卡麻孜日尤司抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的提取物通過如下方法制備：維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100：10-100:25為石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:17-100：100的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:17-100：100洗脫液干燥后即得。
【專利說明】
卡麻孜日尤司抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥 用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物 及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療肝癌、肺癌、胃癌、腸癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫 瘤的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為菊科植物苦蒿Dcroptiol repens (L. ) Dc的干燥果實(shí)，具有一定的抗腫瘤作 用，但是，對(duì)其抗腫瘤的有效成分一直不清楚。本發(fā)明在研究廣棗抗腫瘤活性時(shí)意外地發(fā) 現(xiàn)，亦具有很好的乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤 的預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用癌癥的預(yù)防和治療。本發(fā)明通過系統(tǒng)地篩選研究，發(fā)現(xiàn)了的有 效提取物具有顯著的抗腫瘤活性，可以應(yīng)用于腫瘤的預(yù)防和治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種提取物。
[0004] 本發(fā)明還提供了以提取物為主要活性成分的組合物。
[0005] 本發(fā)明同時(shí)提供了卡麻孜日尤司提取物及其組合物的制備和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（100 :〇-〇 :1〇〇)梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，具體比例 見表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩 選體系測(cè)試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100 :10-100:25,體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:17-100 :100,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:17-100 :100洗脫液干燥后即。
[0008] 優(yōu)選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 :10-100:14,體 積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫，石 油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液干燥即得；
[0009] 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 :20-100:25,體積比） 洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 :30-100:100,體積比）洗 脫，石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液干燥即得。
[0010] 更為優(yōu)選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積 比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫，石 油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。該活性提取物從未見文獻(xiàn) 報(bào)道，其TLC分析表征如圖1，TLC條件為：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 (3:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0011] 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇: 25,體積比）洗脫，繼 用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100，體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC 分析表征如圖2,TLC條件為=GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯色 方法：香草醛-硫酸顯色。
[0012] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0013] 1、維吾爾藥卡麻孜日尤司超聲提取物的制備
[0014] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0050 樣品 I. 6021g，留樣 0· 50g，剩余 I. 1021g。
[0015] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0016] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取 物SN0050樣品1.6021g，留樣0. 50g，剩余I. 1021g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅 膠柱色譜，拌樣硅膠I. 5g，空白硅膠10g，玻璃柱內(nèi)徑2. 0cm，石油醚：乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗 脫（石油醚：乙酸乙酯，體積比，見表1)，柱體積29ml，每個(gè)梯度洗脫200ml，得到各個(gè)濃度 提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得石油醚：乙酸乙酯梯度洗脫提取物，TLC分析結(jié)果見 圖3，TLC條件為=GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯色方法：香草 醛-硫酸顯色。
[0017] 表 1
[0020] 3、抗腫熘伯!王師逃力法和結(jié)米
[0021] 1)實(shí)驗(yàn)條件
[0022] a)細(xì)胞株信息
[0023] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6購(gòu)于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)
[0024] b)藥品及試劑
[0025] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時(shí)用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0026] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購(gòu)于美國(guó)GIBCO公司。胎牛血清購(gòu)于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0027] c)儀器
[0028] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0029] 垂直層流潔凈工作臺(tái)（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0030] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0031] 低/高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）
[0032] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0033] 酶標(biāo)儀（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）
[0034] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0035] 鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）
[0036] PH 計(jì)（SART0RIUS，德國(guó)）
[0037] 2)實(shí)驗(yàn)方法和過程
[0038] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲(chǔ)存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細(xì)胞匯合率 約為40%，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個(gè)組分3個(gè)復(fù)孔。每板細(xì)胞設(shè)立二個(gè)對(duì)照組（培 養(yǎng)基+細(xì)胞；含〇. 1 % DMSO培養(yǎng)基+細(xì)胞），3個(gè)空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24小 時(shí)后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑鹽化學(xué)名為3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時(shí)。完全棄去上清液，加入100 μ I DMSO,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測(cè)定OD 值。
[0039]
[0040] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 [0041 ]表 2
[0047] 本發(fā)明優(yōu)選如下技術(shù)方案：維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:14,體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積 比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥后，得到高活性提取物，即 為該抗腫瘤的活性提取物。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1。
[0048] 或維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅 膠柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫，繼用石 油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯 100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥后，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的活性提取物。 該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖2。
[0049] 4、抗腫瘤總有效提取物的提取方法研究
[0050] 1)提取溶劑的種類研究
[0051] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0052] 表 3
[0054] 研究結(jié)果表明：提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0055] 2)提取溶劑的用量研究
[0056] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物 對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0057] 表 4

[0060] 活性提取物提取用溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0061] 3)干燥方法的研究
[0062] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對(duì)得到 的抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測(cè)試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干 燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，其 中，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0063] 表 5
[0065] 因此，卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物的制備方法為：
[0066] 優(yōu)選地，維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗 脫2-50倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗 脫2-50倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該活性提 取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積 比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積 比）洗脫15倍柱體積。
[0067] 維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的 硅膠柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫2-50倍 柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫2-50 倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該活性提取物。 以上條件最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗 脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗 脫15倍柱體積。其中，
[0068] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇?；钚蕴崛∥锾崛∮萌軇┯昧繛樗幉闹亓康?2-40倍（重量/體積比）。
[0069] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0070] 5、卡麻孜日尤司活性提取物的抗腫瘤活性研究
[0071] 利用各種腫瘤細(xì)胞，如乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝 癌等惡性腫瘤細(xì)胞株，分別測(cè)試卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物的抗腫瘤活性，結(jié)果如 下：
[0072] 表6卡麻孜日尤司抗腫瘤提取物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的抑制活性
[0075] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種 腫瘤如乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治 療。
[0076] 6、卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物的組合物及其制備方法研究
[0077] 1)固體分散體
[0078] 處方
[0080] 制備方法：
[0081] 稱取卡麻孜日尤司活性提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、 1:6的質(zhì)量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至卡麻孜日尤司活性提取物 和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得卡麻孜日尤司活性提 取物PVP包合物。
[0082] 2)環(huán)糊精包合物
[0083] 處方
[0084]
[0085] 制備方法：
[0086] 將β-環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加卡麻孜日尤司活性提取物（水難溶性的應(yīng)先溶 于少量有機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0087] 3)分散片處方：
[0089] 制備方法：
[0090] 1.卡麻孜日尤司活性提取物淀粉分散體的制備，精密稱取卡麻孜日尤司活性提取 物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，用70 %的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后， 在70°C的溫度下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0091] 2.稱取處方量，卡麻孜日尤司活性提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉， 用70%乙醇做濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘 箱烘干45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0092] 7、卡麻孜日尤司抗腫瘤活性提取物的檢測(cè)方法研究
[0093] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測(cè)和標(biāo)示卡麻孜日尤司抗腫瘤活性 提取物的特征，見圖3。
[0094] 具體條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯色方法： 香草醛-硫酸顯色
【附圖說明】：
[0095] 圖1卡麻孜日尤司活性提取物的TLC色譜圖；
[0096] 圖2卡麻孜日尤司活性提取物的TLC色譜圖；
[0097] 圖3卡麻孜日尤司得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0098] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0099] 實(shí)施例1 :
[0100] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。收率0. 3%。
[0101] 實(shí)施例2:
[0102] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率〇. 22%。
[0103] 實(shí)施例3 :
[0104] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該活性提取物。收率〇. 17%。
[0105] 實(shí)施例4 :
[0106] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。收率〇. 14%。
[0107] 實(shí)施例5 :
[0108] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該活性提取物。收率〇. 15%。
[0109] 實(shí)施例6 :
[0110] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率0.23%。
[0111] 實(shí)施例7:
[0112] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。收率0. 26%。
[0113] 實(shí)施例8:
[0114] 維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫15倍柱體積。繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:17,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率0. 27%。
[0115] 實(shí)施例9:
[0116] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng) 回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。收率1. 43%。
[0117] 實(shí)施例10 :
[0118] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng) 回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率1. 31%。
[0119] 實(shí)施例11 :
[0120] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng) 回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該活性提取物。收率1. 13%。
[0121] 實(shí)施例12 :
[0122] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng) 回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。收率1. 08%。
[0123] 實(shí)施例13 :
[0124] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石 油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫 液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該活性提取物。收率I. 11%。
[0125] 實(shí)施例14:
[0126] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚： 乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率1. 26%。
[0127] 實(shí)施例15 :
[0128] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚： 乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。收率1. 22%。
[0129] 實(shí)施例16 :
[0130] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲 提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫洗脫20倍柱體積，繼用石油 醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油 醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。收率1. 35%。
[0131] 實(shí)施例17 :
[0132] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，真空干燥，即為該活性提取物，收率1. 44%。
[0133] 實(shí)施例18 :
[0134] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物，收率1. 38%。
[0135] 實(shí)施例19 :
[0136] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該活性提取物，收率1. 20%。
[0137] 實(shí)施例20:
[0138] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用娃 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī) 溶劑，離心干燥，即為該活性提取物，收率1. 19%。
[0139] 實(shí)施例21:
[0140] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，100:25,體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回 收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該活性提取物，收率1. 17%。
[0141] 實(shí)施例22:
[0142] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲 提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25，體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物，收率1. 32%。
[0143] 實(shí)施例23 :
[0144] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲 提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25，體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物，收率1. 27%。
[0145] 實(shí)施例24 :
[0146] 取維吾爾藥卡麻孜日尤司20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲 提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:25，體積比）洗脫30倍柱體積，繼用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:100,體積比）洗脫25倍柱體積。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物，收率1. 38%。
[0147] 實(shí)施例25:固體分散體
[0148] 稱取卡麻孜日尤司活性提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、 1:6的質(zhì)量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至卡麻孜日尤司活性提取物 和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中出去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得卡麻孜日尤司活 性提取物PVP包合物。
[0149] 實(shí)施例26 :環(huán)糊精包合物
[0150] 將環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加卡麻孜日尤司活性提取物（水難溶性的應(yīng)先溶 于少量有機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0151] 實(shí)施例27:分散片
[0152] 1.稱取干燥的卡麻孜日尤司活性提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70% 的乙醇充分溶解，加入水溶性淀粉與卡麻孜日尤司活性提取物（1:1)，攪拌混合均勻，在 70°C下干燥，粉碎，過100目篩，得卡麻孜日尤司活性提取物分散體。
[0153] 2.精密稱取處方量，卡麻孜日尤司活性提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉， 用70 %乙醇做濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱 烘干45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征為，維吾爾藥卡麻孜日尤司經(jīng)超聲提取， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100 :10-100:25為石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:17-100 :100的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石 油醚：乙酸乙酯100:17-100 :100洗脫液干燥后即得。2. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征為，先用體積比100 : 10-100:14的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:17的石油醚：乙酸乙酯混合 溶劑洗脫； 或先用體積比100 :20-100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100 : 30-100:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫； 優(yōu)選地： 先用體積比100:14的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:17的石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:17洗脫液經(jīng)回收溶劑干燥后，即為該活性 提取物； 或先用體積比100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:100 石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:100洗脫液經(jīng)回收 溶劑干燥后，即為該活性提取物。3. 如權(quán)利要求1-2任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征為， 提取用溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或 乙醇水混合溶劑，優(yōu)選甲醇或95%乙醇，提取用溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/ 體積比)。4. 如權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征為，石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑洗脫2-50倍柱體積。5. 如權(quán)利要求2所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征為，先用體積比100:14 的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用體積比100:17的石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑洗脫15倍柱體積； 或先用體積比100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用 體積比100:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫15倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻 孜日尤司提取物和藥學(xué)上可接受的賦形劑。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻孜日 尤司提取物或權(quán)利要求6所述的藥物組合物。8. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物或權(quán)利要求6所述的組 合物或權(quán)利要求7所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤為乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、 胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤或肝癌。10. 如權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物，其特征在于，用 TLC法檢測(cè)，其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯色 方法：香草醛-硫酸顯色。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105982935SQ201510079843
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 吳文熙
【申請(qǐng)人】沈陽(yáng)藥科大學(xué)