用于溶栓的納豆激酶組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于溶栓的納豆激酶組合物及其制備方法，該組合物包括納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪組成；每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為200～400IU。其制備方法包括：1)利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，離心，取上清液濃縮，得到納豆激酶濃縮液；2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成黃芪浸膏；3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成當(dāng)歸浸膏；4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液混合，即得。本發(fā)明以納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪為原料，這三種組分發(fā)揮協(xié)同增效的作用，具有較好的預(yù)防血栓形成以及溶栓效果。
【專利說明】
用于溶栓的納豆激酶組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及用于溶栓的納豆激酶組合物及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血栓性疾病作為中老年人的高發(fā)病，是死亡威脅最大的疾病之一，目前60歲以上 的老人已達到1億以上，占人口比例的8.7 %，今后20年我國將進入老齡化社會，血栓性疾病 的防治必須引起足夠的重視。全世界現(xiàn)有血栓塞病人約1500萬，所需的溶栓藥的潛在市場 價值約20億美元。國內(nèi)市場上普遍使用的溶栓類藥物鏈激酶、尿激酶、組織型纖溶酶原激活 劑等都存在明顯的不足:抗再灌注、產(chǎn)生再栓塞和出血性副作用，且價格昂貴。
[0003] 納豆激酶(Nattokinase，NK)是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發(fā)酵過程中由納 豆枯草桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度，改善血液循環(huán)，軟化和 增加血管彈性等作用。納豆激酶是1987年由日本生理學(xué)教授須見洋行博士從200多種食品 中首先發(fā)現(xiàn)并命名的一種分子量遠遠小于UK、SK、tPA的蛋白質(zhì)，等電點是8.7,分子量為 27724,具有很強的纖維蛋白溶解能力，并具有活化彈性酶和尿酸酶的活性，在此之后的相 關(guān)研究表明，納豆激酶能夠有效清除人體血液內(nèi)的血栓，是目前溶栓活力最高的蛋白酶，而 且對高血壓、衰老、中風(fēng)、肌肉痙攣和心腦血管疾病也有很好的療效，已被用作溶栓藥物。并 且，納豆激酶來源于日本傳統(tǒng)的食物納豆，安全性好，同時可由腸道吸收，在體內(nèi)作用持續(xù) 時間長，最重要的一點是它還能激活人體內(nèi)重組型纖溶酶激活劑，使之溫和、持續(xù)地提高血 液的纖溶活性，因此，近年來，以納豆激酶為主要成分的藥品、功能性食品、食品添加劑的研 發(fā)工作進展十分迅速。對于納豆激酶產(chǎn)品的應(yīng)用，營養(yǎng)專家建議每日服用的預(yù)防量為1500 ~2000IU，然而這一用量也將帶來較高的成本，使得血栓患者的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)較重。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用于溶栓的納豆激酶組合物及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是用于溶栓的納豆激酶組合物，該組合物包括納豆激酶、 當(dāng)歸、黃芪組成;每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為200~400IU。
[0006] 上述納豆激酶可以是由產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌的發(fā)酵液，也可以是納豆激酶凍干 粉。
[0007] 黃芪甲苷為黃芪的活性成分，在該組合物中黃芪甲苷的含量為0.02~0.03mg/g。
[0008] 阿魏酸為當(dāng)歸的活性成分，在該組合物中阿魏酸的含量為0.02~0.03mg/g。
[0009] 本發(fā)明還提供了上述用于溶栓的納豆激酶組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0010] 1)利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，離心，取上清液濃縮，得到納 豆激酶濃縮液；
[0011] 2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成黃芪浸膏；
[0012 ] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成當(dāng)歸浸膏；
[0013] 4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液混合，即得。
[0014] 本發(fā)明的納豆激酶來自能夠產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物，枯草桿菌作為一 種益生菌，市場上可以直接購買ji^nBacillusSubtilisAK(PN2003-210136，F(xiàn)ERMP-182391JP),Bacillus Subtilis MR141(PN 08-154616,FERM P-14692JP),BaciIIus Subtilis IAM1026(PN 5486467，F(xiàn)ERM BP-6713US)等，這些菌種在發(fā)酵過程中除能產(chǎn)生納 豆激酶外，各級代謝產(chǎn)物均含有對人體有益的成分，因此都可以作為本發(fā)明的菌種。本發(fā)明 優(yōu)選納豆桿菌，其能夠通過固體或液體基質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生高效纖溶活性的納豆激酶。
[0015] 根據(jù)選定的菌種，選擇其適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件進行發(fā)酵培養(yǎng)，其中，可以選用固體發(fā)酵 法，把菌種制成菌懸液，接種到固體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進行培養(yǎng)，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā) 酵產(chǎn)生的的納豆激酶溶解提取出來得到發(fā)酵液，將發(fā)酵液離心，上清液濃縮，得到濃縮液。 由于固體發(fā)酵法為常規(guī)方法，本發(fā)明在此處就不做詳細說明。
[0016] 也可以采用液體發(fā)酵法，其具體工藝如下：
[0017] 1)選用納豆激酶高產(chǎn)菌株，直接在平板上進行分離篩選，分離平板優(yōu)選LB-瓊脂 糖-纖維蛋白平板:LB培養(yǎng)基配制時用0.OlM磷酸鉀緩沖液(PB pH7.4)溶解，制作平板時，將 人血纖維蛋白原和凝血酶溶解于其中，其制作方法同瓊脂糖-纖維蛋白平板。
[0018] 2)根據(jù)所選用的不同菌種的最佳培養(yǎng)條件，所用到的發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源、碳源 和無機鹽可以進行選擇，氮源可以選擇大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母粉、酪蛋白酸水解物以 及干大豆粉末等中的一種或多種，使用的質(zhì)量濃度為0.5~4%左右;碳源可以是葡萄糖、木 糖、可溶性淀粉、麥芽糖、乳糖和蔗糖中的一種或多種，其質(zhì)量濃度優(yōu)選在1. 〇~10. 〇 %左 右;無機鹽可以選擇KH2PO4約0 · 2%、K2HP〇4約0 · 4%、MgS〇4約0 · 05%、CaC12約0 · 02% 等。 [0019]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的方法，使用納豆桿菌進行發(fā)酵制備種子液，發(fā)酵至OD = O. 3~ 1.0，以1.0~2.0 %左右的接種量進行液體深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度25~40°C，發(fā)酵周期12~35 小時，pH為6~8。
[0020] 作為優(yōu)選，納豆激酶組合物的制備方法為：
[0021] 1)利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，以3000~6000rpm離心，取上 清液濃縮，得到納豆激酶濃縮液；
[0022] 2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.10~1.20的黃芪浸膏；
[0023] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60 °C下相對密度為1.20~1.45的當(dāng)歸浸膏；
[0024] 4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液混合，即得。
[0025]納豆激酶發(fā)酵液要進行離心，轉(zhuǎn)速以3000~6000rpm為優(yōu)，可除去發(fā)酵液中的大部 分菌體和雜質(zhì)。由于納豆激酶為熱敏性物質(zhì)，濃縮一般選用常溫超濾濃縮，超濾膜的截留分 子量為50000~200000，超濾壓力為0.1~0.3MPa，截留率多90%，濃縮倍數(shù)視發(fā)酵液中納豆 激酶的纖溶活性而定。
[0026]納豆激酶組合物的制備方法還可以是：
[0027] 1)利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，以3000~6000rpm離心，取上 清液濃縮，真空冷凍干燥，得到納豆激酶凍干粉；
[0028] 2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60 °C下相對密度為1~1.20的浸膏，干燥，得 到黃芪干粉；
[0029] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.20~1.45的浸膏，干燥， 得到當(dāng)歸干粉；
[0030] 4)將黃芪干粉、當(dāng)歸干粉與納豆激酶凍干粉混合，即得。
[0031] 本發(fā)明的組合物可以包括藥學(xué)可接受的輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接 受的任何常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑等。藥學(xué)可接受的輔料包括 填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括:淀 粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀 粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維 素鈉等;潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等;助懸劑包括:聚乙烯 吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等;粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯 烷酮、輕丙基甲基纖維素等;甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、鹿糖、甜蜜素、甘草次酸等;矯 味劑包括:甜味劑及各種香精;防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、 苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等;基質(zhì)包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠 實現(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》， 上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版中各劑型記載的輔料）。
[0032] 本發(fā)明所述的納豆激酶組合物的日服用量為lg，其中Ig組合物中納豆激酶的纖溶 活性僅為200~400IU，遠遠低于常規(guī)用量，但完全可以達到甚至超過納豆激酶纖溶活性 2000IU的溶栓效果，因此可大大節(jié)約成本，減輕血栓性疾病患者的經(jīng)濟壓力。
[0033]根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)可知，黃芪和當(dāng)歸均有一定的溶栓作用，其活性成分分別為黃芪甲 苷和阿魏酸，要達到較好的溶栓效果，阿魏酸的用量為每日0.1~〇.5mg，黃芪甲苷的用量為 每日0.4~4mg。而服用本發(fā)明的組合物，阿魏酸的日服用量僅為0.02~0.03mg，黃芪甲苷的 日服用量僅為〇. 02~0.03mg，遠遠低于常規(guī)用量。
[0034]本發(fā)明的用于溶栓的納豆激酶組合物由納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪三種組分組成，這 三種組分發(fā)揮協(xié)同增效的作用，能夠延長動脈血栓形成時間，降低靜脈血栓重量，加速體外 血栓溶解的作用。
【具體實施方式】
[0035]以下具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但不作為對本發(fā)明的限定。
[0036]以下實施例中所述納豆激酶發(fā)酵液均按下述方法制得：
[0037] 1)選用納豆桿菌高產(chǎn)菌株，直接在平板上進行分離篩選，分離平板優(yōu)選LB-瓊脂 糖-纖維蛋白平板:LB培養(yǎng)基配制時用0.OlM磷酸鉀緩沖液(PB pH7.4)溶解，制作平板時，將 人血纖維蛋白原和凝血酶溶解于其中，其制作方法同瓊脂糖-纖維蛋白平板。
[0038] 2)發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源選擇大豆蛋白胨，使用的質(zhì)量濃度為0.5~4%左右;碳源為 葡萄糖，其質(zhì)量濃度優(yōu)選在I. 〇~10. 〇 %左右；無機鹽可以選擇KH2PO4約0.2 %、K2HP〇4約 0.4%、1^304約0.05%工&(：12約0.02%。使用納豆桿菌進行發(fā)酵制備種子液，發(fā)酵至00 = 0.3~1.0,以1.0~2.0%左右的接種量進行液體深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度25~40°C，發(fā)酵周期12 ~35小時，pH為6~8，得到納豆激酶發(fā)酵液。
[0039] 實施例1
[0040]該組合物由納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪組成，其中，納豆激酶的用量以納豆激酶纖溶活 性計，每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為200IU;黃芪的用量以黃芪甲苷計，該組合物中黃 芪甲苷的含量為O. 〇2mg/g;當(dāng)歸的用量以阿魏酸計，該組合物中阿魏酸的含量為0.02mg/g。 [0041 ]該組合物的制備方法為：
[0042] 1)將納豆激酶發(fā)酵液以3000rpm離心，將上清液常溫超濾濃縮，超濾膜的截留分子 量為50000，超濾壓力為0.1 MPa，得到納豆激酶濃縮液；
[0043] 2)將黃芪加水提取，將提取液過濾，濾液濃縮成60°C下相對密度為1.10的黃芪浸 膏；
[0044] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液過濾，濾液濃縮成60 °C下相對密度為1.20的當(dāng)歸浸 膏；
[0045] 4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液按比例進行混合，以確保每g組合物中 納豆激酶的纖溶活性為200IU，黃芪甲苷的含量為0.02mg，阿魏酸的含量為0.02mg。
[0046] 實施例2
[0047] 該組合物由納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪組成，其中，納豆激酶的用量以納豆激酶纖溶活 性計，每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為400IU;黃芪的用量以黃芪甲苷計，該組合物中黃 芪甲苷的含量為〇. 〇3mg/g;當(dāng)歸的用量以阿魏酸計，該組合物中阿魏酸的含量為0.03mg/g。 [0048]該組合物的制備方法為：
[0049] 1)將納豆激酶發(fā)酵液以6000rpm離心，將上清液常溫超濾濃縮，超濾膜的截留分子 量為200000，超濾壓力為0.3MPa，得到納豆激酶濃縮液；
[0050] 2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.20的黃芪浸膏；
[0051] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.45的當(dāng)歸浸膏；
[0052] 4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液進行混合，以確保每g組合物中納豆激 酶的纖溶活性為40011]、黃芪甲苷的含量為0.031^、阿魏酸的含量為0.0311^。
[0053] 實施例3
[0054]該組合物由納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪組成，其中，納豆激酶的用量以納豆激酶纖溶活 性計，每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為300IU;黃芪的用量以黃芪甲苷計，該組合物中黃 芪甲苷的含量為〇. 〇25mg/g;當(dāng)歸的用量以阿魏酸計，該組合物中阿魏酸的含量為0.025mg/ g°
[0055]該組合物的制備方法為：
[0056] 1)將納豆激酶發(fā)酵液以5000rpm離心，將上清液常溫超濾濃縮，超濾膜的截留分子 量為100000，超濾壓力為0.2MPa，得到納豆激酶濃縮液；
[0057] 2)將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.15的黃芪浸膏；
[0058] 3)將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.35的當(dāng)歸浸膏；
[0059] 4)將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液按比例進行混合，以確保每g組合物中 納豆激酶的纖溶活性為300IU、黃芪甲苷的含量為0.025mg、阿魏酸的含量為0.025mg。
[0060] 實驗例1對大鼠體內(nèi)動脈血栓形成的影響實驗
[0061 ] 取SD大鼠70只，體重在180~220g，雌雄各半，將其隨機分為7組，每組10只，雌雄各 5只，分別為實驗組1、2、3,對照組1、2、3,以及空白對照組。實驗組1、2、3分別給藥實施例1、 2、3的組合物，給藥劑量為lg/kg;對照組1給藥納豆激酶凍干粉(2000IU/g)、對照組2給藥黃 芪提取物（黃芪甲苷的含量為〇 . 〇 3 m g / g )、對照組3給藥當(dāng)歸提取物（阿魏酸的含量為 0.03mg/g)，對照組給藥劑量均為lg/kg;空白對照組給予lg/kg的生理鹽水。采用灌胃給藥， 每天一次，連續(xù)七天，末次給藥后30分鐘，將大鼠用20%烏拉但麻醉，剝離大鼠頸總動脈，在 遠心端進行動脈插管用四道生理記錄儀加測血壓，在近心端用45%的三氯化鐵溶液浸泡的 0.5cm寬的濾紙條包裹動脈，記錄從包裹到血壓降為0時的時間為動脈血栓形成時間，記錄 數(shù)據(jù)，各組進行組間t檢驗統(tǒng)計分析。結(jié)果見表2
[0062]表1本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠體內(nèi)動脈血栓形成的影響(X 土 SD)
[0064] 注：與空白對照組比較，Δρ<〇·〇5Δ Δρ<〇·〇1。
[0065] 實驗組1~3與對照組和空白對照組比較均能延長動脈血栓形成時間。統(tǒng)計結(jié)果分 析表明，本發(fā)明的納豆激酶組合物具有延長動脈血栓形成時間的作用。
[0066] 實驗例2對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響實驗
[0067] 取SD大鼠70只，體重在180~220g，雌雄各半，將其隨機分為7組，每組10只，雌雄各 5只，分別為實驗組1、2、3,對照組1、2、3,以及空白對照組。實驗組1、2、3分別給藥實施例1、 2、3的組合物，給藥劑量為lg/kg;對照組1給藥納豆激酶凍干粉(2000IU/g)、對照組2給藥黃 芪提取物（黃芪甲苷的含量為〇 . 〇 3 m g / g )、對照組3給藥當(dāng)歸提取物（阿魏酸的含量為 0.03mg/g)，對照組給藥劑量均為lg/kg;空白對照組給予lg/kg的生理鹽水。采用灌胃給藥， 每天一次，連續(xù)七天，末次給藥后30分鐘，將大鼠用20%烏拉但麻醉，剝離大鼠下腔總靜脈， 在左腎靜脈下端用線結(jié)扎下腔總靜脈，3h后打開下腔總靜脈取出血栓稱重，記錄數(shù)據(jù)，各組 進行組間t檢驗統(tǒng)計分析。結(jié)果見表2
[0068]表2本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響(X土SD)
[0071] 注：與空白對照組比較Δρ<〇·〇5Δ Δρ<〇·〇1。
[0072] 由上表可知，本發(fā)明的納豆激酶組合物的血栓重量與空白對照組比較均有所降 低，且明顯低于對照組1~3。統(tǒng)計結(jié)果分析表明，本發(fā)明藥物組合物具有降低靜脈血栓重量 的作用。
[0073] 實驗例3對家兔體內(nèi)外血栓溶解的影響實驗
[0074]取健康家兔一只，頸動脈采血，靜止2小時，用手術(shù)刀仔細分取0.5g血塊70粒，稱重 后分別放入7只試管中，每只試管放入10粒血塊。將試管分為7組，分別為實驗組1、2、3,對照 組1、2、3，以及空白對照組。實驗組1、2、3分別給藥實施例1、2、3的組合物0.14g+4.86g蒸餾 水;對照組1添加納豆激酶凍干粉(2000IU/g)0.14g以及4.86g蒸餾水、對照組2添加黃芪提 取物(黃芪甲苷的含量為〇.〇3mg/g)0.14g以及4.86g蒸餾水、對照組3添加當(dāng)歸提取物(阿魏 酸的含量為〇 . 〇3mg/g)0. Hg以及4.86g蒸餾水，對照組分別添加給藥劑量為0. Hg;空白對 照組給予5ml蒸餾水。放入37°C水浴箱中水浴3h，取出吸去水分后稱重，按下列公式計算溶 解率:溶解率=(溶解前重量-溶解后重量)/溶解前重量X 100%，結(jié)果見表3。
[0075]表3本發(fā)明藥物組合物膠囊對體外血栓溶解的影響(X 土 SD)
L〇〇77J 注：與空白對照組比較Δρ<〇·〇5Δ Δρ<〇·〇1，
[0078]本發(fā)明的納豆激酶組合物與空白對照組比較均能增加體外血栓溶解率，且溶栓效 果明顯優(yōu)于對照組。統(tǒng)計結(jié)果分析表明，本發(fā)明的納豆激酶組合物具有加速體外血栓溶解 的作用。
【主權(quán)項】
1. 用于溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于：該組合物包括納豆激酶、當(dāng)歸和黃芪組 成;每g組合物中納豆激酶的纖溶活性為200~400IU。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于:該組合物中黃芪甲 苷的含量為〇 · 02~0 · 03mg/g。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于:該組合物中阿魏酸 的含量為0.02~0.03mg/g。4. 權(quán)利要求1~3中任一項所述的用于溶栓的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在 于:包括以下步驟： 1) 利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，離心，取上清液濃縮，得到納豆激 酶濃縮液； 2) 將黃芪加水提取，將提取液濃縮成黃芪浸膏； 3) 將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成當(dāng)歸浸膏； 4) 將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液混合，即得。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于溶栓的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于:包括以 下步驟： 1) 利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，以3000~6000rpm離心，取上清液 濃縮，得到納豆激酶濃縮液； 2) 將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60 °C下相對密度為1.10~1.20的黃芪浸膏； 3) 將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60 °C下相對密度為1.20~1.45的當(dāng)歸浸膏； 4) 將黃芪浸膏、當(dāng)歸浸膏與納豆激酶濃縮液混合，即得。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于溶栓的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于:包括以 下步驟： 1) 利用產(chǎn)納豆激酶的枯草桿菌制備納豆激酶發(fā)酵液，以3000~6000rpm離心，取上清液 濃縮，真空冷凍干燥，得到納豆激酶凍干粉； 2) 將黃芪加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.10~1.20的浸膏，干燥，得到 黃芪干粉； 3) 將當(dāng)歸加水提取，將提取液濃縮成60°C下相對密度為1.20~1.45的浸膏，干燥，得到 當(dāng)歸干粉； 4) 將黃芪干粉、當(dāng)歸干粉與納豆激酶凍干粉混合，即得。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于溶栓的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于:所述枯 草桿菌為納豆桿菌。
【文檔編號】A61K38/48GK105963690SQ201610486883
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】方捷, 方鵬程, 康萍
【申請人】方捷, 方鵬程, 康萍