含穩(wěn)定化抗體的液體制劑的制作方法【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明的課題在于提供抑制長(zhǎng)期保存時(shí)締合物的生成、穩(wěn)定的、適合皮下給予的含抗體的制劑。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，作為組氨酸緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷的反離子種類(lèi)，通過(guò)使用酸性氨基酸的天冬氨酸或谷氨酸，即，通過(guò)使用組氨酸?天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸?谷氨酸鹽緩沖液、或者三羥基甲基氨基甲烷?天冬氨酸鹽或三羥基甲基氨基甲烷?谷氨酸鹽作為緩沖液，具有顯著的穩(wěn)定效果。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用酸性氨基酸的天冬氨酸或谷氨酸作為精氨酸等堿性氨基酸的反離子種類(lèi)，即，通過(guò)使用精氨酸?天冬氨酸鹽或精氨酸?谷氨酸鹽，具有顯著的穩(wěn)定效果?！緦?zhuān)利說(shuō)明】含穩(wěn)定化抗體的液體制劑[00011本申請(qǐng)是原案申請(qǐng)日為2011年1月20日、原案申請(qǐng)?zhí)枮?01180014798.X(國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/JP2011/050911)、發(fā)明名稱(chēng)為"含穩(wěn)定化抗體的液體制劑"的專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域：
[0002]本發(fā)明涉及含抗體的制劑，特別涉及穩(wěn)定的含高濃度抗體的制劑。【
背景技術(shù)：
】[0003]近年來(lái)，由于醫(yī)療實(shí)踐的需求，人們對(duì)于開(kāi)發(fā)含抗體的制劑作為可自我注射的皮下注射用制劑的要求日益提高。在設(shè)計(jì)皮下注射用的含抗體的制劑時(shí)，每一次的抗體給予量大（100-200mg左右），而皮下注射中，通常是有注射液量的限制的，因此必須使給予液中的抗體為高濃度。[0004]含高濃度抗體的溶液由于蛋白質(zhì)作為大分子的性質(zhì)以及分子間相互作用，其本身有形成粘度高的溶液的傾向。并且，在以高濃度溶液保存蛋白質(zhì)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)以締合物的生成為代表的劣化現(xiàn)象的問(wèn)題，必須予以防止。特別是在以冷凍狀態(tài)或溶液狀態(tài)長(zhǎng)期保存含高濃度抗體的溶液時(shí)，或者冷凍融解時(shí)，容易生成締合物(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、2)。[0005]目前，作為謀求含高濃度抗體的制劑的穩(wěn)定化的方法，大多采用利用所謂的凍干濃縮技術(shù)的高濃度制劑，該凍干濃縮技術(shù)是將較低濃度的抗體溶液冷凍干燥，使用比冷凍干燥前的容量少的水將凍干制劑重新溶解，由此制備高濃度溶液制劑(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。但是，這種情況下，在制造凍干制劑時(shí)必須添加糖等的冷凍保護(hù)劑，重新溶解后的溶液制劑的粘度仍有增大之虞。[0006]與此相對(duì)，如果是不進(jìn)行冷凍干燥的溶液制劑，雖然認(rèn)為可以避免該問(wèn)題，但如上所述，含高濃度抗體的溶液制劑容易生成締合物。但是，含抗體的溶液制劑的操作比凍干制劑簡(jiǎn)便，并且容易應(yīng)用于預(yù)充式注射器制劑，因此其開(kāi)發(fā)的需求高。[0007]目前為止，為了使抗體的高濃度溶液制劑穩(wěn)定，人們進(jìn)行了各種研究(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1-4)。迄今已有報(bào)道稱(chēng):作為含抗體的溶液制劑的緩沖劑和穩(wěn)定劑，組氨酸緩沖劑和精氨酸是有用的（專(zhuān)利文獻(xiàn)2、3、4、5、6)。組氨酸緩沖劑通常使用鹽酸鹽，但最近有報(bào)道稱(chēng):組氨酸乙酸鹽比組氨酸鹽酸鹽顯示高穩(wěn)定效果，作為組氨酸緩沖劑的反離子種類(lèi)，乙酸是有用的(專(zhuān)利文獻(xiàn)6)。另外，作為穩(wěn)定劑的精氨酸通常使用精氨酸鹽酸鹽。但是，使用鹽酸或乙酸作為組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)時(shí)，存在無(wú)法確保充分的穩(wěn)定性的情況，人們需求更為優(yōu)異的反離子種類(lèi)。[0008]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)I:W01997/004801專(zhuān)利文獻(xiàn)2:W02008/121615專(zhuān)利文獻(xiàn)3:W02009/141239專(zhuān)利文獻(xiàn)4:W02008/071394專(zhuān)利文獻(xiàn)5:W02006/065746專(zhuān)利文獻(xiàn)6:W02006/044908非專(zhuān)利文獻(xiàn)：非專(zhuān)利文獻(xiàn)I:ChalIengesinthedevelopmentofhighproteinconcentrationformulations(開(kāi)發(fā)高蛋白濃度制劑的挑戰(zhàn)），JPharmSci，2004，93(6)，1390-1402非專(zhuān)利文獻(xiàn)2:CurrOpinBiotechnol.2009年12月；20(6):708-14.Epub2009年10月31日非專(zhuān)利文南犬3:Antibodystructure,instability,andformulation(抗體結(jié)構(gòu)、不穩(wěn)定性和制劑），JPharmSci，2007，96(1)，1-26非專(zhuān)利文南犬4:Formulationanddeliveryissuesformonoclonalantibodytherapeutics(單克隆抗體治療的制劑和遞送問(wèn)題），AdvDrugDelRev,2006，58(5-6)，686-706?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0009]本發(fā)明的目的在于提供穩(wěn)定的、適合皮下給予的含高濃度抗體的制劑。[0010]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):通過(guò)使用酸性氨基酸一天冬氨酸或谷氨酸作為組氨酸緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷緩沖液的反離子種類(lèi)，即，通過(guò)使用組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、或者三羥基甲基氨基甲烷_(kāi)天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液作為緩沖液，與作為藥物制劑緩沖液報(bào)道的組氨酸-鹽酸鹽緩沖液、組氨酸-乙酸鹽緩沖液等相比，具有顯著的穩(wěn)定效果。并且發(fā)現(xiàn)，作為穩(wěn)定劑使用的精氨酸等堿性氨基酸的反離子種類(lèi)，通過(guò)使用酸性氨基酸一天冬氨酸或谷氨酸，即，通過(guò)使用精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽作為穩(wěn)定劑，與作為藥物制劑的穩(wěn)定劑報(bào)道的精氨酸鹽酸鹽相比，具有顯著的穩(wěn)定效果，又發(fā)現(xiàn):添加這些制劑作為穩(wěn)定劑，可形成高濃度的穩(wěn)定的含抗體的溶液制劑，從而完成了本發(fā)明。[0011]即，本發(fā)明提供以下內(nèi)容。[0012][1]穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸-天冬氨酸鹽或堿性氨基酸-谷氨酸鹽。[0013][2][1]的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸為組氨酸的組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液。[0014][3][1]的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸為精氨酸的精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽。[0015][4]穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、以及精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽。[0016][5]穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。[0017][6]穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液、以及三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。[0018][7][1]-[6]中任一項(xiàng)的制劑，該制劑實(shí)質(zhì)上不含有氯根離子和乙酸根離子。[0019][8][I]_[7]中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑進(jìn)一步含有糖類(lèi)。[0020][9][1]-[8]中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體為人源化抗體或人抗體。[0021][10][1]-[9]中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體是等電點(diǎn)(pI)改變?yōu)?-8的抗體。[0022][11][I]_[10]中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體濃度為50mg/mL以上。[0023][12][I]-[10]中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體濃度為50mg/mL-250mg/mL。[0024][13][1]_[12]中任一項(xiàng)的制劑，該制劑為溶液制劑。[0025][14][13]的制劑，其中，溶液制劑的粘度為30mPa·s以下。[0026][15][13]或[14]的制劑，其中，溶液制劑在2-8°C下至少穩(wěn)定6個(gè)月。[0027][16][13]_[15]中任一項(xiàng)的制劑，其中，在溶液制劑的制造過(guò)程中，不含冷凍干燥工序地進(jìn)彳T制造。[0028][17][13]_[16]中任一項(xiàng)的制劑，該制劑在-30°C至-10°C下冷凍保存。[0029][18][1]_[12]中任一項(xiàng)的制劑，該制劑是凍干制劑。[0030][19][2]、[4]、[7]-[18]中任一項(xiàng)的制劑，其中，緩沖液濃度為51111-10〇1111。[0031][20][3]、[7]-[19]中任一項(xiàng)的制劑，其中，精氨酸的濃度為5mM-300mM。[0032][21][1]-[20]中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體為抗IL-6受體抗體。[0033][22][2]、[4]、[7]-[21]中任一項(xiàng)的制劑，其中，緩沖液實(shí)質(zhì)上只含有氨基酸。[0034][23][1]-[22]中任一項(xiàng)的制劑，該制劑是皮下給予用。[0035][24]抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的緩沖劑的反離子種類(lèi)。[0036][25]抑制含高濃度抗體的制劑在溶液狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的緩沖劑的反離子種類(lèi)。[0037][26]抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)。[0038][27]抑制含高濃度抗體的制劑在溶液狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)。[0039]本發(fā)明進(jìn)一步涉及堿性氨基酸-天冬氨酸鹽或堿性氨基酸-谷氨酸鹽在穩(wěn)定的含抗體的制劑的制造中的應(yīng)用，以及用于在抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)或溶液狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法中使用的作為該制劑中的緩沖劑或穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)的天冬氨酸或谷氨酸。[0040]根據(jù)本發(fā)明，提供穩(wěn)定性?xún)?yōu)異的含抗體的制劑。根據(jù)本發(fā)明，還可以提供抑制溶液狀態(tài)或冷凍狀態(tài)的制劑中締合物的生成，即，提供含高濃度的抗體的制劑。本發(fā)明的含高濃度抗體的制劑可在溶液狀態(tài)或冷凍狀態(tài)下穩(wěn)定地長(zhǎng)期保存。并且，本發(fā)明的制劑對(duì)于冷凍融解時(shí)的應(yīng)力的穩(wěn)定性也提高。從滲透壓的觀點(diǎn)考慮，通常是使用鹽酸或乙酸作為組氨酸或精氨酸或者三羥基甲基氨基甲烷的反離子種類(lèi)，與其相比，通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸，可不提高滲透壓而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定。在以皮下給予(SC)制劑等在幾乎等滲的狀態(tài)下穩(wěn)定的制劑為目標(biāo)時(shí)，可不提高滲透壓而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定是有利的。[0041]附圖簡(jiǎn)述圖1是將Mab1在40°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0042]圖2是將Mab2在40°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0043]圖3是將Mabl冷凍融解時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0044]圖4是將Mab1在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0045]圖5是將Mabl在5°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0046]圖6是將Mab1冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0047]圖7是將Mabl在_20°C3M保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0048]圖8是將Mab2冷凍融解(-20°C-室溫）時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0049]圖9是將Mabl在_20°C保存時(shí)的締合物量(％)在縱軸上繪出的圖。[0050]圖10是將Mab1冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)在縱軸上繪出的圖。[0051]圖11是將Mabl在25°C3M保存時(shí)的締合物量(％)在縱軸上繪出的圖。[0052]圖12是將Mab2在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0053]圖13是將Mab3在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0054]圖14是將Mab3冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0055]圖15是將Mab4在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0056]圖16是將Mab4冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0057]圖17是將Mabl、Mab2、Mab3在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0058]圖18是將MabI、Mab2、Mab3冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0059]圖19是將Mab5在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0060]圖20是將Mab5冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0061]圖21是將Mabl-5在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0062]圖22是將Mab1-5冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0063]圖23是將Mab1-3在25°C保存時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0064]圖24是將Mab1-3冷凍融解(-20°C-室溫)時(shí)的締合物量(％)隨時(shí)間的變化在縱軸上繪出的圖。[0065]實(shí)施發(fā)明的方案以下詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。[0066]本發(fā)明提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸-天冬氨酸鹽或堿性氨基酸-谷氨酸鹽。本發(fā)明中，堿性氨基酸例如可舉出：組氨酸、精氨酸、賴(lài)氨酸等，并且在本發(fā)明中，三羥基甲基氨基甲烷等堿性氨基化合物的緩沖液也包含在本發(fā)明的堿性氨基酸的定義中。[0067]即，本發(fā)明提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸為組氨酸的、組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液。本發(fā)明進(jìn)一步提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸為精氨酸的、精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽作為穩(wěn)定劑。本發(fā)明還進(jìn)一步提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液以及精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽。本發(fā)明又進(jìn)一步提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。本發(fā)明又提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液和三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。本發(fā)明中，含抗體的制劑是指含有抗體作為活性成分，制備成可給予人等動(dòng)物的制劑。[0068]本發(fā)明中的"穩(wěn)定的含抗體的制劑"是指該制劑中難以生成抗體等蛋白質(zhì)的締合物，即，在溶液或冷凍保存中難以發(fā)生以不溶性和可溶性締合物的生成為代表的劣化反應(yīng)的制劑。[0069]本發(fā)明的制劑中所含的抗體濃度沒(méi)有特別限定，優(yōu)選含有高濃度的抗體?？贵w濃度優(yōu)選50mg/mL以上，進(jìn)一步優(yōu)選100mg/mL以上，還進(jìn)一步優(yōu)選120mg/mL以上，又進(jìn)一步優(yōu)選150mg/mL以上，更進(jìn)一步優(yōu)選180mg/mL以上。本發(fā)明的制劑中所含的抗體濃度的上限沒(méi)有特別限定，通常為250mg/mL。[0070]本發(fā)明中使用的抗體只要與所需抗原結(jié)合即可，沒(méi)有特別限定，可以是多克隆抗體也可以是單克隆抗體，從可穩(wěn)定生產(chǎn)均質(zhì)的抗體的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選單克隆抗體。[0071]本發(fā)明中使用的單克隆抗體不僅包含來(lái)自人、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、兔、綿羊、駱駝、猴等動(dòng)物的單克隆抗體，也包含嵌合抗體、人源化抗體、雙特異抗體等的人工變異的基因重組型抗體。并且，為了進(jìn)行以改善血液滯留性或體內(nèi)動(dòng)力學(xué)為目的的抗體分子的物性的改變(具體來(lái)說(shuō)是等電點(diǎn)(Pl)的改變、Fc受體的親和性改變等），將抗體的恒定區(qū)等進(jìn)行人工變異得到的基因重組型抗體也包含于其中。[0072]本發(fā)明中使用的抗體的免疫球蛋白類(lèi)型沒(méi)有特別限定，可以是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4等IgG，IgA、IgD、IgE、IgM等的任意類(lèi)型，優(yōu)選IgG和IgM。[0073]并且，在本發(fā)明中使用的抗體不僅包含全抗體，也包含F(xiàn)v、Fab、F(ab)2等的抗體片段，和將抗體的可變區(qū)用肽接頭等接頭連接得到的1價(jià)或2價(jià)以上的單鏈Fv(scFv、sc(Fv)2或scFv二聚體等的雙抗體(diabody)等)等的低分子化抗體等。[0074]上述在本發(fā)明中使用的抗體可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知的方法制作。[0075]生成單克隆抗體的雜交瘤基本上可采用公知技術(shù)如下制作。即，使用所需抗原或表達(dá)所需抗原的細(xì)胞作為致敏抗原，將其按照常規(guī)的免疫方法免疫，然后通過(guò)常規(guī)的細(xì)胞融合法使所得免疫細(xì)胞與公知的母細(xì)胞融合，通過(guò)常規(guī)的篩選方法篩選單克隆抗體產(chǎn)生細(xì)胞（雜交瘤）來(lái)制作。雜交瘤的制作例如可按照MiIstein等人的方法（KohIer，G.和Milstein,C·，MethodsEnzymol.(1981)73:3-46)等進(jìn)行?？乖拿庖咴缘蜁r(shí)，可以與白蛋白等具有免疫原性的大分子連接后進(jìn)行免疫。[0076]還可以由雜交瘤克隆抗體基因，摻入適當(dāng)?shù)妮d體中，將其導(dǎo)入宿主，使用用基因重組技術(shù)生成的基因重組型抗體(例如參照Carl,A.K.Borrebaeck,James,W.Larrick,THERAPEUTICMONOCLONALANTIBODIES,在UnitedKingdom由MacmillanPublishersLTD出版，1990)。具體來(lái)說(shuō)，使用反轉(zhuǎn)錄酶，由雜交瘤的mRNA合成抗體的可變區(qū)（V區(qū)）的cDNA。如果得到了編碼目標(biāo)抗體V區(qū)的DNA，則將其與編碼所需抗體恒定區(qū)（C區(qū)）的DNA連接，將其摻入表達(dá)載體中?；蛘咭部梢詫⒕幋a抗體的V區(qū)的DNA摻入含有抗體C區(qū)的DNA的表達(dá)載體中。摻入表達(dá)載體中，使其在表達(dá)控制區(qū)、例如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。接著，可用該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，使抗體表達(dá)。[0077]本發(fā)明中，可以使用以降低對(duì)人的異種抗原性等為目的而人工變異的基因重組型抗體，例如嵌合抗體、人源化抗體等。這些變異抗體可采用已知的方法制造。嵌合抗體是含有人以外的哺乳動(dòng)物、例如小鼠抗體的重鏈、輕鏈的可變區(qū)與人抗體的重鏈、輕鏈的恒定區(qū)的抗體，可通過(guò)將編碼小鼠抗體可變區(qū)的DNA與編碼人抗體恒定區(qū)的DNA連接，將其摻入表達(dá)載體，導(dǎo)入宿主后產(chǎn)生而獲得。[0078]人源化抗體也稱(chēng)為重構(gòu)人抗體，是將人以外的哺乳動(dòng)物、例如小鼠抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)移植作為人抗體的互補(bǔ)決定區(qū)所得，還已知其常規(guī)的基因重組方法。具體來(lái)說(shuō)，通過(guò)PCR法，由數(shù)個(gè)制作成末端部具有重疊部分的低聚核苷酸合成設(shè)計(jì)成將小鼠抗體的CDR與人抗體的框架區(qū)（FR)連接的DNA序列。將所得DNA與編碼人抗體恒定區(qū)的DNA連接，接著，摻入表達(dá)載體中，將其導(dǎo)入宿主中產(chǎn)生，從而獲得（參照歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)EP239400、TO96/02576)。對(duì)于經(jīng)由CDR連接的人抗體的FR，選擇互補(bǔ)決定區(qū)形成良好的抗原結(jié)合部位的FR。還可根據(jù)需要置換抗體可變區(qū)的框架區(qū)的氨基酸，使重構(gòu)人抗體的互補(bǔ)決定區(qū)形成適當(dāng)?shù)目乖Y(jié)合部位(Sato,K.等人，CancerRes.(1993)53，851-856)。[0079]為了改善抗體的活性、物性、藥物動(dòng)力學(xué)、安全性等而置換抗體的氨基酸的技術(shù)已知例如有以下所述技術(shù)，本發(fā)明中使用的抗體也包含實(shí)施了這種氨基酸置換的抗體。[0080]對(duì)于對(duì)IgG抗體的可變區(qū)實(shí)施氨基酸置換的技術(shù)，報(bào)道了人源化(TsurushitaN,HintonPR,KumarS.,Designofhumanizedantibodies:fromanti-TactoZenapax.(人源化抗體設(shè)計(jì)：從抗-Tac到賽尼哌），Methods.2005年5月；36(1):69-83)、利用用于增強(qiáng)結(jié)合活性的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的氨基酸置換的親和力成熟(RajpalA,BeyazNjHaberL，CappuccilliG，YeeHjBhattRR，TakeuchiT，LernerRA，CreaR.,Ageneralmethodforgreatlyimprovingtheaffinityofantibodiesbyusingcombinatoriallibraries.(通過(guò)使用組合文庫(kù)極大地提高抗體親和力的一般方法），ProcNatlAcadSciUSA.2005年6月14日；102(24):8466-71)、通過(guò)框架(FR)的氨基酸置換以提高物理化學(xué)穩(wěn)定性（EwertS，HoneggerA，PluckthunA·，Stabilityimprovementofantibodiesforextracellularandintracellularapplications:CDRgraftingtostableframeworksandstructure-basedframeworkengineering.(用于胞外和胞內(nèi)應(yīng)用的抗體穩(wěn)定性提高：CDR移植至穩(wěn)定框架和基于結(jié)構(gòu)的框架工程），Methods.2004年10月；34(2):184-99.綜述）。作為實(shí)施IgG抗體的Fc區(qū)域的氨基酸置換的技術(shù)，已知有使抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒活性(ADCC)或補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒活性(CDC)增強(qiáng)的技術(shù)(KimSJ,ParkY，HongHJ.，Antibodyengineeringforthedevelopmentoftherapeuticantibodies.(用于開(kāi)發(fā)治療性抗體的抗體工程），MolCells.2005年8月31日；20(1):17-29.綜述）。并且還有人報(bào)道了不僅使上述效應(yīng)子功能增強(qiáng)，還可使抗體的血液半衰期提高的Fc的氨基酸置換的技術(shù)(HintonPR,XiongJM，JohlfsMG,TangMT，KellerS，TsurushitaN.,AnengineeredhumanIgGlantibodywithlongerserumhalf-life.(血清半衰期更長(zhǎng)的人IgGl工程抗體），JImmunol.2006年I月I日；176(1):346-56;GhetieVjPopovSjBorvakJjRaduCjMatesoiDjMedesanCjOberRJjWardES.,IncreasingtheserumpersistenceofanIgGfragmentbyrandommutagenesis.(通過(guò)隨機(jī)誘變?cè)鰪?qiáng)IgG片段的血清滯留性），NatBiotechnol·1997年7月；15(7):637-40)。并且，還已知有以提高血液滯留性或體內(nèi)動(dòng)力學(xué)為目的的用于控制抗體的等電點(diǎn)（Pl)的氨基酸置換技術(shù)，具體來(lái)說(shuō)，是通過(guò)改變暴露于抗體表面的氨基酸殘基來(lái)控制抗體的Pl的技術(shù)(W007/114319)。進(jìn)一步還已知有以改善抗體的物性為目的的恒定區(qū)的各種氨基酸置換技術(shù)(W009/41613)。[0081]通過(guò)延長(zhǎng)抗體在血漿中的滯留性或半衰期，有望降低作為藥物的抗體的給予量或延長(zhǎng)給予間隔。因此，作為值得期待的技術(shù)之一，可舉出降低抗體等電點(diǎn)的技術(shù)(W007/114319)。本發(fā)明的制劑對(duì)于這種等電點(diǎn)改變了的抗體也具有高穩(wěn)定效果。這種pI改變抗體是指與改變前的抗體的Pl相比，改變了1以上、優(yōu)選2以上、進(jìn)一步優(yōu)選3以上的抗體。天然的(或者常規(guī)的）抗體通?？烧J(rèn)為具有7.5-9.5范圍的等電點(diǎn)。本發(fā)明的制劑對(duì)于特別是天然中難以存在的、具有低等電點(diǎn)的抗體具有高穩(wěn)定效果。這種抗體的等電點(diǎn)可舉出5.0-8.0，優(yōu)選5.0-7.5，進(jìn)一步優(yōu)選5.0-7.0，特別優(yōu)選5.5-6.5。如后述實(shí)施例所述，改變Mab2(等電點(diǎn):9.3)的氨基酸序列以控制等電點(diǎn)的Mab1的等電點(diǎn)為5.8。[0082]還已知人抗體的取得方法。例如將人淋巴細(xì)胞在體外用所需抗原或表達(dá)所需抗原的細(xì)胞致敏，將致敏淋巴細(xì)胞與人骨髓瘤細(xì)胞例如U266融合，也可獲得具有抗原結(jié)合活性的所需的人抗體(參照日本特公平1-59878)。另外，將具有人抗體基因庫(kù)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用抗原免疫，也可獲得所需的人抗體（參照W093/12227、W092/03918、W094/02602、W094/25585、TO96/34096、W096/33735)。還進(jìn)一步已知使用人抗體文庫(kù)，通過(guò)淘選獲得人抗體的技術(shù)。例如，可以以人抗體的可變區(qū)作為單鏈抗體(scFv)，通過(guò)噬菌體展示法在噬菌體表面表達(dá)，選擇與抗原結(jié)合的噬菌體。如果對(duì)所選擇的噬菌體的基因進(jìn)行分析，則可以確定編碼與抗原結(jié)合的人抗體可變區(qū)的DNA序列。如果了解了與抗原結(jié)合的scFv的DNA序列，則可以制作含有該序列的適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，獲得人抗體。這些方法已是眾所周知，可參考W092/01047、TO92/20791、W093/06213、W093/11236、TO93/19172、TO95/01438、W095/15388。本發(fā)明中使用的抗體也包含這種人抗體。[0083]先分離抗體基因、再導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗髦谱骺贵w時(shí)，可以使用適當(dāng)?shù)乃拗髋c表達(dá)載體的組合。使用真核細(xì)胞作為宿主時(shí)，可以使用動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞已知有：（1)哺乳類(lèi)細(xì)胞，例如CHO、COS、骨髓瘤、BHK(幼倉(cāng)鼠腎）、HeLa、Vero;(2)兩棲類(lèi)細(xì)胞，例如非洲爪蟾卵母細(xì)胞;或（3)昆蟲(chóng)細(xì)胞，例如sf9、sf21、Tn5等。植物細(xì)胞已知有來(lái)自煙草屬(Wcoiia/?a)、例如煙草(jVicoiia/?aiact/ffi)的細(xì)胞，可以將其進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)。真菌細(xì)胞已知有酵母、例如酵母屬（SaccAaroffijces)例如啤酒酵母（SaccAaro/sjcesce_rerisiae)，絲狀真菌、例如曲霉屬djOei-g'iDt/s)例如黑曲霉djOei-g'iDt/s等。使用原核細(xì)胞時(shí)，有使用細(xì)菌細(xì)胞的產(chǎn)生體系。細(xì)菌細(xì)胞已知有大腸桿菌(IcWi)、枯草桿菌。通過(guò)轉(zhuǎn)化，向這些細(xì)胞導(dǎo)入目標(biāo)抗體基因，通過(guò)體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可獲得抗體。[0084]并且，本發(fā)明中使用的抗體也包含抗體片段或低分子化抗體以及抗體修飾物。例如，抗體片段或低分子化抗體可舉出：Fab、F(ab'）2、Fv或者H鏈與L鏈的Fv用適當(dāng)?shù)慕宇^連接而成的1價(jià)或2價(jià)以上的單鏈Fv(scFv)、sc(Fv)2等）（HustonJ.S等.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85:5879-5883)。具體來(lái)說(shuō)，將抗體用酶、例如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶處理，生成抗體片段，或者構(gòu)建編碼這些抗體片段的基因，將其導(dǎo)入表達(dá)載體，然后在適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中表達(dá)(例如參照Co,M.S等人.，J.Immunol.(1994)152，2968-2976;Better,Μ·和Horwitz，A.H·，MethodsEnzymol.(1989)178，476-496;Pluckthun，A.和Skerra,A.，MethodsEnzymol.(1989)178，497-515;Lamoyi，E·，MethodsEnzymol.(1986)121，652-663;Rousseaux,J.等人·，MethodsEnzymol.(1986)121，663-669;Bird,R.E.和Walker,B.W·，TrendsBiotechnol.(1991)9，132-137)。[0085]抗體修飾物也可以使用與聚乙二醇(PEG)或細(xì)胞毒性試劑等各種分子結(jié)合的抗體(Farmaco.1999年8月30日；54(8):497-516;CancerJ.2008年5-6月；14(3):154-69)。本發(fā)明的"抗體"也包含這些抗體修飾物。為獲得上述抗體修飾物，可通過(guò)對(duì)所得抗體實(shí)施化學(xué)修飾獲得。這些方法在本領(lǐng)域已經(jīng)建立。[0086]本發(fā)明的制劑中所含的抗體可舉出：抗組織因子抗體、抗IL-6受體抗體、抗IL-6抗體、HMl.24抗原單克隆抗體、抗甲狀旁腺激素相關(guān)肽抗體(抗PTHrP抗體）、抗磷脂酰肌醇聚糖-3抗體、抗神經(jīng)節(jié)苷脂GM3抗體、抗TPO受體激動(dòng)劑抗體、凝血因子VIII替代抗體、抗IL31受體抗體、抗HLA抗體、抗AXL抗體、抗CXCR4抗體、抗NRl0抗體、IX因子與X因子的雙特異抗體等，但并不限于此。[0087]本發(fā)明中使用的優(yōu)選的重構(gòu)人源化抗體可舉出：人源化抗白細(xì)胞介素6(IL_6)受體抗體（tocilizumab，hPM-l或MRA)(參照W092/19759)、人源化抗HM1.24抗原單克隆抗體(參照W098/14580)、人源化抗甲狀旁腺激素相關(guān)肽抗體(抗PTHrP抗體）（參照W098/13388)、人源化抗組織因子抗體(參照W099/51743)、抗磷脂酰肌醇聚糖-3人源化IgGl航體(參照PCT/JP05/013103)、抗NRlO人源化抗體（參照W02009/072604)等。本發(fā)明中使用的人源化抗體特別優(yōu)選人源化抗IL-6受體抗體。[0088]人IgM抗體優(yōu)選抗神經(jīng)節(jié)苷脂GM3重組型人IgM抗體(參照W005/05636)等。[0089]低分子化抗體優(yōu)選抗TPO受體激動(dòng)劑雙抗體(參照W002/33072)、抗CD47激動(dòng)劑雙抗體(參照W001/66737)等。[0090]等電點(diǎn)得到改良的抗體例如可舉出：W02009/041621所述的抗IL-6受體抗體Mab1(H鏈/SEQIDNO:1，L鏈/SEQIDNO:2)，為抗NRlO人源化抗體、按照W02009/072604的實(shí)施例12中記載的方法制作的完全人源化NS22抗體等。[0091]本發(fā)明的制劑中的緩沖液(例如組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液、組氨酸-谷氨酸鹽緩沖鹽、三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液、三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液）的優(yōu)選方案是通過(guò)用以游離氨基酸的狀態(tài)含有天冬氨酸和/或谷氨酸的水溶液等液體滴定以游離氨基酸的狀態(tài)添加有組氨酸等堿性氨基酸或三羥基甲基氨基甲烷的水溶液等的溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)的緩沖液。也可以以相反的順序添加、調(diào)節(jié)，還可以以粉末直接滴定。[0092]本發(fā)明的制劑中的精氨酸-天冬氨酸鹽和精氨酸-谷氨酸鹽的優(yōu)選方案是通過(guò)將以游離氨基酸的狀態(tài)含有天冬氨酸(游離氨基酸)和/或谷氨酸(游離氨基酸)的水溶液等液體與以游離氨基酸的狀態(tài)添加了精氨酸(游離堿)的水溶液等溶液混合進(jìn)行調(diào)節(jié)的鹽。也可以按其相反順序添加來(lái)調(diào)節(jié)，還可以用粉末直接滴定。[0093]本發(fā)明人為了評(píng)價(jià)含有高濃度的抗體的試樣在保存時(shí)的穩(wěn)定性，通過(guò)冷凍融解試驗(yàn)、熱加速試驗(yàn)、長(zhǎng)期保存試驗(yàn)和冷凍保存試驗(yàn)研究了各種添加劑的效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用酸性氨基酸一天冬氨酸或谷氨酸作為組氨酸緩沖液的反離子種類(lèi)，即，通過(guò)使用組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液作為緩沖液，與作為藥物制劑的緩沖液報(bào)道的組氨酸-鹽酸鹽緩沖液或組氨酸-乙酸鹽緩沖液等相比，顯著抑制締合物的生成。[0094]進(jìn)一步與作為含抗體的制劑的穩(wěn)定劑報(bào)道的精氨酸鹽酸鹽比較，還發(fā)現(xiàn)，通過(guò)添加精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽，顯示更高的穩(wěn)定效果。這些研究結(jié)果在本說(shuō)明書(shū)中后述的實(shí)施例中以使用含人源化抗IL-6受體抗體的試樣的試驗(yàn)結(jié)果的形式例示。[0095]具體來(lái)說(shuō)，通過(guò)含有組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、或三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液，抗體的締合物的生成減少，可以制成穩(wěn)定的含高濃度抗體的制劑。并且，通過(guò)含有精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽作為穩(wěn)定劑，抗體的締合物的生成進(jìn)一步減少，可以制成更穩(wěn)定的含高濃度抗體的制劑。因此，本發(fā)明涉及:通過(guò)使用組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、或三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液作為含高濃度抗體的溶液的緩沖液，以顯著抑制締合物的生成的方法；以及通過(guò)在含高濃度抗體的溶液中添加精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽作為穩(wěn)定劑，以顯著抑制締合物的生成的方法。[0096]作為本發(fā)明的一個(gè)方案，例如可舉出：使用天冬氨酸或谷氨酸作為含高濃度抗體的制劑中的緩沖液(例如組氨酸緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷緩沖液)或穩(wěn)定劑(例如精氨酸)的反離子種類(lèi)，以抑制該制劑在冷凍狀態(tài)下保存時(shí)以及冷凍融解時(shí)的締合的方法。[0097]作為本方法的另一方案，例如可舉出：使用天冬氨酸或谷氨酸作為含高濃度抗體的制劑中的緩沖液(例如組氨酸緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷緩沖液)或穩(wěn)定劑(例如精氨酸)的反離子種類(lèi)，以抑制該制劑在溶液狀態(tài)下保存時(shí)的締合的方法。[0098]本發(fā)明中，代替組氨酸緩沖液，可使用天冬氨酸或谷氨酸作為緩沖液的反離子種類(lèi)的緩沖液可舉出：三羥基甲基氨基甲烷(Tris)、咪唑等。并且還可以將這些緩沖液加入到本發(fā)明的組氨酸的緩沖液中使用。[0099]本發(fā)明中，作為可使用天冬氨酸或谷氨酸作為穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)的、精氨酸以外的穩(wěn)定劑，可舉出:精氨酰胺、賴(lài)氨酸、葡甲胺、精胺、亞精胺、鎂、鈣、鈉、鉀等。[0100]如上所述，本發(fā)明提供穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、或者三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。本發(fā)明的含抗體的制劑通過(guò)進(jìn)一步含有精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽，發(fā)揮更進(jìn)一步的穩(wěn)定效果。因此，本發(fā)明涉及含抗體的制劑，其特征在于:溶液中含有由組氨酸、精氨酸等堿性氨基酸(優(yōu)選組氨酸和/或精氨酸)或三羥基甲基氨基甲烷、與天冬氨酸或谷氨酸組合形成的鹽。[0101]本發(fā)明中使用的組氨酸可以使用組氨酸本身或其衍生物的任意形式，特別優(yōu)選L-組氨酸。本發(fā)明中使用的精氨酸可以使用精氨酸本身、其衍生物、其鹽的任一種，特別優(yōu)選使用L-精氨酸或其鹽。精氨酸的鹽優(yōu)選天冬氨酸鹽或谷氨酸鹽。[0102]本發(fā)明的制劑中的組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液的濃度(量)優(yōu)選為1-lOOmM，更優(yōu)選5-100mM，還更優(yōu)選5-50mM，進(jìn)一步優(yōu)選10-25mM。[0103]本發(fā)明的制劑中的精氨酸的濃度(量)優(yōu)選為5-300mM，進(jìn)一步優(yōu)選25-200mM，還進(jìn)一步優(yōu)選50_150mM。[0104]本發(fā)明的制劑可以是溶液制劑(含抗體的溶液制劑），或凍干劑。本發(fā)明的溶液制劑也包含凍干制劑制造工序中的冷凍干燥處理前的溶液或重新溶解后的溶液。本發(fā)明的溶液制劑優(yōu)選為在制造過(guò)程中不含冷凍干燥工序而制造的溶液制劑。本發(fā)明的凍干制劑可通過(guò)采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法將本發(fā)明的溶液制劑冷凍干燥獲得。[0105]對(duì)于本發(fā)明的制劑，優(yōu)選溶液的pH為4-8，更優(yōu)選5.0-7.5，進(jìn)一步優(yōu)選5.5-6.5。[0106]本發(fā)明的溶液制劑的粘度在室溫(25°C)的條件下為30mPa·s以下，優(yōu)選20mPa·s以下，更優(yōu)選15mPa·s以下。[0107]本發(fā)明的溶液制劑在冷藏溫度（2_8°C)下至少6個(gè)月、優(yōu)選12個(gè)月、進(jìn)一步優(yōu)選2年、還進(jìn)一步優(yōu)選3年，或者在室溫(22-28Γ)下至少6個(gè)月、優(yōu)選1年、更優(yōu)選2年，觀察不到顯著變化。即，本發(fā)明涉及在22-28Γ下至少穩(wěn)定6個(gè)月的溶液制劑。[0108]本發(fā)明的溶液制劑可在-30°C至-10°C的溫度范圍內(nèi)冷凍保存。[0109]本發(fā)明的制劑可進(jìn)一步含有表面活性劑。本發(fā)明使用的優(yōu)選的表面活性劑是聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯和聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，特別優(yōu)選的是聚山梨醇20、80和PluronicF-68(泊洛沙姆188)。表面活性劑相對(duì)于本發(fā)明的制劑的添加量通常為0.0001_10%&八），優(yōu)選0.001-5%，進(jìn)一步優(yōu)選0.005-3%。[0110]本發(fā)明的制劑可進(jìn)一步含有氨基酸。本發(fā)明中使用的優(yōu)選的氨基酸是天然氨基酸或氨基酸衍生物，特別優(yōu)選的是L-甲硫氨酸和L-脯氨酸。[0111]本發(fā)明的制劑可進(jìn)一步含有糖類(lèi)。本發(fā)明中使用的優(yōu)選的糖類(lèi)是蔗糖、海藻糖、葡甲胺和山梨糖醇。[0112]氨基酸或糖類(lèi)相對(duì)于本發(fā)明的制劑的添加量通常為ImM-lOOOmM，優(yōu)選5mM-500mM，進(jìn)一步優(yōu)選10mM-300mM。[0113]本發(fā)明的制劑可進(jìn)一步含有無(wú)機(jī)鹽。本發(fā)明中使用的優(yōu)選的糖類(lèi)是鎂鹽和鈣鹽。[0114]本發(fā)明的制劑優(yōu)選實(shí)質(zhì)上由以下的A-D的成分構(gòu)成。[0115]A)抗IL-6受體抗體B)組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液和/或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液C)根據(jù)需要使用的精氨酸(包含精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽）、精氨酸以外的氨基酸和/或糖類(lèi)，以及D)表面活性劑上述"實(shí)質(zhì)上構(gòu)成"是指后述的任意添加成分一冷凍保護(hù)劑、懸浮劑、溶解助劑、等滲劑、防腐劑、抗吸附劑、稀釋劑、賦形劑、PH調(diào)節(jié)劑、鎮(zhèn)痛劑、含硫還原劑、抗氧化劑等在常規(guī)制劑中添加的成分以外的成分為5mM以下，更優(yōu)選2mM以下，還更優(yōu)選ImM以下。[0116]并且，本發(fā)明的制劑中，緩沖劑或穩(wěn)定劑的反離子優(yōu)選不含有天冬氨酸或谷氨酸以外的陰離子。上述制劑的一個(gè)方案例如可舉出實(shí)質(zhì)上不含有氯根離子和乙酸根離子的制劑。"實(shí)質(zhì)上不含有氯根離子和乙酸根離子"是指:例如氯根離子和乙酸根離子為5mM以下，更優(yōu)選2mM以下，還更優(yōu)選1以下。實(shí)質(zhì)上不含有穩(wěn)定效果小的氯根離子和乙酸根離子、而是使用穩(wěn)定效果大的天冬氨酸或谷氨酸作為反離子，由此，不提高滲透壓即可以制造穩(wěn)定性高的含抗體的制劑。[0117]本發(fā)明的制劑中，可根據(jù)需要適當(dāng)添加冷凍保護(hù)劑、懸浮劑、溶解助劑、等滲劑、防腐劑、抗吸附劑、稀釋劑、賦形劑、PH調(diào)節(jié)劑、鎮(zhèn)痛劑、含硫還原劑、抗氧化劑等。[0118]冷凍保護(hù)劑例如可舉出海藻糖、蔗糖、山梨糖醇等糖類(lèi)。[0119]溶解助劑例如可舉出：聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚山梨醇80、煙酰胺、聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。[0120]等滲劑例如可舉出：氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等。[0121]防腐劑例如可舉出：對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。[0122]抗吸附劑例如可舉出：人血清白蛋白、卵磷脂、葡聚糖、環(huán)氧乙烷/環(huán)氧丙烷共聚物、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙二醇等。[0123]含硫還原劑例如可舉出:N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰高半胱氨酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨糖醇、硫代乙醇酸及其鹽、硫代硫酸鈉、谷胱甘肽、碳原子數(shù)1-7的硫代烷酸等具有巰基的化合物等。[0124]抗氧化劑例如可舉出：異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、α-生育酚、乙酸生育酚、L-抗壞血酸及其鹽、L-抗壞血酸棕櫚酸酯、L-抗壞血酸硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒(méi)食子酸三戊酯、沒(méi)食子酸丙酯或乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、焦磷酸鈉、偏磷酸鈉等螯合劑。[0125]本發(fā)明的制劑可以以口服或非口服的任意形式，通常是非口服途徑給予。具體可通過(guò)注射、透皮、經(jīng)粘膜、經(jīng)鼻、經(jīng)肺等給予。注射劑型的例子例如可以通過(guò)皮下注射、靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射等進(jìn)行全身或局部給予。采取皮下注射時(shí)，注射液量是有限定的，但每次的抗體給予量可以是大量（100-200mg左右）。因此，本發(fā)明的制劑特別適合皮下給予(注射）用。[0126]從疼痛的角度考慮，皮下給予用的制劑優(yōu)選緩沖劑滲透壓比接近等滲的1.0。因此，本發(fā)明的溶液制劑的滲透壓比優(yōu)選為約1。另外，對(duì)于制劑，為了提高其保存穩(wěn)定性而添加精氨酸或糖類(lèi)等以謀求穩(wěn)定化，但是，如果滲透壓超過(guò)等滲，則成為皮下給予時(shí)疼痛的原因，因此，優(yōu)選這些穩(wěn)定劑要考慮滲透壓來(lái)添加。[0127]并且本發(fā)明還涉及堿性氨基酸-天冬氨酸鹽或堿性氨基酸-谷氨酸鹽在穩(wěn)定的含抗體的制劑的制造中的應(yīng)用，以及用于在抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)或溶液狀態(tài)下保存時(shí)的締合的方法中使用的該制劑中的緩沖劑或穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)一天冬氨酸或谷氨酸。[0128]本說(shuō)明書(shū)中所引用的所有現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)均作為參照結(jié)合到本說(shuō)明書(shū)中。實(shí)施例[0129]以下進(jìn)一步通過(guò)實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不只限定于這些實(shí)施例。[0130][實(shí)施例1]使用Mabl和Mab2的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)W02009/041621中所述的抗IL-6受體抗體Mabl(H鏈/SEQIDNO:1，L鏈/SEQIDNO:2)和Mab2(H鏈/SEQIDNO:3，L鏈/SEQIDNO:4,托珠單抗)是使用CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法表達(dá)，按照含有A蛋白的本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法高純度純化，用于下述實(shí)施例的穩(wěn)定性試驗(yàn)。[0131]使用Mabl和Mab2,通過(guò)冷凍融解和40°C保存評(píng)價(jià)組氨酸-氯化物或組氨酸-乙酸鹽兩個(gè)配方的穩(wěn)定性。樣品的制備是將Mabl和Mab2相對(duì)各配方的溶液(表1)透析過(guò)夜，然后濃縮各溶液，使Mabl或Mab2的終濃度為37mg/mL來(lái)進(jìn)行。冷凍融解試驗(yàn)如下進(jìn)行:將在-20°C下冷凍的樣品在室溫下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施I〇次后，接著，將在-20°C下冷凍的樣品在溫浴(37°C)中融解，將該快速冷凍融解實(shí)施10次。冷凍融解后和40°C保存后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜（SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算。締合物(％)的增加顯示Mabl和Mab2的穩(wěn)定性降低，因此，采用締合物增加量作為各配方的穩(wěn)定性比較的指標(biāo)。[0132]尺寸排阻色譜(SEC)尺寸排阻色譜(SEC)是為了分析各配方的締合物量和低分子分解物而實(shí)施。通過(guò)下述移動(dòng)相將各樣品稀釋為約0.4-2.011^/1^，將它們用6300051^柱(東乂一)分析。移動(dòng)相使用含300mMNaC1的50mM的磷酸緩沖液（pH7.0)，以流速0.5mL/分鐘進(jìn)行分析（檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm)。將比單體更快洗脫的峰作為締合物，比單體的洗脫慢但比來(lái)自緩沖液的峰洗脫快的峰作為低分子分解物進(jìn)行分析，通過(guò)面積百分率法計(jì)算各含量（％)。[0133][表1]使用Mabl和Mab2的組氨酸-氯化物或組氨酸-乙酸鹽兩個(gè)配方的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果如圖1-3所示。由該結(jié)果表明，對(duì)于Mabl，在溶液保存和冷凍融解中，組氨酸-氯化物均顯示比組氨酸-乙酸鹽更高的穩(wěn)定性。由溶液保存結(jié)果可知，對(duì)于Mab2,組氨酸-氯化物比組氨酸-乙酸鹽顯示約2倍左右的高穩(wěn)定性。[0134][實(shí)施例2]使用Mabl的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)(1)通常鹽酸為組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)。以往有人報(bào)道:在使用乙酸、磷酸、硫酸作為組氨酸的反離子種類(lèi)進(jìn)行研究時(shí)，結(jié)果，作為組氨酸的反離子種類(lèi)，乙酸的穩(wěn)定性?xún)?yōu)異(PCT/US2005/037471)。但在上述實(shí)施例1中顯示，相對(duì)于Mabl和Mab2，作為組氨酸的陰離子性的反離子種類(lèi)，鹽酸比乙酸稍顯優(yōu)異。陰離子性的反離子種類(lèi)通常是鹽酸，但有報(bào)道指出：鹽酸容易腐蝕常用作保存容器的不銹鋼（Dent.Mater.17:409-414(2001);J.Pharm.Sci.86:1250-1255(1997))。還有報(bào)道稱(chēng)：乙酸具有揮發(fā)性，因此pH容易發(fā)生變動(dòng)(InjectableDrugDevelopment,Authors:PramodK.Gupta(Editor),GayleA.Brazeau,GayleA)〇[0135]因此，本實(shí)施例中，作為Mabl和Mab2的緩沖液中的陰離子性的反離子種類(lèi)，對(duì)不具有不銹鋼腐蝕性和揮發(fā)性、且比乙酸和鹽酸具有更優(yōu)異的穩(wěn)定效果的反離子種類(lèi)進(jìn)行了研究。作為迄今在PCT/US2005/037471中報(bào)道的鹽酸、乙酸、磷酸、硫酸以外的陰離子種類(lèi)，對(duì)氨基酸一天冬氨酸和谷氨酸作為反離子種類(lèi)進(jìn)行了研究。實(shí)施例1中明顯的是，對(duì)于Mabl和Mab2,均表明組氨酸-氯化物比組氨酸-乙酸鹽顯示高穩(wěn)定性，因此，關(guān)于反離子種類(lèi)引起的對(duì)穩(wěn)定性的影響，與鹽酸進(jìn)行了比較。具體來(lái)說(shuō)，是使用Mabl進(jìn)行表2所示的三個(gè)配方的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，由此，對(duì)作為緩沖液的組氨酸和作為穩(wěn)定劑的精氨酸的陰離子性反離子種類(lèi)鹽酸、天冬氨酸、谷氨酸引起的對(duì)穩(wěn)定性的影響進(jìn)行了評(píng)價(jià)。[0136]樣品的制備是與實(shí)施例1同樣，將Mabl相對(duì)各配方溶液(表2)透析過(guò)夜，然后濃縮各溶液，使Mab1的終濃度為200mg/mL來(lái)進(jìn)行。冷凍融解試驗(yàn)通過(guò)將緩慢融解(將在-20°C下冷凍的試樣在室溫下融解)的循環(huán)實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。各配方溶液的制備方法如下所示。對(duì)于配方No.3，是分別量取20mM、50mM分量的L-組氨酸和L-精氨酸，將它們?nèi)芙庥贛i11iQ水中，然后滴定1當(dāng)量的鹽酸，將pH調(diào)節(jié)為6。對(duì)于配方No.4-5，是分別量取20mM、50mM、60mM分量的L-組氨酸、L-精氨酸和L-天冬氨酸或L-谷氨酸，將它們?nèi)芙庥贛illiQ水中，然后滴定30-40mM的L-天冬氨酸或L-谷氨酸溶液，將pH調(diào)節(jié)為6。冷凍融解后或者在-20°C保存后、25°C保存后以及5°C保存后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算[表2][0137]冷凍融解后或_20°C保存后、25°C保存后和5°C保存后各配方的締合物增加量(％)的結(jié)果如圖4-7所示。由5°C、25°C保存時(shí)的締合物增加量比較顯示，組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)是按照谷氨酸=天冬氨酸〉鹽酸的順序顯示高穩(wěn)定性，通過(guò)將反離子種類(lèi)由鹽酸改變?yōu)樘於彼峄蚬劝彼?，可以使Mabl的穩(wěn)定性提高。該傾向在冷凍融解和冷凍保存中也同樣，在-20°C、3M保存后，谷氨酸、天冬氨酸、鹽酸配方的締合物增加量(％)分別為約0.8、1.2、3.0%，顯示谷氨酸比天冬氨酸稍高的穩(wěn)定效果。[0138]由實(shí)施例1和2發(fā)現(xiàn)，作為Mab1中的陰離子性反離子種類(lèi)，谷氨酸和天冬氨酸比鹽酸和乙酸在穩(wěn)定性方面優(yōu)異。谷氨酸和天冬氨酸也未有不銹鋼腐蝕作用和揮發(fā)性的報(bào)道，由此也發(fā)現(xiàn)，谷氨酸和天冬氨酸有望作為Mabl的陰離子性的反離子種類(lèi)。具體來(lái)說(shuō)，認(rèn)為作為緩沖液，組氨酸-谷氨酸鹽和組氨酸-天冬氨酸鹽比組氨酸-氯化物和組氨酸-乙酸鹽優(yōu)異，作為穩(wěn)定劑，精氨酸-谷氨酸鹽和精氨酸-天冬氨酸鹽比精氨酸-氯化物和精氨酸-乙酸鹽優(yōu)異。[0139][實(shí)施例3]使用Mab2的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)(1)如實(shí)施例1所示，對(duì)于Mab2，與組氨酸-乙酸鹽緩沖液相比，組氨酸-氯化物緩沖液顯示高穩(wěn)定性(與Mabl同樣，圖2)。另外如實(shí)施例2所示，通過(guò)使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸改變?yōu)樘於彼峄蚬劝彼?，可以確認(rèn)溶液和冷凍時(shí)Mabl的穩(wěn)定性顯著提高。特別是對(duì)于Mabl，冷凍時(shí)，通過(guò)使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸改變?yōu)楣劝彼?，穩(wěn)定性大幅改善至約3倍以上，因此，使用Mab2,對(duì)于使組氨酸的反離子種類(lèi)為谷氨酸和鹽酸時(shí)的冷凍融解的穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。同時(shí)實(shí)施含有穩(wěn)定效果高的精氨酸的配方，在觀測(cè)使組氨酸的反離子種類(lèi)為谷氨酸時(shí)的穩(wěn)定效果時(shí)，以其作為比較對(duì)照。[0140]樣品的制備與實(shí)施例1同樣，通過(guò)將Mab2相對(duì)各配方溶液(表3)透析過(guò)夜，然后濃縮各溶液，使Mab2的終濃度約為40-230mg/mL來(lái)進(jìn)行。各配方溶液的制備方法如下所示。關(guān)于配方No.6和8，分別量取50mM分量的L-組氨酸和L-精氨酸（只對(duì)配方No.8)，將它們?nèi)苡贛illiQ水中，然后滴加1當(dāng)量的鹽酸，將pH調(diào)節(jié)為6。關(guān)于配方No.7,分別量取50mM、25mM分量的L-組氨酸和L-谷氨酸，將它們?nèi)芙庥贛iIliQ水中，然后滴定30-40mM的L谷氨酸溶液，將pH調(diào)節(jié)為6。樣品制備后各配方的Mab2濃度如表4所示。冷凍融解試驗(yàn)是將在-20°C下冷凍的樣品在室溫下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。緩慢冷凍融解后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)，通過(guò)面積百分率法計(jì)算[0141]冷凍融解試驗(yàn)中各配方的締合物增加量(％)的結(jié)果如圖8所示。該結(jié)果表明，通過(guò)使組氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸變?yōu)楣劝彼幔琈ab2的穩(wěn)定性提高至約2倍左右。還表明，該谷氨酸引起的穩(wěn)定效果與添加常規(guī)穩(wěn)定劑50mM精氨酸-氯化物時(shí)大致同等，谷氨酸作為反離子種類(lèi)，單獨(dú)具有高穩(wěn)定效果。[0142]這里，從疼痛的觀點(diǎn)考慮，對(duì)于皮下給予用的制劑，緩沖液的滲透壓比優(yōu)選接近等滲的I.〇。關(guān)于冷凍融解的穩(wěn)定性，50mM組氨酸-氯化物/50mM精氨酸-氯化物以及50mM組氨酸-谷氨酸鹽均同等，但考慮到緩沖液的滲透壓，后者比前者的滲透壓低約IOOmOsm左右。因此，如上所述，通過(guò)使反離子種類(lèi)為天冬氨酸或谷氨酸來(lái)提高穩(wěn)定性時(shí)，可以不提高滲透壓，而只提高穩(wěn)定性，這在開(kāi)發(fā)皮下給予用制劑時(shí)有很大的優(yōu)勢(shì)。[0143]另外，對(duì)于制劑，為了提高其保存穩(wěn)定性而添加精氨酸或糖類(lèi)等來(lái)謀求穩(wěn)定化，但是，如果滲透壓超過(guò)等滲，則成為皮下給予時(shí)疼痛的原因，因此，這些穩(wěn)定劑必須考慮滲透壓進(jìn)行添加（InjectableDrugDevelopment,Authors:PramodK.Gupta(Editor),GayleA.Brazeau,GayleA;Challengesinthedevelopmentofhighproteinconcentrationformulations，JPharmSci，2004，93(6)，1390-1402)。對(duì)于Mabl，添加鹽酸和乙酸作為組氨酸和精氨酸的陰離子性反離子種類(lèi)時(shí)，鹽酸和乙酸不顯示穩(wěn)定效果，因此只有提高滲透壓的效果。因此，從滲透壓的觀點(diǎn)考慮，作為制劑中所含的離子種類(lèi)，沒(méi)有穩(wěn)定效果的離子濃度越少越好。即，從滲透壓的觀點(diǎn)考慮，不含有鹽酸和乙酸、作為緩沖液，組氨酸-谷氨酸鹽和組氨酸-天冬氨酸鹽比組氨酸-氯化物和組氨酸-乙酸鹽優(yōu)異，作為穩(wěn)定劑，精氨酸-谷氨酸鹽和精氨酸-天冬氨酸鹽比精氨酸-氯化物和精氨酸-乙酸鹽優(yōu)異。[0144][實(shí)施例4]使用Mabl的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)(2)如實(shí)施例2和3所示，顯然的是，通過(guò)使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)為谷氨酸，特別是在冷凍保存中，Mab1的穩(wěn)定性顯著改善至約2-3倍。因此，為了研究Mab1在-20°C下的保存穩(wěn)定性，使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)為谷氨酸，進(jìn)一步使用糖(海藻糖）作為穩(wěn)定劑，實(shí)施-20°C下保存穩(wěn)定性試驗(yàn)。同時(shí)也實(shí)施溶液保存和冷凍融解。[0145]樣品的制備是將Mab1相對(duì)各配方溶液(表5)透析過(guò)夜，然后濃縮各溶液，使Mab1的終濃度為200mg/mL來(lái)進(jìn)行。各配方溶液的制備方法如下所示。將L-組氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酸和海藻糖分別量取100mM、50mM、100mM、0-150mM的分量，將它們?nèi)苡贛illiQ水中，然后滴定30-40mM的L-谷氨酸溶液，將pH調(diào)節(jié)為6。冷凍融解試驗(yàn)是將在-20°C下冷凍的樣品在室溫下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。冷凍融解后，在_20°C保存后以及在25°C保存后的各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算[表5][0146]-20°C保存后、冷凍融解后、以及25°C保存后各配方的締合物增加量(％)的結(jié)果如圖9-11所示。如圖9-11所示，通過(guò)添加50mM以上海藻糖，得到了在-20°C保存和冷凍融解中締合物幾乎不增加的配方。在25°C溶液保存中，觀測(cè)到海藻糖的濃度依賴(lài)性的穩(wěn)定效果。如上所述，發(fā)現(xiàn)了只含有氨基酸和糖的、簡(jiǎn)單的、且在溶液保存和冷凍保存時(shí)穩(wěn)定的配方。[0147][實(shí)施例5]使用Mab2的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)(2)如實(shí)施例1所示，顯然的是，與Mabl同樣，Mab2在組氨酸-氯化物中比在組氨酸-乙酸鹽中顯示高穩(wěn)定性（圖2)。如實(shí)施例2所示，通過(guò)使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸變?yōu)樘於彼峄蚬劝彼?，確認(rèn)在溶液和冷凍時(shí)，Mabl的穩(wěn)定性顯著提高。因此，使用Mab2來(lái)評(píng)價(jià)使組氨酸的反離子種類(lèi)為鹽酸或谷氨酸時(shí)的溶液保存(25°C)中的穩(wěn)定性。同時(shí)也實(shí)施含有穩(wěn)定效果高的精氨酸的配方，以此作為觀測(cè)使組氨酸的反離子種類(lèi)為谷氨酸時(shí)的穩(wěn)定效果時(shí)的比較對(duì)照。[0148]樣品制備是與實(shí)施例1同樣，將Mab2相對(duì)各配方溶液(表3)透析過(guò)夜，然后濃縮各溶液，使Mab2終濃度為約40-230mg/mL來(lái)進(jìn)行。各配方溶液的制備方法與實(shí)施例3同樣。樣品制備后，各配方的Mab2濃度如表4所示。在25°C下保存2周和4周后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算。[0149]25°C保存后各配方的締合物增加量(％)的結(jié)果如圖12所示。由該結(jié)果可知，與冷凍融解試驗(yàn)不同，即使將組氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸變更為谷氨酸，Mab2的穩(wěn)定性也沒(méi)有變化。Mabl和Mab2的pi分別為5.8、9.3,由此表明溶液保存中的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定效果在低pi抗體中顯著可見(jiàn)的可能性。[0150][實(shí)施例6]使用1^1、1^2、1^3、1&*4和1^5的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)Mab3:是IX因子與X因子的雙特異抗體，是具有來(lái)自IgG4的恒定區(qū)、并改變氨基酸序列使Pl值降低至6.8的抗體Mab4:抗NRlO人源化抗體（按照W02009/072604的實(shí)施例12的方法制作的完全人源化吧22抗體），抗體類(lèi)別為以62。是改變氨基酸序列、使?1值降低至5.6的抗體Mab5:抗磷脂酰肌醇聚糖3人源化抗體(按照W02006/006693的實(shí)施例24的方法進(jìn)行人源化，按照實(shí)施例25的方法使L鏈改變的抗體），抗體類(lèi)別為IgGl。[0151]如實(shí)施例2和3所示，對(duì)于Mabl和Mab2,通過(guò)使組氨酸和精氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸變更為天冬氨酸或谷氨酸，確認(rèn)在溶液和冷凍時(shí)的穩(wěn)定性顯著提高。因此，除了Mabl和Mab2之外，也使用抗體等電點(diǎn)變?yōu)?-8的Mab3和Mab4、等電點(diǎn)為9.0的Mab5,評(píng)價(jià)使組氨酸或精氨酸的反離子種類(lèi)為鹽酸或天冬氨酸時(shí)的溶液保存和冷凍融解時(shí)的穩(wěn)定性。Mabl、Mab2、1&匕3、1&&4和1&&5的各口1如下表6所不[表6][0152]樣品制備是將Mabl、1&*2、1^3、1^4和1^5相對(duì)各透析緩沖液(表7)透析過(guò)夜，然后濃縮各抗體溶液，對(duì)該抗體濃縮溶液添加各配方儲(chǔ)備緩沖液(表8)，使抗體終濃度約為100-190mg/mL來(lái)實(shí)施。這樣制備的配方溶液一覽如表9所示。對(duì)于各配方溶液，實(shí)施25°C保存和冷凍融解試驗(yàn)。冷凍融解試驗(yàn)是將在_20°C下冷凍的樣品在25°C下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。緩慢冷凍融解后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算[0153]冷凍融解后和25°C溶液保存后各配方的締合物增加量(％)結(jié)果如圖13-20所示。在25°C溶液保存時(shí)締合物增加量的比較中，組氨酸-天冬氨酸鹽配方顯示與組氨酸-氯化物配方同等程度的穩(wěn)定性，精氨酸-天冬氨酸鹽配方顯示與精氨酸-氯化物配方大致同等程度的穩(wěn)定性(圖13、圖15、圖17和圖19)。[0154]另一方面，在冷凍融解后締合物增加量的比較中，組氨酸-天冬氨酸鹽配方與組氨酸-氯化物配方比較，顯示2倍以上的高穩(wěn)定性，精氨酸-天冬氨酸鹽配方與精氨酸-氯化物配方比較，顯示高穩(wěn)定性（圖14、圖16、圖18和圖20)。因此顯然的是，通過(guò)使組氨酸或精氨酸的反離子種類(lèi)由鹽酸改變?yōu)樘於彼?，抗體在冷凍時(shí)的穩(wěn)定性顯著提高。[0155][實(shí)施例7]使用1^1、1^2、1^3、1&*4和1^5的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)如實(shí)施例2、3和6所示，在組氨酸配方中，通過(guò)使反離子種類(lèi)由鹽酸改變?yōu)樘於彼峄蚬劝彼?，確認(rèn)在溶液和冷凍時(shí)的抗體穩(wěn)定性顯著提高。因此，使用Mabl、Mab2、Mab3、Mab4和Mab5,評(píng)價(jià)使三羥基甲基氨基甲烷(Tris)配方的反離子種類(lèi)為鹽酸或天冬氨酸時(shí)溶液保存和冷凍融解下的穩(wěn)定性。[0156]樣品制備是將Mabl、]\&^2、]\&^3、]\^^4和]\&^5相對(duì)各透析緩沖液(表10)透析過(guò)夜，然后濃縮各抗體溶液，對(duì)該抗體濃縮溶液添加各配方儲(chǔ)備緩沖液(表11)，使抗體終濃度約為lOO-llOmg/mL來(lái)實(shí)施。上述制備的配方溶液一覽如表12所示。對(duì)于各配方溶液，實(shí)施25°C保存和冷凍融解試驗(yàn)。冷凍融解試驗(yàn)是將在_20°C下冷凍的樣品在25°C下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。緩慢冷凍融解后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算[0157]冷凍融解后以及25°C溶液保存后各配方的締合物增加量(％)結(jié)果如圖21-22所示。在25°C溶液保存時(shí)的締合物增加量比較中，Tris-天冬氨酸鹽/精氨酸-天冬氨酸鹽配方與Tris-氯化物/精氨酸-氯化物配方顯示同等程度的穩(wěn)定性(圖21)。[0158]另一方面，在冷凍融解后締合物增加量的比較中，Tris-天冬氨酸鹽/精氨酸-天冬氨酸鹽配方與Tris-氯化物/精氨酸-氯化物配方比較，顯示高穩(wěn)定性（圖22)。因此顯然的是，在Tris配方中，通過(guò)使反離子種類(lèi)由鹽酸變更為天冬氨酸，抗體在冷凍時(shí)的穩(wěn)定性也顯著提高。[0159][實(shí)施例8]使用Mabl、Mab2和Mab3的Tris的反離子種類(lèi)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)如實(shí)施例7所示，在Tris配方中，通過(guò)使反離子種類(lèi)由鹽酸變更為天冬氨酸，確認(rèn)冷凍時(shí)的抗體穩(wěn)定性顯著提高。因此，使用Mabl、Mab2和Mab3,評(píng)價(jià)使Tris的反離子種類(lèi)為鹽酸或天冬氨酸時(shí)的溶液保存和冷凍融解中的穩(wěn)定性。[0160]樣品制備是將Mabl、Mab2和Mab3相對(duì)各透析緩沖液(表13)透析過(guò)夜，然后將各抗體溶液濃縮至IOOmg/mL以上，對(duì)該抗體濃縮溶液添加各透析溶液，使抗體的終濃度約為100mg/mL來(lái)實(shí)施。上述制備的配方溶液一覽如表14所示。對(duì)于各配方溶液，實(shí)施25°C保存和冷凍融解試驗(yàn)。冷凍融解試驗(yàn)是將在-20°C下冷凍的樣品在25°C下融解，將該緩慢冷凍融解實(shí)施10次來(lái)進(jìn)行。緩慢冷凍融解后各樣品的締合物量是使用尺寸排阻色譜(SEC)、通過(guò)面積百分率法計(jì)算[0161]冷凍融解后和25°C溶液保存后各配方的締合物增加量(％)結(jié)果如圖23和24所示。由該結(jié)果顯示，在25°C溶液保存和冷凍融解中任一項(xiàng)的締合物增加量比較中，Tris-天冬氨酸鹽配方與Tris-氯化物配方比較，顯示高穩(wěn)定性，特別是冷凍融解中的穩(wěn)定性高2倍以上。因此顯然的是，即使在使用Tris作為緩沖劑的情況下，通過(guò)將反離子種類(lèi)由鹽酸變更為天冬氨酸，抗體的穩(wěn)定性也顯著提高?！局鳈?quán)項(xiàng)】1.穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有堿性氨基酸-天冬氨酸鹽或堿性氨基酸-谷氨酸鹽。2.權(quán)利要求1的制劑，其特征在于：該制劑含有堿性氨基酸為組氨酸的組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液。3.權(quán)利要求1的制劑，其特征在于：該制劑含有堿性氨基酸為精氨酸的精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽。4.穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于：該制劑含有組氨酸-天冬氨酸鹽緩沖液或組氨酸-谷氨酸鹽緩沖液、以及精氨酸-天冬氨酸鹽或精氨酸-谷氨酸鹽。5.穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液或三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。6.穩(wěn)定的含抗體的制劑，其特征在于:該制劑含有三羥基甲基氨基甲烷-天冬氨酸鹽緩沖液、以及三羥基甲基氨基甲烷-谷氨酸鹽緩沖液。7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的制劑，該制劑實(shí)質(zhì)上不含有氯根離子和乙酸根離子。8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑進(jìn)一步含有糖類(lèi)。9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體為人源化抗體或人抗體。10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體是等電點(diǎn)(pi)改變?yōu)?-8的抗體。11.權(quán)利要求1-1〇中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體濃度為50mg/mL以上。12.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體濃度為50mg/mL-250mg/mL。13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑為溶液制劑。14.權(quán)利要求13的制劑，其中，溶液制劑的粘度為30mPa·s以下。15.權(quán)利要求13或14的制劑，其中，溶液制劑在2-8°C下至少穩(wěn)定6個(gè)月。16.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的制劑，其中，在溶液制劑的制造過(guò)程中，不含冷凍干燥工序地進(jìn)彳T制造。17.權(quán)利要求13-16中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑在-30°C至-10°C下冷凍保存。18.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑是凍干制劑。19.權(quán)利要求2、4、7-18中任一項(xiàng)的制劑，其中，緩沖液濃度為5mM-1OOmM。20.權(quán)利要求3、7-19中任一項(xiàng)的制劑，其中，精氨酸的濃度為5mM-300mM。21.權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的制劑，其中，抗體為抗IL-6受體抗體。22.權(quán)利要求2、4、7-21中任一項(xiàng)的制劑，其中，緩沖液實(shí)質(zhì)上只含有氨基酸。23.權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的制劑，其中，該制劑是皮下給予用。24.抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的緩沖劑的反離子種類(lèi)。25.抑制含高濃度抗體的制劑在溶液狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的緩沖劑的反離子種類(lèi)。26.抑制含高濃度抗體的制劑在冷凍狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)。27.抑制含高濃度抗體的制劑在溶液狀態(tài)下保存時(shí)締合的方法，該方法是通過(guò)使用天冬氨酸或谷氨酸作為該制劑中的穩(wěn)定劑的反離子種類(lèi)?！疚臋n編號(hào)】A61K9/08GK105944099SQ201610373014【公開(kāi)日】2016年9月21日【申請(qǐng)日】2011年1月20日【發(fā)明人】井川智之,森山千史【申請(qǐng)人】中外制藥株式會(huì)社