一種從云南黑木耳提取多酚的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從云南黑木耳提取多酚的方法，該方法包括預(yù)處理、提取、大孔樹脂吸附與洗脫等步驟。本發(fā)明方法能夠制備得到具有抗氧化作用的云南黑木耳多酚，它的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)50％乙醇水提法提高1.40～1.75倍，具有明顯高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基體系中，云南黑木耳多酚的IC50為36.14～45.22μg/mL。本發(fā)明的方法是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的生物活性成分提取技術(shù)，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
一種從云南黑木耳提取多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然活性物質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種從云南黑木耳提取多酚的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]黑木耳(Auricularia auriculajudae)營養(yǎng)豐富，食味鮮美，不但是營養(yǎng)價值很高的食用菌，而且是藥用價值高的藥用菌，是世界公認(rèn)的保健品。我國黑木耳資源豐富，為開發(fā)應(yīng)用黑木耳提供了有利的條件。云南省是我國黑木耳主產(chǎn)地之一，所產(chǎn)黑木耳通稱為云耳?！霸贫币约?xì)嫩、條大、肉厚、色黑發(fā)亮者為上品。云南黑木耳作為藥用子實體，具有益氣強身、補氣血、潤肺、止血、止痛、通便等功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其可用于治療高血壓、血管硬化、月經(jīng)、白帶過多、便血、子宮出血、反胃多痰、吐血、便秘等。
[0003]黑木耳中含有多酚類化合物、生物堿、維生素等多種生理活性物質(zhì)，但對這些物質(zhì)進行提取、成分分析的研究報道很少，尤其是對云南黑木耳多酚的研究就較少。多酚在增強免疫力、降血糖、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面發(fā)揮著生物活性作用。隨著技術(shù)的發(fā)展和人類認(rèn)識的不斷加深，人們發(fā)現(xiàn)多酚類在生物體中除作結(jié)構(gòu)材料和能源性材料夕卜，更重要地是還參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動中；多酚廣泛應(yīng)用于食品、紡織、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域等領(lǐng)域，其在生物學(xué)上的重要意義決定了它在食品及醫(yī)藥領(lǐng)域有廣闊的前景。
[0004]現(xiàn)有乙醇水溶液提取方法效率不高，許多有用成分沒有充分提取出來。
[0005]因此，本發(fā)明人針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的一些技術(shù)缺陷，通過大量實驗研究與分析，終于完成了本發(fā)明。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0006][要解決的技術(shù)問題]
[0007]本發(fā)明的目的是提供一種從云南黑木耳提取多酚的方法。
[0008][技術(shù)方案]
[0009]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0010]本發(fā)明涉及一種從云南黑木耳提取多酚的方法。
[0011]該方法的步驟如下:
[0012]A、預(yù)處理
[0013]將云南黑木耳在烘箱中在溫度58?62°C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度102?108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉；
[0014]B、提取
[0015]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10?50，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；
[0016]C、大孔樹脂吸附
[0017]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進行振蕩吸附；
[0018]D、洗脫
[0019]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟A中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。
[0021]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，所述的乙醇水溶液濃度為以體積計40?70 %。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率300?800W的條件下進行高壓脈沖電場處理6?12h。
[0023]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，在高壓脈沖電場下處理的物料在壓力0.008?0.01210^下過濾0.8?1.211。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟C中，所述的水溶液在吸附速度4?6BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下吸附2?4h。
[0025]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟C中，在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附18?22h。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，洗滌時振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，使用濃度為以體積計45?55%的乙醇水溶液在洗脫速度4?6BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下進行洗脫。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，洗脫液在壓力0.08?0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥。
[0029]下面將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。
[0030]本發(fā)明以提高云南黑木耳多酚抗氧化活性為目的的超高壓脈沖輔助提取法，能夠克服常規(guī)乙醇水提取對活性物質(zhì)帶來的不利影響;利用超高壓脈沖技術(shù)能夠強化溶劑與樣品相接觸，并破壞云南黑木耳中的細(xì)胞組分，將所需化合物從樣品基體中分離進入溶劑中，因此能夠提高其云南黑木耳多酚的得率。本方法具有快速、成本低等特點，其在生產(chǎn)中使用時，可以減少溶劑的用量，提高提取得率，提高純度。
[0031]一種從云南黑木耳提取多酚的方法。
[0032]該方法的步驟如下:
[0033]A、預(yù)處理
[0034]將云南黑木耳在烘箱中在溫度58?62°C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度102?108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉；
[0035]在本發(fā)明中，云南黑木耳在溫度58?62°C下烘干的主要作用是除去水分。本發(fā)明使用的烘箱是一種常規(guī)的干燥設(shè)備，例如由上海一恒科技有限公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱。
[0036]根據(jù)本發(fā)明，烘干的云南黑木耳再在恒溫恒濕干燥器中烘干的主要作用是除去可能殘余的水分。本發(fā)明使用的恒溫恒濕干燥器是一種目前市場上銷售的干燥設(shè)備，例如由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器。
[0037]在步驟A中，烘干云南黑木耳研磨所使用的設(shè)備是本技術(shù)領(lǐng)域里在研磨時通常使用的設(shè)備，是目前市場上銷售的研磨設(shè)備。
[0038]在本發(fā)明中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。如果所述云南黑木耳粉的粒度小于60目，則會使原料料層過厚，物料粒子能量吸收不均，作用效果不均衡，得率小。
[0039]B、提取
[0040]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10?50，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；
[0041 ]在本發(fā)明中，乙醇水溶液提取劑從云南黑木耳粉中提取多酚的基本機制是極性相近的體系相近相溶的原理。
[0042]根據(jù)本發(fā)明，所述的乙醇水溶液濃度是以體積計40?70%。這個乙醇水溶液濃度或者太高或者太低都是不妥的，這主要是因為此濃度條件的體系與提取目標(biāo)對象極性更近，提取效率更高。
[0043]根據(jù)本發(fā)明，如果云南黑木耳粉與乙醇水溶液的固液比大于1:10，則多酚組分無法在乙醇水溶液中完全溶出；如果云南黑木耳粉與乙醇水溶液的固液比小于I:50，則溶劑量達(dá)到一定程度之后，多酚類物質(zhì)已經(jīng)基本完全溶出，得率變化不明顯，此時處理成本明顯提高；因此，云南黑木耳粉與乙醇水溶液的固液比為1:10?50是合理的，優(yōu)選地是1:18?42，更優(yōu)選地是1:26?34。
[0044]高壓脈沖電場法是利用細(xì)胞膜電穿孔原理在瞬間使細(xì)胞破壁，造成細(xì)胞膜電位混亂，細(xì)胞壁和細(xì)胞膜發(fā)生可逆或小可逆的破壞，細(xì)胞組分流出，因此具有處理時間短、能耗低、不易引起目標(biāo)產(chǎn)物變性等優(yōu)點。
[0045]在本發(fā)明中利用了高壓脈沖電場法處理云南黑木耳粉。有云南黑木耳粉的乙醇水溶液在脈沖寬度為2ys、脈沖頻率為200Hz與功率300?800W的條件下進行高壓脈沖電場處理6?12h0
[0046]在本發(fā)明中，如果高壓脈沖電場的脈沖寬度與脈沖頻率為其它值時，溶出的多酚物質(zhì)太低或者溶出的雜質(zhì)成分太高。
[0047]高壓脈沖電場的脈沖寬度為2ys與脈沖頻率為200Hz時，如果高壓脈沖電場的功率小于300W，則高壓脈沖電場對植物細(xì)胞破壞的程度和數(shù)量均不夠;如果高壓脈沖電場的功率大于500W，則造成多酚物質(zhì)的降解，提取率降低；因此，高壓脈沖電場的功率為300?800W是可行的，優(yōu)選地是400?680W，更優(yōu)選地是480?580W。
[0048]這種高壓脈沖電場是由目前市場上銷售的美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備。
[0049]根據(jù)本發(fā)明，對經(jīng)高壓脈沖電場處理的物料使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-DdII)循環(huán)水式真空栗在壓力0.008?0.012MPa下進行減壓過濾0.8?1.2h。
[0050]得到的濾渣使用本發(fā)明提取溶劑乙醇水溶液洗滌2?4次，洗滌的濾渣是所述的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品。采用下面將描述的硝酸鋁顯色法可以測定得到該云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量。
[0051]C、大孔樹脂吸附
[0052]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進行振蕩吸附；
[0053]所述的大孔樹脂吸附的基本作用是純化多酚成分。
[0054]本發(fā)明使用的大孔樹脂是目前市場上銷售的各種大孔樹脂產(chǎn)品，例如南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1n HP-20大孔樹脂、Amberlite XAD-4大孔樹脂等。
[0055]本發(fā)明使用的大孔樹脂需要進行預(yù)處理，首先，篩分收集有效粒徑為0.6mm的大孔樹脂。然后，這種大孔樹脂在2倍體積的無水乙醇中浸泡10h，分離乙醇，用去離子水洗滌，直至洗滌液無白色混濁，無醇味。接著，這種大孔樹脂在2倍體積、濃度為以重量計5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分離NaOH水溶液，用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。然后，在2倍體積、濃度為以重量計5%的HCl水溶液中浸泡3h;分離HCl水溶液，再用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。
[0056]在這個步驟中，所述的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品水溶液在吸附速度4?6BV/h、水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下吸附2?4h。
[0057]在大孔樹脂床吸附后，在恒溫振蕩器里，讓這種大孔樹脂在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下在所述的水溶液中振蕩吸附18?22h。
[0058]本發(fā)明使用的恒溫振蕩器是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器。
[0059]D、洗脫
[0060]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。
[0061 ]在這個步驟中，用蒸餾水洗滌的基本作用是除去樹脂表面雜質(zhì)。用蒸餾水洗滌時，振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。
[0062]根據(jù)本發(fā)明，使用乙醇水溶液洗脫的基本作用是洗脫出多酚物質(zhì)。使用濃度為以體積計45?55%的乙醇水溶液在洗脫速度4?6BV/h、乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下進行洗脫，收集洗脫液。
[0063]收集的洗脫液進行濃縮的目的在于得到濃縮的多酚產(chǎn)品。收集洗脫液在壓力0.08?0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥。
[0064]本發(fā)明使用的真空冷凍干燥器是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名FD-1A-50真空冷凍干燥器銷售的產(chǎn)品。
[0065]本發(fā)明制備得到的云南黑木耳多酚固體樣品采用常規(guī)紫外分光光度法進行了分析。
[0066]硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測定總多酚是在中性或弱堿性環(huán)境與亞硝酸鈉的存在下，多酚類化合物與鋁鹽生成螯合物，加入氫氧化鈉后其溶液則顯紅橙色，在波長510nm處有吸收峰且符合定量分析的比爾定律。因此，可以硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測定其云南黑木耳多酸純度與得率。
[0067]本發(fā)明采用常規(guī)硝酸鋁絡(luò)合分光光度法，使用UV2000紫外可見分光光度計測定在波長510nm處的吸光值，由這個吸光值測得本發(fā)明云南黑木耳多酚的純度。按照下述公式計算得到云南黑木耳多酚的得率:
[0068]得率(mg/g)=提取多酚產(chǎn)品質(zhì)量(mg)/云南黑木耳原料總量(g)
[0069]DPPH自由基有單電子，在波長517nm處有一個強吸收峰，其醇溶液呈紫色特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可以采用分光光度計進行快速定量分析。
[0070]本發(fā)明采用分光光度法測定517nm處的吸光值變化計算云南黑木耳多酚清除DPPH自由基的能力。
[0071]采用本發(fā)明方法制備得到的云南黑木耳多酚產(chǎn)品DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)50 %乙醇水提法提高1.40?1.75倍，具有明顯高的DPPH自由基清除能力。如圖1所顯示的，在DPPH自由基體系中，云南黑木耳多酚的IC5q為36.14?45.22yg/mL。
[0072][有益效果]
[0073]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明從云南黑木耳提取多酚的方法能夠制備得到具有抗氧化作用的云南黑木耳多酚，它的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)50%乙醇水提法提高1.40?1.75倍，具有明顯高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基體系中，云南黑木耳多酚的IC50為36.14?45.22yg/mL。本發(fā)明的方法是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的生物活性成分提取技術(shù)，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
【【附圖說明】】
[0074]圖1是本發(fā)明提取云南黑木耳多酚的純度、得率與清除DPPH自由基能力結(jié)果示意圖。
【【具體實施方式】】
[0075]通過下述實施例將能夠更好地理解本發(fā)明。
[0076]實施例1:從云南黑木耳提取多酚
[0077]該實施例的實施步驟如下:
[0078]A、預(yù)處理
[0079]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度60°C下烘干，然后在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度104°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0080]B、提取
[0081]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:30，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計5 O %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率400W的條件下進行高壓脈沖電場處理9h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.0lMPa下減壓過濾0.9h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.56g/100g;
[0082]C、大孔樹脂吸附
[0083]南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂預(yù)處理，首先進行篩分收集有效粒徑為0.5mm的大孔樹脂。將收集的大孔樹脂在2倍體積的無水乙醇中浸泡10h，分離乙醇，用去離子水洗滌，直至洗滌液無白色混濁，無醇味。接著再在2倍體積、濃度為以重量計5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分離NaOH水溶液，用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。然后，在2倍體積、濃度為以重量計5%的HCl水溶液中浸泡3h;分離HCl水溶液，再用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。
[0084]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度4BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比30:1的條件下吸附2.4h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附21.2h;
[0085]D、洗脫
[0086]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:3用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計46%的乙醇水溶液在洗脫速度4BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比30:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力0.08MPa下濃縮1.6h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.0SMPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0087]實施例2:從云南黑木耳提取多酚
[0088]該實施例的實施步驟如下:
[0089]A、預(yù)處理
[0090]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度58°C下烘干，然后在上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度102°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0091]B、提取
[0092]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計40 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率400W的條件下進行高壓脈沖電場處理12h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.0OSMPa下減壓過濾0.8h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌2次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.44g/100g;
[0093]C、大孔樹脂吸附
[0094]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Amberlite XAD-4大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例I的相同。
[0095]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度6BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比28:1的條件下吸附2.0h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振湯吸附18.0h;
[0096]D、洗脫
[0097]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 2用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計45%的乙醇水溶液在洗脫速度5BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比28:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力0.1OMPa下濃縮2.4h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.0SMPa與溫度-20°c下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0098]實施例3:從云南黑木耳提取多酚
[0099]該實施例的實施步驟如下:
[0100]A、預(yù)處理
[0101]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度62°C下烘干，然后在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0102]B、提取
[0103]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:50，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計7 O %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率800W的條件下進行高壓脈沖電場處理6h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.012MPa下減壓過濾1.2h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.52g/100g;
[0104]C、大孔樹脂吸附
[0105]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1n HP-20大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0106]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比320:1的條件下吸附3.6h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附20.5h;
[0107]D、洗脫
[0108]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:3用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計50%的乙醇水溶液在洗脫速度6BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比32:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力0.12MPa下濃縮1.8h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.1OMPa與溫度-20°c下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0109]實施例4:從云南黑木耳提取多酚
[0110]該實施例的實施步驟如下:[0111 ] A、預(yù)處理
[0112]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度60°C下烘干，然后在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度106°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0113]B、提取
[0114]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計60 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率300W的條件下進行高壓脈沖電場處理9h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.0lOMPa下減壓過濾1.0h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌4次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.47g/100g;
[0115]C、大孔樹脂吸附
[0116]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Amberlite XAD-4大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例I的相同。
[0117]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度4BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比31:1的條件下吸附2.7h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振湯吸附22.0h ；
[0118]D、洗脫
[0119]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:4用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計55%的乙醇水溶液在洗脫速度4BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比31:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力0.1OMPa下濃縮2.0h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.12MPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0120]實施例5:從云南黑木耳提取多酚[0121 ]該實施例的實施步驟如下:
[0122]A、預(yù)處理
[0123]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度58°C下烘干，然后在在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度104°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0124]B、提取
[0125]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計7 O %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率300W的條件下進行高壓脈沖電場處理9h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.012MPa下減壓過濾0.8h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.32g/100g;
[0126]C、大孔樹脂吸附
[0127]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0128]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度6BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比290:1的條件下吸附4.0h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附19.2h;
[0129]D、洗脫
[0130]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:3用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計52%的乙醇水溶液在洗脫速度5BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比29:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力0.09MPa下濃縮2.2h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α_50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.1OOMPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0131 ]實施例6:從云南黑木耳提取多酚
[0132]該實施例的實施步驟如下:
[0133]A、預(yù)處理
[0134]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度62°C下烘干，然后在在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度102°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0135]B、提取
[0136]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:30，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計40 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率800W的條件下進行高壓脈沖電場處理6h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.0lOMPa下減壓過濾1.2h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.41g/100g;
[0137]C、大孔樹脂吸附
[0138]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1n HP-20大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0139]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比30:1的條件下吸附3.3h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振湯吸附19.8h;
[0140]D、洗脫
[0141]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:4用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計48%的乙醇水溶液在洗脫速度6BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比30:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力
0.1OMPa下濃縮1.9h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.09MPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0142]實施例7:從云南黑木耳提取多酚
[0143]該實施例的實施步驟如下:
[0144]A、預(yù)處理
[0145]將云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度60°C下烘干，然后在由上海躍進醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0146]B、提取
[0147]按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:50，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到濃度為以體積計60 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率500W的條件下進行高壓脈沖電場處理9h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.009MPa下減壓過濾1.lh，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌4次，經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品；采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品的多酚含量為1.37g/100g;
[0148]C、大孔樹脂吸附
[0149]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Amberlite XAD-4大孔樹脂預(yù)處理，其預(yù)處理與實施例I的相同。
[0150]將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比30:1的條件下吸附3.0h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附18.6h;
[0151]D、洗脫
[0152]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，然后按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 2用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計54%的乙醇水溶液在洗脫速度5BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比28:1的條件下進行洗脫，洗脫液在壓力
0.1OMPa下濃縮2.1h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.1OMPa與溫度-20°c下進行真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本說明書中描述的方法測定得到云南黑木耳多酚純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
【主權(quán)項】
1.一種從云南黑木耳提取多酚的方法，其特征在于該方法的步驟如下: A、預(yù)處理 將云南黑木耳在烘箱中在溫度58?62°C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度102?108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉； B、提取 按照以克計云南黑木耳粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:10?50，把在步驟A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品； C、大孔樹脂吸附 將步驟B得到的云南黑木耳多酚粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進行振蕩吸附； D、洗脫 讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟A中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，所述的乙醇水溶液濃度為以體積計40?70 %。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率.200Hz與功率300?800W的條件下進行高壓脈沖電場處理6?12h。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，在高壓脈沖電場下處理的物料在壓力0.008?0.012MPa下過濾0.8?I.2h。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟C中，所述的水溶液在吸附速度4?6BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下吸附2?4h。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟C中，在水浴溫度25°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附18?22h。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，洗滌時振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，使用濃度為以體積計45?.55 %的乙醇水溶液在洗脫速度4?6BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比28?32:1的條件下進行洗脫。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，洗脫液在壓力0.08?.0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進行真空冷凍干燥。
【文檔編號】A61P39/06GK105998092SQ201610522241
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月5日
【發(fā)明人】袁毅, 谷向春, 鄭新濤, 張靜, 盧樂華
【申請人】華寶食用香精香料（上海）有限公司