一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備方法，它是以雙蒸水為分散介質(zhì)，采用前體?注入法制備得到。本發(fā)明還公開了制備得到的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶在制備提高機體免疫力的藥物中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法的包封率高，制備所得產(chǎn)品穩(wěn)定性較好且免疫增強活性強，顯著提高了靈芝多糖的免疫增強活性。
【專利說明】
一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中獸藥領(lǐng)域，具體涉及一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶及其制備方法與應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 動物疫病主要靠疫苗來預(yù)防，但是很多疫苗存在免疫原性較弱等缺點，需要免疫 增強劑輔助才能產(chǎn)生強大的免疫應(yīng)答?，F(xiàn)有的常用免疫增強劑如油佐劑、鋁膠佐劑等常存 在刺激性強、有殘留等缺點。由于中藥具有綠色安全的特點，從中藥中開發(fā)免疫增強劑已成 為熱點。
[0003] 靈芝多糖是靈芝中具有免疫增強活性的主要成分，靈芝多糖不僅具有提供糖原能 量，構(gòu)成機體結(jié)構(gòu)物質(zhì)，而且在體內(nèi)安全，組織相容性好，具有開發(fā)成佐劑的良好基礎(chǔ)。靈芝 多糖由很多單體組成，如D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、L-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖等 單體是他的主要組成部分。靈芝多糖具有提高機體體液和免疫細胞免疫的功能同時也可以 激活機體補體系統(tǒng)，誘導(dǎo)抗原特異性CD4+、CD8+記憶性T細胞反應(yīng)，提高I gG、細胞因子的水 平。但是多糖存在不穩(wěn)定、容易發(fā)生聚集、體內(nèi)代謝快、生物利用度低、用藥量大導(dǎo)致成本較 高，嚴重的限制了靈芝多糖在疫苗佐劑領(lǐng)域的使用。為了更好地開發(fā)利用靈芝多糖的藥理 作用，對靈芝多糖新劑型的研究逐漸成為熱點。
[0004] 脂質(zhì)立方液晶納米粒是一定濃度的兩親性脂質(zhì)分散在水溶液中自組裝成含雙連 續(xù)水區(qū)和脂質(zhì)區(qū)的閉合脂質(zhì)雙層"蜂窩狀(海綿狀)"結(jié)構(gòu)，該獨特的內(nèi)部雙水道結(jié)構(gòu)和巨大 膜表面積(400m 2/g)使其能夠包封各種不同極性和劑量的藥物，具有多樣化的藥物包裹性。 如水溶性藥物可以包封在水道中，脂溶性藥物可以包裹在脂質(zhì)雙分子層膜中。脂質(zhì)立方液 晶納米粒具有良好的溫度穩(wěn)定性、內(nèi)表面積高及類似凝膠的黏度等獨特優(yōu)點，具有很多應(yīng) 用功能，如保護藥物活性、控制藥物釋放、靶向給藥以及阻止藥物分子間發(fā)生聚集和化學(xué)反 應(yīng)等。同脂質(zhì)體相比，脂質(zhì)立方晶體納米粒不但具有普通脂質(zhì)體的優(yōu)越特性，如組織相容 性、靶向性、保護性、雙親性、緩釋性等，還具有其自身特殊的優(yōu)點:①穩(wěn)定性好，脂質(zhì)立方液 晶是立體多層結(jié)構(gòu)，類似多囊泡脂質(zhì)體，可提高包封率和制得具有較高穩(wěn)定性的制劑。②在 粒子體積等同時，脂質(zhì)立方液晶納米粒較脂質(zhì)體有更大的雙分子層面積，故具有對親脂性 和兩親性藥物相對更高的載藥量。③脂質(zhì)立方液晶納米?？梢詿o限稀釋，稀釋穩(wěn)定性好，而 脂質(zhì)體稀釋后，藥物滲漏會顯著增加。因此脂質(zhì)立方液晶納米粒在穩(wěn)定性、載藥性能等方面 有較大的優(yōu)勢。④相對于其他種類的佐劑，脂質(zhì)立方液晶在較低的濃度即可明顯的產(chǎn)生佐 劑效應(yīng)，并且脂質(zhì)立方液晶對體液免疫與細胞免疫均有明顯的增強作用。
[0005] 本發(fā)明首次利用前體-注入法制備靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶混懸液，并對其制備工 藝進行優(yōu)化比較，并將其和動物滅活PCV-2病毒一起應(yīng)用免疫，建立了靈芝多糖脂質(zhì)立方液 晶的制備方法，優(yōu)化了制備條件，發(fā)現(xiàn)靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶能顯著提高靈芝多糖的免疫 增強作用，提高其生物利用度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶，以解決現(xiàn)有技術(shù)存 在的靈芝多糖不穩(wěn)定、容易發(fā)生聚集、體內(nèi)代謝快、生物利用度低和用藥量大等問題。
[0007] 本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備方法。
[0008] 本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問題是提供上述靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的應(yīng)用。
[0009] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0010] -種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備方法，它包括如下步驟：
[0011] (1)取植烷三醇和丙二醇溶于乙醇中備用；
[0012] (2)取ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0三嵌段共聚物和靈芝多糖溶于水中備用；
[0013] (3)將步驟（1)中所得的混合體系滴加至步驟(2)中所得的混合體系中并攪拌，旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后，經(jīng)超聲處理得到靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶混懸液(Cub-PS)。
[0014] 步驟(1)中，所述的乙醇為無水乙醇。
[0015] 步驟(1)中，植烷三醇和丙二醇的質(zhì)量比為1~2:1;優(yōu)選質(zhì)量比為4:3。
[0016] 步驟（1)中，植烷三醇和乙醇的固液比為30~100mg: lmL，優(yōu)選50mg: lmL。
[0017] 步驟(2)中，所述的ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0三嵌段共聚物優(yōu)選F127。
[0018]步驟(2)中，所述的水優(yōu)選雙蒸水。
[0019] 步驟(2)中，ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0三嵌段共聚物和靈芝多糖的質(zhì)量比為1~2:1~2;優(yōu)選用 量比為1:1。
[0020] 步驟(2)中，ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0三嵌段共聚物和水的質(zhì)量比為1:50~200。
[0021] 步驟(3)中，步驟(1)所得的混合體系和步驟(2)所得的混合體系的體積比為1:4~ 10。
[0022] 其中，所述的滴加，所述的滴加，滴加流速為1~2mL/min。
[0023] 步驟(3)中，攪拌方法為室溫下300~800r/min攪拌lh;其中，滴加開始時就開始攪 拌。
[0024]步驟(3)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度為40~70°C。
[0025] 步驟(3)中，超聲處理的方法為:使用細胞超聲粉碎儀，在300W功率下超聲20~30 次，每次3~5min，兩次超聲間隔2~5s。
[0026] 上述任意一項制備得到的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0027] 上述的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶在制備提高機體免疫力的藥物中的應(yīng)用。
[0028]上述的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶能夠顯著提高豬圓環(huán)病毒(PCV-2滅活病毒）的特異 性抗體水平、不同亞型抗體的含量和細胞因子含量，且能夠促進抗原轉(zhuǎn)運到附近淋巴結(jié)，同 時提高淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比例，促進記憶細胞的分化，具有較好的免疫增強功能。 [0029] 有益效果：
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)勢：
[0031] 1、靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備國內(nèi)外未見報道，本發(fā)明提供了一種靈芝多糖脂 質(zhì)立方液晶的制備方法及其優(yōu)化的條件，填補了國內(nèi)外研究的空白；且本發(fā)明方法操作簡 單，易于推廣。
[0032] 2、靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的免疫增強活性未見報道。通過本發(fā)明的實施，證明靈 芝多糖通過制備成靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶后能夠顯著提高其免疫增強活性，表現(xiàn)為提高小 鼠血清PCV-2特異性IgG抗體效價、不同亞型抗體水平和細胞因子含量，同時發(fā)現(xiàn)靈芝多糖 脂質(zhì)立方液晶能夠促進抗原轉(zhuǎn)運到附近淋巴結(jié)，同時提高淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比 例，與靈芝多糖相比，能夠誘導(dǎo)機體記憶細胞的分化，從而長時間增強動物免疫功能。因此， 靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶可以作為研制新型免疫增強劑的材料，為研制新型免疫增強劑提供 了材料和示范。
[0033] 3、本發(fā)明方法制備得到的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶，利用馬爾文粒度分析儀對靈芝 多糖脂質(zhì)立方液晶的粒徑、多分散系數(shù)(PDI)及表面電勢進行了分析，并通過冷凍掃描電鏡 和小角度X射線散射試驗(SAXS)對靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的內(nèi)部結(jié)構(gòu)進行了研究，發(fā)現(xiàn)靈 芝多糖脂質(zhì)立方液晶呈均一的納米分散體系。
[0034] 4、本發(fā)明采用前體-注入法將靈芝多糖制備成靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶，所得立方 液晶包封率高（平均包封率為89.5 ± 3.51 % )，不僅可以解決靈芝多糖成分易氧化、不易制 劑等問題，而且便于藥物的吸收，可以使藥物緩慢地的釋放，有效地延長藥效，能顯著提高 動物免疫功能，對抵抗疫病有重要意義。同時，本發(fā)明作為一種新型中獸藥，沒有副作用。
【附圖說明】
[0035] 圖1為實施例1中靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的冷凍掃描電鏡圖；
[0036]圖2A為實施例1中靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的粒徑圖；
[0037]圖2B為實施例1中靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的SAXS分析圖；
[0038]圖3A為實施例2中不同劑量的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶對血清抗體水平的影響示意 圖；
[0039]圖3B為實施例2中各對照組對血清抗體水平的影響示意圖；
[0040]圖3C為實施例2中各對照組的IgGl和IgG2a抗體水平示意圖；
[00411圖3D為為實施例2中各對照組的IgG2b和IgG3抗體水平示意圖；
[0042]圖4A為實施例2中各對照組中血清中細胞因子IL-4的變化示意圖；
[0043]圖4B為實施例2中各對照組中血清中細胞因子IL-12p70的變化示意圖；
[0044]圖4C為實施例2中各對照組中血清中細胞因子IFN- γ的變化示意圖；
[0045] 圖4D為實施例2中各對照組中血清中細胞因子TNF-α的變化示意圖；
[0046] 圖4E為實施例2中各對照組中血清中細胞因子IL-17的變化示意圖；
[0047]圖5A為實施例2中首免24h之后，各對照組淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比例示意 圖；
[0048]圖5B為實施例2中首免48h之后，各對照組淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比例示意 圖；
[0049] 圖6為實施例2中各對照組對小鼠淋巴結(jié)中抗原轉(zhuǎn)運的影響示意圖；
[0050] 圖7為實施例2中各對照組對小鼠淋巴結(jié)中記憶細胞的影響示意圖。
【具體實施方式】
[0051] 根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實 施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本 發(fā)明。
[0052]實施例1靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備
[0053] (1)方法的篩選
[0054]方法l"Buk"相自發(fā)乳化法：
[0055] 稱取0 . lg植烷三醇、0.0 lg F127，丙二醇0.075g置于20ml西林瓶中，加入10mL氯 仿，超聲使其充分溶解。置于50mL旋蒸瓶中，45 °C減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，當圓底燒瓶中溶 液無明顯減少時時，導(dǎo)入10uL含10mg靈芝多糖的水溶液，超聲使其充分混勻，之后將其分散 至5mL雙蒸水中，攪拌5~lOmin，即的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶混懸液，置于4°C保存。
[0056]方法2前體-注入法：
[0057] 稱取脂質(zhì)材料植烷三醇O.lg與丙二醇0.075g，于20ml西林瓶中，再加入無水乙醇 1.5ml，超聲處理20min，使其充分溶解，作為A相;稱取F127 10mg和靈芝多糖10mg于100ml燒 杯中，加入20ml雙蒸水，于水浴60 °C上加熱使溶解，作為B相。將A相緩慢滴加至B相中，以 500r/min室溫下攪拌lh，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以充分除去乙醇，再于細胞超聲粉碎儀上300W冰浴超聲 處理5min，超聲30次（問隔5s)，即得大小均一的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶混懸液(Cub-PS)。
[0058] 上述兩種方法制備得到的Cub-PS的包封率見表1。
[0059] 表1兩種不同方法制備Cub-PS包封率
[0060]
[0061]根據(jù)表1的結(jié)果分析，利用前體-注入法制備的靈芝多糖立方液晶表現(xiàn)出了更高的 包封率，因此后續(xù)實驗選用前體-注入法來制備靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶。
[0062] (2)分散介質(zhì)的選擇
[0063]制備脂質(zhì)立方液晶的過程中，分散介質(zhì)的種類對脂質(zhì)立方液晶的成型、包封率和 穩(wěn)定性有明顯的影響。故本文比較分析了蒸餾水、雙蒸水和磷酸鹽緩沖液(PBS)三種分散介 質(zhì)對靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的包封率和穩(wěn)定性的影響作用。
[0064]表2不同分散介質(zhì)的處方組成
[0065]
[0066] 將按照上述處方制備的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶放置于4°C保存，每天觀察樣品的 團聚情況，結(jié)果見表3。
[0067] 表3不同分散介質(zhì)對芝多糖脂質(zhì)立方液晶的影響
[0068]
[0069] 由表3的實驗結(jié)果可以分析得出選用雙蒸水作為分散介質(zhì)能夠獲得更好的包封 率，并且穩(wěn)定性顯著高于PBS和去離子水組。
[0070] (3)粒徑電位檢測及冷凍掃描電鏡觀察
[0071] 用雙蒸水將Cub-PS(靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶）稀釋到一定濃度，于冷凍臺制備樣 品，透射電鏡下觀察Cub-PS(脂質(zhì)立方液晶）的形態(tài)并拍攝照片（圖1)。利用馬爾文粒度分析 儀測定Cub-PS的粒徑分布及表面電位(圖2)。
[0072]
[0073] 注:Cub:空白脂質(zhì)立方液晶Cub-PS:靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶
[0074] 由掃描電鏡圖片可知，靈芝多糖立方液晶納米粒在水中分散較好，且粒徑大小差 異較小，外觀呈立方狀態(tài);從粒徑大小分析可知立方液晶包封靈芝多糖之后粒徑出現(xiàn)了稍 微的增大（圖2A)，同時SAXS顯示各散射峰對應(yīng)的散射矢量的比為: : Vi (圖2B)，表明 其為Pn3m晶型結(jié)構(gòu)，Cub與Cub-PS的表面電位分別為-14.33 ± 0.75和-16.13 ±0.42。電鏡及 粒徑、電勢分析表明靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶立方液晶具有優(yōu)良的物理化學(xué)性質(zhì)。實施例2靈 芝多糖脂質(zhì)立方液晶免疫增強活性比較
[0075] 以實施例1中制備得到的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶（Cub-PS)為研究對象，以靈芝多 糖(PS)和空白脂質(zhì)立方液晶（Cub)作為對照，ISA206佐劑作為陽性對照，測定了它們對豬圓 環(huán)病毒(PCV-2)滅活病毒免疫后機體IgG抗體水平、抗體亞型、淋巴結(jié)樹突狀細胞的活化、淋 巴結(jié)中PCV-2抗原及細胞因子IFN-γ、了陬-€[、幾-12?70、11^-4和11^-17含量的影響。
[0076] (1)動物分組及處理
[0077] 60只6-8周齡的Blab/c小鼠隨機均分為5組，分別為靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶組 (Cub-PS-Ag)、靈芝多糖組（PS-Ag)、靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶組（Cub-Ag)、陽性對照組 (ISA206)和PBS對照組(PBS)。皮下免疫小鼠2次，每次免疫間隔1周。分別于首免后7、14、21 天檢測機體IgG抗體水平、抗體亞型、淋巴結(jié)樹突狀細胞的活化、淋巴結(jié)中PCV-2抗原及血清 中細胞因子IFN-γ、了陬-€[、幾-12口70、幾-4和幾-17含量變化。
[0078] (2)靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶對抗體水平及抗體亞型水平的影響
[0079] 通過對比3中不同劑量的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶（Cub-PSdXCub-PSdXCub-pS)，發(fā)現(xiàn)低劑量組 (Cub-PS) 產(chǎn)生了最高的抗體水平 （圖 3A)， 因此，后續(xù)試驗對低劑量的靈 芝多糖脂質(zhì)立方液晶組進行了著重的免疫分析。首免后第7天，各組之間的抗體水平并沒有 明顯的差異;然而在首免后第14、21天，(]1113-?3-48組的抗體水平顯著高于?3-48組和(]1113-八區(qū) 組(P〈0·05)(圖3B);另外，在首免后第21天Cub-PS-Ag組的IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3是所有 組中最高的，且顯著高于其他各組(P〈〇. 05)(圖3C和D)。
[0080] 注:*ρ<0· 05表示Cub-PS-Ag組與PS-Ag組對比，#ρ<0· 05表示Cub-PS-Ag組與Cub-Ag組對比。
[0081 ] (3)靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶對血清中細胞因子的影響
[0082] 首免后第7天至21天，Cub-PS-Ag組的IL-4濃度是最高的，顯著高于PS-Ag組和Cub- Ag組(P〈0.05)(圖4A);首免后第7天至21天，Cub-PS-Ag組IFN- γ的濃度是最高的，且顯著高 于卩3-六8組和(：1*48組(？〈0.05)，同時在第14、21天，(：1113-?348組正1丫的濃度已經(jīng)高于陽 性對照組（圖4C);首免后第7天至21天，Cub-PS-Ag組TNF-α和IL-17的濃度均顯著高于PS-Ag 組和Cub-Ag組。
[0083] 注:*ρ<〇·05表示Cub-PS-Ag組與PS-Ag組對比，#ρ<0·05表示Cub-PS-Ag組與Cub-Ag 組對比。
[0084] (3)靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶對小鼠淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞比例的影響
[0085] 作為最主要初級免疫反應(yīng)場所的淋巴結(jié)在疫苗免疫過程中發(fā)揮著及其重要的作 用?？乖谧⑸溥M動物機體后，其迀移至淋巴結(jié)的效率與誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)息 息相關(guān)。有效的疫苗遞載系統(tǒng)類佐劑能夠明顯的提高抗原遞呈細胞攝取抗原、運載抗原至 淋巴結(jié)及遞呈抗原到T淋巴細胞。首免后的24h、48h，PS-Ag組和Cub-Ag組顯著地促進了小鼠 淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比例，Cub-PS-Ag組淋巴結(jié)中成熟樹突狀細胞的比例顯著高于 PS-Ag組和Cub-Ag組（圖5 )，表明了PS-Ag組和Cub-Ag組能有有效的促進成熟樹突狀細胞的 歸巢從而更加有效的將抗原遞呈給淋巴細胞，進一步引起強烈的免疫反應(yīng)。
[0086] 首免后的第七天，Cub-PS-Ag組小鼠淋巴結(jié)中的抗原明顯的多于PS-Ag組和Cub-Ag 組，表明Cub-PS-Ag組能夠產(chǎn)生一個持續(xù)的抗原釋放，從而不斷刺激機體的免疫系統(tǒng)，從而 增強機體的免疫應(yīng)答。
[0087]圖6表明首免后的第7天，Cub-PS-Ag組小鼠淋巴結(jié)中分化的中心記憶細胞和效應(yīng) 記憶細胞的比例均顯著高于PS-Ag組和Cub-Ag組，表明了Cub-PS-Ag組在引起長效的免疫應(yīng) 答方面比PS-Ag組和Cub-Ag組具有更大的潛力。
[0088]根據(jù)上述動物試驗結(jié)果可以得出靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶可以提高小鼠機體IgG抗 體水平、不同亞型抗體含量、淋巴結(jié)樹突狀細胞的活化、淋巴結(jié)中PCV-2抗原及細胞因子 IFN-γ、TNF-a、IL-4和IL-17含量，從而提高機體免疫功能，說明本發(fā)明涉及的靈芝多糖脂 質(zhì)立方液晶可用于提高動物機體免疫功能以達到抵抗疾病的目的。
【主權(quán)項】
1. 一種靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶的制備方法，其特征在于，它包括如下步驟： (1) 取植烷三醇和丙二醇溶于乙醇中備用； (2) 取PEO-PPO-PEO三嵌段共聚物和靈芝多糖溶于水中備用； (3) 將步驟（1)所得的混合體系滴加至步驟(2)所得的混合體系中并攪拌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除 去乙醇后，經(jīng)超聲處理得到靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶混懸液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，植烷三醇和丙二醇的質(zhì)量 比為1~2:1，植烷三醇和乙醇的固液比為30~100mg:lmL;其中，所述的乙醇為無水乙醇。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，PEO-PPO-PEO三嵌段共聚 物和靈芝多糖的質(zhì)量比為1~2:1~2，PE0-PP0-PE0三嵌段共聚物和水的質(zhì)量比為1:50~ 200 〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，步驟（1)所得的混合體系 和步驟(2)所得的混合體系的體積比為1:4~10。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的滴加，滴加流速為1~2mL/min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，攪拌方法為室溫下300~ 800r/min 攬摔 lh。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，超聲處理的方法為:使用 細胞超聲粉碎儀，在300W功率下超聲20~30次，每次3~5min，兩次超聲間隔2~5s。8. 權(quán)利要求1~7中任意一項制備得到的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶。9. 權(quán)利要求8中所述的靈芝多糖脂質(zhì)立方液晶在制備提高機體免疫力的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號】A61P37/04GK105997865SQ201610328083
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】王德云, 劉振廣, 伯若楠, 胡元亮, 劉家國, 武毅
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)