)菌生長提供了儲藏所(reservoir)(扁桃體結(jié)石）。
[0057] 如本文所用，短語"健康的口腔微生物群"是指當(dāng)口腔處于非患病狀態(tài)時(例如，當(dāng) 不存在牙周病，例如牙齦炎、牙周炎、齲齒、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦 炎和/或壞死性牙周炎時）的口腔微生物群體，即健康相關(guān)聯(lián)的口腔微生物群。
[0058] 術(shù)語"有益細(xì)菌"涵蓋口腔中的在健康口腔中以較高數(shù)目或比例存在，但在口腔疾 病(諸如像牙齦炎、牙周炎、齲齒、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦炎和壞死 性牙周炎)狀態(tài)時以較低數(shù)目或比例存在的那些細(xì)菌。所述術(shù)語還包括來自口腔或非口腔 來源的已被確認(rèn)通過預(yù)防或治療口腔疾病而對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌，所述細(xì)菌可 本來存在于口腔中或者可有意地引入到口腔中（例如像益生菌）。有益細(xì)菌可通過其存在或 代謝活性來:降低病原性口腔細(xì)菌的數(shù)目或比例;減少炎癥和炎癥性過程;降低病原性物種 的代謝活性；降低病原性細(xì)菌對毒力因子的產(chǎn)生或抑制病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒力因子;減 少或抑制生物膜形成；占據(jù)可以其他方式由病原體定植的適當(dāng)位置(niche);限制病原體附 著口腔表面的能力;影響病原體的生存力、代謝活性或生長;降低病原體產(chǎn)生毒性因子的能 力；降解由病原體或口腔生物群產(chǎn)生的毒性因子;和/或減弱寄主對病原性物種的應(yīng)答。如 上所論述，據(jù)信這些有益口腔細(xì)菌可妨礙病原性口腔細(xì)菌對口腔上皮的定植。據(jù)信有益口 腔細(xì)菌的選擇性刺激可為口腔健康，例如在牙周炎的預(yù)防中提供有效的預(yù)防性途徑。
[0059] 細(xì)菌需要某些底物以便能夠使它們生長、繁殖、具有代謝活性并且能夠進(jìn)行定植。 某些底物可被某些微生物（例如細(xì)菌)選擇性地利用以有利于所述微生物的生長、代謝活 性、繁殖和定植，從而直接或間接地抑制其他微生物的生長。本發(fā)明研究了通過以下方式修 飾受試者的口腔微生物群的可能性:通過選擇性地增加受試者所固有的有益口腔細(xì)菌群 體，通過為有益口腔細(xì)菌群體提供適當(dāng)?shù)挠糜谏L/繁殖的底物。
[0060] 有益細(xì)菌的實例包括緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、小韋榮球 菌、格氏鏈球菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌和內(nèi)氏放線菌。病原性細(xì)菌的實例包括變異鏈球 菌、中間普雷沃菌（Prevotella intermedia)、牙銀卟啉單胞菌、核粒梭桿菌 (Fusobacterium nucleatum)、福賽斯坦納菌、伴放線放線桿菌和遠(yuǎn)緣鏈球菌 (Streptococcus sobrinus)。
[0061] 本發(fā)明已發(fā)現(xiàn)某些羧酸能夠使得有益細(xì)菌的生長、代謝活性和生物膜形成增加， 而未使得病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性和生物膜形成增加。
[0062]因此本發(fā)明提供了一種包含具有下式的羧酸的口腔護(hù)理組合物：
[0064]其中：
[0065] Ri為H，或取代或未取代的烷基;并且
[0066] R2 為Η、0Η 或NH2;
[0067]所述口腔護(hù)理組合物用于以下方面中：
[0068] (a)在口腔中進(jìn)行選擇性地促進(jìn):相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定 植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植；
[0069] (b)在口腔中相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成;或
[0070] (C)維持和/或重新建立健康的口腔微生物群。
[0071] 在一些實施方案中，1?2為!1。在其他實施方案中，1?2為0!1。在其他實施方案中，心為 nh2〇
[0072] 在其中R2*NH2的一些實施方案中，羧酸為酸性氨基酸。酸性氨基酸可以為L-氨基 酸。在一些實施方案中，酸性氨基酸為天冬氨酸或谷氨酸。在某些實施方案中，酸性氨基酸 為L-天冬氨酸。在其他實施方案中，酸性氨基酸為L-谷氨酸。
[0073]在一些實施方案中，辦為!1。在某些實施方案中，羧酸為乙酸。
[0074] 在一些實施方案中，取代或未取代的烷基。在一些實施方案中為直鏈 或支鏈的烷基。在一些實施方案中，Ri為環(huán)烷基。
[0075] 在一些實施方案中，心為未取代的烷基。在某些實施方案中，Ri為未取代的Q-Ckj; &-〇5;或&-〇4烷基。在一些實施方案中，Ri為未取代的甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)、 異丙基（i-Pr)、正丁基(n-Bu)、異丁基（i-Bu)或叔丁基（t-Bu)。在一些實施方案中，羧酸為 乳酸。在某些實施方案中，羧酸為L-乳酸。
[0076] 在一些實施方案中，1?1為取代的(：1-(：1();(： 1-(：6;或(：1-〇4烷基。在某些實施方案中，1?1 為取代的甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或正丁基(n-Bu)。在某些實施方案中，心為取 代的異丙基（i-Pr)、異丁基(i-Bu)或叔丁基(t-Bu)。在一些實施方案中，Ri被至少一個羥基 取代?？墒褂闷淙〈牡幕鶊F(tuán)的另外實例包括(但不限于)酮基、羧酸基、糖殘基和酯基。
[0077] 在一些實施方案中，心包含糖殘基。在某些實施方案中，糖殘基為吡喃半乳糖殘 基。在一些實施方案中，啦喃半乳糖殘基為α-D-吡喃半乳糖殘基。在其中^為取代的烷基 (包括但不限于，取代的甲基、乙基、正丙基或正丁基;或取代的異丙基、異丁基或叔丁基）的 某些實施方案中，Ri被任一以上實施方案的糖殘基取代。在一些所述實施方案中，Ri還可被 至少一個羥基取代。在某些實施方案中， Rl為由糖苷鍵連接到至少三個碳原子的鏈的糖殘 基（即羧酸具有結(jié)構(gòu)（糖殘基)-(至少三個碳原子的鏈)-CHR 2-C00H)。至少三個碳原子的鏈 可被羥基取代。在某些實施方案中，羧酸為蜜二糖酸。
[0078]在某些實施方案中，R!包含至少一個C00R3基，其中R3為!1或&-4烷基。在某些實施方 案中，R3選自甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)、異丙基（i-Pr)、正丁基(n-Bu)、異丁基（i-Bu)或叔丁基(t-Bu)。
[0079]在某些實施方案中，RiSKftOnCOOfc，其中η為1至5。在某些實施方案中，η為1至4; 1至3;或1至2。在某些實施方案中，η為1。在任一這些實施方案中，R3可以為甲基(Me)、乙基 (Et)、正丙基(n-Pr)、異丙基（i-Pr)、正丁基(n-Bu)、異丁基（i-Bu)或叔丁基(t-Bu)。在一些 實施方案中，羧酸為琥珀酸或L-蘋果酸。在一些實施方案中，羧酸為琥珀酸單甲酯。
[0080] 在一些實施方案中，心包含至少一個C(0)C00H基。在某些實施方案中，辦為(012){ (0)C00H，其中m為1至4。在某些實施方案中，m可以為1至3;1至2;或者m可以為1。在一些實施 方案中，羧酸為a_酮基戊二酸。
[0081 ]在一些實施方案中，辦包含兩個C00H基。在某些實施方案中，羧酸為檸檬酸。
[0082] 在一些實施方案中，R!包含C00H基和C00R3基，其中R3為!1或&-4烷基。在某些實施方 案中，R3選自甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)、異丙基（i-Pr)、正丁基(n-Bu)、異丁基（i-Bu)或叔丁基(t-Bu)。
[0083]在一些實施方案中，以口腔護(hù)理組合物的重量為基準(zhǔn)，所述組合物中的羧酸存在 量為0.01重量％至10重量％、0.05重量％至7.5重量％、0.1重量％至5重量％，或1重量％至 2.5重量％。
[0084] 在任一以上實施方案中，組合物中的羧酸存在量可以為lymol/ml至50μπιο1/πι1、2μ mol/ml至40ymol/ml、5ymol/ml至30ymol/ml、10ymol/ml至25ymol/ml、20ymol/ml至25ymol/ ml;或約25ymol/ml、約20ymol/ml、約ΙΟμηιοΙ/ml，或約5ymol/ml。在一些實施方案中，組合物 中的羧酸存在量為22ymol/ml至30ymol/ml。
[0085]如任一以上實施方案中所述的口腔護(hù)理組合物可以為潔齒劑、牙膏、凝膠、牙粉、 漱口水、口腔清洗劑、錠劑（其可以為可溶解的或可咀嚼的）、片劑、噴霧劑、口香糖或膜劑 (其可以為可全部或部分溶解的，或不可溶解的）。
[0086]如任一以上實施方案中所述的口腔護(hù)理組合物還可包含對口腔健康具有有益效 應(yīng)的至少一種細(xì)菌物種。在這些實施方案中，組合物可被稱之為共生型組合物（synbiotic composition)，因為其含有益生菌(對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌)和益生元(刺激益生 菌的生長、代謝活性和/或定植的羧酸）。在某些實施方案中，對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì) 菌種類選自緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、小韋榮球菌、格氏鏈球菌、生 痰二氧化碳嗜纖維菌、內(nèi)氏放線菌以及其組合。
[0087]如任一以上實施方案中所述的口腔護(hù)理組合物還可用于預(yù)防牙齦炎、牙周炎、種 植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種。
[0088] 本發(fā)明還提供了一種在受試者口腔中選擇性促進(jìn)以下項的方法：
[0089] (a)相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植;或
[0090] (b)相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成；
[0091 ]所述方法包括使受試者的口腔與根據(jù)任一上述實施方案的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0092] 本發(fā)明還提供了一種在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生物群的方 法，所述方法包括使受試者的口腔與根據(jù)任一上述實施方案的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0093] 本發(fā)明還提供了一種預(yù)防受試者的牙齦炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘 膜炎、壞死性牙齦炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種的方法，所述方法包括使受試 者的口腔與根據(jù)任一上述實施方案的口腔護(hù)理組合物接觸。
[0094] 在以上方法中，受試者可以為哺乳動物。在一些實施方案中，受試者為人。在一些 實施方案中，受試者為動物，例如伴侶動物(例如貓或狗）。
[0095]在某些實施方案中，口腔與口腔護(hù)理組合物的接觸包括使用刷將口腔護(hù)理組合物 施用至口腔，用呈漱口水形式的口腔護(hù)理組合物清洗口腔，或使用例如噴霧器將口腔護(hù)理 組合物噴入口腔中。
[0096]本發(fā)明還提供了如任一以上實施方案中所述的羧酸在口腔護(hù)理組合物中的用途， 所述用途為：
[0097] (a)相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具 有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植；
[0098] (b)相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成；
[0099] (c)在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生物群;或
[0100] (d)預(yù)防受試者的牙齦炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙齦 炎、壞死性牙周炎以及齲齒中的一種或多種。
[0101] 在組合物、方法和用途的任一以上實施方案中，羧酸在與對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌和病原性口腔細(xì)菌一起孵育24小時后，可相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活 性或定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。
[0102] 在組合物、方法和用途的任一以上實施方案中，羧酸在與對口腔健康具有有益效 應(yīng)的細(xì)菌和病原性口腔細(xì)菌一起孵育48小時后，可相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活 性或定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。
[0103] 在組合物、方法和用途的任一以上實施方案中，對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌 可選自緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、小韋榮球菌、格氏鏈球菌、生痰二 氧化碳嗜纖維菌、內(nèi)氏放線菌以及其組合。另外或可替代地，病原性細(xì)菌可選自變異鏈球 菌、中間普雷沃菌、牙齦卟啉單胞菌、核粒梭桿菌、福賽斯坦納菌、伴放線放線桿菌、遠(yuǎn)緣鏈 球菌以及其組合。
[0104] 在其中組合物、方法和用途涉及相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植 選擇性促進(jìn)(在受試者口腔中）對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植的 任一以上實施方案中，具有口腔健康的有益效應(yīng)的細(xì)菌可選自緩癥鏈球菌、血鏈球菌、粘性 放線菌、小韋榮球菌、內(nèi)氏放線菌以及其組合，并且在某些實施方案中，可選自緩癥鏈球菌 和小韋榮球菌。另外或可替代地，病原性細(xì)菌可選自變異鏈球菌、中間普雷沃菌、牙齦卟啉 單胞菌、核粒梭桿菌、福賽斯坦納菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌以及其組合。
[0105] 在其中組合物、方法和用途涉及相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成選擇性促進(jìn) 對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成的任一以上實施方案中，病原性細(xì)菌可選自 變異鏈球菌、中間普雷沃菌、牙齦卟啉單胞菌、核粒梭桿菌、福賽斯坦納菌、伴放線放線桿菌 以及其組合;并且在某些實施方案中，可選自牙齦卟啉單胞菌、福賽斯坦納菌和伴放線放線 桿菌。另外或可替代地，具有口腔健康的有益效應(yīng)的細(xì)菌可選自唾液鏈球菌、血鏈球菌、格 氏鏈球菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌以及其組合。
[0106] 本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物還可包含額外的成分。這些額外的成分可包括但不限于 研磨劑、稀釋劑、碳酸氫鹽、pH改性劑、表面活性劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、增稠劑、濕潤劑、甜味劑、調(diào) 味劑、顏料、抗菌劑、防齲劑、防牙垢劑或牙石控制劑以及其混合物。
[0107] 在一些實施方案，特別是(但不限于)其中口腔護(hù)理組合物為牙膏的那些實施方案 中，本發(fā)明的組合物還可包含研磨劑?？墒褂玫难心┌ǘ趸柩心T如具有高達(dá) 約20微米平均粒徑的沉淀或水合的二氧化娃，諸如由J.M.Huber化學(xué)部(Havre de Grace， Md. 21078)市售的Zeodent 105和Zeodent 114,或由W.R.Grace&Company的Davison化學(xué)部 市售的Sylodent 783。還可包括諸如來自PQ公司的Sorbosil AC 43的研磨劑。其他可用的 潔齒劑研磨劑包括氧化鋁、硅酸鋁、煅燒氧化鋁、膨潤土或其他硅質(zhì)材料、不溶性磷酸鹽以 及其混合物。研磨劑的存在量可以為以組合物重量為基準(zhǔn)的5至30重量％，任選地以組合物 重量為基準(zhǔn)的10至20重量％。在某些實施方案，特別是(但不限于）其中口腔護(hù)理組合物為 漱口水或口腔清洗劑的那些實施方案中，組合物可不含研磨劑。
[0108] 在一些實施方案中，本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物包含至少一種碳酸氫鹽，所述碳酸 氫鹽由于起泡和釋放二氧化碳而可用于例如賦予牙齒和膠"清潔感"。可使用任何口服可接 受的碳酸氫鹽，包括(不限于)堿金屬碳酸氫鹽諸如碳酸氫鈉和碳酸氫鉀、碳酸氫銨等。以組 合物的總重量計，一種或多種額外的碳酸氫鹽任選的存在總量為約〇. 1重量％至約50重 量％，例如約1重量％至20重量％。
[0109] 在一些實施方案中，本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物包含至少一種pH改性劑。所述改性 劑包括降低pH的酸化劑、升高pH的堿化劑以及將pH控制在需要范圍內(nèi)的緩沖劑。例如，可包 含選自酸化劑、堿化劑和緩沖劑的一種或多種化合物以提供2至10,或在各種例示性實施方 案中，2至8、3至9、4至8、5至7、6至10、7至9等的pH。可使用任何口服可接受的pH改性劑，包括 (不限于)磷酸和磺酸以及其鹽、堿金屬氫氧化物諸如氫氧化鈉、碳酸鹽諸如碳酸鈉、碳酸氫 鹽、倍半碳酸鹽、硼酸鹽、硅酸鹽、磷酸鹽(例如，磷酸二氫鈉、磷酸三鈉）、咪唑等。一種或多 種pH改性劑任選地以有效維持組合物在口服可接受的pH范圍內(nèi)的總量存在。
[0110] 本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物還可包含至少一種表面活性劑。可使用任何口服可接受 的表面活性劑，它們大部分是陰離子型、非離子型或兩性離子型的。合適的陰離子型表面活 性劑包括(不限于)C 8-2Q烷基硫酸酯、磺化的C8-2Q脂肪酸甘油單酯的水溶性鹽、肌氨酸鹽、牛 磺酸鹽等。這些和其他種類的例示性實例包括十二烷基硫酸鈉、椰子甘油單酯磺酸鈉、月桂 基肌氨酸鈉、月桂基輕乙基磺酸鈉 （sodium lauryl isoethionate)、月桂醇聚醚羰酸鈉 (sodium laureth carboxylate)和十二烷基苯磺酸鈉。合適的非離子型表面活性劑包括 (不限于）泊洛沙姆、聚氧乙烯失水山梨醇酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、叔胺 氧化物、叔膦氧化物、二烷基亞砜等。合適的兩性型表面活性劑包括(不限于)具有陰離子基 團(tuán)（諸如羰酸根、硫酸根、磺酸根、磷酸根或膦酸根）的C 8-2Q脂肪族仲胺和叔胺的衍生物。還 可以使用甜菜堿，其合適的實例是椰油酰胺丙基甜菜堿。以組合物的總重量計，一種或多種 表面活性劑任選的存在總量為約0.01重量％至約10重量％，例如，約0.05重量％至約5重 量％或約0.1重量％至約2重量％。
[0111] 本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物可包含至少一種泡沫調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑可用于例如增 加組合物在攪拌時所形成的泡沫的量、稠度或穩(wěn)定性?？墒褂萌魏慰诜山邮艿呐菽{(diào)節(jié) 劑，包括(不限于）聚乙二醇(PEG)，也稱為聚氧乙烯。高分子量PEG是合適的，包括平均分子 量為200,000至7，000,000,例如500,000至5，000,000或 1,000,000至2,500,000的那些。以 組合物的總重量計，一種或多種PEG任選的存在總量為約0.1重量％至約10重量％，例如約 0.2重量％至約5重量％，或約0.25重量％至約2重量％。
[0112] 本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物可包含至少一種增稠劑，所述增稠劑可用于例如賦予組 合物所需要的稠度和/或口感?？墒褂萌魏慰谇豢山邮艿脑龀韯?，包括(不限于)卡波姆(也 稱為羧乙烯基聚合物）、角叉菜膠（也稱為愛爾蘭蘚)且更具體地t-角叉菜膠G-角叉菜膠 (iota-carrageenan))、纖維素聚合物(諸如羥乙基纖維素、羧甲基纖維素(CMC)及其鹽例如 CMC鈉）、天然樹膠(諸如刺梧桐膠、黃原膠、阿拉伯膠和黃蓍膠）、膠體硅酸鎂鋁、膠體二氧化 硅等。優(yōu)選的增稠劑或膠凝劑種類包括丙烯酸與季戊四醇的烷基醚或蔗糖的烷基醚交聯(lián)的 一類均聚物，或卡波姆。卡波姆可從B. F. G〇〇dr i ch以Carbopol?系列商購獲得。特別優(yōu)選 的卡波姆包括Carbopol 934、940、941、956、974P以及其混合物。也可使用二氧化硅增稠劑 諸如DT 267(來自PPG工業(yè)）。以組合物的總重量計，一種或多種增稠劑任選的存在總量為約 0.01重量％至15重量％，例如約0.1重量％至約10重量％，或約0.2重量％至約5重量％。
[0113] 本發(fā)明的組合物可包含至少一種粘度調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑可用于例如幫助抑制成 分的沉淀或分離或者促進(jìn)液體組合物在攪拌時的重新分散性?？墒褂萌魏慰诜山邮艿恼?度調(diào)節(jié)劑，包括(不限于)礦物油、凡士林、粘土和有機(jī)改性的粘土、二氧化硅等。以組合物的 總重量計，一種或多種粘度調(diào)節(jié)劑任選的存在總量為約0.01重量％至約10重量％，例如約 0.1重量％至約5重量％。
[0114] 本發(fā)明的組合物還可包含至少一種濕潤劑。可使用任何口服可接受的濕潤劑，包 括(不限于）多元醇諸如甘油、山梨醇(任選地為70重量％的水溶液）、木糖醇或低分子量的 聚乙二醇(PEG)。大多數(shù)濕潤劑還充當(dāng)甜味劑。以組合物的總重量計，一種或多種濕潤劑任 選的存在總量為約1重量％至約70重量％，例如，約1重量％至約50重量％，約2重量％至約 25重量％，或約5重量％至約15重量％。
[0115] 本發(fā)明的組合物還可包含至少一種甜味劑，所述甜味劑可用于例如增強(qiáng)組合物的 味道。一種或多種甜味劑任選的存在總量密切取決于選擇的特定甜味劑，但是通常為以組 合物的總重量計的0.005重量％至5重量％，任選地0.005重量％至0.2重量％，還任選地以 組合物的總重量計的0.05重量％至0.1重量％。
[0116] 本發(fā)明的組合物還可包含至少一種調(diào)味劑，所述調(diào)味劑可用于例如增強(qiáng)組合物的 味道?？墒褂萌魏慰诜山邮艿奶烊换蚝铣傻恼{(diào)味劑，包括(不限于)茶調(diào)味劑、香草醛、鼠 尾草、馬郁蘭、歐序油、留蘭香油、肉桂油、冬青油（水楊酸甲酯(11161：1171831；^713七6))、薄荷 油、丁香油、月桂油、茴香油、桉樹油、柑橘油、水果油和水果香精(包括源自檸檬、桔子、酸 橙、葡萄柚、杏子、香蕉、葡萄、蘋果、草莓、櫻桃、菠蘿等的那些）、源自豆類和堅果的調(diào)味劑 (諸如咖啡、可可、可樂果、花生、杏仁)等，吸附的和包封的調(diào)味劑等。還涵蓋在本文的調(diào)味 劑之內(nèi)的是在口腔中提供芳香和/或其他感官效果(包括涼爽或溫?zé)嵝Ч┑某煞帧Ｋ龀?分例示性地包括薄荷醇、乙酸薄荷酯、乳酸薄荷酯、樟腦、桉樹油、桉油醇、茴香腦、丁香酚、 肉桂（cassia)、覆盆子酮（oxanone)、a-紫羅蘭酮、丙烯基乙基愈創(chuàng)木酸（propenyl guaiethol)、麝香草酸、里哪醇、苯甲醛、肉桂醛、N-乙基-對-薄荷燒-3-甲酰胺⑴飛!：]!}^^-menthan-3-carboxamine)、N，2，3-三甲基-2-異丙基丁酰胺、3-( 1-薄荷氧基）-丙烷-1，2-二 醇、肉桂醛甘油縮醛(CGA)、薄荷酮甘油縮醛(MGA)等。以組合物的總重量計，一種或多種調(diào) 味劑任選的存在總量為約0.01重量％至約5重量％，例如，約0.03重量％至約2.5重量％，任 選約0.05重量％至約1.5重量％，還任選約0.1重量％至約0.3重量％。
[0117] 本發(fā)明的組合物可包含至少一種著色劑。本文中的著色劑包括顏料、染料、色淀和 賦予特定光澤或反射率的試劑諸如珠光劑?？墒褂萌魏慰诜山邮艿闹珓?，包括(不限 于）滑石、云母、碳酸鎂、碳酸鈣、硅酸鎂、硅酸鎂鋁、二氧化硅、二氧化鈦、氧化鋅、紅色、黃 色、褐色和黑色鐵氧化物、氰亞鐵酸鐵銨（ferric ammonium ferrocyanide)、猛紫 (manganese violet)、群青、鈦酸化云母(titaniated mica)、氯氧化祕等。以組合物的總重 量計，一種或多種著色劑任選的存在總量為約0.001重量％至約20重量％，例如，約0.01重 量％至約10重量％，或約0.1重量％至約5重量％。
[0118]本發(fā)明的組合物還可包含抗菌劑或防腐劑，諸如氯己定、三氯生、季銨化合物(例 如苯扎氯銨)或?qū)αu基苯甲酸酯(paraben)(諸如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯）。 以組合物的總重量計，組合物中的一種或多種抗菌劑或防腐劑任選的存在總量為約0.01重 量％至約0.5重量％，任選約0.05重量％至約0.1重量％。
[0119] 口腔護(hù)理組合物還可包含氟化物離子源。氟化物離子源包括但不限于:氟化亞錫、 氟化鈉、氟化鉀、單氟磷酸鉀、單氟磷酸鈉、單氟磷酸銨、氟硅酸鈉、氟硅酸銨、氟化胺諸如奧 拉氣（Ν'-十八烷基二乙稀二胺-Ν,Ν，# -二（2 -乙醇）-二氫氣化物丨#-octadecyltrimethylendiamine -Ν,Ν,Ν' -tris(2-ethanol )-dihydrofluoride))、氣化銨 以及其組合。在某些實施方案中，氟化物離子源包括氟化亞錫、氟化鈉、氟化胺、單氟磷酸鈉 以及其混合物。在某些實施方案中，本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物還可含有氟化物離子源或提 供氟的成分，所述提供氟的成分的量足以提供約50至約5000ppm的氟化物離子，例如，約100 至約1000、約200至約500,或約250ppm氟化物離子?？上虮景l(fā)明組合物添加的氟化物離子源 的水平為約0.001重量％至約10重量％，例如，約0.003重量％至約5重量％、0.01重量％至 約1重量％，或約0.05重量％。然而，應(yīng)理解提供適當(dāng)水平氟化物離子的氟化物鹽的重量將 基于鹽中的反離子的重量而明顯不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地測定這些量。優(yōu)選的氟化 物鹽可以為氟化鈉。
[0120] 本發(fā)明的組合物可包含可用于例如改善口腔干燥的唾液刺激劑?？墒褂萌魏慰诜?可接受的唾液刺激劑。一種或多種唾液刺激劑任選地以有效刺激唾液的總量存在。
[0121 ]本發(fā)明的組合物可包含抗敏感劑，例如，鉀鹽諸如硝酸鉀、碳酸氫鉀、氯化鉀、檸檬 酸鉀和草酸鉀;辣椒素；丁香酚;鍶鹽;氯化物鹽以及其組合。所述試劑可添加的有效量為 (例如）以組合物的總重量為基準(zhǔn)的約1重量％至約20重量％，這取決于選擇的試劑。
[0122] 本發(fā)明的組合物還可包含抗氧化劑。可使用任何口腔可接受的抗氧化劑，包括丁 基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、維生素 A、類胡蘿卜素、維生素 E、類黃酮、多 酚、草本抗氧化劑、葉綠素、褪黑激素以及其混合物。
[0123] 本發(fā)明的組合物此外可任選地包含如下面提供的牙石控制（防牙垢)劑。本文可用 的那些牙石控制劑包含特定試劑的鹽，包括堿金屬鹽和銨鹽。所述試劑包括:磷酸鹽和多磷 酸鹽、聚氨基丙烷磺酸(AMPS)、聚烯烴磺酸鹽、聚烯烴磷酸鹽、二磷酸鹽諸如氮雜環(huán)烷-2,2-二磷酸鹽(例如，氮雜環(huán)庚烷-2，2-二磷酸）、N-甲基氮雜環(huán)戊烷-2，3-二磷酸、乙烷-1-羥基-1，1_二磷酸(EHDP)和乙烷-1-氨基-1，1-二磷酸鹽?？捎玫臒o機(jī)磷酸鹽和多磷酸鹽包括磷酸 二氫鈉、磷酸氫二鈉和磷酸鈉、三聚磷酸鈉、四聚磷酸鹽、三偏磷酸鈉、六偏磷酸鈉以及其混 合物。其他可用的牙石控制劑包括多羧酸鹽聚合物和聚乙烯甲醚/馬來酸酐(PVM/MA)共聚 物，諸如 GANTREZ?。 實施例
[0124] 實施例1
[0125] 研究了各種有益口腔細(xì)菌和病原性口腔細(xì)菌在羧酸即琥珀酸、L-乳酸、琥珀酸單 甲酯、L-蘋果酸、檸檬酸、蜜二糖酸、α-酮基-戊二酸、乙酸和L-天冬氨酸存在下的代謝活性。
[0126] 測試的有益口腔細(xì)菌是緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、格氏鏈 球菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌、內(nèi)氏放線菌和小韋榮球菌。測試的病原性口腔細(xì)菌是變異鏈 球菌、中間普雷沃菌、牙齦卟啉單胞菌、核粒梭桿菌、福賽斯坦納菌、伴放線放線桿菌和遠(yuǎn)緣 鏈球菌。
[0127] 能夠增加以上有益細(xì)菌中的至少一種的代謝活性而不或僅極小程度地增加病原 性細(xì)菌的生長的底物被認(rèn)為是益生元底物。
[0128] 通過針對微生物細(xì)胞(Biolog Inc.)的高通量表型微陣列系統(tǒng)(PM)研究了所測試 細(xì)菌在以上提到的酸存在下的24小時和48小時之后的代謝活性程度。每個PM可含有可充當(dāng) 細(xì)菌底物的高達(dá)95種不同的生物化學(xué)化合物(例如，有機(jī)酸）以及不含有底物的一種陰性對 照。使用了微陣列板，其中每個板的不同孔預(yù)加載有(通過制造商Biolog Inc.)待測試的不 同有機(jī)酸。使用單獨的微陣列板來測試每種細(xì)菌物種。因此，在每個特定板上使用多種有機(jī) 酸測試了單一細(xì)菌物種。所述微陣列基于氧化還原技術(shù)，使用細(xì)胞呼吸作為通用的報告因 子(reporter)?；钚约?xì)胞呼吸引起四唑染料的減少以及濃顏色的形成-例如，當(dāng)使用四唑染 料"Biolog Redox Dye Mix D"時，當(dāng)染料減少時顏色從透明/無色變成紫色。所述顏色變化 的觀察結(jié)果指示了哪種底物改善細(xì)胞的代謝活性和健康。
[0129] 從血瓊脂板(在37 °C下厭氧孵育48小時）收集每種細(xì)菌物種并且將其轉(zhuǎn)移至為營 養(yǎng)缺乏型培養(yǎng)基的IF-0基礎(chǔ)接種液（Biolog Inc.)。使用BioRad SmartSpec 3000?11〇1:〇1116丨61'在492111]1下將所得細(xì)胞懸浮液調(diào)節(jié)至42%的透射率（相對于不存在細(xì)菌物 種的基礎(chǔ)接種液的透射率）（通過添加其他接種液或其他細(xì)菌來進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到獲得42 %的 透射率）。通過將3mL 42 %透射率細(xì)胞懸浮液與15mL接種液(所述接種液通過將11.6mL無菌 水、62.5mL IF-0基礎(chǔ)接種液和0.9mL四唑染料"Biolog Redox Dye mix D"混合來形成)混 合來制備所述懸浮液的1: 5稀釋液，從而產(chǎn)生等于85 %透射率（使用BioRad SmartSpec 3000Ph〇t〇meter)的最終細(xì)胞密度。對于每種所測試的酸，用100μL7孔的所述85%透射率細(xì) 胞懸浮液直接接種微陣列板(從供應(yīng)商(Biolog Inc.)獲得，其中酸已以粉末形式存在于相 關(guān)的孔中）。
[0130]在37°C下在厭氧性氣氛中孵育所有板。使用同一板在兩個時間點24小時處和48小 時處通過分光光度法(Thermo Scientific Multiskan Ascent)在492nm下測定顏色變化。 對于每種所測試的細(xì)菌，還使用了相應(yīng)的對照，對照是板中含有特定細(xì)菌(細(xì)胞懸浮液)但 不含任何羧酸的孔。在Multiscan微板讀數(shù)器中處于連續(xù)振動24小時和48小時之后，針對每 種細(xì)菌/有機(jī)酸組合并且針對每種其相應(yīng)對照（即其含有特定細(xì)菌但不含羧酸)在492nm波 長下測定(使用微板讀數(shù)器)24小時和48小時處的合成培養(yǎng)基的光密度(0D)。對于每種細(xì) 菌，將在24小時處和在48小時處獲得的0D值除以相應(yīng)對照在24小時處和在48小時處(分別 地)獲得的0D值，由此使得對照具有為1的值。因此，針對細(xì)菌與羧酸的特定組合的大于1的 值表明24小時或48小時之后的細(xì)菌代謝活性的增加大于針對對照所觀察到的增加。
[0131]針對細(xì)菌與羧酸的每種組合進(jìn)行三次實驗，其中每次重復(fù)在不同的天數(shù)時進(jìn)行 (因此提供了三個生物復(fù)制品）。對照也如上所述進(jìn)行三次。所示的值是針對細(xì)菌與羧酸的 每種組合在24小時處和在48小時處所獲得(如以上詳述的）的三個單一值的平均值(均值）。 結(jié)果顯示于下表1至4中：
[0133] 表1:24小時處的病原性細(xì)菌[0134] μ伴放線放線桿菌
[0137] 表2:24小時處的有益細(xì)菌
[0139] 表3:48小時處的病原性細(xì)菌[0140] μ伴放線放線桿菌
[0143] 表4:48小時處的有益細(xì)菌
[0144] 在以上數(shù)據(jù)中，將值2作為閾值，在所述閾值之上有機(jī)酸使得細(xì)菌的代謝活性顯著 地增加。選擇所述值是為了排除低刺激的代謝物并且避免假陽性的結(jié)果。
[0145] 如可從以上數(shù)據(jù)看出的，琥珀酸、L-乳酸、琥珀酸單甲酯和L-蘋果酸在24小時處表 現(xiàn)出益生元效應(yīng)，并且琥珀酸、琥珀酸單甲酯、檸檬酸、蜜二糖酸、α-酮基-戊二酸、乙酸和L-天冬氨酸在48小時處表現(xiàn)出益生元效應(yīng)。在不受任何理論限制的情況下，據(jù)信在48小時處 表現(xiàn)出益生元效應(yīng)的那些底物可在長時間使用后向口腔提供有益效應(yīng)。
[0146] 因為L-乳酸被有益細(xì)菌代謝的速度比被病原性細(xì)菌代謝的速度更快(通過以上的 在24小時處所達(dá)到的數(shù)據(jù)組中的值2所顯示的），所以預(yù)期L-乳酸的存在使得有益細(xì)菌在短 時間范圍內(nèi)抑制病原性細(xì)菌的生長，從而維持健康的口腔微生物群。因為L-乳酸被有益細(xì) 菌代謝的速度比被病原性細(xì)菌代謝的速度更快，所以在病原性細(xì)菌可開始利用L-乳酸之 前，所述有機(jī)酸被有益細(xì)菌所消耗/代謝掉（由此被從環(huán)境中除去）。在不受任何理論限制的 情況下，據(jù)信當(dāng)（諸如在口腔中）存在有益細(xì)菌和病原性細(xì)菌的混合物時，可消除L-乳酸對 病原性細(xì)菌的刺激效應(yīng)(如在48小時處所看到的），因為所述有機(jī)酸底物已被有益細(xì)菌代謝 掉，因此未被病原性細(xì)菌獲得來利用。因此，如果在病原性細(xì)菌的生長/代謝活性/定植被刺 激之前，有益細(xì)菌的生長/代謝活性/定植得以刺激，那么在病原性細(xì)菌有機(jī)會生長/繁殖之 前，有益細(xì)菌可進(jìn)行繁殖并且對病原性細(xì)菌產(chǎn)生抑制效應(yīng)。
[0147] 實施例2
[0148] 研究了各種有益口腔細(xì)菌和致病口腔細(xì)菌在羧酸即L天冬氨酸和琥珀酸(作為實 例)存在下的生長程度。
[0149] 測試的有益口腔細(xì)菌是緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、格氏鏈 球菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌、內(nèi)氏放線菌和小韋榮球菌。測試的病原性口腔細(xì)菌是變異鏈 球菌、中間普雷沃菌、牙齦卟啉單胞菌、核粒梭桿菌、福賽斯坦納菌、伴放線放線桿菌和遠(yuǎn)緣 鏈球菌。
[0150] 能夠增加以上有益細(xì)菌中的至少一種的生長(或最大生長密度或生長程度)而不 或僅極小程度地增加病原性細(xì)菌的生長(或最大生長密度)的底物被認(rèn)為是益生元化合物。
[0151] 通過在富營養(yǎng)型培養(yǎng)基(腦心浸液肉湯(BHI)，0xoid)中經(jīng)48小時建立生長曲線研 究了所測試的細(xì)菌響應(yīng)于選擇的羧酸(L-天冬氨酸、琥珀酸）的生長程度。通過將相應(yīng)的細(xì) 菌從血瓊脂板轉(zhuǎn)移至BHI制備了晚指數(shù)生長期液體培養(yǎng)物并且將所述培養(yǎng)物在37 °C下在厭 氧性氣氛中針對粘性放線菌、小韋榮球菌、核粒梭桿菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普雷沃菌、福 賽斯坦納菌、內(nèi)氏放線菌和生痰二氧化碳嗜纖維菌進(jìn)行過夜孵育，并且在5 %C02環(huán)境中針 對唾液鏈球菌、血鏈球菌、緩癥鏈球菌、伴放線放線桿菌、變異鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌和格氏鏈 球菌進(jìn)行過夜孵育。將過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至BHI并且通過在600nm下測定(BioRad SmartSpec 3000)光密度(0D6QQ)將其調(diào)節(jié)至1 X 107CFU/ml (菌落形成單位數(shù)/ml)的濃度。對于每種菌 株，將200μ1細(xì)菌懸浮液添加至含有20μ1相應(yīng)羧酸的96孔板中。將羧酸的最終濃度設(shè)定為5、 10、20和25ymol/ml。對于每種所測試的細(xì)菌，還使用了不含有羧酸的相應(yīng)對照。如先前所述 來孵育板。
[0152] 針對細(xì)菌/羧酸的每種組合并且針對每種其相應(yīng)對照（即在沒有羧酸的富營養(yǎng)型 培養(yǎng)基中的特定細(xì)菌），在〇h、24h和48h處在630nm下測定（Thermo Scientif ic Multiskan Ascent)光密度(0D63Q)。另外，還在Oh和9h之間每隔一小時測定了在5%⑶2環(huán)境中生長的細(xì) 菌/羧酸的組合的0D63Q。對于細(xì)菌/羧酸的每種組合，將經(jīng)48小時時間段獲得的最大0D值除 以相應(yīng)對照經(jīng)48小時時間獲得的最大0D值，由此使得對照具有為1的值。因此，針對細(xì)菌與 羧酸的特定組合的大于1的值表明經(jīng)48小時的細(xì)菌生長程度大于針對對照的經(jīng)48小時的細(xì) 菌生長程度。
[0153] 針對細(xì)菌與羧酸的每種組合并且針對每種對照，在不同的3天進(jìn)行了實驗（因此提 供了 3個生物復(fù)制品）并且在每天時進(jìn)行四次實驗（因此提供了 4個技術(shù)復(fù)制品）。針對每天 并且針對每種組合，計算針對四次技術(shù)復(fù)制品所獲得的值(如以上詳述的）的平均值(均值） 以提供針對每天的每種組合的單一值。下面表5至6中示出的值是針對細(xì)菌與羧酸的每種組 合所獲得的三個單一值的平均值(均值）。結(jié)果顯示于下表5至6中：
[0155] 表5:經(jīng)48小時的病原性細(xì)菌
[0156] *伴放線放線桿菌
[0158] 表6:經(jīng)48小時的有益細(xì)菌
[0159] 在以上數(shù)據(jù)中，將值1.25作為閾值，在所述閾值之上羧酸使得細(xì)菌的生長程度相 對于對照顯著地增加。選擇所述值是為了排除低刺激的代謝物并且避免假陽性的結(jié)果。
[0160] 如可從以上數(shù)據(jù)看到的，L-天冬氨酸在10和20ym〇l/ml下表現(xiàn)出益生元效應(yīng)，并且 琥?白酸在20和25ymol/ml濃度下表現(xiàn)出益生元效應(yīng)。
[0161] 實施例3
[0162] 還研究了羧酸即L-天冬氨酸和琥珀酸(作為實例)對各種有益口腔細(xì)菌和病原性 口腔細(xì)菌生物膜生長的效應(yīng)。
[0163] 能夠增加以上有益細(xì)菌中的至少一種的生物膜量而不或僅極小程度地增加病原 性細(xì)菌的生物膜量的底物被認(rèn)為是益生元化合物。
[0164] 通過在富營養(yǎng)型培養(yǎng)基(腦心浸液肉湯(BHI)，0xoid)中經(jīng)48小時建立生物膜生長 試驗研究了所測試的細(xì)菌響應(yīng)于選擇的羧酸(L-天冬氨酸和琥珀酸）的生物膜形成的增加。 通過將相應(yīng)的細(xì)菌從血瓊脂板轉(zhuǎn)移至BHI制備了晚指數(shù)生長期液體培養(yǎng)物并且將所述培養(yǎng) 物在37°C下在厭氧性氣氛中針對粘性放線菌、小韋榮球菌、核粒梭桿菌、牙齦卟啉單胞菌、 中間普雷沃菌、福賽斯坦納菌、內(nèi)氏放線菌和生痰二氧化碳嗜纖維菌進(jìn)行過夜孵育，并且在 5 % C02環(huán)境中針對唾液鏈球菌、血鏈球菌、緩癥鏈球菌、伴放線放線桿菌、變異鏈球菌和格 氏鏈球菌進(jìn)行過夜孵育。將過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至BHI并且通過在600nm下測定（BioRad SmartSpec 3000)光密度(OD·)將其調(diào)節(jié)至1 X 107CFU/ml的濃度。對于每種菌株，將200μ1 細(xì)菌懸浮液添加至含有20μ1相應(yīng)羧酸的96孔板中。將羧酸的最終濃度設(shè)定為5、10、20和25μ mol/ml。對于每種所測試的細(xì)菌，還使用了不含有羧酸的相應(yīng)對照。另外，對于每種所測試 的細(xì)菌，添加了背景對照以校正背景染色。所述背景對照含有所測試的細(xì)菌和0.03重量％ 氯己定(作為防腐劑）。如先前所述來孵育板。在48小時之后將上清液從板的孔中除去。用1 X 1 OOyL PBS (磷酸鹽緩沖鹽水)將孔洗滌兩次，用96 %體積乙醇（96 %體積水溶液）固定20 分鐘，并且用1重量％結(jié)晶紫（1重量％水溶液)將保留在孔底部的生物膜染色。用5%體積乙 酸（5%體積水溶液）溶解結(jié)合的染料。通過使用Multiskan Ascent微板讀數(shù)器（Thermo Scientific)在630nm下測定吸光度來進(jìn)行對染色生物膜的定量。
[0165] 在扣除背景對照0D值之后，對于細(xì)菌/羧酸的每種組合，將在48小時處獲得的最大 0D值除以針對相應(yīng)對照所獲得的0D值，由此使得對照具有為1的值。因此，針對細(xì)菌與羧酸 的特定組合的大于1的值表明經(jīng)48小時的生物膜生長大于針對對照的經(jīng)48小時的生物膜生 長。
[0166] 針對細(xì)菌與羧酸的每種組合并且針對每種對照，在不同的3天進(jìn)行了實驗（因此提 供了 3個生物復(fù)制品）并且每天進(jìn)行四次實驗（因此提供了 4個技術(shù)復(fù)制品）。針對每天并且 針對每種組合，計算針對四次技術(shù)復(fù)制品所獲得的值(如以上詳述的）的平均值(均值）以提 供針對每天的每種組合的單一值。下面表7至8中示出的值是針對細(xì)菌與羧酸的每種組合所 獲得的三個單一值的平均值(均值）。結(jié)果顯示于下表7至8中：
[0168] 表7:48小時下的病原性細(xì)菌
[0169] *伴放線放線桿菌
[0172] 表8:經(jīng)48小時的有益細(xì)菌
[0173] 在以上數(shù)據(jù)中，將值1.6作為閾值，在所述閾值之上有機(jī)酸使得細(xì)菌的生物膜生長 相對于對照顯著地增加。選擇所述值是為了排除低刺激的代謝物并且避免假陽性的結(jié)果。
[0174] 如可從以上數(shù)據(jù)中看到的，L-天冬氨酸和琥珀酸在25μπι〇1/πι1下均表現(xiàn)出益生元 效應(yīng)。
【主權(quán)項】
1. 一種口腔護(hù)理組合物，置巧含且有下立的餘酸. 其中：化為H，或取代或未取代的烷基;并且 化為H、OH或畑2; 所述口腔護(hù)理組合物用于W下方面中： (a) 在口腔中進(jìn)行選擇性地促進(jìn):相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選 擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植； (b) 在口腔中相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有 益效應(yīng)的細(xì)菌的生物膜形成;或 (C)維持和/或重新建立健康的口腔微生物群。2. 如權(quán)利要求1所述的口腔護(hù)理組合物，其中W所述口腔護(hù)理組合物的重量為基準(zhǔn)，所 述組合物中的所述簇酸存在量為0.01重量％至1〇重量％。3. 如任一前述項權(quán)利要求所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述組合物中的所述簇酸存在 量為如mol/ml至30皿ol/ml。4. 如任一前述項權(quán)利要求所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為H。5. 如權(quán)利要求1至3中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為0H。6. 如權(quán)利要求1至3中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為N出。7. 如權(quán)利要求6所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為酸性氨基酸。8. 如權(quán)利要求7所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述酸性氨基酸為心氨基酸。9. 如權(quán)利要求8所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述酸性氨基酸為天冬氨酸或谷氨酸。10. 如權(quán)利要求1至6中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為H。11. 如權(quán)利要求1至6中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為未取代的烷基。12. 如權(quán)利要求11所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為未取代的C1-C4烷基。13. 如權(quán)利要求12所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為k乳酸。14. 如權(quán)利要求1至6中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中化包含糖殘基。15. 如權(quán)利要求14所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述糖殘基為化喃半乳糖殘基。16. 如權(quán)利要求15所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述化喃半乳糖殘基為a-D-化喃半乳 糖殘基。17. 如權(quán)利要求16所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為蜜二糖酸。18. 如權(quán)利要求1至7中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中Ri包含至少一個COOR溢，其 中R3為H或Ci-4烷基。19. 如權(quán)利要求18所述的口腔護(hù)理組合物，其中化包含至少一個C(O)COOH基。20. 如權(quán)利要求18所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為(C出)nCOORs，其中n為1至5。21. 如權(quán)利要求20所述的口腔護(hù)理組合物，其中n為1。22. 如權(quán)利要求21所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為班巧酸或心蘋果酸。23. 如權(quán)利要求21所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為班巧酸單甲醋。24. 如權(quán)利要求19所述的口腔護(hù)理組合物，其中化為(C出)mC(0)C00H，其中m為1至4。25. 如權(quán)利要求24所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為a-酬基戊二酸。26. 如權(quán)利要求18所述的口腔護(hù)理組合物，其中化包含兩個COOH基。27. 如權(quán)利要求26所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述簇酸為巧樣酸。28. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述組合物為潔齒劑、牙 膏、凝膠、牙粉、漱日水、口腔清洗劑、錠劑、片劑、噴霧劑、日香糖或膜劑。29. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的口腔護(hù)理組合物，其中所述組合物還包含對口腔 健康具有有益效應(yīng)的至少一種細(xì)菌物種。30. 如權(quán)利要求29所述的口腔護(hù)理組合物，其中對口腔健康具有有益效應(yīng)的所述細(xì)菌 種類選自緩癥鏈球菌、唾液鏈球菌、血鏈球菌、粘性放線菌、小韋榮球菌、格氏鏈球菌、生疲 二氧化碳嗜纖維菌、內(nèi)氏放線菌W及其組合。31. 如任一前述權(quán)利要求所述的口腔護(hù)理組合物，所述口腔護(hù)理組合物用于預(yù)防牙銀 炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙銀炎、壞死性牙周炎W及離齒中的 一種或多種。32. -種在受試者口腔中選擇性促進(jìn)W下項的方法： (a) 相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有 益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植;或 (b) 相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的 細(xì)菌的生物膜形成； 所述方法包括使所述受試者的口腔與根據(jù)權(quán)利要求1至31中任一項所述的口腔護(hù)理組 合物接觸。33. -種在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生物群的方法，所述方法包括使 所述受試者的口腔與根據(jù)權(quán)利要求1至31中任一項所述的口腔護(hù)理組合物接觸。34. -種預(yù)防受試者的牙銀炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙銀 炎、壞死性牙周炎W及離齒中的一種或多種的方法，所述方法包括使所述受試者的口腔與 根據(jù)權(quán)利要求1至31中任一項所述的口腔護(hù)理組合物接觸。35. 具有下式的簇酸在口腔護(hù)理組合物的用途： 其中：化為H，或取代或未取代的烷基;并且 化為H、0H或畑2; 所述用途為： (a)相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或定植，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有 益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植； (b)相對于病原性口腔細(xì)菌的生物膜形成，選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的 細(xì)菌的生物膜形成； (C )在受試者中維持和/或重新建立健康的口腔微生物群;或 (d)預(yù)防受試者的牙銀炎、牙周炎、種植體周圍炎、種植體周圍粘膜炎、壞死性牙銀炎、 壞死性牙周炎W及離齒中的一種或多種。36. 如權(quán)利要求35所述的用途，其中所述簇酸在與對口腔健康具有有益效應(yīng)的所述細(xì) 菌和所述病原性口腔細(xì)菌一起解育24小時后，相對于所述病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活 性或定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的所述細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。37. 如權(quán)利要求35所述的用途，其中所述簇酸在與對口腔健康具有有益效應(yīng)的所述細(xì) 菌和所述病原性口腔細(xì)菌一起解育48小時后，相對于病原性口腔細(xì)菌的生長、代謝活性或 定植選擇性地促進(jìn)對口腔健康具有有益效應(yīng)的細(xì)菌的生長、代謝活性或定植。
【文檔編號】A61K31/19GK105916486SQ201380081879
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2013年12月27日
【發(fā)明人】漢斯·施泰特勒, 維姆·特日赫爾斯, 馬克·奎爾瑞嫩, 尼科·博恩
【申請人】高露潔-棕欖公司, 魯汶天主教大學(xué), 根特大學(xué)