一種治療腫瘤的埃博霉素b聚合物納米粒制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑及其制備方法。該聚合物納米粒制劑由埃博霉素B、聚合物載體材料和凍干保護(hù)劑組成；該納米粒制劑粒徑范圍為10～200nm。其制備方法如下：將聚合物載體材料和埃博霉素B的有機(jī)溶劑溶液與含有乳化劑的水相按照一定比例混合、勻化、除去有機(jī)溶劑、濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。本發(fā)明通過(guò)改變聚合物載體材料組成、濃度、除有機(jī)溶劑溫度等處方工藝參數(shù)調(diào)節(jié)載藥量、藥物釋放速度等特性。本發(fā)明制備的治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑緩釋效果好，可有效避免埃博霉素B在體內(nèi)被酯酶快速水解失活，顯著延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，提高抗腫瘤活性，降低藥物毒性。
【專利說(shuō)明】
一種治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，提供了一種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑 及其制備方法。 【背景技術(shù)】
[0002] 埃博霉素B系大環(huán)內(nèi)酯類抗腫瘤藥物，其抗腫瘤作用機(jī)理與紫杉烷相似，為微管解 聚抑制劑，可誘導(dǎo)微管蛋白二聚體聚合形成微管，從而起抗腫瘤作用。在抗多藥耐藥性、抗 腫瘤譜、抗腫瘤活性、安全性等方面均優(yōu)于相同作用機(jī)制的紫杉醇。研究顯示，埃博霉素B體 外抗腫瘤活性高于紫杉醇50~500倍。已完成的多項(xiàng)埃博霉素B治療卵巢癌、腹膜癌、前列腺 癌和乳腺癌等癌癥的Π期臨床研究均取得很好結(jié)果。但埃博霉素B(結(jié)構(gòu)如式I)的內(nèi)酯環(huán)在 體內(nèi)易被酯酶水解開(kāi)環(huán)迅速失活，導(dǎo)致其體內(nèi)抗腫瘤效果大打折扣，這也是限制其抗腫瘤 效果的主要因素之一。因此，研究可以避免埃博霉素B被酯酶水解迅速失活的制劑具有重要 意義。
[0003]
[0004] 近年來(lái)，基于生無(wú)可降解載體材料的聚合物納米粒制劑在抗腫瘤藥物傳遞領(lǐng)域得 到研究者廣泛的關(guān)注，主要包括聚乙二醇-聚乳酸共聚物(PEG-PLA)、聚乙二醇-聚乳酸-羥 基乙酸共聚物(PEG-PLGA)和聚乙二醇-聚己內(nèi)酯共聚物(PEG-PCL)等。上述聚合物載體材料 均為優(yōu)良的緩釋材料，制備成載藥納米粒后，可緩慢釋放藥物，避免藥物"爆釋"至體循環(huán) 中，可提高藥物穩(wěn)定性并降低毒性;同時(shí)由于表面聚乙二醇的親水性，可避免納米粒子迅速 被內(nèi)皮網(wǎng)狀吞噬系統(tǒng)識(shí)別捕獲，從而延長(zhǎng)藥物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間;此外，由于腫瘤部位血管內(nèi)皮 細(xì)胞間隙較大(空隙可達(dá)100~780nm)且淋巴清除系統(tǒng)缺失，因此，納米粒子在腫瘤部位具 有高滲透性和滯留效應(yīng)，即EPR效應(yīng)（enhanced permeability and retention effect)，可 使藥物被動(dòng)靶向于腫瘤組織，提高抗腫瘤作用，降低毒副作用。專利CN103585634A和 CN102247325A均公開(kāi)了聚合物納米粒制劑用于傳遞抗腫瘤藥物的方法。此外，文獻(xiàn)也報(bào)道 了將埃博霉素B與PEG進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)后制備成納米粒，可一定程度上提高埃博霉素B在血液 中穩(wěn)定性。因此，聚合物納米粒制劑有望避免埃博霉素B被酯酶水解迅速失活。
[0005] 雖然聚合物納米粒制劑在抗腫瘤藥物傳遞方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但其制備方法仍 是限制其規(guī)?；a(chǎn)的主要因素之一。專利CN1017732234A和CN101972480A是采用薄膜分 散法獲得膠束溶液，工藝重復(fù)性較差;專利CN103585634A采用微流體法將藥物和聚合物材 料的有機(jī)溶劑溶液以〇.2mL/min流速注入水相中，制備耗時(shí)長(zhǎng)，不適于規(guī)?；a(chǎn)；而 CN102247325A所制備聚合物納米粒粒徑較大，在50~450nm范圍內(nèi)，無(wú)法進(jìn)行過(guò)濾除菌。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑，該制劑具有 明顯緩釋作用，可有效避免埃博霉素B在體內(nèi)被酯酶水解迅速失活，并可顯著延長(zhǎng)藥物體內(nèi) 循環(huán)時(shí)間，從而提高抗腫瘤作用。本發(fā)明的藥物制劑為注射用粉針。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供一種簡(jiǎn)單易行、易于規(guī)?；a(chǎn)的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方法。
[0008] 本發(fā)明所述的一種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑，其特征在于，該聚合 物納米粒制劑由埃博霉素B、聚合物載體材料和凍干保護(hù)劑組成;該納米粒制劑粒徑范圍為 10~200nm。
[0009] 上述的聚合物載體材料為聚乙二醇-聚乳酸共聚物、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸 共聚物、聚乙二醇-聚己內(nèi)酯共聚物、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚己內(nèi)酯中的一種 或一種以上，其中，優(yōu)選聚乙二醇-聚乳酸共聚物和聚乙二醇-聚己內(nèi)酯共聚物。
[0010] 上述的埃博霉素B與聚合物載體材料的重量比在1:4~1:199之間，其中，優(yōu)選1:15 ~1:20之間。
[0011] 本發(fā)明所述的一種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑，通過(guò)以下技術(shù)方案 實(shí)現(xiàn)：
[0012] -種治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑的制備方法，包括如下步驟:將聚合 物載體材料和埃博霉素B的有機(jī)溶劑溶液與含有乳化劑的水相按照一定比例混合、勻化、除 去有機(jī)溶劑、濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。
[0013] 上述的有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、苯甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿中的一種或一 種以上。
[0014] 上述的乳化劑為聚乙烯醇、泊洛沙姆、磷脂、膽酸鈉、白蛋白或聚山梨酯80中的一 種。
[0015] 上述的有機(jī)溶劑溶液與水相體積比在1:2~1:20之間，優(yōu)選1:5~1:10之間。
[0016] 上述的勻化方法為超聲法、高壓均質(zhì)法或微射流法中的一種。
[0017] 上述的除去有機(jī)溶劑方法為減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、透析法或切向流過(guò)濾法的一種。
[0018] 上述的超聲法制備的具體過(guò)程為:將埃博霉素B和聚合物載體材料的有機(jī)溶劑溶 液，在3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25 °C條件下攪 拌0.5~lOmin，在超聲功率100~400W條件下超聲2~20min，除去有機(jī)溶劑、濃縮、過(guò)濾除 菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。
[0019] 上述的高壓均質(zhì)法制備的具體過(guò)程為:將埃博霉素B和聚合物載體材料的有機(jī)溶 劑溶液，在3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25°C條件 下攪拌0.5~lOmin，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力1000~7000psi條件下，循環(huán)1~8次，除去有機(jī) 溶劑、濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。
[0020] 上述的微射流法制備的具體過(guò)程為:將埃博霉素B和聚合物載體材料的有機(jī)溶劑 溶液，在3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25 °C條件下 攪拌0.5~lOmin，采用微射流在壓力1000~15000psi條件下，循環(huán)1~4次，除去有機(jī)溶劑、 濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。
[0021]除去有機(jī)溶劑后，選用冷凍干燥法制得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。 冷凍干燥前向埃博霉素B聚合物納米粒中加入凍干保護(hù)劑，所述凍干保護(hù)劑為蔗糖、甘露 糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖、右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、氨基酸、麥芽糖或白蛋白中的一種或 幾種組合。
[0022]本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)為：
[0023] 第一，本發(fā)明通過(guò)改變聚合物載體材料組成、濃度、除有機(jī)溶劑溫度等處方工藝參 數(shù)調(diào)節(jié)載藥量、藥物釋放速度等特性。
[0024] 第二，本發(fā)明制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑，集疏水性內(nèi)核緩釋包埋作用和 PEG長(zhǎng)循環(huán)作用于一體，兼具緩釋和長(zhǎng)循環(huán)特性可有效避免酯酶水解作用和RES吞噬作用， 顯著延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間。
[0025] 第三，本發(fā)明制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑，粒徑在10~200nm范圍內(nèi)，即可 實(shí)現(xiàn)過(guò)濾除菌，又具有被動(dòng)腫瘤靶向性，可有效提高抗腫瘤作用。
【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1實(shí)施例2制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑的粒度分布圖。
[0027]圖2實(shí)施例2制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑(EPOB NPs)在pH7.4磷酸鹽緩沖 鹽溶液中的藥物釋放曲線圖（37 °C，mean 土 sd，η = 3)。
[0028] 圖3實(shí)施例2制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑(EPOB NPs)和埃博霉素B(EPOB) 在大鼠血衆(zhòng)中降解曲線圖（37°C，mean土sd，n = 3)。
[0029] 圖4分別靜脈給予大鼠0.1mg/kg實(shí)施例2制備的埃博霉素B聚合物納米粒制劑 (EPOB NPs)和埃博霉素B普通溶液(EPOB)后的體內(nèi)血藥濃度-時(shí)間曲線圖（mean 土 sd，η = 6)〇
【具體實(shí)施方式】
[0030] 以下通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明，但是本發(fā)明的范圍并不限于 以下實(shí)施例。
[0031] 實(shí)施例1
[0032]將0.2g埃博霉素B和1.8g PEG-PLA共同溶解于IOmL二氯甲烷中作為有機(jī)相，0.2g 泊洛沙姆188溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相，在6000rpm攪拌速度下，將有機(jī)相加入水相 中，8°C條件下攪拌3min，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力6000psi條件下，循環(huán)6次;將所得乳液置切 向流濾過(guò)系統(tǒng)中，膜截留分子量為IOOkDa，40°C除去有機(jī)溶劑和游離藥物、濃縮、過(guò)濾除菌、 冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。其平均粒徑為110.2nm，埃博霉素B 載藥量為2.3%。
[0033] 實(shí)施例2
[0034]將0.2g埃博霉素B和1.8g PEG-PLA共同溶解于IOmL二氯甲烷中作為有機(jī)相，0.2g 泊洛沙姆188溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相，在6000rpm攪拌速度下，將有機(jī)相加入水相 中，8°C條件下攪拌3min，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力6000psi條件下，循環(huán)6次;將所得乳液置切 向流濾過(guò)系統(tǒng)中，膜截留分子量為IOOkDa，20°C除去有機(jī)溶劑和游離藥物、濃縮、過(guò)濾除菌、 冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。其粒度分布圖如圖1所示，平均粒 徑為100 · 2nm，埃博霉素B載藥量為7 · 8 %。
[0035] 實(shí)施例3
[0036] 將0.2g埃博霉素B、1 .Og PEG-PLA和0.8g PLA共同溶解于IOmL二氯甲烷中作為有 機(jī)相，0.2g泊洛沙姆188溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相，在6000rpm攪拌速度下，將有機(jī)相 加入水相中，8°C條件下攪拌3min，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力6000psi條件下，循環(huán)6次;將所得 乳液置切向流濾過(guò)系統(tǒng)中，膜截留分子量為IOOkDa，10 °C除去有機(jī)溶劑和游離藥物、濃縮、 過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。其平均粒徑為132.5nm， 埃博霉素B載藥量為8.9%。
[0037] 實(shí)施例4
[0038]將0.4g埃博霉素B和1.6g PEG-PLGA共同溶解于IOmL二氯甲烷中作為有機(jī)相，0.2g 泊洛沙姆188溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相，在6000rpm攪拌速度下，將有機(jī)相加入水相 中，8°C條件下攪拌3min，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力5000psi條件下，循環(huán)6次;將所得乳液置切 向流濾過(guò)系統(tǒng)中，膜截留分子量為IOOkDa，10°C除去有機(jī)溶劑和游離藥物、濃縮、過(guò)濾除菌、 冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。其平均粒徑為125.6nm，埃博霉素B 載藥量為12.1%。
[0039] 實(shí)施例5
[0040]將0.4g埃博霉素B和1.6g PEG-PCL共同溶解于IOmL二氯甲烷中作為有機(jī)相，0.2g 泊洛沙姆188溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相，在6000rpm攪拌速度下，將有機(jī)相加入水相 中，8°C條件下攪拌3min，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力5000psi條件下，循環(huán)6次;將所得乳液置切 向流濾過(guò)系統(tǒng)中，膜截留分子量為IOOkDa，10°C除去有機(jī)溶劑和游離藥物、濃縮、過(guò)濾除菌、 冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素B聚合物納米粒制劑。其平均粒徑為121.3nm，埃博霉素B 載藥量為15.7%。
[0041 ] 實(shí)施例6
[0042] 埃博霉素B聚合物納米粒制劑體外釋放實(shí)驗(yàn)：
[0043] 采用動(dòng)態(tài)透析法，將ImL埃博霉素B聚合物納米粒制劑(5mg/mL，按照本實(shí)施例2方 法制得)置透析袋(截留分子量3000Da)中，將透析袋置含有IOOmL pH7.4磷酸緩沖鹽溶液的 燒杯中，于37 °C條件下恒溫?cái)嚢瑁D(zhuǎn)速為50rpm，于一定時(shí)間取0.5mL釋放，并補(bǔ)充相同體積 空白釋放介質(zhì)。采用高效液相色譜法測(cè)定釋放介質(zhì)中埃博霉素B濃度，并計(jì)算累積釋放量。 所得藥物釋放曲線如圖2所示。
[0044] 實(shí)施例7
[0045] 埃博霉素B聚合物納米粒制劑血漿中穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：
[0046]分別取20yL埃博霉素B聚合物納米粒制劑(5mg/mL，按照本實(shí)施例2方法制得)和20 此埃博霉素B甲醇溶液(5mg/mL)，分別加入至37°C孵育的5mL新鮮大鼠空白血漿中，渦旋振 蕩混勻后，置37 °C水浴孵育，分別于1，2，3，4，6，8和12h取IOOyL血漿，加入400yL乙腈，渦旋 振蕩10min，12000rpm離心10min，取上清液，采用高效液相色譜法測(cè)定上清液中藥物濃度， 計(jì)算埃博霉素B剩余百分量。埃博霉素B降解曲線如圖3所示。
[0047] 實(shí)施例8
[0048]埃博霉素B聚合物納米粒制劑大鼠血漿藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0049]采用平行對(duì)照試驗(yàn)法，12只SD大鼠，雌性，200 ± 20g，江南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供， 隨機(jī)分成兩組，每組6只，實(shí)驗(yàn)前禁食一夜。分別于尾靜脈注射給予埃博霉素B聚合物納米粒 制劑(按照本實(shí)施例2方法制得)和埃博霉素普通注射液（自制），給藥劑量為0.1mg/kg。分別 于給藥前（零時(shí)），5min，30min，45min，Ih，2h，3h，4h，6h，8h，12h，24h和36h于眼眶取血 0.3ml，置預(yù)先肝素化的1.5ml尖底離心試管中，4000rpm離心10min，取上層血衆(zhòng)于-80 °C保 存待測(cè)。測(cè)定時(shí)，精密吸取IOOyL血漿樣品，精密加入20yL苯海拉明甲醇溶液為內(nèi)標(biāo)，渦旋振 蕩Imin，加入200yL乙腈，禍旋振蕩IOmin，12000rpm離心10min，取上清液，采用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定上清液中藥物濃度，計(jì)算埃博霉素B血漿濃度，并繪制平均血藥濃度-時(shí)間 曲線，如圖4所示。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑，其特征在于，該聚合物納米粒制劑由 埃博霉素 B、聚合物載體材料和凍干保護(hù)劑組成;該納米粒制劑粒徑范圍為10~200nm。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑，其特征在于，聚合 物載體材料為聚乙二醇-聚乳酸共聚物、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乙二醇-聚 己內(nèi)酯共聚物、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚己內(nèi)酯中的一種或一種以上，優(yōu)選聚 乙二醇-聚乳酸共聚物和聚乙二醇-聚己內(nèi)酯共聚物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑，其特征在于，埃博 霉素 B與聚合物載體材料的重量比在1:4~1:199之間，優(yōu)選1:15~1:20之間。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方法，其特征 在于，其制備方法包括如下步驟:將聚合物載體材料和埃博霉素 B的有機(jī)溶劑溶液與含有乳 化劑的水相按照一定比例混合、勻化、除去有機(jī)溶劑、濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫 瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑。 所述有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、苯甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿中的一種或一種以上。 所述乳化劑為聚乙烯醇、泊洛沙姆、磷脂、膽酸鈉、白蛋白或聚山梨酯80中的一種。 所述有機(jī)溶劑溶液與水相體積比在1:2~1:20之間，優(yōu)選1:5~1:10之間。 所述勻化方法為超聲法、高壓均質(zhì)法或微射流法中的一種。 所述除去有機(jī)溶劑方法為減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、透析法或切向流過(guò)濾法的一種。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方法，其特征 在于，所述超聲法制備的具體過(guò)程為:將埃博霉素 B和聚合物載體材料的有機(jī)溶劑溶液，在 3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25°C條件下攪拌0.5 ~lOmin，在超聲功率100~400W條件下超聲2~20min，除去有機(jī)溶劑、濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍 干燥后得治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方法，其特征 在于，所述高壓均質(zhì)法制備的具體過(guò)程為：將埃博霉素 B和聚合物載體材料的有機(jī)溶劑溶 液，在3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25 °C條件下攪 拌0.5~lOmin，采用高壓均質(zhì)機(jī)在壓力1000~7000psi條件下，循環(huán)1~8次，除去有機(jī)溶劑、 濃縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方法，其特征 在于，所述的微射流法制備的具體過(guò)程為：將埃博霉素 B和聚合物載體材料的有機(jī)溶劑溶 液，在3000~15000rpm攪拌速度下，加入含有乳化劑的雙蒸水溶液中，在0~25 °C條件下攪 拌0.5~lOmin，采用微射流在壓力1000~15000psi條件下，循環(huán)1~4次，除去有機(jī)溶劑、濃 縮、過(guò)濾除菌、冷凍干燥后得治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求4~7任一所述的治療腫瘤的埃博霉素 B聚合物納米粒制劑的制備方 法，其特征在于，冷凍干燥前向埃博霉素 B聚合物納米粒中加入凍干保護(hù)劑，所述凍干保護(hù) 劑為蔗糖、甘露糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖、右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、氨基酸、麥芽糖或白蛋 白中的一種或幾種組合。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105963276SQ201610480986
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年6月28日
【發(fā)明人】林霞, 楊子毅
【申請(qǐng)人】江南大學(xué)